miR-200c/ZEB1/E-cadherin轴在胆管癌转移侵袭中的作用及对胆管癌预后评估的价值

目的:探讨微小RNA-200c(miR-200c)/锌指转录因子(ZEB1)/E-钙黏蛋白(E-cadherin)在胆管癌(HCCA)转移、侵袭中的作用及对HCCA预后评估的临床价值。方法:选取2020年08月至2022年12月间我院收治的胆管癌患者36例为研究对象,同时选取胆管良性疾病患者(胆总管结石或胆管良性狭窄)20例作为对照。采用原位杂交、实时荧光定量PCR检测miR-200c在HCCA患者组织及血清中的表达;生存曲线分析miR-200c表达与总生存期的相关性;Transwell实验检测细胞的迁移及侵袭能力;免疫印迹检测ZEB1及E-cadherin蛋白的表达。体内研究构建裸鼠成瘤实验,采用免疫组化检测ZEB1及E-cadherin蛋白的表达;Tunel技术检测组织中的凋亡情况。受试者工作特征(ROC)曲线评估生物标志物对胆管癌预后的诊断效能。结果:miR-200c低表达于HCCA组织及血清中;生存曲线分析显示,miR-200c表达与患者的总生存期呈正相关性,TNM分期与患者的总生存期呈负相关性;miR-200c mimics抑制了胆管癌细胞的迁移和侵袭能力,并降低ZEB1表达而诱导E-cadherin表达;转染ZEB1逆转miR-200c的作用效应,促进胆管癌细胞的迁移和侵袭特性,抑制胆管癌细胞的凋亡。CA199、CEA和miR-200c联合检测诊断胆管癌预后的ROC曲线下面积为0.892,灵敏度0.8611,特异度0.8000。结论:miR-200c/ZEB1/Ecadherin轴参与胆管癌的转移侵袭;CA199、CEA和miR-200c联合检测对胆管癌预后的诊断效能良好,对临床胆管癌的治疗策略具有重要指导价值。

尿外泌体miR-27a、miR-27b、miR-29c、miR-200c在早期糖尿病肾病诊断中的价值

目的探讨尿外泌体miR-27a、miR-27b、miR-29c、miR-200c在早期糖尿病肾病(DN)诊断中的价值。方法选取2021年1月—2022年12月金华市人民医院2型糖尿病(T2DM)患者260例,根据其就诊时的微量尿蛋白排泄率(UAER)分为单纯T2DM组(135例)、早期DN组(82例)、临床期DN组(43例)。另选取同期金华市人民医院健康体检者50名作为正常对照组。收集所有研究对象的一般资料,并检测尿外泌体miR-27a、miR-27b、miR-29c、miR-200c和尿液肌酐(UCr)、尿液尿素氮(UUN)、尿液转化生长因子-β1(TGF-β1,以UCr校正)、糖化血红蛋白(HbA_(1c))、血清尿酸(UA)。采用Pearson相关分析评价各项指标之间的相关性。采用多元逐步回归分析评价尿液TGF-β1的影响因素。采用受试者工作特征(ROC)曲线评价miR-27a、miR-27b、miR-29c、miR-200c诊断早期DN的效能。结果正常对照组、单纯T2DM组、早期DN组和临床期DN组尿外泌体miR-27a、miR-27b、miR-200c相对表达量依次升高(P<0.001),miR-29c相对表达量依次降低(P<0.001)。单纯T2DM组、早期DN组和临床期DN组UUN、UCr、校正TGF-β1和HbA_(1c)、UA水平均高于正常对照组(P<0.05)。单纯T2DM组、早期DN组和临床期DN组UUN、UCr、UA、校正TGF-β1水平和UAER依次升高(P<0.001)。尿外泌体miR-27a、miR-27b、miR-200c与UCr、校正TGF-β1均呈显著正相关(P<0.01),miR-29c与UCr、校正TGF-β1均呈显著负相关(P<0.001),与UUN、UA均无相关性(P>0.05)。HbA_(1c)、UCr和尿外泌体miR-27a、miR-27b、miR-29c、miR-200c是尿液校正TGF-β1水平的独立影响因素(P<0.01)。尿外泌体miR-27a、miR-27b、miR-29c、miR-200c单项检测和联合检测诊断早期DN的曲线下面积(AUC)分别为0.823、0.855、0.799、0.557、0.923。结论尿外泌体miR-27a、miR-27b、miR-29c、miR-200c联合检测对早期DN有较好的诊断价值。

