miR-212-3p靶向MAPK3调控骨髓间充质干细胞的衰老

背景:骨质疏松症患者的骨髓间充质干细胞表现出明显衰老状态,并且细胞活性及成骨分化水平显著降低。miR-212-3p能够抑制人骨髓间充质干细胞的成骨分化,但其对骨髓间充质干细胞衰老调控的作用及机制尚不明确。目的:研究miR-212-3p通过靶向丝裂原活化蛋白激酶3(mitogen-activated protein kinase 3,MAPK3)对骨髓间充质干细胞衰老的影响及其机制。方法:体外分离培养大鼠骨髓间充质干细胞,收集第3代进行以下实验:①分2组培养:对照组加入完全培养基,造模组加入含H_(2)O_(2)的完全培养基培养,培养72 h后,检测细胞中β-半乳糖苷酶活性、miR-212-3p和MAPK3 mRNA表达,以及MAPK3、p16和p21蛋白表达。②分3组培养:对照组、抑制物对照组、miR-212-3p抑制物组,转染24 h后,检测细胞中miR-212-3p、MAPK3 mRNA表达及MAPK3蛋白表达。③采用双荧光素酶报告基因联合qRT-PCR和Western blot验证miR-212-3p与MAPK3靶向调控作用。④分组培养:分为对照抑制物组、miR-212-3p抑制物组、miR-212-3p抑制物+干扰对照组、miR-212-3p抑制物+MAPK3干扰组,转染24 h后,检测细胞中MAPK蛋白与mRNA表达。分为对照组、H_(2)O_(2)组、H_(2)O_(2)+对照抑制物组、H_(2)O_(2)+miR-212-3p抑制物组、H_(2)O_(2)+miR-212-3p抑制物+干扰对照组、H_(2)O_(2)+miR-212-3p抑制物+MAPK3干扰组,细胞转染24 h后再加入H_(2)O_(2)培养72 h,检测细胞中衰老相关β-半乳糖苷酶活性、p16和p21蛋白表达。结果与结论:①与对照组比较,造模组β-半乳糖苷酶活性、miR-212-3p mRNA表达及p16、p21蛋白表达升高(P<0.05),MAPK3 mRNA和蛋白表达降低(P<0.05)。②与对照组比较,miR-212-3p抑制物组细胞中miR-212-3p mRNA表达降低(P<0.05),MAPK3 mRNA与蛋白表达升高(P<0.05)。③双荧光素酶报告基因实验证实,MAPK3是miR-212-3p下游靶基因。④与对照抑制物组比较,miR-212-3p抑制物组细胞中MAPK3 mRNA和蛋白表达升高(P<0.05);与miR-212-3p抑制物组比较,miR-212-3p抑制物+MAPK3干扰组细胞中MAPK3 mRNA和蛋白表达降低(P<0.05)。与H_(2)O_(2)+对照抑制物组比较,H_(2)O_(2)+miR-212-3p抑制物组β-半乳糖苷酶活性降低(P<0.05);与H_(2)O_(2)+miR-212-3p抑制物组比较,H_(2)O_(2)+miR-212-3p抑制物+MAPK3干扰组β-半乳糖苷酶活性升高(P<0.05)。与H_(2)O_(2)+对照抑制物组比较,H_(2)O_(2)+miR-212-3p抑制物组细胞中p16和p21蛋白表达降低(P<0.05);与H_(2)O_(2)+miR-212-3p抑制物组比较,H_(2)O_(2)+miR-212-3p抑制物+MAPK3干扰组细胞中p16和p21蛋白表达升高(P<0.05)。⑤结果表明,下调miR-212-3p可抑制大鼠骨髓间充质干细胞衰老,其作用机制可能是通过靶向上调MAPK3表达实现的。

