miR-28-5p靶向BECN1对OCI-LY7细胞凋亡及自噬过程的调控作用

目的探讨miR-28-5p靶向BECN1在OCI-LY7细胞凋亡及自噬过程中的作用及机制。方法通过TUNEL荧光染色、Western blot实验明确miR-28-5p及姜黄素在OCI-LY7细胞凋亡及自噬过程的作用,经在线预测并进一步通过双荧光素酶报告基因检测明确miR-28-5p和BECN1的靶向关系。结果TUNEL染色和caspase-3蛋白水平检测:与对照组比较,姜黄素明显增加凋亡细胞百分比并表达裂解蛋白caspase-3(P<0.05)。相比姜黄素单独作用,细胞凋亡被miR-28-5p显著减弱抑制(P<0.05)。与对照组比较,姜黄素组beclin1和LC3B-Ⅱ/LC3B-Ⅰ比值显著降低、P62蛋白表达明显升高(P<0.05);与姜黄素组比较,姜黄素+miR-28-5p抑制剂组beclin1表达和LC3B-Ⅱ/LC3B-Ⅰ比值明显升高、P62蛋白表达明显降低(P<0.05)。通过在线数据库预测:miR-28-5p与BECN1存在靶向的关系;双荧光素酶报告基因实验显示:与阴性对照组比较,miR-28-5p模拟物显著降低BECN1-wt组的荧光素酶活性,但miR-28-5p模拟物不影响BECN1-mut组的荧光素酶活性。结论miR-28-5p介导姜黄素促OCI-LY7细胞凋亡作用。BECN1是miR-28-5p的靶基因,姜黄素诱导miR-28-5p过表达可直接靶向BECN1抑制自噬过程。

miR-28-5p通过抑制FSP1介导的铁死亡逆转肺腺癌细胞顺铂耐药的机制

目的 研究miR-28-5p对顺铂(DDP)耐药的A549肺腺癌细胞系(A549/DDP)的影响,并探讨其作用机制是否与铁死亡抑制蛋白1(FSP1)介导的铁死亡有关。方法 选择A549肺腺癌细胞和A549/DDP细胞作为研究对象。采用RT-qPCR法检测细胞中miR-28-5p的表达水平。通过CCK-8法和集落形成实验测定细胞增殖。miR-28-5p的靶基因通过荧光素酶报告基因和蛋白质印迹分析进行鉴定和验证。使用miR-28-5p模拟物或FSP1过表达质粒转染A549/DDP,评估细胞增殖情况,并采用透射电子显微镜评估线粒体形态,以及试剂盒测定细胞活性氧(ROS)、谷胱甘肽(GSH)和丙二醛(MDA)水平。建立了基于细胞系的异种移植模型,在体内评估miR-28-5p对肿瘤生长的影响。结果 与A549细胞相比,A549/DDP细胞中miR-28-5p的表达水平降低(P<0.001)。与A549细胞比较,A549/DDP细胞的细胞活力(F=49.542,P<0.001)和集落形成能力(t=4.412,P<0.01)增加。与miR-NC组相比,miR-28-5p组A549/DDP细胞的细胞活力(t=4.612,P<0.01)和集落数(t=4.503,P<0.01)均降低。在pGL3-FSP1 3′UTR-WT载体存在情况下,用miR-28-5p模拟物转染的细胞中荧光素酶活性降低(P<0.01)。此外,过表达miR-28-5p细胞中FSP1的表达水平被抑制。与载体+miR-28-5p组相比,FSP1+miR-28-5p组细胞活力、集落形成、细胞线粒体长度、GSH增加(P<0.01)且细胞凋亡、ROS产生、MDA形成降低(P<0.05)。体内实验显示,与miR-NC+DDP组相比,miR-28-5p+DDP组裸鼠体内形成的肿瘤大小和质量减少(P<0.05),并且Ki-67和FSP1蛋白表达降低(P<0.05)。结论 miR-28-5p逆转肺腺癌细胞顺铂的耐药机制可能与抑制FSP1介导的铁死亡有关。

