槐角黄酮调控miR-199a-3p/p38MAPK/NF-κB对乳腺癌细胞增殖、迁移、侵袭和炎症因子分泌的影响

目的 探讨槐角黄酮对乳腺癌细胞增殖、迁移、侵袭和炎症因子分泌的影响。方法 将乳腺癌细胞BT549分为正常对照(NC)组、低剂量组、中剂量组、高剂量组、miR-NC组、miR-199a-3p组、高剂量+anti-miR-NC组、高剂量+anti-miR-199a-3p组。采用CCK-8、克隆形成实验评估细胞增殖;采用Transwell法评估细胞迁移和侵袭。采用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测miR-199a-3p表达。采用酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测细胞培养液上清中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)以及白细胞介素-1β(IL-1β)水平。采用蛋白免疫印迹(Western blot)检测p-p38MAPK和p-p65蛋白表达。结果 与NC组比较,低、中、高剂量组BT549细胞活力、克隆形成数、迁移数、侵袭数降低,miR-199a-3p表达升高,细胞培养液上清中TNF-α、IL-6以及IL-1β水平降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。与miR-NC组比较,miR-199a-3p组BT549细胞活力、克隆形成数、迁移数、侵袭数降低,细胞培养液上清中TNF-α、IL-6以及IL-1β水平降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。与高剂量+anti-miR-NC组比较,高剂量+anti-miR-199a-3p组BT549细胞活力、克隆形成数、迁移数、侵袭数升高,细胞培养液上清中TNF-α、IL-6以及IL-1β水平升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。与NC组比较,高剂量组BT549细胞p-p38MAPK和p-p65蛋白表达降低,差异有统计学意义(P<0.05)。与高剂量+anti-miR-NC组比较,高剂量+anti-miR-199a-3p组BT549细胞p-p38MAPK和p-p65蛋白表达升高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 槐角黄酮可抑制乳腺癌细胞增殖、迁移、侵袭和炎症反应,其机制可能是通过上调miR-199a-3p表达、抑制p38MAPK/NF-κB通路实现的。

miR-199a-3p通过靶向CABLES-1调控流体剪切力介导的成骨细胞增殖

目的探讨miR-199a-3p在流体剪切力(fluid shear stress,FSS)诱导成骨细胞增殖中的作用及其可能的分子机制。方法对成骨细胞MC3T3-E1加载1.2 Pa FSS,时间分别为0、15、30、45、60、75、90 min。使用miR-199a-3p模拟物或miR-199a-3p抑制物转染MC3T3-E1细胞。使用将过表达的miR-199a-3p以及其阴性对照分别转染MC3T3-E1细胞,并以1.2 Pa FSS处理45 min。将pcDNA NC、pcDNA-CABLES-1、si RNA NC、si RNA CABLES-1转染至MC3T3-E1细胞中。分别共转染pc DNA-CABLES-1与miR-199a-3p mimic以及si RNA-CABLES-1与miR-199a-3p inhibitor。CCK-8实验检测细胞活性;RT-qPCR检测CABLES-1、miR-199a-3p、CDK 6、Cyclin D1、PCNA表达水平;荧光素酶报告实验检测CABLES-1和miR-199a-3p的靶向关系。免疫荧光检测CABLES-1蛋白表达。Western blot检测CABLES-1、CDK 6、PCNA、Cyclin D1的蛋白表达。结果FSS作用下MC3T3-E1细胞中的miR-199a-3p出现显著下调。过表达的miR-199a-3p抑制成骨细胞增殖,下调miR-199a-3p表达促进成骨细胞增殖。miR-199a-3p可以逆转FSS诱导的成骨细胞增殖。双荧光素酶实验表明,miR-199a-3p靶向作用于CABLES-1,过表达的miR-199a-3p可抑制CBALES-1蛋白表达。CABLES-1能够促进成骨细胞增殖。miR-199a-3p通过CABLES-1抑制FSS诱导的成骨细胞增殖。结论FSS诱导的成骨细胞增殖通过下调miR-199a-3p并通过靶向作用于CABLES-1实现。研究结果为FSS诱导成骨细胞增殖机制的研究提供新方向,也为未来机械刺激在骨关节疾病治疗中的临床应用研究提供新思路。