miR-200c靶向ZEB1调控宫颈癌细胞的增殖和凋亡

目的探究miR-200c对宫颈癌细胞增殖和凋亡的影响及其分子机制。方法利用RT-qPCR检测52例宫颈癌组织及癌旁组织中miR-200c的表达水平,使用miR-200c模拟物或抑制物转染宫颈癌细胞系,RT-qPCR验证转染效率后,使用CCK8检测转染细胞的增殖水平,流式细胞术检测转染细胞的凋亡水平;生物信息学预测miR-200c的靶基因,荧光素酶报告基因验证其靶向关系;RT-qPCR检测癌组织中靶基因的表达水平,Pearson相关性分析miR-200c和靶基因的表达关系;RT-qPCR和蛋白质印迹检测转染靶基因siRNA或质粒细胞的增殖和凋亡水平。结果宫颈癌组织中miR-200c的表达显著低于癌旁组织,转染miR-200c模拟物的HT3细胞增殖水平显著降低,凋亡水平显著增加,而转染miR-200c抑制物的HeLa细胞增殖水平显著增加,凋亡水平显著降低;荧光素酶报告基因实验证实ZEB1是miR-200c的指标靶标,miR-200c模拟物显著降低ZEB1表达,而抑制物则发挥相反效应;宫颈癌组织中ZEB1的表达显著高于癌旁组织,且其表达与miR-200c呈显著负相关关系;敲低ZEB1显著抑制HT3的增殖水平,促进其凋亡,而过表达ZEB1则发挥相反效应。结论miR-200c通过靶向抑制ZEB1表达调控宫颈癌细胞的增殖与凋亡,从而参与宫颈癌的发生发展。

感音神经性耳聋患者外周血miR-34c、miR-29b的表达及意义

目的探讨感音神经性耳聋(SNHL)患者外周血miR-34c、miR-29b的表达情况及临床意义。方法筛选2020年6月至2023年6月我院收治的神经性耳聋患者140例为观察组,同期选取体检健康者40例为对照组。根据听力损伤情况将SNHL患者分为轻度耳聋组63例,中度耳聋组42例,重度耳聋组35例。采用qRT-PCR检测miR-34c、miR-29b的表达,并检测VEGF、氧化应激水平(TAC、SOD、MDA)、NO和Cx26;采用Pearson检验进行相关性分析,采用logistic回归分析SNHL病情严重程度的独立危险因素,采用ROC曲线评估miR-34c、miR-29b对SNHL患者病情严重程度的预测价值。结果4组NO、TAC、SOD、Cx26水平比较,重度耳聋组<中度耳聋组<轻度耳聋组<对照组(P<0.05);VEGF和MDA水平比较,重度耳聋组>中度耳聋组>轻度耳聋组>对照组(P<0.05)。4组miR-34c mRNA和miR-29b mRNA表达水平比较,重度耳聋组>中度耳聋组>轻度耳聋组>对照组(P<0.05)。Pearson相关分析显示,SNHL患者外周血miR-34c、miR-29b与VEGF、MDA呈正相关,与NO、TAC、SOD、Cx26呈负相关(P<0.05)。多因素logistic回归分析显示,VEGF、MDA、NO、Cx26、TAC、SOD、miR-34c、miR-29b是影响SNHL病情严重程度的独立因素。结论miR-34c、miR-29b在SNHL患者中过表达,可作为预测评估SNHL患者病情严重程度的血清标志物。

