miR-206对腰椎间盘突出症大鼠髓核炎症、镇痛及自噬相关蛋白的作用机制

背景:研究发现,腰椎间盘突出症患者的疼痛机制与炎症相关,自噬与椎间盘疾病及炎症反应密切相关,miR-206表达异常可促进骨骼疾病的发生。目的:探讨miR-206对腰椎间盘突出大鼠髓核炎症、镇痛及自噬相关蛋白的作用机制。方法:SPF级雄性SD大鼠60只按照随机数字方法分为对照组、模型组、miR-206 mimics-NC组、miR-206 mimics组、miR-206 inhibitor-NC组及miR-206 inhibitor组。除对照组外均建立腰椎间盘突出症大鼠模型,建模后第10天miR-206 mimics-NC组、miR-206 mimics组、miR-206 inhibitor-NC组及miR-206 inhibitor组分别在损伤处注射miR-206 mimics-NC、miR-206 mimics(miR-206模拟物)、miR-206 inhibitor-NC及miR-206 inhibitor(miR-206抑制物),均20μmol/L,10μL,1次/d,连续注射4 d;对照组及模型组均注射等剂量生理盐水。Von Frey纤维丝测定大鼠双侧后足机械性缩足反射阈值,热痛测试仪检测大鼠双侧后足热刺激缩足反射潜伏期;苏木精-伊红染色观察背根神经节组织形态;qPCR检测各组大鼠髓核组织炎症因子磷脂酶A2、环氧化酶2、前列腺素E2、肿瘤坏死因子α、白细胞介素1β表达;免疫印迹检测自噬相关蛋白LC3Ⅰ、Beclin-1表达。结果与结论:①造模后3,7及14 d时,与对照组相比,模型组大鼠机械性缩足反射阈值、热刺激缩足反射潜伏期降低,磷脂酶A2、环氧化酶2、前列腺素E2、肿瘤坏死因子α、白细胞介素1β、LC3Ⅰ、Beclin-1表达升高(P<0.05);miR-206 inhibitor-NC组、miR-206 mimics-NC组上述指标与模型组相比差异无显著性意义(P>0.05);②与miR-206 mimics-NC组相比,miR-206 mimics组大鼠机械性缩足反射阈值、热刺激缩足反射潜伏期降低,磷脂酶A2、环氧化酶2、前列腺素E2、肿瘤坏死因子α、白细胞介素1β、LC3Ⅰ、Beclin-1水平升高(P<0.05);与miR-206 inhibitor-NC组相比,miR-206 inhibitor组大鼠上述指标呈相反变化,差异均有显著性意义(P<0.05);③结果说明,抑制miR-206可以显著改善腰椎间盘突出症大鼠髓核炎症因子水平,提高疼痛阈值,降低细胞自噬,其作用机制与抑制LC3Ⅰ、Beclin-1表达相关。

LncRNA MIAT靶向miR-206促进食管鳞状细胞癌细胞的增殖、凋亡、迁移和侵袭的作用研究

目的 探讨长链非编码RNA(LncRNA)MIAT靶向微小RNA(miR)-206促进食管鳞状细胞癌细胞的增殖、凋亡、迁移和侵袭的作用。方法 将食管鳞状细胞癌(ESCC)细胞分为ctrl组(正常培养的ESCC细胞)、si-NC组、si-MIAT组、si-MIAT+miR-NC组和si-MIAT+miR-206 inhibitor组。实时qRT-PCR检测各组细胞MIAT、miR-206表达;CCK-8法检测细胞增殖情况;划痕实验检测细胞迁移能力;流式细胞术分析细胞凋亡情况;蛋白质印迹技术检测PCNA、MMP-9蛋白表达;双荧光素酶报告基因实验验证MIAT和miR-206的关系。结果 与ctrl组、si-NC组比较,si-MIAT组ESCC细胞中miR-206表达、细胞凋亡率升高,MIAT、OD_(450)值(24、48、72 h)、划痕愈合率、PCNA和MMP9蛋白表达降低(P<0.05);干扰LncRNA MIAT表达能降低ESCC细胞增殖、迁移、侵袭能力,提高细胞凋亡能力,MIAT靶向调控miR-206表达。结论 干扰LncRNA MIAT表达能够阻滞ESCC细胞增殖、迁移、侵袭,并促进ESCC细胞凋亡。

