清肾颗粒对大鼠NRK-52E细胞转分化模型miR-23b和PINK1/Parkin通路的影响

目的 探讨TGF-β1诱导大鼠NRK-52E细胞转分化模型中miR-23b对PINK1/Parkin通路的靶向调节机制,并阐明清肾颗粒含药血清对NRK-52E细胞转分化的干预机理。方法 采用超高效液相色谱(UPLC)指纹图谱法对清肾颗粒进行全指纹图谱分析。构建TGF-β1诱导大鼠NRK-52E细胞转分化模型,转染siRNA后分为模拟物空载对照组、miR-23b-5p模拟物组、抑制剂空载对照组、miR-23b-5p抑制剂组,观察miR-23b-5p对PINK1表达量的影响。再将NRK-52E细胞分组为正常组、TGF-β1组、清肾颗粒组、miR-23b-mimic-NC组、miR-23b-mimic组、miR-23b-mimic+清肾颗粒组,Western blot法检测NRK-52E细胞中Pink1、Parkin、LC3Ⅱ、Beclin-1、P62、α-SMA蛋白表达,RT-qPCR法检测NRK-52E细胞中miR-23b-5p、Pink1、Parkin、Beclin-1、α-SMA mRNA的表达,双荧光素酶报告基因实验检测miR-23b-5p与PINK1的靶向关系。结果 UPLC指纹图谱法鉴定出清肾颗粒中11个活性成分。miR-23b-5p过表达后,PINK1 mRNA表达量也显著增加(P<0.05);而miR-23b-5p表达沉默后,PINK1 mRNA表达量也显著减少(P<0.05)。双荧光素酶报告显示,Rno-miR-23b-5p能显著下调Rno-PINK1-WT荧光素酶活性(P<0.05),但未能下调突变Rno-PINK1-mut荧光素酶活性(P>0.05)。清肾颗粒含药血清干预实验发现,TGF-β1组的miR-23b-5p、Pink1、Parkin、Beclin-1、LC3Ⅱ表达及LC3Ⅱ/Ⅰ比值均明显低于正常组,P62和α-SMA表达明显高于正常组(P<0.05)。清肾颗粒组和miR-23b-mimic组的miR-23b-5p、Pink1、Parkin、Beclin-1、LC3Ⅱ表达及LC3Ⅱ/Ⅰ比值均明显高于TGF-β1组,P62和α-SMA表达明显低于TGF-β1组(P<0.05)。miR-23b-mimic+清肾颗粒组的表现更优于miR-23b-mimic组(P<0.05)。结论 清肾颗粒能够上调NRK-52E细胞内miR-23b-5p表达,并通过增强PINK1/Parkin通路介导的线粒体自噬活性,抑制NRK-52E细胞转分化进程。

血清miR-155、miR-23b在特发性肉芽肿乳腺炎和乳腺癌中的差异性表达及意义

目的 探讨miR-155、miR-23b在特发性肉芽肿乳腺炎(IGM)和乳腺癌(BC)鉴别诊断中的作用。方法 选取2018年10月至2021年11月我院收治的32例IGM患者(ICM组)和40例BC患者(BC组),所有患者均经活检确诊。另外纳入33例健康女性作为对照组。比较患者的临床资料。采用实时荧光定量PCR检测血清miRNAs表达水平。采用受试者工作特征(ROC)曲线评估血清miR-155、miR-23b对IGM和BC的诊断价值。采用Pearson相关系数法评估相关性。结果 3组CRP、WBC、Hb、Hct、CA19-9、CA15-3、CA125水平比较,差异有统计学意义(P<0.05)。IGM组患者血清miR-155、miR-16-5p、miR-21-5p、miR-210-3p、miR-222-3p、miR-29c-3p表达水平较对照组升高(P<0.001),血清miR-23b表达水平低于对照组(P<0.001);BC组患者血清中以上miRNAs表达水平均高于对照组(P<0.001)。BC组患者血清miR-155表达水平低于IGM组(P<0.001),血清miR-23b表达水平高于IGM组(P<0.001)。血清miR-155和miR-23b水平鉴别诊断IGM和BC的ROC曲线下面积(AUC)分别为0.722(95%CI:0.601~0.843)、0.765(95%CI:0.657~0.874),敏感度分别为81.00%、77.50%,特异度分别为65.00%、59.40%;二者联合鉴别诊断的AUC为0.869(95%CI:0.786~0.951),敏感度和特异度分别为84.10%和92.50%。IGM组血清miR-155与WBC、CRP水平均呈正相关(P<0.05),而血清miR-23b与WBC、CRP水平均呈负相关(P<0.05)。结论 血清miR-155和miR-23b有助于区分IGM和BC,可成为IGM和BC早期鉴别诊断的靶标。