lncHAGLR通过抑制miR-26a激活NF-κB促进骨关节炎大鼠软骨细胞的炎症反应和细胞凋亡

目的探讨长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)HOXD反义生长相关长链非编码RNA(HOXD antisense growth-associated long non-coding RNA,lncHAGLR)对大鼠膝关节退行性软骨细胞C518细胞的炎症反应和凋亡的作用与潜在机制。方法采用StarBase和荧光素酶报告基因法预测和确认ln-cHAGLR和微小RNA(microRNA,miR)-26a之间的相互作用。为研究lncHAGLR对miR-26a表达的调控作用,将C518细胞分为沉默lncHAGLR的小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)载体质粒(si-ln-cHAGLR)组、siRNA的阴性对照(negative control of siRNA,si-NC)组、miR-26a抑制剂阴性对照(nega-tive control of miR-26a inhibitor,inhibitor-NC)组、miR-26a的抑制剂(miR-26a-inhibitor)组。此外,为研究lncHAGLR是否通过调控miR-26a对C518细胞的炎症和凋亡具有调控作用,将C518细胞分为5组:Control组、白细胞介素(interleukin,IL)-1β组、IL-1β+si-NC组、IL-1β+si-lncHAGLR组和IL-1β+si-lncHA-GLR+miR-26a-inhibitor组。采用实时定量PCR(real-time quantitative PCR,qRT-PCR)分析lncHAGLR和miR-26a的水平。采用四甲基偶氮唑蓝(methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)、乳酸脱氢酶(lactate dehydro-genase,LDH)和流式细胞术(flow cytometry,FCM)检测C518细胞的增殖、细胞毒性和凋亡情况。蛋白质印迹检测切割模式的半胱天冬酶3(CLEAVED-CASPASE3)、核因子κB P65(nuclear factor-κB P65,NF-κB P65)、磷酸化的NF-κB P65(phosphorylated NF-κB P65,P-NF-κB P65)的表达。ELISA法检测白细胞介素(interleukin,IL)-6和肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor,TNF)-α的释放。结果lncHAGLR直接靶向miR-26a。在IL-1β组,lncHAGLR水平明显较Control组增高,miR-26a水平较Control组降低(P均<0.05)。此外,IL-1β+si-lncHAGLR组减轻了IL-1β诱导的C518细胞的炎症并抑制了凋亡,而且细胞的活力增加,LDH释放减少,CLEAVED-CASPASE3的表达被抑制,TNF-α和IL-6的分泌减少,且p-NF-κB P65表达减少(P均<0.05)。IL-1β+si-lncHAGLR+miR-26a-inhibitor组逆转了IL-1β+si-lncHAGLR组的结果(P均<0.05)。结论lncHAGLR通过抑制miR-26a激活NF-κB促进C518细胞的炎症反应和细胞凋亡,表明lncHAGLR可能是治疗骨关节炎的一个有价值的靶点。

miR-200c PAPP-A水平与经阴道超声鉴别诊断先兆流产和异位妊娠的价值

目的:探究血清miR-200c、妊娠相关血浆蛋白A(PAPP-A)水平与经阴道超声鉴别诊断先兆流产和异位妊娠的价值。方法:本研究开展时间为2020年1月至2022年1月,研究对象为此时间段内在我院就诊的正常早孕孕妇、异位妊娠及先兆流产孕妇各43例,患者均接受阴道超声检查,记录各项超声参数,并比较各组孕妇就诊时血清miR-200c、PAPP-A水平差异,探究其对孕妇先兆流产及异位妊娠的诊断价值。结果:三组间孕妇的妊娠黄体平均径比较组间差异无统计学意义(P>0.05),异位妊娠孕妇的子宫内膜厚度低于先兆流产组和正常早孕组,且先兆流产组低于正常早孕组(P<0.05);先兆流产组孕妇的RI高于异位妊娠组和正常早孕组,且异位妊娠组高于正常早孕组(P<0.05);先兆流产组和异位妊娠组孕妇的PSV均低于正常早孕组(P<0.05),但先兆流产组和异位妊娠组组间差异无统计学意义(P>0.05)。先兆流产组和异位妊娠组孕妇的血清miR-200c水平高于正常早孕组(P<0.05),但先兆流产组和异位妊娠组组间差异无统计学意义(P>0.05),异位妊娠孕妇的PAPP-A低于先兆流产组和正常早孕组,且先兆流产组低于正常早孕组(P<0.05)。经分析,超声及miR-200c、PAPP-A水平联合诊断孕妇先兆流产特异度高于各指标单独诊断,对异位妊娠诊断的特异度及阳性预测值高于各指标单独诊断。结论:血清miR-200c和PAPP-A水平结合经阴道超声检查,能有效地用于鉴别诊断先兆流产和异位妊娠,提高诊断的准确率和特异度,具有较高的临床应用潜力。