miR-26b、miR-1233-3p、miR-206与妊娠期高血压血管内皮功能关系及三者联合预测HDCP不良妊娠结局的ROC曲线分析

目的 探讨微小RNA-26b(microRNA-26b, miR-26b)、miR-1233-3p、miR-206与妊娠期高血压(hypertensive disorders complicating pregnancy, HDCP)血管内皮功能关系及三者联合预测HDCP不良妊娠结局的价值。方法 选取2019-04/2021-04月作者医院收治的104例HDCP患者的病历资料进行分析。根据是否发生不良妊娠结局分为发生组(n=25)和未发生组(n=79)。比较两组基线资料、肱动脉内皮依赖性舒张功能(flow mediated dilation, FMD)、miR-26b、miR-1233-3p、miR-206。应用Pearson相关分析探讨miR-26b、miR-1233-3p、miR-206与FMD关系。采用多因素Logistic回归分析探讨不良妊娠结局的相关影响因素。采用受试者工作特征(receiver operating characteristic, ROC)曲线及曲线下面积(area under the curve, AUC)分析miR-26b、miR-1233-3p、miR-206预测HDCP不良妊娠结局的价值。结果 发生组患者病情阶段与未发生组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。发生组患者FMD、miR-206低于未发生组,miR-26b、miR-1233-3p高于未发生组(P均<0.05)。miR-26b、miR-1233-3p与FMD呈负相关(r=-0.538、-0.588,P均<0.001),miR-206与FMD呈正相关(r=0.653,P<0.001)。调整病情阶段、FMD后,miR-26b、miR-1233-3p、miR-206仍与HDCP不良妊娠结局相关(P<0.05)。miR-26b、miR-1233-3p、miR-206及三者联合预测HDCP不良妊娠结局的AUC分别为0.771(95%CI:0.658~0.884)、0.790(95%CI:0.673~0.907)、0.772(95%CI:0.678~0.856)、0.840(95%CI:0.743~0.936),三者联合预测价值最大。结论 miR-26b、miR-1233-3p、miR-206与HDCP血管内皮功能、不良妊娠结局有关,三者联合检测可作为HDCP不良妊娠结局的一个有效预测方案。

LncRNA(HOTAIR)/miR-206/TAGLN2信号轴调控甲状腺乳头状癌细胞的侵袭

目的探讨lncRNA(HOTAIR)/miR-206/TAGLN2信号轴调控人甲状腺乳头状癌(PTC)细胞系TPC-1侵袭的分子机制。方法收集兰州大学第一医院甲状腺乳头状癌组织和癌旁组织,用RT-qPCR和Western blot检测PTC组织和癌旁组织中HOTAIR、miR-206和TAGLN2的表达;构建miR-206过表达和HOTAIR低表达的TPC-1细胞。RT-qPCR和Western blot检测mRNA和蛋白的表达,Transwell小室法实验检测TPC-1细胞系的侵袭能力。结果与癌旁组织相比PTC组织中HOTAIR表达量增加2.48倍,miR-206-5p表达量降低至0.6,TAGLN2及其蛋白表达量增加(P<0.05);过表达miR-206后,TPC-1细胞中TAGLN2的蛋白表达量减少(P<0.05),且TPC-1细胞的侵袭能力受到了抑制。敲低HOTAIR后,TPC-1细胞中miR-206表达增加,TAGLN2表达降低,同时TPC-1细胞的侵袭能力也明显降低(P<0.05)。结论在甲状腺乳头状癌中,降低HOTAIR的表达水平,可促成miR-206的过表达,进一步抑制TAGLN2的表达,最终可降低甲状腺癌的侵袭能力。