miR-199a-3p靶向CD151对甲状腺癌B-CPAP细胞增殖、凋亡、侵袭和上皮间质转化的影响

目的探究miR-199a-3p过表达靶向CD151对甲状腺癌B-CPAP细胞增殖、凋亡、侵袭和上皮间质转化的影响。方法通过双荧光素酶报告基因实验验证miR-199a-3p和CD151的靶向关系。构建CD151pcDNA载体过表达CD151,将miR-199a-3p mimic与pcDNA-CD151单独或联合转染至B-CPAP细胞,将细胞随机分为4组:Control组、miR-199a-3p mimic组、pcDNA-CD151组和miR-199a-3p mimic+pcDNA-CD151组。BrdU染色检测细胞增殖水平;流式细胞术检测细胞凋亡率;流式分选检测细胞周期分布;Transwell检测细胞侵袭能力;Western blot检测MMP-2、Ki-67、Cyclin D1、E-cadherin、N-cadherin、Vimentin蛋白表达。结果CD151与miR-199a-3p存在靶向作用关系。与Control组比较,miR-199a-3p mimic组BrdU阳性细胞数降低,细胞凋亡率升高,G2/M、G1期比例降低,S期比例升高,侵袭细胞数降低,MMP-2、Ki-67、Cyclin D1蛋白表达降低,E-cadherin蛋白表达升高,N-cadherin、Vimentin蛋白表达降低;pcDNA-CD151组BrdU阳性细胞数升高,细胞凋亡率降低,G2/M、G1期比例升高,S期比例降低,侵袭细胞数升高,MMP-2、Ki-67、Cyclin D1蛋白表达升高,E-cadherin蛋白表达降低,N-cadherin、Vimentin蛋白表达升高。与pcDNACD151组比较,miR-199a-3p mimic+pcDNA-CD151组BrdU阳性细胞数降低,细胞凋亡率升高,G2/M、G1期比例降低,S期比例升高,侵袭细胞数降低,MMP-2、Ki-67、Cyclin D1蛋白表达降低,E-cadherin蛋白表达升高,N-cadherin、Vimentin蛋白表达降低(均P<0.01)。结论miR-199a-3p过表达靶向CD151抑制甲状腺癌B-CPAP细胞增殖、侵袭和上皮间质转化,并诱导细胞凋亡。

LncRNA NORAD通过miR-199a-3p调控ZNF217对非小细胞肺癌细胞增殖、凋亡及化疗敏感性的影响

背景与目的针对非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)的治疗和诊断仍然是医学界的难题,而探究NSCLC发生发展的分子机制是当前研究的热点。长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)NORAD在多种癌细胞中高表达,可能是促进NSCLC发生的分子靶点。探讨LncRNA NORAD通过miR-199a-3p调控锌指蛋白217(zinc finger protein 217,ZNF217)对NSCLC细胞增殖、凋亡及化疗敏感性的影响。方法实时定量聚合酶链式反应(real-time quantitative polymerase chain reaction,qRT-PCR)法检测正常肺上皮细胞BEAS-2B、肺癌H460细胞和顺铂(Cisplatin,DDP)耐药细胞株H460/DDP细胞中NORAD、miR-199a-3p、ZNF217基因表达;将H460/DDP细胞分为control组、si-NC组、si-NORAD组、miR-NC组、miR-199a-3p mimic组、si-NORAD+inhibitor NC组、si-NORAD+miR-199a-3p inhibitor组。检测细胞增殖、细胞凋亡情况,各组细胞NORAD、miR-199a-3p、ZNF217基因表达,Ki-67、caspase-9、ZNF217蛋白表达量;验证miR-199a-3p与NORAD和ZNF217的关系。结果与BEAS-2B细胞相比,H460和H460/DDP细胞中NORAD、ZNF217 mRNA表达显著升高(P<0.05),miR-199a-3p表达显著降低(P<0.05)。与H460细胞相比,H460/DDP细胞中NORAD、ZNF217 mRNA表达显著升高(P<0.05),miR-199a-3p表达显著降低(P<0.05)。与control组和si-NC组相比,si-NORAD组H460/DDP细胞增殖率、NORAD、ZNF217 mRNA表达、Ki-67、ZNF217蛋白表达显著降低(P<0.05),凋亡率、miR-199a-3p表达、caspase-9表达显著升高(P<0.05)。与miR-NC组相比,miR-199a-3p mimic组H460/DDP细胞增殖率、NORAD、ZNF217 mRNA表达、Ki-67、ZNF217蛋白表达显著降低(P<0.05),凋亡率、miR-199a-3p、caspase-9表达显著升高(P<0.05)。与si-NORAD+inhibitor NC组相比,si-NORAD+miR-199a-3p inhibitor组H460/DDP细胞增殖率、ZNF217 mRNA表达、Ki-67、ZNF217蛋白表达显著升高,凋亡率、miR-199a-3p表达、caspase-9表达显著降低(P<0.05)。结论下调NORAD表达可增强miR-199a-3p表达并抑制ZNF217表达,进而抑制H460/DDP细胞增殖,促进其凋亡,增强其DDP化疗敏感性。