miR-200b对胃癌MGC-803细胞增殖的影响以及对Bcl-2表达的调节

目的:研究miR-200b对胃癌MGC-803细胞Bcl-2蛋白及mRNA表达的调节作用,探讨miR-200b对胃癌MGC-803细胞增殖的影响.方法:用人工合成的miR-200b相应的双链互补DNA片段,插入miRNASelectTM pEGP-miR载体,经测序鉴定后作为microRNA的表达质粒;用脂质体将miR-200b高表达质粒转染进MGC-803胃癌细胞,经嘌呤霉素筛选获得阳性克隆.构建Bcl-2高表达质粒,转染入MGC-803胃癌细胞和含有miR-200b高表达质粒的MGC-803细胞中.用RT-PCR技术和Western blot方法分别检测Bcl-2的mRNA和蛋白表达;用MTT法检测胃癌MGC-803细胞增殖的变化.结果:Western blot结果显示,与正常MGC-803细胞相比,转染了miR-200b的胃癌MGC-803细胞中,Bcl-2蛋白的表达降低了56.91%,RT-PCR分析显示Bcl-2mRNA表达降低了32.29%;MTT结果显示转染了miR-200b的细胞增殖受到显著抑制.进一步的实验结果显示,转染了Bcl-2高表达质粒的胃癌细胞增殖受到促进,48h最明显增加了16.82%,然而转染了miR-200b和Bcl-2高表达质粒的MGC-803细胞增殖却下降了7.97%;Western blot结果显示,与转染了pCMV6-XL5-Bcl-2高表达质粒的MGC-803细胞组相比,转染了pEGP-miR-200b高表达质粒的MGC-803细胞中Bcl-2蛋白的表达降低了4.84倍,而转染了pEGP-miR-200b和pCMV6-XL5-Bcl-2高表达质粒的MGC-803细胞中Bcl-2蛋白的表达量降低了1.76倍.结论:过表达的miR-200b抑制MGC-803胃癌细胞增殖,这种抑制作用至少部分与Bcl-2基因的低表达有关.

miR-200c对乳腺癌BT549细胞迁移及Slug表达的作用

目的:结合对乳腺癌细胞系BT549迁移能力的研究,探讨转染miR-200c对Slug表达的作用。方法:设计miR-200c模拟物,转染具有高转移性的乳腺癌细胞系BT549,通过Transwell迁移试验、划痕实验,观察转染miR-200c后对乳腺癌细胞系BT549迁移能力的影响;利用Real-time PCR检测Slug和E-钙黏连蛋白mRNA的表达水平;利用Western blot检测Slug蛋白的表达水平。结果:Real-time PCR和Western blot结果显示,miR-200c转染组Slug表达水平被有效抑制(P<0.05)。与对照组相比,miR-200c转染组的BT549细胞迁移能力明显下降(P<0.05)。结论:在乳腺癌细胞系BT549中,miR-200c可以通过抑制Slug的表达进而抑制上皮间质转化,最终导致细胞迁移能力下降。