长链非编码RNA HOX转录反义RNA靶向miR-206对结直肠癌细胞迁移、侵袭的影响

目的探讨长链非编码RNA(lncRNA)HOX转录反义RNA(HOTAIR)靶向miR-206对结直肠癌细胞侵袭和迁移的影响。方法常规培养人结直肠癌HT-29细胞,将合成的HOTAIR si RNA和siRNA control转染于HT-29细胞,设置为si-HOTAIR组、si-con组,未进行转染的HT-29细胞设置为空白组。实时荧光定量聚合酶链反应测定转染效果,Transwell和划痕愈合实验检测HT-29细胞侵袭和迁移情况。生物信息学软件分析HOTAIR与miR-206区域结合位点,构建突变型(HOTAIR 3’UTR mut)和野生型(HOTAIR 3’UTR wt)萤光素酶报告载体,将HOTAIR 3’UTR wt、HOTAIR 3’UTR mut与miR-206 mimic或miR-NC载体共转染至HT-29细胞中,设为HOTAIR 3’UTRwt/miR-NC组、HOTAIR3’UTRwt/miR-206组、HOTAIR3’UTRmut/miR-NC组,HOTAIR3’UTRmut/miR-206组,培养48 h后检测萤光素酶活性。将HOTAIR si RNA和miR-206 inhibitor共转染于HT-29细胞,设置si-HOTAIR+anti-NC组和si-HOTAIR+anti-miR-206组,用Transwell和划痕愈合实验分析细胞侵袭、迁移水平。结果空白组与si-con组HT-29细胞中HOTAIR m RNA的表达水平比较,差异无统计学意义(P>0.05);与si-con组比较,si-HOTAIR组HT-29细胞中HOTAIR m RNA的表达水平降低(P<0.01)。空白组与si-con组HT-29细胞侵袭数目、细胞划痕愈合率比较,差异无统计学意义(P>0.05);与si-con组比较,si-HOTAIR组HT-29细胞侵袭数目减少,细胞划痕愈合率降低(P<0.01)。与HOTAIR 3’UTR wt/miR-NC组比较,HOTAIR 3’UTR wt/miR-206组中HOTAIR wt的萤光素酶活性下降(P<0.01);而HOTAIR 3’UTR mut/miR-NC组与HOTAIR 3’UTR mut/miR-206组萤光素酶活性比较,差异无统计学意义(P>0.05)。与si-HOTAIR+anti-NC组比较,si-HOTAIR+anti-miR-206组中miR-206的表达水平降低(P<0.01)。与si-HOTAIR+anti-NC组比较,si-HOTAIR+anti-miR-206组中HT-29细胞的侵袭和迁移率增加(P<0.01)。结论HOTAIR通过负调控miR-206促进HT-29细胞的侵袭和迁移能力。

宫内发育迟缓新生儿血清中miR-206水平变化与胰岛素敏感性的相关性

目的探讨宫内发育迟缓新生儿血清中miR-206水平变化与胰岛素敏感性的相关性。方法前瞻性选取2021年3月至2022年4月入同济大学附属第一妇婴保健院妇产科出生并诊断为宫内发育迟缓的新生儿96例作为研究对象,设为宫内发育迟缓组。另选同期在同济大学附属第一妇婴保健院出生的体重正常、非宫内发育迟缓的新生儿70例作为对照组。收集两组新生儿的临床资料,进行实验室指标、胰岛素敏感性和miR-206水平检测,并进行比较分析。Pearson相关性分析评价血清中miR-206水平和新生儿胰岛素敏感性及各项指标相关性。结果宫内发育迟缓组中C肽水平为(1574.11±657.75)pmol/L,明显高于对照组[(867.21±354.62)pmol/L],空腹血糖水平为(6.11±0.82)mmol/L,显著低于对照组[(6.87±1.94)mmol/L],差异均有统计学意义(P<0.05),两组的甘油三酯、总胆固醇、丙氨酸氨基转移酶(ALT)和天门冬氨酸氨基转移酶(AST)水平比较,差异无统计学意义(P>0.05)。宫内发育迟缓组中胰岛素敏感指数(ISI)和胰岛素样生长因子-1(IGF-1)水平为-2.96±0.39、(49.12±16.27)ng/mL,明显低于对照组[-2.71±0.36、(80.69±18.46)ng/mL],血清胰岛素、胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)和miR-206水平为(5.59±3.72)μIU/mL、3.12±0.45、2.19±0.87,显著高于对照组[(2.61±1.39)μIU/mL、2.01±0.32、0.39±0.09],差异均有统计学意义(P<0.05)。miR-206与体重(r=-0.694,P<0.001)、空腹血糖(r=-0.613,P<0.001)和IGF-1(r=-0.645,P<0.001)指标呈负相关,与胰岛素(r=0.412,P<0.001)、HOMA-IR(r=0.579,P<0.001)、C肽(r=0.461,P<0.001)和ISI(r=0.326,P=0.014)呈正相关,与甘油三酯、总胆固醇、ALT和AST无相关性(P>0.05)。结论胎儿宫内发育迟缓新生儿miR-206水平升高,与新生儿体重、胰岛素的敏感性及相关指标具有一定的相关性。