血清miR-28-5p、HMGB1表达与多发性骨髓瘤患者病理特征及预后的关系

目的探讨血清miR-28-5p、高迁移率族蛋白B1(HMGB1)表达与多发性骨髓瘤(MM)患者病理特征及预后的关系。方法选取2018年1月至2019年6月于河南省南阳市中心医院就诊的MM患者124例为病例组,选取同期健康志愿者50名为对照组,分析两组血清miR-28-5p、HMGB1表达水平与患者病理特征及其预后的关系。结果与对照组比较,病例组血清miR-28-5p表达水平降低、血清HMGB1水平升高,差异有统计学意义(t=30.327、16.269,P均<0.05);不同D-S分期、ISS分期患者随着分期越晚血清miR-28-5p表达水平降低,差异有统计学意义(F=19.541、22.173,P均<0.05);不同ISS分期患者随着分期越晚血清HMGB1水平越高,差异有统计学意义(F=6.891,P<0.05);存活患者miR-28-5p水平高于死亡患者、HMGB1水平低于死亡患者,差异有统计学意义(t=4.416、2.546,P<0.05)。高表达水平miR-28-5p、低水平HMGB1的累计生存率更高,差异有统计学意义(χ^(2)=16.930、12.417,P均<0.05)。结论MM患者血清miR-28-5p表达水平降低、HMGB1表达水平升高,两项指标均与患者预后有关,或可作为MM患者预后评价的血清生物学指标。

基于MCP-1/CCR2通路研究miR-28-5p对老龄自发性高血压大鼠的干预作用

目的研究基于单核细胞趋化蛋白(MCP)-1/CC趋化因子受体(CCR)2通路微小核糖核酸-28-5p(miR-28-5p)对老龄自发性高血压大鼠的干预作用。方法选取SPF级雄性Wistar大鼠6只设为正常组,自发性高血压大鼠18只分为模型组、对照组、miR-28-5p组各6只,miR-28-5p水平检测采用荧光定量聚合酶链反应(PCR)法,检测肺功能相关指标,采用酶联免疫法检测炎症因子白细胞介素(IL)-1、IL-6、肿瘤坏死因子(TNF)-α水平,Western印迹检测MCP-1及CCR2通路相关蛋白表达。结果与正常组相比,模型组、对照组、miR-28-5p组miR-28-5p表达及左室收缩压(LVSP)水平明显较高,左室舒张末压(LVEDP)、左室内压最大上升速率(+dp/dtmax)、左室内压最大下降速率(-dp/dtmax)水平明显较低(P<0.05);与模型组相比,对照组、miR-28-5p组miR-28-5p表达及LVEDP水平明显较低,LVSP、+dp/dtmax、-dp/dtmax水平明显较高(P<0.05);与对照组相比,miR-28-5p组miR-28-5p表达及LVEDP水平明显较低,LVSP、+dp/dtmax、-dp/dtmax水平明显较高(P<0.05)。与正常组相比,模型组、对照组、miR-28-5p组IL-1、IL-6、TNF-α水平及MCP-1、CCR2水平明显较高(P<0.05);与模型组相比,对照组、miR-28-5p组IL-1、IL-6、TNF-α水平及MCP-1、CCR2水平明显较低(P<0.05);与对照组相比,miR-28-5p组IL-1、IL-6、TNF-α水平及MCP-1、CCR2水平明显较低(P<0.05)。结论miR-28-5p可通过调控MCP-1、CCR2通路蛋白水平改善老龄自发性高血压大鼠的心功能,干预抑制炎性反应。

卵巢癌组织hsa-miR-28表达及其临床意义

目的:探讨卵巢癌组织内含子型微小核糖核酸-28(hsa-miR-28)表达及其与临床病理特征及根治术后复发的关系。方法:选取2017年3月至2019年3月宝鸡市中心医院收治的行根治术治疗的138例卵巢癌患者作为卵巢癌组,选取同期行腹腔镜治疗的120例卵巢良性病变患者作为对照组,检测两组患者切除卵巢组织的hsa-miR-28表达水平,并比较卵巢癌不同病理特征患者卵巢组织hsa-miR-28表达水平。随访3年,记录卵巢癌根治术后复发情况,比较复发和未复发患者hsa-miR-28表达水平,并采用Cox回归分析卵巢癌根治术后复发的影响因素。结果:卵巢癌组卵巢组织hsa-miR-28表达水平低于对照组(2.24±0.62 vs.4.12±0.73,P<0.001);低分化、FIGO分期Ⅲ期卵巢癌患者hsa-miR-28表达水平低于高/中分化、FIGO分期Ⅰ~Ⅱ期患者(1.72±0.31 vs.2.70±0.54、1.79±0.34 vs.2.53±0.66,P<0.05)。随访3年期间138例卵巢癌患者有49例复发,复发率为35.51%,复发组低分化、FIGO分期Ⅲ期占比均高于未复发组(P<0.05),复发组术后化疗患者占比及hsa-miR-28表达水平低于未复发组(P<0.05);Cox分析结果显示,hsa-miR-28低表达、低分化、FIGO分期Ⅲ期均是卵巢癌根治术后复发的危险因素,术后化疗是其保护因素(P<0.05)。结论:hsa-miR-28在卵巢癌组织中呈低表达,且与卵巢癌临床病理特征及根治术后复发密切相关,检测hsa-miR-28表达水平对于评估卵巢癌病情进展及预后可能具有潜在的临床价值。