miR-199a-3p通过靶向VEGFA缓解H_(2)O_(2)诱导泪腺上皮细胞损伤

目的观察miR-199a-3p、血管内皮生长因子(VEGF)A对过氧化氢(H_(2)O_(2))诱导泪腺上皮细胞氧化应激、凋亡的作用并探究二者之间的关系。方法通过H_(2)O_(2)诱导泪腺上皮细胞损伤模型。将泪腺上皮细胞随机分为对照组(不做任何处理)、H_(2)O_(2)组(200μmol/L)H_(2)O_(2)+anti-miR-con组(转染anti-miR-con)、H_(2)O_(2)+anti-miR-199a-3p组(转染anti-miR-199a-3p)、H_(2)O_(2)+pcDNA组(转染pcDNA)、H_(2)O_(2)+pcDNA-VEGFA组(转染pcDNA-VEGFA)、H_(2)O_(2)+anti-miR-199a-3p+si-con组(共转染anti-miR-199a-3p和si-con)、H_(2)O_(2)+anti-miR-199a-3p+si-VEGFA组(共转染anti-miR-199a-3p和si-VEGFA),除对照组及H_(2)O_(2)组外,剩余组转染泪腺上皮细胞,再用H_(2)O_(2)处理2 h。实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)检测细胞miR-199a-3p、VEGFA表达;Western印迹法检测细胞VEGFA、B细胞淋巴瘤(Bcl)-2、Bcl-2相关X蛋白(Bax)表达;免疫荧光法检测细胞活性氧(ROS)含量;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测细胞谷胱甘肽(GSH)、丙二醛(MDA)含量;流式细胞术检测细胞凋亡率;双荧光素酶报告基因检测实验检测细胞的荧光活性。结果在H_(2)O_(2)的诱导下,泪腺上皮细胞中miR-199a-3p表达显著升高,而VEGFA表达显著下降(均P<0.05)。敲除miR-199a-3p表达可以降低H_(2)O_(2)诱导的泪腺上皮细胞中ROS、MDA、Bax表达,促进GSH、Bcl-2表达,降低细胞的凋亡水平,差异显著(均P<0.05)。Starbase预测miR-199a-3p与VEGFA的3′非翻译区(UTR)端存在6个连续的结合位点,且miR-199a-3p明显抑制野生型VEGFA的荧光活性,并负向调控VEGFA蛋白表达(均P<0.05)。过表达VEGFA蛋白可降低H_(2)O_(2)诱导的泪腺上皮细胞中ROS、MDA、Bax表达,促进GSH、Bcl-2表达,降低细胞的凋亡水平,差异显著(均P<0.05)。同时敲低miR-199a-3p和VEGFA,H_(2)O_(2)诱导的泪腺上皮细胞中ROS、MDA、Bax表达显著增加,GSH、Bcl-2表达显著降低,且凋亡水平显著增加(均P<0.05)结论miR-199a-3p促进H_(2)O_(2)诱导的泪腺上皮细胞氧化应激和凋亡,其机制与靶向调控VEGFA有关。

罗汉果皂苷提取物通过调控miR-199a-3p对高糖诱导的肾小管上皮细胞损伤的影响

目的探究罗汉果皂苷提取物对高糖诱导的肾小管上皮细胞损伤的影响及潜在分子机制。方法体外培养人肾小管上皮细胞HK-2,采用高糖和罗汉果皂苷提取物干预HK-2细胞,细胞计数试剂盒(CCK-8)检测细胞活力,流式细胞术分析细胞凋亡率,Western印迹分析B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)和Bcl-2相关X蛋白(Bax)蛋白表达,实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)检测miR-199a-3p的表达,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测肿瘤坏死因子(TNF)-α、白细胞介素(IL)-6和IL-8的表达。结果高糖能够抑制HK-2细胞活力,促进细胞凋亡和Bax的表达,抑制Bcl-2的表达,提高TNF-α、IL-6和IL-8的含量;罗汉果皂苷提取物能够抑制高糖诱导的HK-2细胞凋亡,提高细胞活力,促进miR-199a-3p的表达,降低TNF-α、IL-6和IL-8的含量;过表达miR-199a-3p能够抑制高糖诱导的HK-2细胞损伤,下调miR-199a-3p能够逆转罗汉果皂苷提取物对高糖诱导的HK-2细胞损伤保护作用。结论罗汉果皂苷提取物能够通过上调miR-199a-3p的表达对高糖诱导的HK-2细胞损伤起保护作用。