血清hsa-miR-34a-3p及hsa-miR-206表达对妊娠合并甲减患者子代心肌损害的预测研究

目的探讨血清hsa-miR-34a-3p及hsa-miR-206表达对妊娠合并甲状腺功能减退(简称甲减)患者子代心肌损害的预测价值。方法选取2019年8月至2021年8月宜宾市第二人民医院收治的妊娠合并甲减患者248例作为观察组,另选取同期健康体检孕妇236例为对照组,均采用实时荧光定量聚合酶链反应法检测血清hsa-miR-34a-3p及hsa-miR-206表达情况并进行比较;随访至妊娠结束,观察并比较两组子代心肌损害发生情况;观察组根据子代是否发生心肌损害将妊娠合并甲减患者进一步分为发生组和未发生组,比较此两组血清hsa-miR-34a-3p、hsa-miR-206水平;采用多因素Logistic回归分析法分析妊娠合并甲减患者子代心肌损害的影响因素,受试者工作特征(ROC)曲线分析各血清指标单项及联合对妊娠合并甲减患者子代心肌损害的预测价值。结果观察组血清hsa-miR-34a-3p、hsa-miR-206水平高于对照组(P<0.05);随访至妊娠结束,观察组子代心肌损害的发生率为20.97%(52/248),对照组子代心肌损害的发生率为1.69%(4/236);发生组血清hsa-miR-34a-3p、hsa-miR-206水平高于未发生组(P<0.05);多因素Logistic回归分析显示血清hsa-miR-34a-3p、hsa-miR-206、促甲状腺激素(TSH)、游离三碘甲状腺原氨酸(FT3)、游离甲状腺素(FT4)、总三碘甲状腺原氨酸(TT3)、总甲状腺素(TT4)均是影响妊娠合并甲减患者子代心肌损害的影响因素(P<0.05);ROC曲线分析显示,hsa-miR-34a-3p、hsa-miR-206联合预测妊娠合并甲减患者子代心肌损害的灵敏度均高于单独预测(P<0.05),曲线下面积(AUC)也高于单独预测(P<0.05),特异度与单独预测比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论妊娠合并甲减患者血清hsa-miR-34a-3p、hsa-miR-206水平异常升高,此可能会增加子代心肌损害发生风险,且二者对妊娠合并甲减患者子代心肌损害具有一定的预测价值。

小鼠肌肉损伤修复不同时间内miR-206及其靶基因PAX7的变化规律

为研究小鼠肌肉损伤修复不同时间内miR-206及其靶基因PAX7的变化规律,以雄性8周龄昆明鼠为实验对象,利用盐酸布比卡因注射小鼠胫骨前肌制备肌肉损伤及修复模型,通过qRT-PCR技术检测肌肉组织中PAX7 mRNA和miR-206表达,利用Western-blot技术检测PAX7蛋白质表达变化水平.结果表明,与对照组相比,注射盐酸布比卡因后,在修复4~8 h小鼠肌肉组织中,miR-206表达逐渐降低.随着时间的延长,在修复24~72 h范围内,miR-206表达量逐渐增高.生物信息学预测发现,PAX7是miR-206调控的靶基因.检测小鼠肌肉损伤修复过程中PAX7表达发现,在肌肉修复4~8 h PAX7基因表达水平逐渐升高;而在修复24~72 h范围内其表达水平显著下降.由此可见,在小鼠肌肉修复过程中,PAX7基因表达先升高,可以满足损伤修复时骨骼肌卫星细胞的激活及增殖所需,随着修复时间的延长,miR-206的高表达可加快肌肉修复进程.研究结果可为miR-206和PAX7在肌肉损伤修复中的作用提供实验基础.