miR-28-3p通过抑制BIN1表达促进三阴性乳腺癌MDA-MB-468细胞的恶性生物学行为

目的:探讨miR-28-3p在三阴性乳腺癌(triple negative breast cancer,TNBC)组织和细胞系中的表达及其对MDA-MB-468细胞恶性生物学行为的影响。方法:收集2013年1月至2014年1月河北医科大学第四医院乳腺中心手术切除的、经病理证实的83例女性TNBC患者的癌组织和癌旁组织标本,以及TNBC细胞系MDA-MB-468、HCC-1937、MDA-MB-231、MDA-MB-436、MDA-MB-453和人正常乳腺上皮细胞MCF10A,用qPCR检测组织和细胞系中miR-28-3p的表达水平并分析其表达与患者临床病理特征的相关性。用miR-28-3p抑制剂转染MDA-MB-468细胞后,用CCK-8、流式细胞术、细胞划痕和Transwell实验分别检测miR-28-3p抑制剂对MDA-MB-468细胞增殖、凋亡、侵袭和迁移能力的影响,用Western blotting检测MDA-MB-468细胞中桥接整合因子1(bridging integrator-1,BIN1)蛋白的表达水平。通过生物信息学工具预测miR-28-3p的靶基因BIN1,用双荧光素酶报告基因实验验证miR-28-3p对BIN1的调控作用。结果:TNBC组织及细胞系中miR-28-3p表达水平显著高于癌旁组织及MCF10A细胞(均P<0.01);83例TNBC组织中共有56例(67.47%)高表达miR-28-3p,其高表达与患者的Ki-67表达水平、肿瘤大小和TNM分期密切相关(均P<0.05或P<0.01)。与miR-NC组比较,miR-28-3p抑制剂组MDA-MB-468细胞增殖、侵袭和迁移能力降低,凋亡率升高(均P<0.05或P<0.01)。双荧光素酶报告基因和实验证实BIN1是miR-28-3p的靶基因,miR-28-3p抑制剂可上调MDA-MB-468细胞中BIN1蛋白的表达(P<0.05)。结论:miR-28-3p在TNBC组织及细胞中呈高表达状态,mi R-28-3p抑制剂上调BIN1表达进而抑制MDA-MB-468细胞的增殖、迁移和侵袭能力,并促进其凋亡。

液相杂交检测B细胞淋巴瘤细胞系miR-28的表达

microRNA(miRNA)是一组在进化上高度保守、非编码蛋白、参与转录后调节的小分子RNA(19-25核苷酸)。为了进一步明确miRNA的加工机制及功能和定量研究miRNA的表达水平,应用液相杂交和Northernblot两种方法检测miR-28在B细胞淋巴瘤细胞系中的表达并进行了比较。结果表明:液相杂交和Northernblot检测miR-28均显出阳性结果,但液相杂交所用的细胞总RNA量(5μg)明显少于Northernblot(30μg),液相杂交的条带信号也较Northernblot的强。结论:液相杂交是一种较Northernblot更为快速、简便和敏感的检测miR-28的方法。

弥漫大B细胞淋巴瘤细胞系中bcl-6、lpp和miR-28基因表达的研究

本研究从基因和蛋白水平探讨弥漫大B细胞淋巴瘤(DLBCL)细胞系中Bcl-6、LPP和miR-28表达,及其之间的相互关系。应用Northern blot检测8个DLBCL细胞系(CTB-1、MD901、OC1-LY8、BEVA、RCK8、MD903、HRC57和K231)bcl-6和lpp的mRNA水平,液相杂交法检测miR-28表达,Western blot检测BCL-6和LPP的蛋白水平。结果显示,bcl-6基因易位类型涉及Ig基因细胞系(Oc1-ly8、MD903、CTB-1和MD901),其bcl-6mRNA的表达较强,而在未涉及Ig基因易位的细胞系(HRC57和K231)中未见表达。lpp mRNA在CTB-1细胞系中表达阴性。miR-28在各细胞系中均有表达,表达强度高到低依次为:K231、CTB-1、MD903、HRC57、MD901、RCK8、OC1-LY8和BEVA。BCL-6蛋白在各细胞系表达由强到弱依次为:RCK8、BEVA、MD901、CTB-1、MD903、OC1-LY8、HRC57和K231;而LPP蛋白在K231细胞系中未见表达,余各细胞系表达由强到弱依次为:HRC57、OC1-LY8、BEVA、RCK8、CTB-1、MD901和MD903。各细胞系中bcl-6和lpp mRNA水平与蛋白的表达并不一致,即高mRNA水平并不一定导致蛋白的表达增加。结论:不同DLBCL细胞系具有不同的BCL-6、LPP和miR-28蛋白表达水平,各细胞系中bcl-6和lpp mRNA表达水平与它们表达的蛋白量不平行,有关bcl-6、lpp和miR-28基因在DLBCL发生、发展中的作用机制有待进一步探讨。