前列腺癌患者血清miR-138-5p,miR-212-5p水平表达及与临床预后价值

目的 探究前列腺癌(prostate cancer)患者血清miR-138-5p,miR-212-5p水平表达及与临床预后价值。方法 选择2020年7月~2021年6月邯郸市第一医院收治的95例前列腺癌患者,根据术后两年的随访记录分为预后不良组(复发或死亡,n=52)和预后良好组(未复发或好转,n=43),另选同期48例健康体检志愿者为健康对照组。实时荧光定量聚合酶链式反应(quantitative real-time fluorescence-PCR,qRT-PCR)检测血清miR-138-5p和miR-212-5p相对表达水平,收集并分析患者临床资料,多因素COX回归分析影响前列腺癌患者预后的因素;绘制受试者工作特征(receiver operating characteristic,ROC)曲线分析血清miR-138-5p和miR-212-5p对前列腺癌患者预后情况的预测价值;Pearson分析miR-138-5p,miR-212-5p与Gleason评分的相关性。结果 与健康对照组相比较,预后良好组、预后不良组患者血清miR-138-5p(0.88±0.10,0.83±0.09 vs 1.01±0.10),miR-212-5p(0.75±0.09,0.71±0.08 vs 1.02±0.11)水平显著降低,差异具有统计学意义(t=14.021,22.275;9.825,18.063,均P <0.05);前列腺癌患者预后情况与TNM分期、骨转移、组织分化程度、术前PSA水平以及Gleason评分有关(χ^(2)=4.417~7.187,t=14.235,均P <0.05);血清mi R-138-5p[HR(95%CI):0.871(0.785~0.966)],miR-212-5p[HR(95%CI):0.822(0.725~0.932)]为预后不良的保护因素(均P <0.05)。Gleason评分[HR(95%CI):1.253(1.026~1.530)],TNM分期[HR(95%CI):1.224(1.024~1.463)],骨转移[HR(95%CI):1.398(1.036~1.887)],组织分化程度[HR(95%CI):1.520(1.146~2.016)]和PSA水平[HR(95%CI):1.426(1.094~1.858)]为预后不良的危险因素(均P <0.05);血清miR-138-5p,miR-212-5p预测的曲线下面积(95%置信区间)[AUC(95%CI)]分别为0.883(95%CI:0.801~0.940),0.863(95%CI:0.777~0.925);血清miR-138-5p,miR-212-5p与Gleason评分均呈负相关(r=-0.610,-0.420,均P <0.05)。结论 前列腺癌患者血清miR-138-5p和miR-212-5p水平显著降低,且对前列腺癌患者预后具有一定辅助预测价值。

miR-212-3p靶向调控NAP1L1抑制胶质瘤细胞增殖、迁移和上皮-间充质转化

目的探究miR-212-3p在胶质瘤细胞增殖、侵袭和上皮-间充质转化(EMT)中的分子机制。方法RT-qPCR用于衡量胶质瘤细胞中miR-212-3p和NAP1L1表达,构建NC mimic、miR-212-3p mimic、oeNC和oe-NAP1L1转染至细胞中,利用CCK-8、Transwell和伤口实验评估细胞生物学行为。通过Western blot分析EMT相关标志物的蛋白表达。miR-212-3p与NAP1L1的关系通过双荧光素酶报告基因和AgO2-RIP实验进行证实。结果miR-212-3p的表达水平在胶质瘤细胞中显著下调(P<0.0001),过表达miR-212-3p可以显著降低胶质瘤细胞增殖(P<0.0001)、侵袭(P=0.0011)和迁移能力(P<0.0001),并且抑制了EMT标志物N-钙黏蛋白(N-cadherin)(P=0.000861)和波形蛋白(Vimentin)(P=0.007430)的表达,而上调了E-钙黏蛋白(Ecadherin)(P<0.0001)的表达。miR-212-3p靶向负调控NAP1L1的表达。过表达NAP1L1逆转了miR-212-3p对胶质瘤细胞增殖(P<0.0001)、迁移(P<0.0001)和EMT(P<0.0001)的抑制作用。结论miR-212-3p通过靶向负调节NAP1L1的表达抑制胶质瘤细胞增殖、迁移和EMT。

circMAN1A2调节miR-212-3p/DDIT4轴对胃癌细胞增殖、侵袭和迁移的影响

目的探究circMAN1A2靶向miR-212-3p/DNA损伤诱导转录子4(NDA damage-inducible transcript 4,DDIT4)轴对胃癌细胞增殖、侵袭和迁移的影响。方法qRT-PCR法检测胃癌组织和细胞中circMAN1A2、miR-212-3p表达水平。荧光素酶检测circMAN1A2与miR-212-3p、DDIT4和miR-212-3p的靶向关系。在胃癌细胞SGC-7901、HGC-27中转染si-NC、si-circMAN1A2、si-circMAN1A2+anti-NC、si-circMAN1A2+anti-miR-212-3p、miR-NC、miR-212-3p mimics,将未转染的SGC-7901、HGC-27细胞设为对照。平板克隆实验检测细胞增殖;细胞划痕及Transwell实验分别检测细胞迁移、侵袭能力。Western blotting检测增殖、迁移及侵袭相关蛋白表达。结果在胃癌组织及细胞中,circMAN1A2高表达,miR-212-3p低表达;下调circMAN1A2可以靶向上调miR-212-3p表达,且下调DDIT4表达,进而抑制胃癌细胞增殖、侵袭和迁移能力。抑制miR-212-3p表达可部分逆转抑制circMAN1A2表达对胃癌细胞恶性增殖的抑制作用。结论在胃癌细胞中抑制circMAN1A2表达可抑制胃癌细胞增殖、迁移与侵袭,其与调节miR-212-3p/DDIT4信号轴有关。