lncRNA HOTAIR调控miR-206影响类风湿关节炎滑膜细胞增殖和凋亡的分子机制研究

目的:探讨lncRNA HOTAIR调控miR-206影响类风湿关节炎滑膜细胞增殖和凋亡的分子机制。方法:收集30例类风湿关节炎的滑膜组织;培养类风湿关节炎滑膜细胞MH7A,实验分为siNC组、si-HOTAIR组、miR-NC组、miR-206 mimic组、si-HOTAIR+NC inhibitor组、si-HOTAIR+miR-206 inhibitor组。实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测HOTAIR、miR-206表达水平。CCK-8法检测细胞增殖;流式细胞术检测细胞凋亡;Western blot检测细胞CyclinD1、p21、Bax和Bcl-2蛋白表达;双荧光素酶报告实验检测HOTAIR与miR-206靶向结合关系。结果:与健康对照组比较,类风湿关节炎患者HOTAIR表达水平明显上调,miR-206表达水平明显下调(P<0.05)。与si-NC组比较,si-HOTAIR组HOTAIR表达水平明显下调,细胞存活率明显下调,细胞凋亡率明显上调(P<0.05)。与miR-NC组比较,miR-206 mimic组miR-206表达水平明显上调,细胞存活率明显下调,细胞凋亡率明显上调(P<0.05)。与si-HOTAIR+NC inhibitor组比较,siHOTAIR+miR-206 inhibitor组细胞存活率明显上调,细胞凋亡率明显下调(P<0.05)。结论:抑制HOTAIR表达,上调miR-206表达降低类风湿关节炎滑膜细胞增殖,并促进凋亡。

急性脑梗死患者血清miR-206及miR-122表达水平及其诊断价值分析

急性脑梗死(ACI)是一种急性缺血性脑血管疾病具有高发病率、高致残率和高病死率等特点[1-2]。研究指出,miRNA在脑血管疾病的发生和预后中起着重要的作用,但其确定的基因靶标和信号通路仍不十分清楚[3]。miR-122是一种机体组织特异性miRNA,参与调节机体神经发育过程,并在脑组织缺血、缺氧、脑梗死的发生发展过程中扮演重要角色,并与脑梗死病情及预后密切相关[4]。miR-206属于miR-1家族成员之一具有调控细胞生长、增殖及凋亡等作用[5]。本研究旨在探讨ACI患者血清miR-206、miR-122表达水平及其诊断价值,报道如下。

miR-206/miR-1对乳腺癌干细胞增殖的影响及作用机制

目的探讨上调micro RNA-206(mi R-206)和micro RNA-1(mi R-1)表达对乳腺癌干细胞增殖的影响以及其作用机制。方法采用流式细胞分选技术从乳腺癌细胞株MCF-7中分离出乳腺癌干细胞。实验分为空白对照组、阴性对照组、mi R-206转染组、mi R-1转染组。除空白对照组外,其他各组分别转染阴性对照mimic、hsa-mi R-206 mimic、hsa-mi R-1 mimic。应用实时定量PCR检测mi R-206、mi R-1以及转录因子EVI-1基因的表达水平;Western blot法检测EVI-1蛋白的表达;应用MTT法检测mi R-206、mi R-1对乳腺癌干细胞增殖能力的影响。结果从MCF-7细胞系中分选出CD44+/CD24-/low乳腺癌干细胞,经无血清培养后可以成功传代,用于后续试验;转染hsa-mi R-206 mimic、hsa-mi R-1 mimic 48 h后mi R-206、mi R-1相对表达水平提高,EVI-1m RNA表达水平明显下降;Western blot、MTT结果显示,上调mi R-206和mi R-1表达水平后显著降低EVI-1蛋白的表达,抑制了乳腺癌干细胞增殖能力。乳腺癌干细胞中mi R-206、mi R-1表达水平以及EVI-1蛋白表达水平的差异有统计学意义(P<0.05)。结论上调mi R-206和mi R-1表达能够抑制乳腺癌干细胞增殖能力,其机制可能与下调EVI-1的表达有关。