miR-23a/27a/24基因簇g.65307469G>A突变对大白猪产仔数和启动子活性的影响

[目的]本文旨在研究大白猪miR-23a/27a/24基因簇启动子突变位点多态性与产仔数性状的关系及潜在机制,为母猪繁殖性状的分子育种提供新的潜在遗传标记。[方法]利用混池测序技术筛选猪miR-23a/27a/24基因簇启动子突变位点,直接测序法对大白猪群体(n=345)miR-23a/27a/24基因簇突变位点进行基因分型,计算遗传多样性;用线性模型对突变位点多态性与产仔数性状进行关联性分析;构建不同等位基因类型启动子载体,转染猪卵巢颗粒细胞,通过检测荧光素酶活性分析突变对启动子活性的影响;用生物信息学方法预测不同等位基因类型启动子潜在结合的差异转录因子,用荧光素酶活性分析差异转录因子对不同等位基因类型启动子活性的影响。[结果]在猪miR-23a/27a/24基因簇启动子-648 nt(Chr.2,65307469 nt)处发现1个新的G/A突变,命名为g.65307469G>A。在大白猪群体中发现3种基因型(GG、GA和AA),其中GG为优势基因型(89.57%),G等位基因为优势等位基因(94.64%)。关联性分析发现,GA基因型母猪的总产仔数(TNB)比GG基因型母猪每胎高0.56头(P<0.05)。荧光素酶活性分析结果显示G等位基因类型启动子活性显著高于A等位基因类型(P<0.05)。在不同等位基因类型启动子间发现1个潜在结合的差异转录因子死亡相关蛋白1(THAP1),成功构建猪THAP1基因过表达载体,共转试验结果显示转录因子THAP1对不同等位基因类型启动子活性均无显著影响(P>0.05)。[结论]miR-23a、miR-27a和miR-24是大白猪产仔数性状的候选基因,g.65307469G>A突变抑制miR-23a/27a/24基因簇的启动子活性,但与转录因子THAP1无关。

肾小管HIF-1α/miR-23a通路在脓毒血症急性肾损伤中的作用机制

目的探讨肾小管低氧诱导因子-1α(HIF-1α)/MicroRNA-23a(miR-23a)通路在脓毒血症急性肾损伤(SA-AKI)中的作用及相关作用机制。方法体外培养人近曲小管上皮细胞(HK-2细胞),采用脂多糖(LPS)处理HK-2细胞构建SA-AKI细胞模型。LPS处理的HK-2细胞分为LPS组、NC siRNA组、HIF-1αsiRNA组、anti-miR-NC组、anti-miR-23a组、HIF-1αsiRNA+miR-NC组、HIF-1αsiRNA+miR-23a组,以正常培养的HK-2细胞作为空白对照组(Control组)。采用qRT-PCR法检测细胞中HIF-1α、miR-23a基因表达;CCK-8法检测细胞活力;流式细胞术检测细胞凋亡;ELISA法检测细胞中炎性因子[白介素-1β(IL-1β)、白介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)]水平;Western blot法检测细胞中HIF-1α蛋白、NF-κB通路蛋白表达。结果与Control组比较,LPS组HK-2细胞中HIF-1α蛋白和mRNA表达水平、miR-23a mRNA表达水平均升高,细胞活力降低,细胞凋亡率、细胞中IL-6、IL-1β和TNF-α水平均升高(P<0.05)。与LPS组比较,HIF-1αsiRNA组HK-2细胞中HIF-1α蛋白和mRNA表达水平、miR-23a mRNA表达水平均降低,细胞活力升高,细胞凋亡率、细胞中IL-6、IL-1β和TNF-α水平均降低(P<0.05)。与LPS组比较,anti-miR-23a组HK-2细胞中miR-23a mRNA表达水平降低,细胞活力升高,细胞凋亡率、细胞中IL-6、IL-1β和TNF-α水平均降低(P<0.05)。与HIF-1αsiRNA组比较,HIF-1αsiRNA+miR-23a组HK-2细胞中miR-23a mRNA表达水平升高,细胞活力降低,细胞凋亡率、细胞中IL-6、IL-1β和TNF-α水平均升高(P<0.05)。与Control组比较,LPS组HK-2细胞p-NF-κB-p65/NF-κB-p65、p-IκBα/IκBα比值均升高(P<0.05)。与LPS组比较,HIF-1αsiRNA组和anti-miR-23a组HK-2细胞p-NF-κB-p65/NF-κB-p65、p-IκBα/IκBα比值均降低(P<0.05)。与HIF-1αsiRNA组比较,HIF-1αsiRNA+miR-23a组HK-2细胞p-NF-κB-p65/NF-κB-p65、p-IκBα/IκBα比值均升高(P<0.05)。结论肾小管HIF-1α通过调控miR-23a表达调节NF-κB信号通路,从而参与LPS诱导的肾小管上皮细胞损伤。