非小细胞肺癌患者射频消融治疗后血清miR-28-3p表达量变化及意义

目的探讨非小细胞肺癌(NSCLC)患者射频消融(RFA)治疗后血清miR-28-3p表达量变化及意义。方法选取2013年7月至2015年7月治疗的73例NSCLC患者为研究对象。采用RT-qPCR法检测患者治疗前后血清miR-28-3p相对表达量。分析血清miR-28-3p相对表达量与NSCLC患者预后的关系。结果NSCLC患者RFA治疗前血清miR-28-3p相对表达量为(12.62±2.51),经RFA治疗后血清miR-28-3p相对表达量降低[(10.46±2.10),P<0.05]。73例NSCLC患者3年生存率为61.6%(45/73)。NSCLC生存组患者血清miR-28-3p相对表达量明显低于死亡组患者(P<0.05)。血清miR-28-3p评估NSCLC患者生存预后的曲线下面积(AUC)为0.782。血清miR-28-3p≥11.05的NSCLC患者3年平均总生存时间为27.78(95%CI为24.30~31.27)个月,明显低于血清miR-28-3p<11.05的NSCLC患者3年总生存时间33.19(95%CI为30.84~35.55)个月,差异有统计学意义(P<0.05)。COX单因素及多因素回归分析显示年龄、TNM分期、肿瘤直径、淋巴结转移、miR-28-3p与NSCLC患者RFA后生存时间密切相关。结论NSCLC患者RFA后血清miR-28-3p相对表达量明显降低。血清miR-28-3p与RFA治疗后NSCLC患者生存预后密切相关。

miR-28-3p通过PI3K/AKT通路对大鼠糖尿病性视网膜病变及视网膜血管生成的影响

目的:探讨miR-28-3p通过PI3K/AKT通路对糖尿病性视网膜病变(DR)大鼠及视网膜血管生成的影响。方法:SD大鼠分为假手术组(sham组)、糖尿病模型组(model组)、糖尿病+阴性对照组(miR-NC组)和糖尿病+miR-28-3p inhibitor组(miR-28-3p inhibitor组),采用腹腔注射链脲佐菌素溶液建立糖尿病大鼠模型并给与腺相关病毒(AAV-U6-inhibitor-rno-miR-28-3p-CAG-EGFP)治疗;qPCR检测各组大鼠视网膜组织中miR-28-3p的表达情况;HE染色观察各组大鼠视网膜内血管分布面积情况;免疫荧光检测CD31的表达;免疫组化检测各组大鼠视网膜组织中Bax和Bcl-2蛋白的表达情况;ELISA检测各组大鼠血清中炎性因子(TNF-α、IL-1β和IL-6)的表达情况;Western blotting检测PI3K、AKT蛋白表达情况。结果:与sham组相比,model组大鼠视网膜组织中miR-28-3p的表达上调(P<0.001),与model组相比,miR-28-3p inhibitor组大鼠视网膜组织中miR-28-3p的表达下调(P<0.001);与sham组相比,model组大鼠的视网膜内血管分布面积和CD31的表达明显增加(均P<0.001),与model组相比,miR-28-3p inhibitor组大鼠视网膜血管分布面积和CD31的表达量均降低(均P<0.01);与model组相比,miR-28-3p inhibitor组中Bax的细胞数量降低(P<0.001),Bcl-2的细胞数量增加(P<0.01);与sham组相比,model组大鼠血清中TNF-α、IL-1β和IL-6含量明显增加(均P<0.001),而miR-28-3p inhibitor组大鼠血清中TNF-α、IL-1β和IL-6含量明显降低(均P<0.01);与model组相比,miR-28-3p inhibitor组大鼠视网膜中PI3K和AKT蛋白含量明显下降(均P<0.01)。结论:miR-28-3p inhibitor能抑制视网膜中血管的生成、减轻炎性反应以及抑制凋亡因子Bax表达,促进凋亡抑制因子Bcl-2表达,并且能抑制PI3K/AKT信号通路的激活,在DR发生发展过程有重要作用。