类风湿关节炎患者血清lncRNA TUG1、miR-199a-3p表达水平及其与疾病严重程度的相关性

目的探讨类风湿关节炎(RA)患者血清长链非编码RNA(lncRNA)牛磺酸上调基因1(TUG1)和miR-199a-3p表达水平,以及两者与疾病严重程度的关系。方法选取102例RA患者为RA组,另选取102例健康者作为健康组。比较RA组与健康组之间血清lncRNA TUG1、miR-199a-3p表达水平,以及不同疾病活动度RA患者之间血清lncRNA TUG1和miR-199a-3p表达水平、基于C反应蛋白的28个关节疾病活动度评分(DAS28-CRP)、血清类风湿因子水平、血沉。分析RA患者血清lncRNA TUG1表达水平与血清miR-199a-3p表达水平的相关性,以及两者与DAS28-CRP、血清类风湿因子水平、血沉的相关性。结果RA组患者血清lncRNA TUG1表达水平高于健康组,血清miR-199a-3p表达水平低于健康组(均P<0.05)。随RA疾病活动度增加,RA患者血清lncRNA TUG1表达水平、血清类风湿因子水平、DAS28-CRP及血沉均呈升高趋势,而血清miR-199a-3p表达水平呈降低趋势(均P<0.05)。RA患者的血清lncRNA TUG1表达水平与DAS28-CRP、血清类风湿因子水平、血沉均呈正相关,而血清miR-199a-3p表达水平与血清lncRNA TUG1表达水平及上述指标均呈负相关(均P<0.05)。结论RA患者血清lncRNA TUG1表达水平上调,血清miR-199a-3p表达水平下调,二者均与疾病严重程度相关,两者有助于临床评估RA患者的病情。

miR-199a-3p在乳腺癌中的表达及其作用

背景与目的:多种微小RNA(micro RNA,mi RNA)在乳腺癌中异常表达,在乳腺癌的发生、发展中起重要作用。mi RNA可能是治疗乳腺癌的新靶点。该研究旨在探讨mi R-199a-3p在乳腺癌中的表达水平,及其对乳腺癌癌细胞增殖和凋亡的影响。方法:运用实时定量聚合酶链式反应(quantitative real-time polymerase chain reaction,QRT-PCR)检测乳腺癌患者癌组织、癌旁正常组织、人乳腺癌细胞和人乳腺细胞中mi RNA-199a-3p的表达水平,mi R-199a-3p mimic(或inhibitor)转染乳腺癌细胞MDA-MB-231过表达(或沉默)mi R-199a-3p的表达后,通过MTT法检测细胞增殖能力,Hoechst染色法和caspase-3活力测试检测细胞凋亡情况。结果:相对癌旁正常组织和人正常乳腺细胞,mi R-199a-3p在乳腺癌患者癌组织和人乳腺癌细胞中表达下调。在MDAMB-231中转染mi R-199a-3p mimic过表达mi R-199a-3p可抑制细胞增殖,促进其凋亡;在MDA-MB-231中转染mi R-199a-3p inhibitor沉默mi R-199a-3p可促进细胞增殖,抑制其凋亡。结论:mi R-199a-3p在乳腺癌中表达下调,并通过调节乳腺癌细胞增殖和凋亡发挥抑癌作用。

miR-199a-3p靶基因预测及生物信息学分析

目的为深入研究miR-199a-3p在膀胱癌形成和发展中的作用提供理论依据。方法分析miR-199a-3p序列,预测其靶基因和转录因子,并对靶基因进行GO富集和KEGG Pathway分析;构建TF-miR-199a-3p-靶基因网络调控图。结果 miR-199a-3p序列在多物种间具有高度保守性;GO分析发现miR-199a-3p的靶基因参与细胞调节、代谢调节、细胞大分子生物合成等生物过程(P<0.01);KEGG Pathway分析发现miR-199a-3p的靶基因显著富集在上皮细胞的细菌入侵通路、ECM受体的相互作用通路、PI3K-Akt信号通路、MAPK信号通路、小细胞肺癌通路、癌症中的蛋白聚糖通路等;根据构建的TF-miR-199a-3p-靶基因网络调控图,挖掘出可能受miR-199a-3p调控的重要基因有MYC、SP1、mTOR、NFκB、NFκB1等。结论 miR-199a-3p可能通过直接靶向作用mTOR,调节PI3K-Akt-mTOR信号通路,从而参与膀胱癌的形成和发展。