外周血miR-23b、miR-202-3p、miR-7977与狼疮性肾炎疾病活动性的关系及临床价值

目的:探讨外周血微小RNA-23b(miR-23b)、微小RNA-202-3p(miR-202-3p)、微小RNA-7977(miR-7977)在狼疮性肾炎(LN)疾病活动性中的应用价值。方法:选取我院2020年4月—2022年5月收治的104例LN患者为研究对象,根据入院时系统性红斑狼疮疾病活动指数(SLE-DAI)将患者分为活动组(63例,SLE-DAI评分≥10分)和稳定组(41例,SLE-DAI评分<10分)。比较两组一般临床资料、入院时外周血miR-23b、miR-202-3p、miR-7977水平,Logistic回归分析影响LN疾病活动性的因素,探讨联合检测对活动性LN的诊断价值。结果:活动组eGFR、SCr、ESR、补体C3、补体C4、miR-23b、miR-202-3p、miR-7977水平与稳定组相比,差异具有统计学意义(P<0.05);入院时,外周血miR-23b、miR-202-3p、miR-7977水平均与eGFR、补体C3、补体C4水平呈正相关,均与ESR、Scr、SLE-DAI评分呈负相关(P<0.05);Logistic回归分析显示,入院时eGFR≤76.93ml/(min·1.73m^(2))、SCr>96.01μmol/L、ESR>53.66mm/h、补体C3≤0.80g/L、补体C4≤0.24g/L、miR-23b≤0.49、miR-202-3p≤10.49、miR-7977≤6.10水平是活动性LN的危险因素(P<0.05);临床受试者工作曲线(ROC)结果显示,外周血miR-23b、miR-202-3p、miR-7977水平联合诊断活动性LN的AUC、敏感度、特异度最佳。结论:临床联合检测外周血miR-23b、miR-202-3p、miR-7977对诊断LN疾病活动程度具有重要指导作用。

HPV16 E6调控miR-23a表达促进宫颈癌细胞侵袭、迁移

目的探讨高危型人乳头瘤病毒16 E6蛋白(HPV16 E6蛋白)调控miR-23a表达对宫颈癌细胞SiHa侵袭、迁移的作用。方法选取100例宫颈癌HPV阴性患者、100例HPV阳性患者的组织标本、100例癌旁正常组织;宫颈癌SiHa细胞分为空白组、E6过表达组、阴性转染组、E6+miR-23a mimics组;qRTPCR法检测miR-23a、HPV16 E6 mRNA表达;MTT法检测增殖抑制率;流式细胞仪检测凋亡;Transwell小室实验检测细胞侵袭;划痕实验检测细胞迁移;WB检测HPV16 E6、凋亡相关蛋白(Caspase-3、Bax、Bcl-2)、迁移相关蛋白(MMP-2、MMP-9)的表达。结果宫颈癌组织中miR-23a表达降低,其中宫颈癌HPV阳性组织中miR-23a表达水平更低。E6过表达降低miR-23a表达水平、细胞增殖抑制率、凋亡率、Caspase-3、Bax蛋白表达,增高Bcl-2蛋白、划痕愈合率、侵袭细胞数、MMP-2、MMP-9蛋白表达(P<0.05);miR-23a mimics逆转了E6过表达对上述各项指标的影响。结论HPV16 E6促进宫颈癌细胞侵袭、迁移可能与调控miR-23a表达有关。