长链非编码ATB通过抑制miR-200c的表达促进乳腺癌细胞的侵袭转移

目的探讨长链非编码ATB通过抑制miR-200c的表达促进乳腺癌细胞侵袭转移的作用及其机制。方法 q PCR检测不同乳腺癌细胞株中ATB和miR-200c的表达情况;双荧光素酶报告基因检测ATB与miR-200c的相互作用;MTT细胞增殖实验和Transwell侵袭实验检测沉抑制ATB后乳腺癌细胞增殖和侵袭能力的变化;MTT细胞增殖实验和Transwell侵袭实验检测抑制ATB后沉默miR-200c对乳腺癌细胞增殖和侵袭能力的逆转作用;Western blot检测抑制ATB后ZEB1和ZNF217蛋白的表达。结果与其他乳腺癌细胞相比,SKBr-3细胞株ATB表达水平最低,miR-200c的表达水平最高;ATB能与miR-200c的位点特异性结合,调控其表达活性;抑制ATB后可以增强乳腺癌细胞的增殖和侵袭能力,而沉默miR-200c后可以在一定程度上逆转ATB对乳腺癌细胞增殖和侵袭能力的影响;抑制ATB后ZEB1和ZNF217蛋白表达水平得到一定的恢复。结论 ATB在乳腺癌发生、发展过程中起重要作用,ATB可以靶向调节miR-200c调控乳腺癌细胞的增殖和侵袭能力。

miR-200c对三阴乳腺癌细胞株MDA-MB-231放疗敏感性的影响

目的探讨miR-200c对三阴乳腺癌细胞株MDA-MB-231放疗敏感性的影响及潜在的机制。方法将细胞株分成3组,未处理组是指未感染任何慢病毒的原始细胞,miR-NC组是指感染阴性对照慢病毒的细胞,miR-200c组是指利用包装有has-miR-200c的慢病毒感染MDA-MB-231细胞,并建立稳定过表达miR-200c的细胞株模型。qRT-PCR和Western blot检测间充质-上皮转化(MET)的标记分子及共济失调毛细血管扩张突变基因蛋白(ATM)分子的表达;克隆形成实验检测转化后细胞的放射敏感性。结果过表达miR-200c的MDA-MB-231细胞发生间充质样形态向上皮样形态的转变,伴随着MET相关基因的显著改变(P<0.05);转化后细胞的放射敏感性增加;转化后细胞的ATM总蛋白及磷酸化蛋白水平显著减少。结论 miR-200c过表达诱导乳腺癌细胞发生间充质-上皮转化,增加细胞的放疗敏感性,这种作用可能与细胞内ATM表达的下调有关。

原发性先天性青光眼(PCG)患儿与正常婴幼儿血浆中微小核糖核酸(miRNA或miR)-29b、miR-24、miR-200c的表达差异及临床意义

目的探讨原发性先天性青光眼(primary congenital glaucoma,PCG)患儿与正常婴幼儿血浆中微小核糖核酸(miRNA或miR)-29b、miR-24、miR-200c的表达差异及临床意义。方法收集2015年至2017年散发的PCG患儿16例血浆标本作为PCG组,另选年龄相近的正常婴幼儿共49例血浆标本作为正常人组。应用实时荧光定量PCR检测两组受试者血浆中miR-29b、miR-24、miR-200c的表达量,分析各自表达差异与病变严重程度的关系,并运用ROC曲线评价其诊断价值。结果PCG组受试者血浆中miR-29b、miR-24、miR-200c相对表达量(0.31±0.19、0.17±0.16、0.55±0.18)明显低于正常人组(1.18±0.52、2.86±2.65、1.62±0.76),差异均有统计学意义(均为P<0.05);血浆中miR-24、miR-29b的表达与PCG病变严重程度有关,病变越严重,其表达量越低;ROC曲线表明miR-24和miR-29b对PCG疾病的诊断价值高于miR-200c。结论血浆中游离的miRNA可作为辅助诊断PCG一种新的血浆标志物。