miR-206/CDK4信号在卵巢癌生长和化疗增敏中的作用

探讨miR-206/CDK4信号在卵巢癌生长和化疗增敏中的作用。方法分别提取卵巢癌和癌旁组织总RNA并将它们逆转录成cDNA。实时荧光定量PCR检测miR-206在卵巢癌和癌旁组织中差异表达。在将miR-206 mimic和其特异抑制剂以及它们各自对照分别转染卵巢癌细胞后,MTT和流式细胞仪用于检测细胞增殖和细胞周期的改变。Western blot和荧光素酶报告基因活性分析鉴定miR-206的靶基因和其调控信号通路。miR-206诱导5-Fu对卵巢癌细胞化疗增敏作用被鉴定。结果荧光定量PCR分析显示,miR-206在卵巢癌组织中表达明显下调。在转染miR-206 mimics后,细胞的增殖明显抑制,细胞周期也出现G/S转化障碍。机制分析显示,miR-206 mimic能明显抑制CDK4,c-Myc和CCND1表达。与之相反,在使用miR-206特异抑制剂后,细胞的增殖能力明显恢复,而CDK4表达能明显增高。荧光素酶报告基因活性分析显示,miR-206能直接结合CDK43'UTR。药敏分析显示,miR-206能明显降低IC50值(P<0.001),从而增加5-Fu对卵巢癌细胞的敏感性。结论 miR-206作为候选抑癌基因,直接靶击CDK4基因,从而抑制了卵巢癌细胞生长,并诱导了5-Fu对卵巢癌细胞的化疗敏感性。

miR-206抑制乳腺癌MDA-MB-231细胞Cdc42蛋白表达及其对细胞骨架的影响

目的探讨miR-206对MDA-MB-231乳腺癌细胞Cdc42表达的调控及对细胞骨架的影响。方法采用Li-pofectamineTM2000转染miR-206进入MDA-MB-231细胞,48h后Western blot检测转染后乳腺癌细胞Cdc42、MMP-2和MMP-9蛋白质表达。用免疫荧光显微镜观察细胞丝状伪足的改变,进一步用侵袭迁移实验检测转染前后细胞侵袭力和迁移力的变化。结果Western blot检测Cdc42、MMP-2和MMP-9在转染前后的表达结果,其条带灰度值与阴性对照组相比明显下降(P<0.05);细胞免疫荧光计数每个细胞平均丝状伪足数,空白对照组为(14.99±5.53),表皮生长因子(EGF)组为(23.59±3.92),miR-206转染组为(9.45±3.59),miR-206+EGF组为(11.77±2.85)。与空白对照组和EGF组比较,miR-206转染组或miR-206+EGF组细胞丝状伪足明显减少(P<0.05)。侵袭实验结果显示,小室膜下的细胞数量空白对照组为(311.7±23.5),miR-206转染组为(65.0±13.9),二者差异有统计学意义(P<0.01)。迁移实验结果显示,小室膜下的细胞数量空白对照组为(793.0±76.3),而miR-206转染组为(415.3±20.0),二者差异有统计学意义(P<0.01)。结论miR-206能抑制MDA-MB-231细胞Cdc42的表达和细胞丝状伪足的形成,并且能抑制细胞的侵袭迁移能力。

miR-125a和miR-206在乳腺癌中的表达及临床意义

目的:探讨miR-125a和miR-206在乳腺癌中的表达及临床意义。方法:应用Real-time PCR检测35例乳腺癌组织及其癌旁乳腺组织中miR-125a和miR-206的表达,用免疫组化检查乳腺癌中雌激素受体(ER)和孕激素受体(PR)的表达,荧光原位杂交技术检测人类表皮生长因子受体2(HER-2)和DNA拓扑异构酶2A(TOP2A)表达;分析miR-125a和miR-206与乳腺癌患者年龄、月经、淋巴结状态、HER-2、TOP 2A、ER、PR的表达等临床病理特征的相关性。结果:miR-125a和miR-206在乳腺癌组织中的表达水平显著低于癌旁组织,miR-125a高表达与淋巴结阴性、HER-2阴性、TOP 2A阴性具有相关性(P<0.05),与乳腺癌患者肿瘤大小、年龄、月经状态、ER、PR无相关性。miR-206的高表达与较小的肿瘤体积、ER阴性、PR阴性、HER-2阴性具有相关性(P<0.05),与乳腺癌患者年龄、月经、淋巴结状态及TOP 2A的表达程度无关。结论:miR-125a和miR-206在乳腺癌发生发展过程中可能发挥重要作用,对指导HER-2阳性和三阴性乳腺癌的治疗有重要临床意义。