颅脑外伤患者血清miR-23a-3p、miR-532-5p表达水平与认知功能的相关性

目的研究颅脑外伤(TBI)患者血清miR-23a-3p、miR-532-5p表达水平与认知功能的关系。方法选取2022年1月至2023年10月于郑州大学第一附属医院就诊的103例TBI患者设为TBI组,同期选取本院68例健康体检者作为对照组。纳入患者根据不同昏迷程度分为:轻度TBI组(n=39)、中度TBI组(n=30)和重度TBI组(n=34);根据术后是否发生认知功能障碍(POCD)分为:POCD组[蒙特利尔认知评估量表(MoCA)<26分,n=41]和认知功能正常组(MoCA≥26分,n=62)。采用qRT-PCR法检测血清miR-23a-3p、miR-532-5p水平。结果与对照组相比,TBI组受教育程度、血清miR-23a-3p水平明显提高,血清miR-532-5p水平明显降低,且与TBI严重程度相关(P<0.05)。POCD组血清miR-532-5p水平、MoCA评分明显低于认知功能正常组,血清miR-23a-3p水平明显高于认知功能正常组(P<0.05)。TBI患者血清miR-23a-3p水平与MoCA评分呈负相关(r=-0.484,P<0.05),血清miR-532-5p水平与MoCA评分呈正相关(r=0.499,P<0.05)。受教育程度、MoCA评分及血清miR-23a-3p、miR-532-5p水平是TBI患者术后发生POCD的影响因素(P<0.05);血清miR-23a-3p、miR-532-5p联合评估TBI患者术后发生POCD的ROC曲线下面积(AUC)、灵敏度、特异度分别为0.888、85.37%、83.87%,二者联合评估效果更佳。结论TBI患者发生POCD时,机体血清miR-23a-3p水平表达高,miR-532-5p水平表达低,二者联合评估TBI患者术后发生POCD的价值更高。

miR-23家族在脂多糖诱导的人肾小管上皮HK-2细胞损伤中的作用

目的研究微小RNA(miR)-23家族在脂多糖(LPS)诱导的人肾小管上皮HK-2细胞损伤中的作用及机制。方法培养人肾小管上皮HK-2细胞,将细胞分为对照组(给予不含药物的培养液)、LPS组(给予含1 mg/L LPS的培养液)、LPS+miR-NC组(转染NC模拟物6 h后更换为含有1mg/L LPS的培养液)、LPS+miR-23a组(转染miR-23a模拟物6 h后更换为含有1mg/L LPS的培养液)。采用荧光定量PCR检测miR-23a、miR-23b、miR-23c的表达,双荧光素酶报告基因实验检测miR-23a靶向TAK1结合蛋白3(TAB3),CCK-8法检测细胞存活率,Annexin V-FITC/PI法检测细胞凋亡率,ELISA法检测白细胞介素1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)的含量,Western blot法检测TAB3、核因子κB(NF-κB)、B细胞淋巴瘤2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)的表达水平。结果LPS组HK-2细胞的miR-23a、Bcl-2表达水平,存活率均低于对照组;凋亡率、IL-1β、TNF-α、IL-6含量,Bax、TAB3、NF-κB表达水平均高于对照组(均P<0.05),miR-23b、miR-23c的表达水平与对照组差异均无统计学意义(均P>0.05)。miR-23a使野生型TAB3报告基因的活性降低。LPS+miR-23a组HK-2细胞的miR-23a、Bcl-2表达水平,存活率高于LPS+miR-NC组;凋亡率,IL-1β、TNF-α、IL-6含量,Bax、TAB3、NF-κB表达水平低于LPS+miR-NC组(均P<0.05)。结论miR-23家族中miR-23a表达降低与LPS诱导HK-2细胞损伤有关,相关的分子机制是靶向TAB3/NF-κB途径并抑制炎症反应、细胞凋亡。