血清miR-212-5p、miR-221-3p与AECOPD患者TLR4/NF-κB炎症信号通路和预后的关系研究

目的探讨血清微小核糖核酸(miRNA)-212-5p(miR-212-5p)、miRNA-221-3p(miR-221-3p)与慢性阻塞性肺疾病(COPD)急性加重期(AECOPD)患者Toll样受体4(TLR4)/核因子κB(NF-κB)炎症信号通路和预后的关系。方法选取2020年1月至2022年12月聊城市第二人民医院收治的298例COPD患者为研究对象,其中AECOPD患者175例(AECOPD组),COPD稳定期患者123例(COPD稳定期组),另纳入同期在该院体检健康者100例作为健康对照组。根据28 d预后情况,将AECOPD患者分为预后良好组和预后不良组。采用荧光定量聚合酶链反应检测血清miR-212-5p、miR-221-3p及TLR4/NF-κB信号通路相关指标的水平。采用Pearson相关分析AECOPD患者血清miR-212-5p、miR-221-3p水平与TLR4/NF-κB信号通路相关指标水平的相关性。采用多因素Logistic回归分析AECOPD患者预后不良的影响因素。绘制受试者工作特征(ROC)曲线分析miR-212-5p、miR-221-3p水平对AECOPD患者预后不良的预测价值。结果COPD稳定期组、AECOPD组血清TLR4 mRNA、NF-κB信使RNA(mRNA)水平高于健康对照组,血清miR-212-5p、miR-221-3p水平低于健康对照组,差异均有统计学意义(P<0.05);AECOPD组血清TLR4 mRNA、NF-κB mRNA水平高于COPD稳定期组,血清miR-212-5p、miR-221-3p水平低于COPD稳定期组,差异均有统计学意义(P<0.05)。随访28 d,AECOPD患者中预后不良62例(预后不良组),预后良好113例(预后良好组)。预后良好组血清miR-212-5p、miR-221-3p水平高于预后不良组,而血清TLR4 mRNA、NF-κB mRNA水平低于预后不良组,差异均有统计学意义(P<0.05)。Pearson相关性分析结果显示,AECOPD患者血清miR-212-5p、miR-221-3p水平与TLR4 mRNA、NF-κB mRNA水平均呈负相关(P<0.05)。预后良好组血清白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平低于预后不良组,差异均有统计学意义(P<0.05)。多因素Logistic回归分析结果显示,IL-6、TNF-α、TLR4 mRNA和NF-κB mRNA水平升高是AECOPD患者预后不良的危险因素(P<0.05),miR-212-5p、miR-221-3p水平升高是AECOPD患者预后不良的保护因素(P<0.05)。ROC曲线分析结果显示,血清miR-212-5p、miR-221-3p联合预测AECOPD预后不良的曲线下面积(AUC)为0.862,明显高于miR-212-5p、miR-221-3p单独预测的0.722、0.755(P<0.05)。结论AECOPD预后不良患者血清miR-212-5p、miR-221-3p水平下调可能与调节TLR4/NF-κB炎症信号通路有关,且miR-212-5p、miR-221-3p联合检测对AECOPD患者的预后不良具有较高的预测价值。

卵巢癌患者血浆miR-205、miR-212及miR-429的水平分析及意义

目的探讨卵巢癌患者血浆miR-205、miR-212及miR-429水平,分析3者与卵巢癌临床病理学特征的关系。方法收集本院收治的71例上皮性卵巢癌患者未经治疗前的血浆标本(上皮性卵巢癌组),采用实时定量RT-PCR(qRTPCR)法检测以上标本的miR-205、miR-212及miR-429水平,收集卵巢癌患者的临床病理学参数(年龄、临床分期、分化程度、组织类型及淋巴结转移情况),比较不同miR-205、miR-212及miR-429水平的临床病理参数分布差异,采用受试者工作特征曲线(ROC)评价血浆miR-205、miR-212及miR-429水平在卵巢癌诊断中的临床价值。同时选取同期的68例女性健康体检者(健康对照组)及66例良性卵巢肿瘤患者(良性卵巢肿瘤组)的血浆标本作对照。结果上皮性卵巢癌组的血浆miR-205水平高于良性卵巢肿瘤组和健康对照组,但miR-212和miR-429水平低于良性卵巢肿瘤组和健康对照组,差异均有统计学意义(P<0.05);上皮性卵巢癌组中的miR-205水平与年龄、临床分期、分化程度及淋巴结转移有关,miR-212水平与临床分期、分化程度有关,miR-429水平与临床分期、淋巴结转移有关,以上差异均有统计学意义(P<0.05);卵巢癌患者血浆miR-205水平与miR-212及miR-429均呈负相关(r=-0.572、-0.325),miR-212与miR-429呈正相关(r=0.473),差异均有统计学意义(P<0.05);血浆miR-205、miR-212及miR-429诊断卵巢癌的AUC、灵敏度和特异度分别为0.915、92.1%和86.2%,0.944,87.3%和91.0%,0.905、88.5%和83.6%。结论卵巢癌患者血浆中miR-205呈高表达,miR-212和miR-429呈低表达,与临床病理学参数有关,且在卵巢癌诊断中有一定的价值,可用于卵巢癌的辅助诊断和病情评估。