miR-199a-3p对前列腺癌细胞迁移及侵袭能力的影响

目的从miR-199a-3p在前列腺癌高、低转移潜能细胞中的表达差异出发,研究其在高转移前列腺癌细胞株1E8细胞运动转移中的作用及可能的分子机制。方法运用Realtime PCR法检测miR-199a-3p在前列腺癌高、低转移潜能配对细胞系中的表达差异。通过划痕实验及transwell实验观察1E8细胞及转染miR-199a-3p mimics及mimics NC后该细胞运动迁移能力的变化。结果 (1)RealtimePCR结果显示高转移潜能1E8细胞中miR-199a-3p表达水平明显低于低转移潜能2B4细胞。(2)上调miR-199a-3p会减弱1E8细胞的运动转移能力。结论 miR-199a-3p的上调可以抑制前列腺癌细胞的运动迁移能力。

重症肺炎支原体肺炎患儿外周血miR-199a-3p表达水平及其对预后不良的预测价值

目的检测重症肺炎支原体肺炎(SMPP)患儿外周血微小RNA-199a-3p(miR-199a-3p)表达水平,并分析其对患儿预后不良的预测价值。方法选择2019年2月至2020年10月陕西省榆林市星元医院收治的168例SMPP患儿作为重症组,165例轻症MPP患儿作为轻症组,150例健康儿童作为健康组。采用实时荧光定量PCR检测3组研究对象外周血miR-199a-3p表达水平;重症组、轻症组均予以常规治疗,统计治疗28 d后预后不良发生率;采用Logistic回归分析探讨外周血miR-199a-3p表达水平与重症组预后不良的关系,并分析其对重症组患儿预后不良的预测价值。结果重症组、轻症组患儿外周血miR-199a-3p表达水平均低于健康组,且重症组低于轻症组,差异均有统计学意义(P<0.05);重症组患儿治疗28 d后预后不良发生率高于轻症组,差异有统计学意义(P<0.05);发病至入院时间>3 d、入院时急性生理和慢性健康状况评分Ⅱ评分>30分、外周血miR-199a-3p表达水平降低均是重症组患儿预后不良的最佳独立危险因素(P<0.05);外周血miR-199a-3p表达水平预测重症组患儿预后不良的最佳截断值为0.25,灵敏度、特异度、受试者工作特征曲线下面积分别为94.12%、97.35%、0.984。结论SMPP和轻症MPP患儿外周血miR-199a-3p表达水平均下降,SMPP患儿水平更低,预后不良发生率更高,miR-199a-3p表达水平与患儿预后不良有关,对SMPP患儿预后不良具有较好的预测价值。

血清miR-199a-3p、TXNIP与甲亢患者心房颤动的相关性分析

目的探讨血清中微小RNA-199a-3p(miR-199a-3p)、硫氧还蛋白相互作用蛋白(TXNIP)水平与甲状腺功能亢进症(简称甲亢)患者心房颤动(简称房颤)的相关性。方法选取2018年3月至2020年9月蔡甸区人民医院收治的甲亢患者218例作为研究对象,按照是否合并房颤分为合并房颤组(98例)与未合并房颤组(120例)。采集患者入院后静脉血,检测患者血清中miR-199a-3p、TXNIP水平;采用多因素Logistic回归分析甲亢患者发生房颤的影响因素;采用TargetScan Human网站预测miR-199a-3p与TXNIP的靶向关系;采用Pearson相关分析miR-199a-3p与TXNIP水平的相关性;采用受试者工作特征(ROC)曲线分析血清miR-199a-3p与TXNIP对甲亢患者发生房颤的诊断价值。结果与未合并房颤组比较,合并房颤组患者总胆固醇和血清中miR-199a-3p水平较低,年龄、心率、左心房内径、左心室内径、血清中TXNIP水平较高(P<0.05)。总胆固醇、miR-199a-3p水平升高均是甲亢患者发生房颤的独立保护因素,年龄增加、左心房内径增大、TXNIP水平升高均是甲亢患者发生房颤的独立危险因素(P<0.05)。TargetScan Human网站预测,miR-199a-3p与TXNIP存在靶向结合位点。Pearson相关分析结果显示,甲亢合并房颤患者血清miR-199a-3p与TXNIP水平呈负相关(r=-0.226,P=0.025);血清miR-199a-3p水平与心率、左心房内径呈负相关(r=-0.248、-0.260,P=0.037、0.029);血清TXNIP水平与心率、左心房内径呈正相关(r=0.255、0.236,P=0.032、0.042)。血清miR-199a-3p、TXNIP评估甲亢患者发生房颤的曲线下面积分别为0.848、0.738,灵敏度分别为95.92%、82.65%,特异度分别为72.50%、57.50%。结论甲亢合并房颤患者血清miR-199a-3p呈低表达,TXNIP呈高表达,二者对评估甲亢患者发生房颤的风险具有一定的参考价值。