miR-23a-3p与miR-182在结直肠癌患者外周血中的异常表达及其临床意义

目的探讨miR-23a-3p与miR-182在结直肠癌患者外周血中的异常表达及其临床意义。方法选取2021年6月至2022年6月我院收治的30例结直肠癌患者为观察A组,30例结直肠良性肿瘤患者为观察B组,同期30名健康体检者为对照组。采集观察A组、观察B组治疗前空腹静脉血以及对照组体检时空腹静脉血,使用实时荧光定量PCR仪测定miR-23a-3p、miR-182水平;比较miR-23a-3p、miR-182单独及联合检测对结直肠癌的诊断效能;分析结直肠癌临床因素与miR-23a-3p、miR-182的关系。结果观察A组、观察B组的miR-23a-3p、miR-182水平高于对照组(P<0.05);观察A组的miR-23a-3p、miR-182水平高于观察B组(P<0.05)。miR-23a-3p、miR-182联合检测诊断结直肠癌的灵敏度、特异度、阳性预测值、阴性预测值、曲线下面积(AUC)大于miR-23a-3p、miR-182单独检测。不同家族史、淋巴结转移、病灶大小、临床分期的结直肠癌患者miR-23a-3p、miR-182水平比较,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论家族史、淋巴结转移、病灶大小及临床分期与结直肠癌患者miR-23a-3p、miR-182水平有密切联系,且miR-23a-3p与miR-182检测在结直肠癌临床诊断中均具备一定价值,二者联合应用可提高结直肠癌早期诊断的准确性。

多囊卵巢综合征患者血清miR-23a、miR-143表达及与胰岛素抵抗的相关性分析

目的:探讨多囊卵巢综合征(PCOS)患者血清微小RNA-23a(miR-23a)、微小RNA-143(miR-143)表达及其与胰岛素抵抗的相关性分析。方法:选取2022年1月至2023年6月枣庄市妇幼保健院收治的68例PCOS患者(PCOS组)和50例健康体检女性(对照组)为研究对象,均采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测血清miR-23a、miR-143表达,PCOS患者根据胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)分为胰岛素抵抗组(HOMA-IR≥2.69)40例和非胰岛素抵抗组(HOMA-IR<2.69)28例,比较各组血清miR-23a、miR-143表达水平,并采用Pearson相关分析血清miR-23a、miR-143表达与胰岛素抵抗的相关性。结果:PCOS组血清miR-23a、miR-143表达水平均高于对照组(P<0.05)。胰岛素抵抗组PCOS患者血清miR-23a、miR-143表达水平均高于非胰岛素抵抗组(P<0.05)。Pearson相关分析显示,PCOS患者血清miR-23a、miR-143表达水平与HOMA-IR均呈正相关(P<0.05)。结论:PCOS患者血清miR-23a、miR-143均呈异常高表达,且表达水平与HOMA-IR有关,可作为PCOS病情评估的有效生物学标志物。

外周血miR-299和miR-23a在PE患者诊断及预后评估中的应用

目的:探讨外周血miR-299和miR-23a在子痫前期(PE)患者诊断及预后评估中的应用价值。方法:回顾性选取2020年1月至2023年1月在十堰市人民医院就诊的84例PE患者为研究对象(观察组),并随机选取同期73例正常孕妇作为对照组。检测血清中miR-299和miR-23a表达量。多因素Logistic回归模型分析PE孕妇的影响因素。采用ROC曲线分析miR-299和miR-23a对PE的诊断价值;通过Kaplan-Meier法分析miR-299和miR-23a表达水平对观察组孕期生存的影响。结果:观察组血清中miR-299和miR-23a水平(3.13±0.84、1.94±0.55)显著高于对照组(2.34±0.73、1.47±0.43)(P<0.05)。Logistic回归分析显示,miR-299和miR-23a水平是PE发生的危险因素(P<0.05)。miR-299和miR-23a两者联合诊断结果优于任何1项单独分析(Z_(两项联合-miR-299)=2.067,P=0.038;Z_(两项联合-miR-23a)=2.086,P=0.037)。患者中miR-299和miR-23a高表达组的死亡率显著高于低表达组(P<0.05)。结论:PE患者血清中miR-299和miR-23a表达水平均上调,两者联合对PE有一定的诊断价值,且其表达水平与PE患者的预后密切相关。