miR-206靶向调控活化的T细胞核因子对人前列腺癌细胞增殖和侵袭的影响

目的:探讨miR206靶向调控活化的T细胞核因子5(NFAT5)蛋白表达对前列腺癌细胞增殖与侵袭的影响。方法:采用RT-qPCR技术对40例前列腺癌患者和40例前列增生患者的前列腺组织的miR-206和NFAT5表达水平进行检测。通过双荧光素酶试验检测miR-206和NFAT5的靶向关系。采用LipofectamineTM2000将miR-206-mimics和miR-206-NC转入PC-3细胞中,CCK8法检测两组细胞增殖速率,Transwell技术检测两组细胞侵袭能力的变化。Western blot方法和q-PCR技术测定两组细胞NFAT5、增殖细胞核抗原(PCNA)、EMT相关分子钙黏蛋白(E-cadherin)和波形蛋白(Vimentin)表达水平。结果:前列腺癌组织miR-206表达水平显著低于前列腺增生组织,而前列腺癌组织NFAT5表达水平显著高于前列腺增生组织(均P<0.0001),并且两者呈负相关关系(r=-0.934,P<0.0001)。miR-206靶向调控NFAT5的3′-UTR,降低了荧光素酶的表达活性。与miR206-NC比较,细胞转染miR-206-mimics后,miR-206的表达水平显著升高,转染miR-206-mimics 48 h和72 h后,PC-3细胞的增殖速率显著降低(P<0.05)。转染miR-206-mimics后,与miR206-NC组比较,侵袭性PC-3细胞的数量明显降低(P<0.05)。与miR-206-NC组比较,miR-206-mimics组E-cadherin蛋白和mRNA水平显著升高,NFAT5、PCNA、Vimentin蛋白和mRNA水平显著降低(均P<0.05)。结论::miR-206可以通过靶向调控NFAT5的表达影响前列腺癌增殖和侵袭,在前列腺癌的发生发展过程中起重要作用。

食管鳞状细胞癌组织中miR-206的表达及与预后的关系

目的:检测miR-206在食管鳞状细胞癌(食管鳞癌)组织中的表达,探讨其与食管鳞癌预后的关系。方法:采用实时荧光定量PCR检测miR-206在136例食管鳞癌组织和配对癌旁正常组织中的表达。将ESCC患者分为miR-206低表达组(≤0.2356)和miR-206高表达组(>0.2356),分析食管鳞癌组织中miR-206的表达与患者临床病理特征的关系。采用Kaplan-Meier和Log-rank检验分析miR-206的表达与食管鳞癌患者预后的关系。结果:与癌旁组织(1.60±1.37)相比,miR-206在食管鳞癌组织中的表达(0.82±1.10)降低(P<0.001)。在食管鳞癌组织中,miR-206的表达与肿瘤直径和浸润深度有关,肿瘤直径<5 cm、浸润深度T1+T2者miR-206表达水平高(P<0.05)。食管鳞癌患者miR-206低表达组的中位生存期短于miR-206高表达组(P<0.05)。结论:miR-206在食管鳞癌中表达降低,与患者的预后有关,可作为食管鳞癌预后预测及治疗的潜在靶点。

miR-206过表达靶向VEGFA对人肝癌HepG2细胞侵袭和迁移的抑制作用

目的探究miR-206过表达对人肝癌Hep G2细胞侵袭和迁移的影响及其分子机制。方法 Hep G2细胞分为四组:Hep G2空白对照组,miR-206 mimic组,pc-VEGFA组和miR-206 mimic+pc-VEGFA组。qRT-PCR检测miR-206表达和VEGFA的mRNA水平。荧光素酶实验确认miR-206与VEGFA的靶向关系。Western blot检测VEGFA,抗波形蛋白,N-钙粘蛋白和纤维连接蛋白的表达。Transwell检测细胞侵袭。划痕实验分析细胞迁移。结果转染miR-206 mimic后Hep G2细胞中miR-206表达显著上升,VEGFA的mRNA水平显著下降(P<0.001)。miR-206与VEGFA存在直接靶向关系。与对照组相比,miR-206 mimic组VEGFA的蛋白水平,每个视野下的侵袭细胞数目,痕愈合率显著下降(P<0.01)。pc-VEGFA组VEGFA的蛋白水平,每个视野下的侵袭细胞数目,痕愈合率显著高于对照组(P<0.01)。与pc-VEGFA组相比,miR-206 mimic+pc-VEGFA组VEGFA的蛋白水平,每个视野下的侵袭细胞数目,痕愈合率显著降低(P<0.01)。miR-206 mimic组vimentin,N-cadherin和Fibronectin表达低于对照组(P<0.01)。pc-VEGFA组vimentin,N-cadherin和Fibronectin表达高于对照组(P<0.01)。与pcVEGFA组相比,miR-206 mimic+pc-VEGFA组vimentin,N-cadherin和Fibronectin表达降低(P<0.01)。结论miR-206过表达通过靶向VEGFA抑制人肝癌Hep G2细胞侵袭和迁移。