miR-212通过靶向NRP1调节结肠癌SW480肿瘤干细胞样特性和免疫应答

目的:探讨miR-212在SW480肿瘤干细胞样特性和免疫应答中的调控作用,并初步分析其调控机制。方法:结肠癌SW480细胞分别转染mimic、miR-NC或miR-212-5p,RT-PCR检测神经纤毛蛋白1(NRP1)和miR-212-5p表达水平并进行相关性分析;TargetScan预测miR-212-5p潜在靶向基因NRP1,荧光素酶实验验证靶向关系;SW480细胞单独或联合转染miR-212-5p和pcDNA-NRP1,RT-PCR检测miR-212-5p和NRP1 mRNA表达水平,Western blot检测NRP1蛋白表达水平;流式细胞术分选干细胞阳性标记(CD44+)比例,Western blot检测性别决定区Y框蛋白2(SOX2)和富含亮氨酸重复单位的G蛋白偶联受体5(LGR5)蛋白表达;ELISA测定SW480细胞上清液中IL-6、TNF-α和IL-4蛋白含量,RT-PCR检测IL-6和IL-4 mRNA表达水平。结果:与Control组相比,miR-212-5p显著上调SW480肿瘤干细胞miR-212-5p表达(P<0.05),下调NRP1表达(P<0.05),抑制CD44+、SOX2、LFR5表达(P<0.05),促进炎症反应和免疫应答(P<0.05);与NRP1组相比,miR-212-5p明显抑制因NRP1上调的CD44+、SOX2和LGR5表达(P<0.05),促进因NRP1下调的炎症因子表达(P<0.05)。结论:miR-212-5p靶向抑制NRP1表达,调节结肠癌SW480肿瘤干细胞样特性和免疫应答。

miR-212-5p通过靶向PCED1B基因抑制Wnt/β-catenin信号通路调控膀胱癌细胞的增殖和凋亡

目的研究miR-212-5p对膀胱癌(BC)细胞凋亡和增殖的影响和潜在分子机制。方法以正常膀胱上皮细胞SV-HUC-1为对照,实时荧光定量-聚合酶链反应(qRT-PCR)和Western印迹检测BC细胞系T24、RT4和UM-UC-3中miR-212-5p和PCED1B的表达;在RT4细胞中转染miR-212-5p和si-PCED1B,Western印迹检测PCED1B、细胞周期蛋白(Cyclin)D1、酶切含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶(caspase)-3和β-catenin蛋白表达,CCK-8实验和流式细胞术分别检测细胞增殖率和凋亡率,双荧光素酶报告系统验证miR-212-5p和PCED1B的关系。结果与miR-NC组相比,miR-212-5p组RT4细胞中miR-212-5p含量显著升高,CyclinD1和酶切caspase-3表达量均显著降低,细胞增殖率显著降低,凋亡率显著升高(均P<0.05)。与si-NC组相比,si-PCED1B组RT4细胞中PCED1B、CyclinD1和酶切caspase-3、细胞增殖率均显著下降(均P<0.05),凋亡率显著升高(P<0.05)。miR-212-5p组PCED1B蛋白水平显著低于miR-NC组(P<0.05),anti-miR-212-5p组PCED1B蛋白水平显著高于anti-miR-NC组(P<0.05)。恢复PCED1B表达后RT4细胞中的PCED1B、CyclinD1和酶切caspase-3表达量、细胞增殖率均显著升高(P<0.05),细胞凋亡率显著降低(P<0.05)。与miR-NC组β-catenin蛋白水平相比,miR-212-5p组显著降低(P<0.05);与miR-212-5p+pcDNA-NC组β-catenin蛋白水平相比,miR-212-5p+pcDNA-PCED1B组显著升高(P<0.05)。结论miR-212-5p靶向PCED1B可能通过调控Wnt/β-catenin信号通路影响BC细胞凋亡和增殖。miR-212-5p可能是BC的潜在分子靶点。