MiR-200b通过调控PIK3CA/AKT通路抑制大鼠角膜血管新生

目的探讨microRNA-200b(miR-200b)在大鼠角膜新生血管(corneal neovascularization,CNV)形成中的作用及其调节机制。方法24只雌性SD大鼠采用一眼经缝线法构建CNV模型(实验组),另一眼作为正常对照组,于裂隙灯下观察建模后第4、7、14天角膜新生血管情况,采用HE染色观察角膜组织结构改变及炎性细胞浸润情况,RT-PCR检测造模后第14天各组大鼠角膜组织中miR-200b以及血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)的表达。利用脂质体转染人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs),分为miR-200b模拟物(miR-200b mimic)组、阴性对照(miR-NC)组、空白对照(CON)组,利用RT-PCR验证转染效果,分别采用CCK-8检测HUVECs增殖能力,划痕实验检测HUVECs迁移能力,Matrigel胶成管实验检测HUVECs管腔形成能力。并通过Western blot检测VEGF及PIK3CA、AKT蛋白的表达。结果成功构建大鼠CNV模型,HE染色显示与正常组相比,缝线后第4、7、14天,大鼠角膜组织排列紊乱,炎性细胞浸润逐渐加重(P<0.05),RT-PCR结果显示缝线后第14天角膜组织中miR-200b表达明显降低,而VEGF表达明显升高(P<0.01)。与CON组和miR-NC组相比,miR-200b mimic组中miR-200b相对表达量显著升高(P<0.01),而增殖、迁移及管腔形成能力显著下降(P<0.05),转染miR-200b mimic后,HUVECs中VEGF、PIK3CA、p-AKT蛋白表达均明显下降(P<0.05)。结论miRNA-200b可显著抑制HUVECs的增殖、迁移及成管能力,可能通过抑制PIK3CA/AKT通路参与CNV的发生和发展。

miR-200b调控PDCD4的表达对乳腺癌细胞增殖和侵袭的影响

目的探讨miR-200b对乳腺癌细胞增殖及侵袭的影响及其可能的分子机制。方法利用荧光实时定量PCR检测人乳腺癌组织及乳腺癌细胞株中miR-200b的表达差异;利用生物信息学方法预测miR-200b的靶基因,并使用免疫蛋白印迹实验对靶基因的表达进行验证;分别将miR-200b siRNA、PDCD4 mimics以及相应对照miRNA转染MCF-7细胞,通过CCK-8实验检测细胞的增殖能力;采用Transwell侵袭实验检测细胞的侵袭能力。结果miR-200b在乳腺癌组织中呈低表达水平,进一步抑制miR-200b的表达,乳腺癌细胞的增殖及侵袭能力显著增强(P<0.05);将miR-200b siRNA、PDCD43′-UTR共转染到乳腺癌MCF-7细胞中,双荧光素酶报告基因结果显示抑制miR-200b的表达后,PDCD4的表达及活性相应上调(P<0.05);同时通过蛋白免疫印迹实验可以发现,抑制miR-200b表达后,PDCD4蛋白表达含量降低,乳腺癌细胞的增殖及侵袭能力明显增强(P<0.05);而过表达PDCD4后PDCD4蛋白表达含量增加(P<0.05),乳腺癌细胞的增殖及侵袭能力明显降低(P<0.05)。结论miR-200b可靶向上调PDCD4基因的表达,从而抑制乳腺癌细胞的增殖及侵袭能力。

miR-200b、miR-200c靶向肝细胞生长因子抑制结直肠癌细胞

目的研究miR-200b、miR-200c对肝细胞生长因子进行靶向调节抑制结直肠癌细胞增殖的机制。方法采用生物信息学软件预测和验证miR-200b、miR-200c靶基因,分析miR-200b、miR-200c过表达抑制HGF表达,并分析miR-200b、miR-200c在体外影响结直肠癌细胞增殖活性的情况。结果培养1d、2d、3d,阴性对照模拟物的结直肠癌细胞增殖活性均高于miR-200b模拟物、miR-200c模拟物、miR-200b/c模拟物(P<0.05),阴性对照抑制剂的结直肠癌细胞增殖活性均低于miR-200b抑制剂、miR-200c抑制剂、miR-200b/c抑制剂(P<0.05),miR-200b模拟物、miR-200c模拟物的结直肠癌细胞增殖活性均高于miR-200b/c模拟物(P<0.05),miR-200b抑制剂、miR-200c抑制剂的结直肠癌细胞增殖活性均低于miR-200b/c抑制剂(P<0.05)。结论miR-200b、miR-200c对肝细胞生长因子进行靶向调节抑制结直肠癌细胞增殖,可以作为潜在治疗靶点。