miR-206通过调节ERα水平影响乳腺癌细胞MCF-7对他莫昔芬敏感度的初步研究

目的探讨乳腺癌细胞株MCF-7中miR-206能否调节ERα表达水平并影响乳腺癌细胞对他莫昔芬的敏感度。方法将miR-206 mimic、miR-206 inhibitor及相应阴性对照(miR-206 mimic NC、miR-206 inhibitor NC)分别转染乳腺癌MCF-7细胞,RT-PCR法检测转染后各组乳腺癌细胞中miR-206和ERαm RNA的表达量,用5μg/ml他莫昔芬处理MCF-7细胞后,MTT法检测不同转染组细胞增殖情况。结果miR-206 mimic组中乳腺癌细胞miR-206表达升高,ERαm RNA表达降低;miR-206 inhibitor组中乳腺癌细胞miR-206表达降低,ERαm RNA表达升高。他莫昔芬作用24 h后,miR-206 mimic组与阴性对照组(miR-206 mimic NC)的乳腺癌细胞增殖抑制差异无统计学意义(t=-1.169,P=0.276);miR-206 inhibitor组的乳腺癌细胞增殖抑制明显强于阴性对照组(miR-206 inhibitor NC)(t=-3.054,P=0.016)。结论下调miR-206表达可以增加ERα阳性乳腺癌细胞对他莫昔芬的敏感度。

miR-206-3p在小鼠皮肤中的表达及其作用

目的对小鼠皮肤中miR-206-3p及其靶基因脑源性神经营养因子(Bdnf)进行表达与定位检测,以探讨其在皮肤发育过程中的可能作用。方法手术剪取13.5 dpc(交配后天数)、15.5 dpc、17.5 dpc胎鼠,1 dpp(出生后天数)、4 dpp乳鼠及16周龄雄鼠的背部全层皮肤,用实时荧光定量RT-PCR检测miR-206-3p与Bdnf mRNA的表达水平,western blot检测BDNF蛋白质表达水平,原位杂交与免疫组化分别检测miR-206-3p与BDNF的组织定位。结果皮肤中miR-206-3p在胚胎期持续升高,到17.5 dpc后逐渐降低,于成年鼠时回复至13.5 dpc时水平;BDNF表达趋势与miR-206-3p相反,而Bdnf mRNA在17.5 dpc至成年鼠并无显著改变。miR-206-3p的分布在皮肤发育过程中逐渐区域化,在出生后主要分布于上基部和毛囊外周,与同期BDNF表达区域毗邻但不重叠。结论 miR-206-3p可能通过转录后调控Bdnf参与了小鼠皮肤神经发育过程。

miR-206抑制SDF-1/CXCR4信号活化诱导的乳腺癌细胞迁移和增殖

目的研究miR-206在乳腺癌细胞中的作用及其机制。方法 MDA-MB-231细胞分别转染miRNA-NC和miR-206 mimic后,荧光显微镜观察转染效率。同时,细胞添加不同剂量(20 ng·m L^(-1)和40 ng·m L^(-1))基质细胞衍生因子1(SDF-1)处理,利用Transwell法检测细胞迁移,噻唑蓝(MTT)法检测细胞增殖,qRT-PCR法检测细胞中CXC趋化因子受体4(CXCR4)mRNA表达水平,Western blot检测细胞中CXCR4蛋白表达水平。结果 miRNA-NC组和miR-206 mimic组细胞转染效率分别为(83.4±6.3)%和(87.6±8.3)%。与对照组比较,SDF-1显著促进细胞迁移和增殖(P<0.05)。miR-206 mimic转染明显抑制细胞迁移和增殖(P<0.05)。SDF-1处理促进细胞中CXCR4 mRNA和蛋白的表达水平(P<0.05)。miR-206 mimic转染则抑制CXCR4蛋白表达水平(P<0.05),但不影响CXCR4 mRNA表达(P>0.05)。结论miR-206通过抑制CXCR4表达拮抗SDF-1诱导乳腺癌细胞迁移和增殖作用。