Has-miR-28的靶基因预测及其生物信息学分析

对广泛研究的has-miR-28的靶基因进行了预测及相关生物信息学分析。首先利用miRBase数据库并采用MEGA5.0软件分析其保守性。结果表明miR-28在多个物种之间具有高度序列保守性;用Target Scan7.1、Pictar、MIRDB及mi Tarbase生物学软件对其靶基因进行预测并得到共65个靶基因;然后采用Gene Ontology数据库对靶基因集合进行GO注释描述和GO分类富集分析,结果表明其分子功能表现在细胞对应激的反应、生物过程调控等基本生物学过程和蛋白复合物结合等分子功能上(P<0.05);KEGG数据库分析表明has-mir-28预测靶基因集合显著地富集于PI3K-Akt、MAPK、mTOR等信号通路,以及乳腺癌,前列腺癌疾病通路中(P<0.01)。

miR-28-5p对结肠癌细胞增殖和迁移的影响

目的探究miR-28-5p对结肠癌细胞增殖和迁移能力的影响。方法采用qRT-PCR检测miR-28-5p在正常结肠细胞NCM460与结肠癌细胞HCT116、SW480、SW620中表达量的差异。将HCT116、SW480、SW620各分为三组:对照组,过表达组,沉默组。对照组不予特殊处理,其余两组分别转染miR-28-5p mimic和miR-28-5p inhibitor,采用qRT-PCR验证转染效率,采用CCK8法检测三组细胞的增殖能力,采用划痕实验检测三组细胞的的迁移能力。结果miR-28-5p在结肠癌细胞HCT116、SW480、SW620中低表达,与正常结肠细胞NCM460比较差异有统计学意义(P<0.05)。与对照组相比,过表达组细胞增殖和迁移能力均降低(P<0.05),沉默组细胞增殖和迁移能力均增强(P<0.05)。结论miR-28-5p在结肠癌细胞中低表达且有调控结肠癌细胞增殖和迁移的作用。

miR-28-5p和Nrf2与老年脑动静脉畸形出血的关系

目的研究miR-28-5p与Nrf2在脑动静脉畸形(AVM)中的表达及与出血的关系。方法收集2016年2月至2018年2月民航总医院就诊的脑血管AVM未出老年血患者32例为血管畸形组,AVM出血患者25例为出血组,27例为癫痫组,健康体检者30例为健康组,采用逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)方法测定各组外周血miR-28-5p与Nrf2的mRNA表达,随访血管畸形组2年,统计AVM患者出血情况并进行相关因子检测。AVM老年患者进行Spetzler&Martin分级,对不同分组、病情分级的数据进行统计。结果在健康组、癫痫组、血管畸形组、出血组外周血中miR-28-5p依次呈低表达;Nrf2依次呈高表达,差异具有统计学意义(P<0.05);不同病情分级对应的miR-28-5p表达均随着病情分级增加表达减弱,不同分级之间差异具有统计学意义(P<0.05)。Nrf2表达随着病情分级增加表达增强,不同分级之间差异具有统计学意义(P<0.05);血管畸形组随访期间14例出现出血症状,单因素回归分析显示出血危险与miR-28-5p弱表达相关,与Nrf2强表达相关(P<0.05)。体外模型中,加入Nrf2抑制剂后,癫痫组、血管畸形组、出血组中miR-28-5p的mRNA表达水平明显升高,miR-28-5p与Nrf2呈负相关(P<0.05)。结论miR-28-5p在老年脑AVM患者中呈现低表达,与临床分级、出血症状呈负相关。Nrf2在老年脑AVM患者中呈现高表达,与临床分级、出血症状呈正相关,MicroRNA-28-5p与Nrf2呈负相关,是临床出血并发症的危险因素。