miR-146a、miR-23b水平与前列腺癌患者术前临床分期及预后的关系

目的 探索miR-146a、miR-23b表达水平与前列腺癌(PCa)患者术前临床分期及预后的关系。方法 选取2019年3月-2020年3月期间重庆市丰都县人民医院收治的70例PCa患者和70例良性前列腺增生症(BPH)患者,设为PCa组和BPH组,入组后分别进行前列腺组织取样,检测两组前列腺中miR-146a、miR-23b表达水平,分析miR-146a、miR-23b表达与PCa患者临床病理特征及预后的相关性。结果 PCa组miR-146a、miR-23b表达低于BPH组,差异有统计学意义(P<0.05);术前PCa患者miR-146a、miR-23b水平随Gleason评分和临床T分期升高而逐次下降(P<0.05);PCa患者术前存在淋巴结转移者miR-146a、miR-23b水平低于无转移者,差异有统计学意义(P<0.05);Spearman相关性分析结果显示,PCa患者术前前列腺组织miR-146a、miR-23b表达水平分别与临床分期呈现负相关(r=-0.758、-0.760,均P<0.05);截止随访,预后不良的PCa患者miR-146a、miR-23b低于预后良好组,差异有统计学意义(P<0.05);miR-146a、miR-23b联合检测预测PCa预后AUC高于单一检测指标(P<0.05)。结论 PCa患者前列腺组织中miR-146a、miR-23b表达较低,且与临床分期相关,miR-146a、miR-23b表达水平对患者不良预后有一定预测价值。

miR-23a对LPS诱导小鼠巨噬细胞促炎性细胞因子表达的影响

目的探讨miR-23a对LPS诱导小鼠原代腹腔巨噬细胞促炎性细胞因子表达的影响。方法 Real-time PCR定量分析LPS刺激不同时间的腹腔巨噬细胞中miR-23a的表达以及瞬时转染miR-23a mimics和inhibitors的腹腔巨噬细胞中IL-1β、IL-6和TNF-α等促炎性细胞因子的表达;ELISA检测mRNA变化明显的细胞培养上清的IL-6的含量。结果原代腹腔巨噬细胞在LPS刺激后,miR-23a的表达明显下调;在转染miR-23a mimics后,IL-6的表达和分泌明显升高(P<0.05),但对IL-1β和TNF-α的表达没有明显影响。而转染miR-23a inhibitors后,则IL-6的表达水平受到抑制。结论 LPS刺激原代巨噬细胞可抑制miR-23a的表达;miR-23a可促进炎性细胞因子IL-6的表达,对IL-1β和TNF-α无显著影响。

炎性骨组织中miR-23a和miR-30a的表达改变及其生物学作用的研究

目的:观察研究体外炎性微环境下的牙周膜细胞(periodontal ligament cells,PDLCs)、成骨细胞(MC3T3-E1)和体内大鼠牙周炎牙龈组织、骨组织中miR-23a和miR-30a的表达变化,证实miR-23a和miR-30a在牙周炎性骨缺失中发挥重要调控作用,探讨其生物学作用。方法:1μg/mL LPS刺激PDLCs、MC3T3-E1细胞模拟炎性微环境,24 h后收集细胞。采用正畸结扎丝结扎各SD大鼠右侧上颌第一磨牙颈部,左侧未结扎作为自身对照,21 d后取其牙龈、牙槽骨组织。采用荧光定量PCR分别检测处于炎性微环境下的细胞、大鼠牙周炎牙龈组织、牙周骨组织中miR-23a和miR-30a的表达。结果:炎性环境下PDLCs、MC3T3-E1细胞中miR-23a和miR-30a的表达水平均较对照组明显增高(P<0.05)。大鼠牙周炎牙龈组织、牙槽骨组织中miR-23a和miR-30a的表达水平明显高于正常对照侧(P<0.05)。结论:miR-23a和miR-30a参与调控炎性环境下骨代谢和成骨细胞活性。