MiR-199a-3p对大鼠肝细胞增殖的抑制作用

目的探讨miR-199a-3p对体外培养SD大鼠BRL-3A增殖的影响.方法人工合成miR-199a-3p模拟物、miR-199a-3p阻遏物及其各自阴性对照载体,分别转染BRL-3A肝细胞,转染后12 h、24 h、48 h和72h,应用定量PCR分析细胞中Cyclin D1和PCNA mRNA表达水平,免疫组化方法观测Cyclin D1和PCNA阳性细胞比率,流式细胞仪检测细胞各周期比例和CCK 8法检测细胞增殖.实验分4组:mimics组,mi-nc组,inhibitors组和in-nc组.结果转染后24 h、48 h、72 h,inhibitors组肝细胞Cyclin D1和PCNA mRNA表达水平较in-nc组显著增多(P<0.05),而mimics组肝细胞Cyclin D1和PCNA mRNA表达水平较mi-nc组显著降低(P<0.05).inhibitors组肝细胞Cyclin D1和PCNA阳性细胞比率均高于mi-nc组(P<0.05),而mimics组肝细胞Cyclin D1和PCNA阳性细胞比率均低于mi-nc组(P<0.05).inhibitorss组肝细胞G0/G1期细胞比例明显低于in-nc组(P<0.05),而mimics组肝细胞G0/G1期细胞比例明显高于mi-nc组(P<0.05).同时,inhibitors组肝细胞S期细胞比例明显低于mi-nc组(P<0.05)和in-nc组(P<0.05).inhibitors组肝细胞增殖能力明显高于in-nc组(P<0.05),mimics组肝细胞增殖能力明显低于mi-nc组(P<0.05).结论 miR-199a-3p能够延长大鼠BRL-3A肝细胞周期和抑制肝细胞增殖,其作用可能与抑制Cyclin D1和PCNA的表达有关.

白杨素通过调控miR-199a-3p/ZHX1抑制食管鳞癌细胞增殖和侵袭

目的:探究白杨素(Chrysin,CR)对食管鳞癌细胞增殖和侵袭的影响及其潜在的分子机制。方法:将食管鳞癌细胞分为对照组(未转染、未CR处理细胞常规培养)、miR-NC组(稳定转染的miR-199a-3p-NC用等量DSMO培养)、miR mimic组(稳定转染的miR-199a-3p mimic用等量DSMO培养)、CR-miR-NC组(稳定转染的miR-199a-3p-NC用终浓度100μmol·L-1CR培养)、CR-miR mimic组(稳定转染的miR-199a-3p mimic用终浓度100μmol·L-1CR培养),48 h后,采用流式细胞仪检测转染效率,采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测EC9706细胞中miR-199a-3p和锌指和同源框蛋白1(Zinc-fingers and homeoboxes protein 1,ZHX1)表达情况,采用荧光素活性和蛋白免疫印迹(Western blot)检测miR-199a-3p对ZHX1的调控作用,分别采用MTT和transwell小室实验检测EC9706细胞增殖和侵袭能力。结果:流式细胞仪检测结果显示转染效率达到80%以上;CR-miR-NC组miR-199a-3p的表达水平显著低于miR-NC组(P<0.05);CR-miR mimic组miR-199a-3p的表达水平显著低于miR mimic组(P<0.05),CR-miR-NC组ZHX1的表达水平显著高于miR-NC组(P<0.05);CR-miR mimic组ZHX1的表达水平显著高于miR mimic组(P<0.05)。荧光素酶活性测定显示,在转染ZHX1 3’UTR的细胞中,与miR-199a-3p-NC组相比,miR-199a-3p mimic组荧光素酶活性显著降低(P<0.05),而在转染ZHX13’UTR-Mut的细胞中,miR-199a-3p mimic组与miR-199a-3p-NC组的荧光素酶活性差异无统计学意义(P>0.05),CR-miR-NC组EC9706细胞增殖和侵袭能力显著低于miRNC组(P<0.05),CR-miR mimic组EC9706细胞增殖和侵袭能力显著低于miR mimic组(P<0.05)。结论:CR通过调控miR-199a-3p/ZHX1抑制食管鳞癌细胞增殖和侵袭,为食管鳞癌的靶向治疗提供一定的理论依据。