miR-212在上皮性卵巢癌中表达的临床意义

目的:本研究探讨上皮性卵巢癌中miR-212的表达及其与临床病理特征的关系。方法:采用茎环实时荧光逆转录聚合酶链反应Real-time RT-PCR检测我院46例上皮性卵巢癌组织及癌旁良性组织中miR-212表达,并对临床病理数据进行分析。Transwell检测转染miR-212 mimic对SKOV3细胞运动、侵袭的影响,Western Blot检测E-cadherin和Vimentin蛋白表达。结果:46例上皮性卵巢癌miR-212相对表达量(0.842±0.223)显著低于癌旁卵巢组织(1.212±0.438)。miR-212在Ⅲ/Ⅳ期中相对表达量为(0.865 3±0.469 3),明显低于I/Ⅱ期(1.095 2±0.415 2)(P<0.05)。在低分化癌组织中相对表达量为(0.856 0±0.437 6),明显低于中高分化癌组织(1.131 9±0.471 2)(P<0.05)。而且miR-212在有淋巴结转移组相对表达量为(0.879 4±0.462 2),明显低于无淋巴结转移组(1.163 7±0.412 7)(P<0.01)。但与患者年龄(P=0.430),肿瘤组织学类型(P=0.546)无关。miR-212转染组SKOV3细胞运动、侵袭均低于未转染组,miR-212转染组抑制SKOV3细胞Vimentin表达,但促进E-cadherin表达。结论:卵巢癌中miR-212低表达,miR-212表达缺失可能与卵巢癌的肿瘤生长和侵袭发展相关,在卵巢癌预后判断中可能有一定价值。

miR-212-3p靶向长链非编码RNA SCAMP1在胃癌中的差异表达

目的:探究miR-212-3p靶向LncRNA SCAMP1在胃癌中表达水平。方法:通过生物信息学分析,预测miR-212-3p靶向的LncRNA;运用COX风险模型,分析miR-212-3p相关的靶向LncRNA SCAMP1对胃癌患者生存时间的影响;采用实时定量PCR,检测人胃癌组织及远癌组织中miR-212-3p和LncRNA的表达水平。结果:LncRNA预测结果显示miR-212-3p靶向SCAMP1等21个LncRNA;COX风险模型显示miR-212-3p在胃癌中无统计学差异(P>0.05),SCAMP1在胃癌中有统计学差异(P<0.05),其表达升高不利于患者预后;实时定量PCR结果显示,miR-212-3p在远癌组织表达量高于胃癌组织(P<0.05);SCAMP1在远癌组织表达量低于胃癌组织(P<0.05)。结论:miR-212-3p相关的靶向LncRNA SCAMP1高表达不利于胃癌患者的预后。

miR-212在宫颈癌中的表达及对癌细胞增殖和侵袭的影响与机制

目的探讨miR-212在宫颈癌中的表达及其对宫颈癌细胞增殖和侵袭的影响及作用机制。方法采用RT-PCR和Western Blot方法检测宫颈癌细胞中miR-212和TCF7L2的表达水平。应用BrdU细胞增殖检测和Transwell侵袭实验分别检测细胞增殖和侵袭情况。运用生物信息学方法Target Scan预测并筛选miR-212的蛋白编码基因靶点,并应用双荧光素酶报告系统进行验证。结果与癌旁组织相比,miR-212在宫颈癌组织中的表达下调(P<0.01);与End1/E6E7细胞相比,miR-212在宫颈癌细胞系中的表达水平均显著降低(P<0.01)。miR-212的过表达可以抑制细胞的增殖和侵袭,而低表达miR-212可以促进宫颈癌细胞系的增殖和侵袭(P<0.01)。miR-212的过表达可以显著抑制TCF7L2蛋白的表达,而miR-212的低表达则促进TCF7L2蛋白的表达。靶基因TCF7L2是miR-212的直接作用靶点。结论宫颈癌组织中miR-212表达降低,通过基因TCF7L2的靶向调节抑制宫颈癌的侵袭和转移。