miR-28-5p靶向Nrf2调控LPS诱导的急性肺损伤机制研究

目的探究miR-28-5p在脂多糖(LPS)诱导的急性肺损伤(ALI)进程中的作用和分子机制。方法将40只C57BL/6雄鼠按随机数字表法分为生理盐水组、ALI-3h组、ALI-6h组和ALI-12h组,每组10只。利用LPS诱导小鼠ALI 3h、6h、12h,取肺组织进行荧光定量PCR(RT-PCR)检测miR-28-5p表达;同时体外利用LPS刺激小鼠巨噬细胞RAW264.7发生炎症反应,RT-PCR检测细胞miR-28-5p表达;巨噬细胞过表达miR-28-5p mimic后利用LPS刺激,RT-PCR检测巨噬细胞炎症因子肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素1β(IL-1β)表达情况;RT-PCR和Western blot检测抗氧化关键分子核因子E2相关因子2(Nrf2)、血红素加氧酶(HO-1)、醌氧化还原酶(NQO1)表达水平;Targetscan 7.0预测miR-28-5p靶向基因,突变结合位点后,并通过荧光素酶报告基因系统检测miR-28-5p对靶基因的转录调控作用。结果与生理盐水组比较,LPS诱导小鼠ALI 3h、6h、12h TNF-α、IL-1β水平明显升高[TNF-α:(6.24±1.84)、(4.31±0.97)、(2.97±0.49)比(1.00±0.21),P<0.05;IL-1β:(6.29±1.06)、(4.95±0.93)、(3.59±1.05)比(1.00±0.53),P<0.05],肺组织miR-28-5p水平明显升高[(7.24±1.35)、(5.26±1.64)、(3.24±0.97)比(1.00±0.34),P<0.05];与生理盐水组比较,LPS刺激巨噬细胞炎症反应3h、6h、12h细胞miR-28-5p水平明显升高[(5.21±0.15)、(3.51±0.78)、(2.45±0.41)比(1.00±0.35),P<0.05];与mimic-NC组比较,巨噬细胞过表达miR-28-5p mimic组细胞炎症因子TNF-α和IL-1β表达水平明显升高[TNF-α:(4.86±0.59)比(1.00±0.52);IL-1β:(3.54±0.41)比(1.00±0.24),P<0.05];同时与mimic-NC组比较,miR-28-5p mimic过表达组抗氧化关键分子Nrf2及其下游HO-1、NQO1表达明显升高[Nrf2:(5.16±1.03)比(1.00±0.14);HO-1:(4.91±1.08)比(1.00±0.12);NQO1:(5.61±0.80)比(1.00±0.08),P<0.05];Targetscan 7.0预测发现miR-28-5p靶向Nrf2基因3'UTR序列,荧光素酶报告基因实验进一步明确miR-28-5p通过靶向Nrf2基因3'UTR序列调控其转录。结论miR-28-5p在LPS诱导的ALI中表达上调,并进一步加剧ALI病理进程,其作用机制可能是通过靶向巨噬细胞Nrf2,从而减弱胞内抗氧化能力,促进炎症因子分泌和巨噬细胞的活化。

miR-28-5p影响结肠癌细胞迁移活力的分子机制初探

目的探讨miR-28-5p影响结肠癌细胞迁移活力的分子机制。方法选用结肠癌细胞(HCT116细胞)进行实验,实验分为两部分。第一部分实验:将HCT116细胞分为空白对照组(control组)和爱拉斯汀组(erastin组),control组不进行特殊处理,erastin组使用加有20μM erastin的培养基培养48 h。第二部分实验:将HCT116细胞分为拮抗剂阴性对照组(inhibitor-NC组)、miR-28-5p拮抗剂组(inhibitor组)、激动剂阴性对照组(mimics-NC组)、miR-28-5p激动剂组(mimics组),两组阴性对照分别转染拮抗剂阴性对照混合物和激动剂阴性对照混合物,miR-28-5p拮抗剂组转染miR-28-5p inhibitor以沉默miR-28-5p,miR-28-5p激动剂组转染miR-28-5p mimics以过表达miR-28-5p。用细胞划痕实验检测细胞迁移活力,实时荧光定量PCR(RT-PCR)检测HCT116细胞中miR-28-5p的相对表达水平,蛋白质免疫印迹(WB)检测VAT1L蛋白的相对表达量。比较48 h后erastin组与control组miR-28-5p、VAT1L表达水平及两组细胞划痕迁移率和转染完成后各组细胞miR-28-5p、VAT1L表达水平。结果第一部分:与control组相比,erastin组miR-28-5p的相对表达量、VAT1L蛋白的相对表达量均有降低(均P<0.05);与control组相比,erastin组的细胞迁移率降低(P<0.05)。第二部分:与inhibitor-NC组比较,miR-28-5p inhibitor组miR-28-5p的相对表达量降低(P<0.05);与mimics-NC组比较,miR-28-5p mimics组miR-28-5p的相对表达量增高(P<0.05)。与inhibitor-NC组比较,miR-28-5p inhibitor组VAT1L蛋白的相对表达量升高(P<0.05);与mimics-NC组比较,miR-28-5p mimics组VAT1L蛋白的相对表达量降低(P<0.05)。结论miR-28-5p可能通过抑制VAT1L的表达,以降低结肠癌细胞迁移活力。