miR-199a-3p/Nme2在TGF-β1信号通路中的作用分析

通过microRNA芯片技术在小鼠GC-1 spg细胞中筛选发现microRNA-199a-3p(miR-199a-3p)受转化生长因子TGF-β1调节。为了进一步探讨二者的关系,通过基因克隆与载体构建技术、双荧光素酶报告基因检测及定量PCR实验,发现miR-199a-3p靶向识别肿瘤转移抑制基因2(Nme2)的3'非编码区(UTR)序列,且正向调控Nme2的表达。利用TGF-β1处理GC-1 spg细胞后,结果显示Nme2和miR-199a-3p在mRNA水平的表达均显著上调;进一步将miR-199a-3p和TGF-β1双重作用于GC-1 spg细胞后,结果表明Nme2的表达会明显增强,而且在TGF-β1通路中,miR-199a-3p被抑制的部分功能可能会被Nme2补偿。综上,miR-199a-3p对Nme2基因具有直接靶向识别和调控作用,且在参与TGF-β1信号通路的生物学效应中,二者在功能上相互关联。

LncRNA SNHG1通过吸附miR-199a-3p促进肾透明细胞癌细胞迁移和侵袭

目的探讨LncRNA SNHG1对肾透明细胞癌细胞侵袭及转移能力的影响,并探索潜在机制。方法利用划痕实验和Transwell实验检测SNHG1对肾透明细胞癌细胞迁移和侵袭能力的影响,利用双荧光素酶报告基因实验检测SNHG1是否可结合miR-199a-3p,利用实时荧光定量PCR检测SNHG1与miR-199a-3p表达的关系。结果抑制SNHG1的表达后,细胞迁移和侵袭能力均升高(P<0.01)。双荧光素酶报告基因实验结果显示SNHG1能够吸附miR-199a-3p(P<0.01)。实时荧光定量PCR实验结果显示抑制SNHG1的表达可促进miR-199a-3p的表达(P<0.01)。结论 SNHG1可通过吸附miR-199a-3p促进肾透明细胞癌细胞迁移和侵袭。

miR-199a-3p在卵巢癌组织中的表达及其对癌细胞增殖转移的影响

目的探讨miR-199a-3p在卵巢癌组织中表达情况及其对癌细胞增殖转移能力的影响机制。方法培养四株卵巢癌细胞系SK-OV-3、OV-90、CAOV3、HO-8910S,采用RT-qPCR法检测四株卵巢癌细胞中miR-199a-3p的表达情况。选择miR-199a-3p表达较低的卵巢癌细胞,分为对照组、NC mimic转染组、miR-199a-3p mimic组。对照组不加任何试剂,miR-199a-3p mimic组、NC mimic转染组分别加入miR-199a-3p mimic和NC mimic转染试剂。采用MTT法、Transwell小室试验检测卵巢癌细胞的增殖及迁移能力。RT-qPCR检测过表达miR-199a-3p后卵巢癌细胞中smad1的表达情况,双荧光素酶试验观察miR-199a-3p对smad1的调控作用。结果miR-199a-3p在卵巢癌细胞株CaOV3及OV-90中的表达水平低于其他细胞(P均<0.05)。CaOV3及OV-90细胞过表达miR-199a-3p后,miR-199a-3p mimic组细胞增殖及迁移能力低于NC mimic组(P均<0.05)。miR-199a-3p mimic组细胞中smad1的表达低于NC mimic组(P<0.05)。miR-199a-3p互补结合smad1mRNA的3′UTR区;与wt-smad13′UTR+NC mimic组相比,wt-smad13′UTR+miR-199a-3p mimic组细胞的相对荧光素酶活性降低(P均<0.05)。结论过表达miR-199a-3p能够抑制卵巢癌细胞的增殖和迁移能力,其机制可能与调节smad1的基因表达有关。