SLE患者外周血单个核细胞中miR-132和miR-212的表达及临床意义

目的分析SLE患者外周血单个核细胞(PBMC)中微小RNA(miR)-132和miR-212的表达水平及临床意义。方法提取PBMC中的总RNA,运用茎环逆转录实时荧光定量PCR(qRT-PCR)技术检测24例健康人及48例SLE患者PBMC中miR-132和miR-212的相对表达水平,分析其与临床检验指标的相关性。结果 SLE患者中miR-132相对表达量为1.72±0.071,与健康人对照组0.99±0.037比较,差异有统计学意义(t=-6.881,P=0.000)。健康人和SLE患者miR-212相对表达水平分别是0.99±0.020和1.03(0.982,1.048),差异未见统计学意义(Z=1.302,P=0.197)。相关性分析结果显示,SLE患者中miR-132的表达量与抗双链DNA(dsDNA)抗体以及SLE患者疾病活动指数(SLEDAI)呈正相关(r分别为0.740和0.526,P均<0.05);而miR-212的表达量与抗dsDNA抗体(r=0.106,P=0.474)和SLEDAI(r=0.005,P=0.973)等临床指标无相关性。结论 miR-132在SLE患者PBMC中的表达水平升高,可能参与SLE的致病过程。

miR-212对疾病基因表达调控的研究进展

miRNAs是存在于动植物中的一类RNA分子,每一个miRNA可以调节一个或多个基因,具有十分复杂的调节网络。根据现有研究,miRNA至少调节人类1/3的基因。miR-212是一种新发现的miRNA,它的表达在人类某些疾病的发生、发展过程中起到了非常重要的作用,在阐释相关疾病的发病机制、筛选诊断标志物、疾病的治疗、新药研发、判断疾病预后等方面具有巨大的潜在研究价值。本文就miR-212在癌症、心血管疾病、神经退行性疾病等疾病中的作用作一综述,以资临床借鉴。

脂肪间充质干细胞外泌体miR-212-3p对成纤维样滑膜细胞的影响

目的探讨脂肪间充质干细胞(ADSCs)外泌体miR-212-3p对类风湿性关节炎成纤维样滑膜细胞RA-FLS增殖、迁移和侵袭的影响及其作用机制。方法收集海南医学院第一附属医院类风湿性关节炎(RA)患者和健康者血清各20例,采用RT-qPCR检测血清中miR-212-3p的表达情况。体外细胞可分为4组:RA-FLS细胞单独培养(NC组)、RA-FLS细胞+Exo-ADSCs共培养(Exo组)、RA-FLS细胞+沉默外泌体miR-212-3p共培养(Exo-antagomiR-212-3p组)、敲降RA-FLS细胞SMAD1+沉默外泌体miR-212-3p共培养(si-SMAD1+Exo-antagomiR-212-3p组)。外源性调节ADSCs细胞中miR-212-3p和RA-FLS细胞中SMAD1的表达水平后,将ADSCs外泌体与RA-FLS细胞共培养,CCK-8和Transwell分别检测RA-FLS细胞增殖活力、迁移和侵袭能力;采用双荧光素酶报告基因验证miR-212-3p与SMAD1之间的靶向关系。结果与健康者相比,miR-212-3p在RA患者血清中低表达,差异有统计学意义(P<0.05);与NC组相比,Exo组中miR-212-3p表达显著上调,增殖活力、迁移和侵袭显著降低,差异无统计学意义(均P>0.05);miR-212-3p能够靶向结合SMAD1的3′UTR;同时与NC组相比,Exo组及si-SMAD1+Exo-antagomiR-212-3p组中SMAD1相对表达、RA-FLS细胞增殖活力、迁移和侵袭数显著降低,差异无统计学意义(均P<0.05),而Exo-antagomiR-212-3p组中SMAD1相对表达、RA-FLS细胞增殖活力、迁移和侵袭数与NC组比较,差异无统计学意义(均P>0.05)。结论ADSCs外泌体miR-212-3p在RA患者和RA-FLS细胞中低表达,其通过靶向下调SMAD1抑制RA-FLS细胞增殖、迁移和侵袭。