子宫内膜癌患者血清miR-145、miR-200a及miR-181c表达水平及其临床意义

目的观察子宫内膜癌患者血清miR-145、miR-200a、miR-181c表达变化,探讨其临床意义。方法选取84例子宫内膜癌患者为研究组,同期收治的51例子宫肌瘤患者为对照组。检测两组血清miR-145、miR-200a、miR-181c表达,分析miR-145、miR-200a、miR-181c表达与子宫内膜癌临床病理特征的关系,采用受试者工作特征(ROC)曲线分析miR-145、miR-200a、miR-181c对子宫内膜癌的诊断效能。结果研究组血清miR-145、miR-181c水平低于对照组,miR-200a水平高于对照组(P<0.05);血清miR-145、miR-200a、miR-181c表达与临床分期、淋巴结转移有关(P<0.05);ROC曲线分析结果显示,miR-145、miR-200a、miR-181c诊断子宫内膜癌的AUC分别为0.954、0.987、0.908。结论子宫内膜癌患者血清miR-145、miR-181c表达下调,miR-200a表达上调,且三者均与淋巴结转移、临床分期有关,可能作为子宫内膜癌诊断的辅助指标。

血清miR-200c表达水平与复发性卵巢癌的相关性及临床意义

目的分析血清miR-200c表达水平与上皮性卵巢癌(EOC)患者治疗后复发的关系。方法选取2019年6月至2020年6月昆明医科大学第三附属医院收治的160例EOC患者作为研究对象,随访2年,有104例复发。调查患者的基线资料,采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)法检测患者血清miR-200c的表达水平,采用单因素分析患者治疗后复发与血清miR-200c的表达水平和基线资料的相关性,多因素Logistic回归分析影响患者复发的独立危险因素,绘制受试者工作特征(ROC)曲线分析miR-200c预测EOC患者治疗后复发的效能。结果单因素分析显示,雌激素受体、孕激素受体、淋巴结转移、血清糖类抗原125(CA125)和人附睾蛋白4(HE4)的水平与EOC患者治疗后复发呈正相关,血清miR-200c水平与EOC患者治疗后复发呈负相关(P<0.05);多因素Logistic回归分析显示,血清CA125高表达(OR>1,P<0.05)、miR-200c低表达(OR<1,P<0.05)是EOC患者术后复发的独立危险因素;ROC曲线结果显示,血清CA125、miR-200c水平单独及联合预测EOC患者治疗后复发的曲线下面积分别为0.915、0.954、0.993,血清miR-200c的预测效能优于CA125,联合预测效能优于单项指标。结论miR-200c是提示EOC细胞侵袭性的分子标志物,血清miR-200c表达水平的降低会增加EOC患者治疗后复发的风险,可作为潜在的癌症复发预测指标和治疗靶点。

miR-200b抑制鼻咽癌CNE-2细胞放疗抵抗的作用观察

目的探讨miR-200b介导鼻咽癌放疗抵抗,揭示miR-200b作为抑癌基因作用。方法 Real-time PCR检测miR-200b在鼻咽癌细胞系中的含量;将miR-200b模拟物转染CNE-2,miR-200b抑制剂转染CNE-2R,采用MTS检测其对CNE-2细胞生长的影响。结果 miR-200b在CNE-2R细胞中表达下调。特异性miR-200b模拟物具有逆转CNE-2R细胞的辐射抗性作用,而转染miR-200b抑制剂可增强CNE-2细胞的辐射抗性。过表达miR-200b可抑制鼻咽癌细胞的生长。结论 miR-200b参与了鼻咽癌细胞的放射抵抗,miR-200b可能成为一种新的用于合理治疗鼻咽癌的治疗策略。