孤立低高密度脂蛋白胆固醇表型与血浆miR-9-3p、miR-28-5p的表达分析

目的探讨孤立低高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)表型血浆miR-9-3p和miR-28-5p的变化模式及其相关性。方法选取唐山市工人医院体检中心2014年1月至2015年12月174例健康体检者资料,收集其外周血血浆样本。根据血清HDL-C水平分为血脂正常表型组(86例)和孤立低HDL-C表型组(88例)。实时荧光定量聚合酶链反应(qPCR)法测定血浆miR-9-3p和miR-28-5p的表达水平。结果脂代谢表型正常组和孤立低HDL-C表型组血浆中miR-9-3p的检出率分别为86.05%(74/86)和64.78%(57/88),差异有统计学意义(χ2=10.58,P=0.001);女性miR-9-3p水平在脂代谢正常组和孤立低HDL-C异常表型组血浆中的表达水平均高于男性[正常组:0.041(0.024,0.111)vs.0.018(0.009,0.039),Z=3.05,P=0.002;孤立低HDL-C表型组:0.029(0.024,0.059)vs.0.013(0.007,0.027),Z=3.35,P=0.001]。线性回归显示,表观健康者血浆miR-9-3p的相对表达水平与性别(β=-1.337,P<0.001)、血清HDL-C(β=1.638,P=0.041)、空腹血糖(β=0.475,P=0.044)相关。血浆miR-28-5p女性组高于男性组,差异有统计学意义[0.003(0.002,0.008)vs.0.004(0.003,0.011),P=0.028],而不同表型组中男、女比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论血浆miR-9-3p是孤立低HDL-C表型的分子病理特征,性别、血清HDL-C、空腹血糖是其循环水平变化的主要影响因素。

miR-28调控非小细胞肺癌细胞增殖、迁移与侵袭的作用机制

目的探讨微小RNA-28(miR-28)对非小细胞肺癌细胞株细胞A549和H1299的影响及其作用机制。方法通过转染miR-28 mimics过表达miR-28,转染miR-28 inhibitor抑制miR-28的表达,其中miR-28 NC作为对照组。通过CCK-8实验、克隆形成试验和细胞周期实验分别评估过表达miR-28、抑制miR-28对非小细胞肺癌细胞增殖能力的影响;通过划痕实验、Transwell迁移及Boyden小室侵袭实验分别评估过表达miR-28、抑制miR-28对非小细胞肺癌细胞迁移与侵袭能力的影响;通过生物信息学软件分析发现Ras相关蛋白1b(RAP1B)可能是miR-28的潜在靶基因并利用荧光素酶报告基因实验进行验证;通过RT-qPCR和Western blot方法检测过表达和抑制miR-28表达后A549和H1299细胞RAP1B的表达。结果与miR-28 NC比较,miR-28 mimics组A549和H1299细胞的增殖速度明显减慢,迁移及侵袭能力明显减弱,差异均有统计学意义(P<0.05);miR-28 inhibitor组A549和H1299细胞的增殖速度增快,迁移及侵袭能力明显增强,差异均有统计学意义(P<0.05);在非小细胞肺癌细胞中,荧光素酶报告基因实验表明miR-28可以靶向RAP1B基因;与miR-28 NC比较,miR-28 mimics组A549和H1299细胞RAP1B mRNA和RAP1B蛋白的表达明显减少,差异均有统计学意义(P<0.05);miR-28 inhibitor组A549和H1299细胞RAP1B mRNA和RAP1B蛋白的表达明显增加,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论miR-28可能通过下调靶基因RAP1B从而抑制非小细胞肺癌细胞的增殖、迁移与侵袭。

慢性牙周炎患者血清miR-205-5p、miR-28-5p的表达与诊断价值研究

目的:探讨慢性牙周炎(CP)患者血清微小核糖核酸(miRNA)-205-5p、miR-28-5p表达与牙周指标、炎症反应的关系及诊断价值。方法:选取2021年1月-2022年12月我院口腔科收治的102例CP患者为CP组,根据病情严重程度分为轻度组31例、中度组37例、重度组34例,另选取同期我院65名体检健康者为对照组。采用实时荧光定量聚合酶链式反应(PCR)检测血清miR-205-5p、miR-28-5p表达,酶联免疫吸附法检测白细胞介素(IL)-1β、IL-6、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平,检查各组牙周指标[菌斑指数(PLI)、牙龈出血指数(BI)、附着丧失(AL)、探诊深度(PD)]。CP患者血清miR-205-5p、miR-28-5p表达与牙周指标和炎症指标的相关性采用Pearson相关性分析。受试者工作特征(ROC)曲线分析血清miR-205-5p、miR-28-5p表达诊断CP的价值。结果:与对照组比较,CP组血清miR-205-5p、miR-28-5p表达降低,PLI、BI、AL、PD和IL-1β、IL-6、TNF-α水平升高(P<0.05)。轻度组、中度组、重度组血清miR-205-5p、miR-28-5p表达依次降低,PLI、BI、AL、PD和IL-1β、IL-6、TNF-α水平依次升高(P<0.05)。Pearson相关性分析显示,CP患者血清miR-205-5p、miR-28-5p表达与PLI、BI、AL、PD、IL-1β、IL-6、TNF-α呈负相关(P<0.05)。ROC曲线分析显示,血清miR-205-5p联合miR-28-5p诊断CP的曲线下面积分别为0.885大于miR-205-5p、miR-28-5p单独检测的0.792、0.790。结论:CP患者血清miR-205-5p、miR-28-5p低表达,与牙周指标、炎症反应密切相关,血清miR-205-5p、miR-28-5p的表达情况可能成为CP辅助诊断指标,且miR-205-5p联合miR-28-5p诊断CP的价值较高。