LncTUG1通过靶向miR-212-3p对口腔鳞状细胞癌细胞NK细胞杀伤敏感性的影响

目的:探讨长链非编码RNA(Lnc)牛磺酸调节基因1(taurine up-regulated gene 1,TUG1)对口腔鳞状细胞癌细胞自然杀伤细胞(nature killer cell,NK)杀伤敏感性的影响。方法:以口腔鳞状细胞癌细胞作为体外实验对象,转染TUG1 siRNA,利用qRT-PCR、MTT、流式细胞术、LDH方法,分别检测TUG1表达量、细胞增殖、细胞凋亡和NK细胞杀伤率。利用生物信息学软件预测TUG1与miR-212-3p靶向互补结合,构建荧光素酶报告载体,鉴定靶向关系。在口腔鳞状细胞癌细胞中共转染TUG1 siRNA和miR-212-3p抑制剂,评估miR-212-3p抑制剂对TUG1 siRNA影响口腔鳞状细胞癌细胞增殖凋亡和NK细胞杀伤敏感性的影响。采用SPSS 21.0软件包对实验数据进行统计学分析。结果:TUG1 siRNA可显著降低口腔鳞状细胞癌细胞中TUG1的表达水平(P=0.000),降低细胞增殖能力(P=0.001),促进细胞凋亡(P=0.000),增加NK细胞杀伤率(P<0.01)。TUG1 siRNA靶向提高miR-212-3p表达量。miR-212-3p抑制剂可逆转TUG1 siRNA对口腔鳞状细胞癌细胞增殖、凋亡和NK细胞杀伤率的影响。结论:下调TUG1可靶向负调控miR-212-3p,抑制口腔鳞状细胞癌细胞增殖并诱导凋亡,提高NK细胞杀伤敏感性。

联合应用小檗碱和二甲双胍对miR-212介导的食管癌细胞迁移的影响

目的探讨小檗碱和二甲双胍联合对miR-212介导的人食管癌KYSE-450细胞迁移的影响及机制。方法对miR-212慢病毒转染的KYSE-450细胞,用小檗碱(10μmol/L)和二甲双胍(10 mmol/L)单独或联合应用处理,利用Transwell迁移实验检测细胞迁移能力,Western印迹法检测上皮-间质转化(EMT)相关蛋白的表达。结果与对照组相比,小檗碱和二甲双胍联合后对KYSE-450细胞迁移能力的抑制作用明显增强,并优于两药的单独用药组(P<0.05)。小檗碱和二甲双胍联合后,EMT标记蛋白E-cadherin表达显著增加,Vimentin和转录因子Twist1表达显著减少(P<0.05)。结论小檗碱和二甲双胍联合用药显著增强对miR-212介导的食管癌KYSE-450细胞的迁移能力的抑制作用,其机制与两种药物联合抑制EMT转化过程及转录因子Twist1的表达有关。

miR-212在乳腺浸润性导管癌组织中的表达及效应分析

目的分析miR-212在乳腺浸润性导管癌组织中的表达及与乳腺癌临床病理特征之间的相关性,并分析其效应。方法采用茎环RT-qPCR方法检测38例乳腺癌及癌旁正常乳腺组织标本中miR-212的表达,统计分析其表达水平与乳腺癌常用临床病理指标间的关系。不同浓度miR-212 inhibitor转染MCF7乳腺癌细胞,通过MTT法分析细胞活性,通过Tran-swell实验检测细胞的侵袭能力。结果与癌旁正常乳腺组织比较,乳腺癌组织中miR-212的表达明显升高(P<0.05);分析miR-212表达水平与乳腺癌常用临床病理指标间的关系发现,miR-212表达水平与乳腺癌细胞与淋巴结转移、TNM分期相关及增殖指数(ki67)相关(P<0.05),与月经状况、肿块大小、雌激素和孕激素受体状态、Her-2表达未见显著相关性(P>0.05)。细胞干预实验显示,与空白对照组、阴性对照组比较,miR-212inhibitor可明显抑制MCF7细胞增殖活性(P<0.05)和细胞迁移(P<0 01)。结论乳腺癌组织高表达的miR-212在乳腺癌发展过程中发挥重要作用,有望成为乳腺癌防治的一个新靶点。