miR-200b通过靶向CRKL抑制胶质瘤U251细胞增殖

目的研究hsa-miR-200b对人U251胶质瘤细胞增殖的影响及相关作用机制。方法将miR-200b过表达和表达沉默质粒分别稳定转染至胶质瘤U251细胞,qRT-PCR验证转染效率,CCK-8法检测U251细胞增殖水平变化,qRTPCR以及Western blot方法检测的CRKL的m RNA和蛋白表达水平。双荧光素酶报告基因实验验证miR-200b与CRKL基因3’UTR的结合位点。将CRKL过表达和表达沉默质粒载体分别稳定转染至U251胶质瘤细胞,使用CCK-8法检测U251细胞增殖水平变化。分别建立miR-200b和CRKL的稳定双转染U251细胞系,使用CCK-8法检测对各组细胞增殖水平的变化。结果与对照组相比,miR-200b过表达显著抑制胶质瘤U251细胞的增殖并且抑制CRKL在U251胶质瘤细胞的m RNA和蛋白表达;双荧光素酶报告基因实验验证了miR-200b与CRKL基因3’UTR的结合位点;CRKL过表达显著增强胶质瘤U251细胞增殖能力;CRKL过表达有效阻断了miR-200b抑制胶质瘤U251细胞增殖的作用。结论 miR-200b能够通过靶向下调CRKL抑制胶质瘤U251细胞增殖。

MiR-29a/b/c对葡萄膜黑色素瘤细胞功能的影响及机制

目的:探索miR-29a/b/c对葡萄膜黑色素瘤(UM)细胞功能的影响及其作用机制。方法:使用脂质体转染技术将hsa-miR-29a/b/c或基质金属蛋白酶2(MMP2)特异性siRNA转染进UM细胞。使用MTS实验和Matrigel Transwell实验分别检测UM细胞增殖和侵袭能力的变化。使用半定量PCR实验检测UM细胞中MMP2m RNA水平表达量的变化。使用ELISA实验检测UM细胞上清中MMP2蛋白分泌量的变化。结果:转染miR-29a/b/c抑制了UM细胞的增殖(P<0.05)和侵袭能力(P<0.05)。MiR-29a/b/c不影响MMP2 mRNA转录,但均能抑制UM细胞分泌MMP2(P<0.05)。在UM细胞中干扰MMP2抑制UM细胞的侵袭能力(P<0.05)。结论:Mi R-29a/b/c抑制UM细胞的增殖和侵袭。MiR-29a/b/c减少其下游靶蛋白MMP2的分泌,在UM细胞中干扰MMP2抑制细胞侵袭。

胃癌患者血清miR-200b和miR-200c水平变化及临床意义

目的观察胃癌患者血清miR-200b和miR-200c水平变化特点,探讨其临床意义。方法回顾性分析浙江省舟山医院自2012年1月~2014年6月消化内科及胃肠外科收治的84例胃癌患者为研究对象（观察组）,选择30例健康人为对照组。采用qRT-PCR检测所有研究对象血清miR-200b和miR-200c水平,比较2组间血清miR-200b和miR-200c水平差异,探讨胃癌患者血清miR-200b和miR-200c水平与其临床及病理特点之间的关系。结果胃癌组血清miR-200b和miR-200c水平均明显低于对照组,差异均有统计学意义（均P〈0.05）。胃癌患者不同年龄、性别、分化程度和浸润深度之间血清miR-200b和miR-200c水平差异无统计学意义;较高临床分期及合并淋巴结转移的患者血清miR-200b和miR-200c水平明显低于较低临床分期和无淋巴结转移者,差异均有统计学意义（均P〈0.05）。血清miR-200b和miR-200c水平诊断胃癌的AUC分别为0.826（95%CI：0.741~0.911,P〈0.001）和0.856（95%CI：0.778~0.935,P〈0.001）。结论胃癌患者血清miR-200b和miR-200c水平明显降低,并且与临床分期和淋巴结转移密切相关,检测血清miR-200b和miR-200c水平有助于判断胃癌并判断预后。