miR-28-5p在吸入性肺炎中的表达与临床意义

目的探讨miR-28-5p在吸入性肺炎患者中的表达水平及临床价值。方法本研究为回顾性对照研究,选取复旦大学附属金山医院重症监护病房重症肺炎患者60例为研究组,根据发病因素分为吸入性肺炎组和其他感染性肺炎组,同时选取20例健康体检患者为健康对照组。采集研究组患者第1、4、7天的静脉血,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测血清中miR-28-5p的表达水平;酶联免疫法(ELISA)测定各组血清中白细胞介素-4(IL-4)、白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-8(IL-8)、白细胞介素-10(IL-10)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的表达水平。收集研究组C-反应蛋白(CRP)、降钙素原(PCT)的临床检测结果。采用SPSS 26.0进行统计分析,绘制受试者工作特征曲线(receiver operator characteristic,ROC)分析血清中miR-28-5p对吸入性肺炎的诊断价值。Pearson法分析血清miR-28-5p与IL-4、IL-6、IL-8、IL-10、TNF-α、CRP和PCT水平的相关性。记录所有患者治疗10 d后的治疗效果,按预后良好与预后不良分为两组,分析miR-28-5p及各项炎症因子表达水平及预后的关系。结果与健康对照组相比,研究组血清miR-28-5p表达水平显著升高,研究组中吸入性肺炎组血清miR-28-5p表达水平显著低于其他感染性肺炎组(P<0.05);与误吸发生时相比,研究组中吸入性肺炎组血清miR-28-5p表达水平显著升高(P<0.05)。ROC曲线分析血清miR-28-5p表达对吸入性肺炎的诊断价值结果显示AUC为0.871,当临界值取1.211时,敏感度为76.67%,特异度为95.00%。Pearson相关分析结果显示miR-28-5p与IL-6呈正相关,与IL-4和IL-10呈负相关(P<0.05)。ROC曲线分析显示年龄、miR-28-5p、IL-8、IL-10、TNF-α、CRP、PCT水平的曲线下面积分别为0.695、0.813、0.655、0.668、0.724、0.651、0.661。结论血清miR-28-5p对吸入性肺炎的诊断具有重要参考意义,同时对区分吸入性肺炎的不同类型有一定的价值。血清miR-28-5p有可能作为潜在评估重症肺炎患者预后的标志物。年龄、TNF-α、IL-8、IL-10、CRP、PCT等也与重症肺炎的预后相关。

早产儿脐带血单核细胞中hsa-miR-28-3p和ADAM12的表达

目的早产儿是指出生时胎龄小于37周的婴儿，其发生率逐渐升高，成为围生期发病率和病死率的主要原因，其发生可能与遗传有关。因此我们拟研究自发性早产儿脐带血单核细胞中hsa-miR-28-3p及ADAM12的表达情况。方法采集上海市普陀区妇幼保健院出生新生儿的脐带血3ml，分为无明显诱因的自发性早产儿（早产组，30例）和正常足月儿（对照组，30例）。采用荧光定量PCR方法检测hsa-miR-28-3p及ADAM12mRNA表达情况，并行相关性分析。结果早产组和对照组各30例，平均胎龄分别为（30．92±1．73）周和（39．73±0．58）周，平均出生体重分别为（1647±357）g和（3301±394）g；早产组脐带血单核细胞中hsa-miR-28-3p表达（1．03±0．23）较对照组（2．32±0．52）明显下调（P〈0．01），早产组ADAMl2mRNA表达（0．0378±0．0056）较对照组（0．0276±0．0039）明显上调（P〈0．05），两者呈负相关（r=一0．6341，P〈0．01）。结论胎儿脐带血单核细胞hsa-miR-28-3p表达下调，可能使靶基因ADAM的表达上调，并促使自发性早产的发生。