CircWHSC1调节miR-212-3p/CD47轴对子宫内膜癌细胞免疫逃逸和紫杉醇耐药性的影响

目的:探讨环状链非编码RNA(Circ)WHSC1调节微小RNA(miR)-212-3p/整合素相关蛋白(CD47)轴对子宫内膜癌(EC)细胞免疫逃逸和紫杉醇(PTX)耐药性的影响。方法:qRT-PCR检测EC细胞系(Ishikawa、RL95-2、HEC-1-A、HEC-1B)及人子宫内膜基质细胞(ESC)系CL0453中CircWHSC1、miR-212-3p、CD47 mRNA表达水平;以Ishikawa细胞为研究对象,分为对照组、RNA干扰CircWHSC1载体(sh-CircWHSC1)组、阴性对照(sh-NC)组、sh-CircWHSC1+miR-212-3p抑制剂(miR-212-3p inhibitor)组、sh-CircWHSC1+抑制剂阴性对照(inhibitor NC)组;CCK-8分别检测各组Ishikawa细胞增殖及对PTX耐药性;流式细胞仪检测细胞凋亡状况;Western blot检测CD47及免疫逃逸蛋白(B7-H1、PD-L1)表达;双荧光素酶验证miR-212-3p分别与CircWHSC1、CD47靶向关系。结果:Ishikawa、RL95-2、HEC-1-A、HEC-1B细胞较CL0453细胞CircWHSC1、CD47 mRNA均显著增加,miR-212-3p表达显著下降(P<0.05);与对照组、sh-NC组相比,sh-CircWHSC1组CircWHSC1、CD47 mRNA、增殖率、IC 50、B7-H1、PD-L1表达均显著下降,凋亡率、miR-212-3p表达显著增加(P<0.05);与sh-CircWHSC1+inhibitor NC组相比,sh-CircWHSC1+miR-212-3p inhibitor组CD47 mRNA、增殖率、IC 50、B7-H1、PD-L1表达均显著增加,凋亡率、miR-212-3p表达显著下降(P<0.05)。miR-212-3p分别与CircWHSC1、CD47存在靶向关系。结论:干扰CircWHSC1表达可抑制Ishikawa细胞增殖,降低PTX耐药性,促进其凋亡,并可能抑制癌细胞免疫逃逸,其作用机制可能是通过调控miR-212-3p/CD47轴实现的。

lncRNA CRNDE靶向miR-212-5p调控氧糖剥夺诱导的大鼠皮质神经元损伤

目的:探讨lncRNA CRNDE对氧糖剥夺(OGD)诱导的大鼠皮质神经元损伤的影响及作用机制。方法:培养大鼠皮质神经元,分为对照组(Con组)、OGD组、OGD+si-NC组、OGD+si-CRNDE组、OGD+miR-NC组、OGD+miR-212-5p组、OGD+si-CRNDE+anti-miR-NC组和OGD+si-CRNDE+anti-miR-212-5p组,RT-qPCR法检测细胞中CRNDE和miR-212-5p表达水平,CCK-8法检测细胞存活率,试剂盒法检测细胞培养上清液中乳酸脱氢酶(LDH)漏出率,流式细胞术检测细胞凋亡率,Western blotting检测细胞中Bcl-2、Bax蛋白表达。双荧光素酶报告基因实验验证CRNDE和miR-212-5p的调控关系。结果:与Con组比较,OGD组CRNDE水平、LDH漏出率、细胞凋亡率、Bax蛋白水平升高(P<0.01),miR-212-5p水平、细胞存活率、Bcl-2蛋白水平降低(P<0.01)。与OGD+si-NC组比较,OGD+si-CRNDE组细胞存活率、Bcl-2蛋白水平升高(P<0.01),LDH漏出率、细胞凋亡率和Bax蛋白水平降低(P<0.01)。与OGD+miR-NC组比较,OGD+miR-212-5p组细胞存活率、Bcl-2蛋白水平升高(P<0.01),LDH漏出率、细胞凋亡率和Bax蛋白水平降低(P<0.01)。与OGD+si-CRNDE+anti-miR-NC组比较,OGD+si-CRNDE+anti-miR-212-5p组细胞存活率、Bcl-2蛋白水平降低(P<0.01),LDH漏出率、细胞凋亡率和Bax蛋白水平升高(P<0.01)。CRNDE靶向负调控miR-212-5p表达。结论:干扰CRNDE表达可靶向上调miR-212-5p促进OGD诱导的大鼠皮质神经元增殖,并抑制神经元凋亡及LDH漏出率,减轻了神经元损伤。

miR-212抑制骨肉瘤细胞恶性生物学行为的实验研究

目的探讨miR-212对骨肉瘤细胞增殖和迁移的抑制机制。方法 MIRDB预测miR-212与锌指蛋白133(ZNF133)的结合位点后,利用荧光素酶报告基因实验检测miR-212对ZNF133的靶向作用。通过MTT实验和Transwell实验检测miR-212过表达或受到抑制后对MG63细胞增殖和迁移的影响。通过Western blotting实验检测miR-212对ZNF133及CDK4/6和MMP2的作用。结果MIRDB预测发现miR-212与ZNF133的3’UTR区域具有结合位点,荧光素酶报告基因实验证明了miR-212可以直接作用于ZNF133。MTT实验表明转染miR-212后显著抑制MG63细胞增殖;miR-212受到抑制后促进MG63细胞增殖。Transwell实验发现miR-212可以抑制骨肉瘤细胞系MG63迁移。Western blotting实验证明miR-212对MG63细胞增殖迁移能力的抑制在一定程度上是通过miR-212对ZNF133及CDK4/6和MMP2的抑制实现的。结论 miR-212可以通过抑制ZNF133及相关蛋白抑制骨肉瘤细胞的增殖和迁移。