miR-199a-3p对高脂饮食诱导的非酒精性脂肪性肝病模型小鼠肝脏脂肪变性的影响

目的研究miR-199a-3p对高脂饮食诱导的非酒精性脂肪性肝病(non-alcoholic fatty liver disease,NAFLD)模型小鼠肝脏脂肪变性的影响。方法 40只雄性C57BL/6J小鼠适应性喂养7 d,然后随机分成4组,正常对照组10只饲喂标准饲料(SCD),模型组10只饲喂高脂饮食(HFD),喂养8周后收集肝组织。另外,在2组饲喂HFD的小鼠(每组10只)通过尾静脉静脉注射腺病毒,使用腺病毒载体作为对照(Ad-Ctrl组)与表达miR-199a-3p(Ad-199a组)的腺病毒载体进行比较。2周后收集肝脏。进行油红O染色观察肝脏组织学病理改变;测量肝脏TG含量; PCR测量肝脏miRNA、FASN、SREBP1 mRNA的表达。结果在SCD组和HFD组小鼠肝脏中检测到6种下调miRNA。与SCD组小鼠相比,除miR-145-5p外,HFD组小鼠中检测到的miRNA均显著下调。同时,miR-199a-3p具有显著倍数变化(P <0. 001)。与Ad-Ctrl组相比,Ad-199a组肝脏质量显著减轻(P <0. 05); Ad-199a组肝脏质量/体质量值显著下降(P <0. 01); Ad-199a组肝脏TG含量明显降低(P <0. 01);油红O染色结果显示,SCD组、Ad-199a组未见明显的脂滴沉积;而HFD组及Ad-Ctrl组则见到大量大小不一的红色脂滴沉积。与Ad-Ctrl组相比,Ad-199a组肝脏内miR-199a-3p的表达量显著提高(P <0. 01);脂肪合成酶基因(FASN)显著减少(P <0. 001);固醇调节元件结合蛋白(SREBP1)显著降低(P <0. 01)。结论 miRNA-199a-3p在肝脏中表达下调,在肝脏脂肪形成过程中有明显抑制作用,可以作为治疗NAFLD潜在治疗靶点,但其具体机制需进一步研究。

miR-199a-3p通过DDR调控Wnt/β-catenin通路抑制卵巢癌细胞侵袭转移

目的:探讨miR-199a-3p调控卵巢癌细胞侵袭转移及机制。方法:QPCR技术检测22例卵巢癌组织及20例卵巢正常组织中DDR2 mRNA表达水平。采用miR-199a-3p mimics转染人卵巢癌SKOV3细胞,QPCR技术检测DDR2 mRNA表达,Western blot法检测DDR2、Wnt/β-catenin相关通路信号分子表达。结果:DDR2在卵巢癌组织中表达明显升高。较SKOV3细胞组,miR-199a-3p mimics组中DDR2 mRNA表达水平降低,DDR2、β-catenin、c-myc、c-JUN表达水平明显下调。结论:miR-199a-3p可能通过下调DDR和Wnt/β-catenin通路抑制卵巢癌细胞体外侵袭转移。

IL-8通过下调miR-199a-3p对肾癌细胞迁移、侵袭及上皮-间质转化的影响

目的研究IL-8、miR-199a-3p对肾癌细胞迁移、侵袭及上皮间质化的影响并探讨其作用机制。方法运用ELISA检测肾癌组织及癌旁正常组织中IL-8的表达;qRT-PCR检测肾癌组织及癌旁正常组织中miR-199a-3p的表达;将IL-8+miR-199a-3p组(转染miR-199a-3p mimics并与IL-8共处理)、IL-8+miR-con组(转染Negative control mimics并与IL-8共处理)均用脂质体法转染至786-0细胞,再用IL-8(100μg/L)处理;Transwell检测各组细胞的迁移、侵袭;Western blot检测各组细胞中Ecadherin、N-cadherin、p-Smad1的蛋白表达。结果与癌旁正常组织相比,肾癌组织中IL-8表达显著升高,miR-199a-3p表达显著降低(P<0.05),且IL-8可呈浓度依赖性抑制miR-199a-3p表达;过表达miR-199a-3p可明显抑制IL-8对786-0细胞迁移、侵袭的促进作用,且可抑制IL-8对786-0细胞中E-cadherin、N-cadherin、p-Smad1蛋白的表达。结论 IL-8可促进肾癌细胞的迁移侵袭及上皮-间质转化,其机制可能与下调miR-199a-3p有关,这将可为肾癌的高效治疗提供依据。