miR-182、miR-23a-3p联合cTnI、CK-MB、Myo在急性心肌梗死早期诊断中的应用价值

目的探讨微小RNA(miR)-182、miR-23a-3p联合肌钙蛋白I(cTnI)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)和肌红蛋白(Myo)在急性心肌梗死(AMI)早期诊断中的应用价值。方法选取80例AMI病人作为AMI组,40名健康体检者作为对照组。采集AMI组发病后1~2 h、2~4 h、4~8 h、8~12 h空腹静脉血,对照组体检时采集空腹静脉血,使用逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)测定miR-182、miR-23a-3p表达,采用胶体金免疫层析法测定cTnI、CK-MB、Myo含量。结果AMI组不同时间血清miR-182、miR-23a-3p表达均低于对照组,AMI组不同时间cTnI、CK-MB、Myo含量均高于对照组(P<0.05)。AMI组不同时间miR-182、miR-23a-3p、cTnI、CK-MB、Myo阳性检出率均高于对照组(P<0.05)。AMI病人发病后1~2 h血清miR-182、miR-23a-3p、cTnI灵敏度均高于80%,其中miR-23-3p灵敏度最高,为92.5%,cTnI特异度最高,为87.5%;miR-182与miR-23a-3p联合检测灵敏度和特异度分别为90.0%和85.0%,均高于cTnI、CK-MB、Myo三者联合诊断的88.8%和82.5%,但差异均无统计学意义(P>0.05)。结论miR-182、miR-23a-3p可作为AMI早期诊断的新型标志物,联合cTnI、CK-MB、Myo有利于提高AMI病人早期诊断的准确度。

miR-23a靶向NID2通过Notch通路调控肺癌细胞的侵袭和迁移

目的探讨mi R-23a靶向调控NID2蛋白的表达通过Notch通路对肺癌细胞的生物学行为的影响及其机制。方法免疫组织化学检测NID2在肺癌和癌旁正常肺组织中的表达;Western blot检测不同肺癌细胞株中NID2的表达;荧光素酶报告基因检测mi R-23a与NID2的相互作用;Transwell侵袭和划痕实验检测mi R-23a的表达对肺癌细胞侵袭和迁移能力的影响;Western blot检测过表达mi R-23a后肺癌H1650细胞中hes1和NICD蛋白的表达。结果与癌旁正常肺组织相比,肺癌组织中NID2表达明显增高;H1650肺癌细胞株中NID2的表达水平最高;在肺癌H1650细胞中,mi R-23a能与NID2的3’UTR特异性结合,调控NID2的表达;mi R-23a可调控肺癌H1650细胞的侵袭迁移能力;过表达mi R-23a可以抑制肺癌H1650细胞中hes1和NICD的表达。结论 mi R-23a可以靶向NID2通过Notch信号通路调控肺癌细胞的侵袭和迁移。

肺癌患者血清中miR-23a的表达及临床意义

目的：探讨肺癌患者血清中miR-23a的表达情况及其与病例临床特征的关系。方法：提取63例肺癌患者和60例健康体检人血清中总mRNA，采用qRT-PCR方法检测miR-23a的相对表达量；统计分析miR-23a的表达与肺癌侵袭转移和患者耐药的关系。结果：与健康人相比，miR-23a在肺癌患者血清中表达增高（P〈0．01）；miR-23a在淋巴结转移患者血清中的表达量显著高于未转移患者（P〈0．01）；miR-23a在临床I～Ⅱ期肺癌患者血清中的表达低于Ⅲ～Ⅳ期患者（P〈0．05）；miR-23a在非小细胞肺癌患者中的表达高于小细胞肺癌患者（P〈0．05）；miR-23a的表达量在不同年龄、性别、吸烟及不同分化程度的患者中表达差异不显著（P〉0．05）。miR-23a的表达量随患者化疗次数的增多而表达增强。结论：血清miR-23a有可能作为肺癌患者转移及耐药判断的分子标志物。

miR-23a对肺腺癌细胞株A549顺铂耐药性的影响

目的探讨miR-23a对肺腺癌细胞株A549顺铂耐药的影响。方法人工合成miR-23a模拟物mimics和抑制剂inhibitor,用脂质体转染法将其转入A549细胞中,荧光定量PCR检测miR-23a的表达情况;MTT法检测顺铂对A549细胞的半数抑制浓度(IC_(50))和转染后细胞对顺铂药物敏感度的改变;RT-PCR、Western blot检测MDR1、bcl-2基因及其产物P-gp、bcl-2蛋白的表达。结果荧光定量PCR证实转染成功。MTT结果表明顺铂对A549细胞的IC50值为5.2μg/m L。MTT结果表明转染miR-23a mimics的细胞增殖增加,顺铂药敏性降低;而转染miR-23a inhibitor的细胞增殖减少,顺铂药敏性增加。RT-PCR、Western blot结果表明高表达miR-23a可促进MDR1、bcl-2基因及其蛋白的表达,而低表达miR-23a可抑制MDR1、bcl-2的表达。结论 miR-23a可能在肺癌顺铂化疗耐药中有重要作用,抑制miR-23a的表达可增加顺铂对肺癌细胞的敏感性,并降低耐药基因MDR1和bcl-2基因及蛋白的表达。

原发性痛风性关节炎患者miR-23a miR-24-2和miR-27a的表达水平及调节机制

目的:分析原发性痛风性关节炎(PGA)患者microRNA-23a(miR-23a)、microRNA-24-2(miR-24-2)和microRNA-27a(miR-27a)的表达水平及调节机制。方法:将本院50例PGA患者为病例组,30例健康体检人员为对照组。比较两组实验室常规指标,通过实时荧光定量PCR法对miR-23a、miR-24-2和miR-27a的表达水平进行检测,并采用Pearson相关性分析miR-23a、miR-24-2、miR-27a表达间的关系,将所获数据纳入统计学分析。结果:病例组血浆空腹血糖、尿酸、白细胞计数、中性粒细胞、甘油三酯、载脂蛋白B100较对照组均明显升高(均P<0.05),载脂蛋白A1较对照组均明显下降(P<0.01);而两组总胆固醇的比较,并无明显差异(P>0.05)。相比对照组,病例组miR-23a、miR-24-2和miR-27a的表达水平明显下调(P<0.01)。经Pearson相关性分析结果显示,病例组患者外周血单个核细胞中miR-23a、miR-24-2、miR-27a三者之间的表达水平存在正相关关系(P<0.01)。采用尿酸盐(100μg/mL)对健康体检人员中的外周血单个核细胞进行刺激,结果发现在炎性微环境下,刺激组外周血单个核细胞中的miR-23a、miR-24-2和miR-27a的表达水平显著低于无刺激组(P<0.01)。结论:miR-23a、miR-24-2和miR-27a可能作为炎症负性调控因子而在PGA的炎症免疫反应过程中起到重要作用,并且miR-24-2可能具有调节PGA的脂蛋白的作用。

miR-23a对肺腺癌细胞95-D迁移和侵袭能力的影响

目的:研究miR-23a对人肺腺癌细胞95-D增殖、侵袭和迁移能力的影响。方法:常规培养人肺腺癌细胞95-D,经脂质体转染miR-23a mimic和inhibitors片段后,通过MTT、流式、Transwell实验,观察对95-D细胞增殖、侵袭和迁移能力的影响。结果:MTT结果表明miR-23a mimic可促进细胞生长(P<0.05),miR-23a inhibitors可抑制细胞生长(P<0.05),但抑制率不高;流式结果表明miR-23a对细胞周期影响不大;Transwell实验结果表明miR-23a mimic可以促进细胞侵袭和迁移(P<0.01),而miR-23a inhibitors可以减弱细胞侵袭和迁移能力(P<0.01)。结论:miR-23a可促进肺癌细胞的侵袭转移。