尿外泌体miR-29c对器官和非器官局限性膀胱尿路上皮癌临床结局的预测价值

目的 探讨尿外泌体微小RNA(miR)-29c对器官和非器官局限性膀胱尿路上皮癌(BUC)临床结局的预测价值。方法 2017年1月~2022年3月,从我院泌尿外科选取152例BUC病人作为验证集。另外,从我院体检中心选择了126例非癌对照。采用实时荧光定量PCR法检测尿外泌体miR-29c表达水平。结果 验证集BUC病人尿外泌体miR-29c水平低于非癌对照组,差异有统计学意义(P<0.05),而尿外泌体miR-17-5p水平和miR-590-5p水平比较无明显差异(P>0.05)。尿外泌体miR-29c水平诊断BUC的ROC曲线下面积为0.969(95%CI:0.953~0.986),相应的敏感性和特异性分别为92.1%和90.2%。亚型分析中,非器官局限性BUC病人尿外泌体miR-29c水平较器官局限性BUC病人进一步降低(P=0.009)。预后分析中,尿外泌体miR-29c高表达组病人总生存期、无病生存期和疾病特异性生存期均更长(P<0.05)。结论 尿外泌体miR-29c低水平是BUC病人不利的预后因子,有希望作为器官和非器官局限性BUC不良临床结局的预测标志物。

多发性骨髓瘤组织中miR-29c、miR-195表达水平变化及其与临床病理特征及预后的关系

目的 探讨多发性骨髓瘤(MM)组织中miR-29c、miR-195表达水平变化及其与临床病理特征及预后的关系。方法 选取75例MM患者作为病例组,另选取同期就诊的75例骨髓象检查为正常的非血液系统疾病患者作为对照组。采用实时荧光定量PCR(q-PCR)检测骨髓组织中miR-29c、miR-195表达水平,根据检测平均值将miR-29c、miR-195分为高水平组和低水平组,分析miR-29c、miR-195表达水平与临床病理特征及预后的相关性。结果 病例组骨髓组织miR-29c、miR-195表达水平低于对照组(P<0.05)。miR-29c低水平组中ISS分期Ⅲ期及血清白蛋白水平<35 g/L的患者占比高于高水平组(P<0.05);miR-195低水平组中ISS分期Ⅲ期及血清白蛋白水平<35 g/L的患者占比高于高水平组(P<0.05);miR-29c低水平组的生存期低于高水平组(P<0.05),miR-195低水平组的生存期低于高水平组(P<0.05)。miR-29c、miR-195表达水平与ISS分期呈负相关(P<0.05),与血清白蛋白、生存期呈正相关(P<0.05)。结论miR-29c、miR-195均在MM患者骨髓组织中低表达,且低表达miR-29c、miR-195患者的生存期较短。miR-29c、miR-195表达水平与ISS分期呈正相关,与血清白蛋白、生存期呈负相关。

miR-29c-3p调控ERLIN2抑制肺腺癌发展的作用

目的:探讨miR-29c-3p在肺腺癌(lung adenocarcinoma,LUAD)发生发展中的作用。方法:利用公共数据库分析miR-29c-3p和ERLIN2在肺腺癌中的表达及其与临床病理参数的相关性。采用qRT-PCR检测miR-29c-3p在LUAD细胞系和正常支气管上皮细胞系中的表达,CCK8、细胞克隆形成、Transwell和伤口愈合实验评估miR-29c-3p在细胞增殖、迁移和侵袭中的作用,利用生物信息学工具预测miR-29c-3p下游靶基因,并通过双荧光素酶报告基因分析验证靶向关系。结果:miR-29c-3p在肺腺癌组织和细胞中低表达。miR-29c-3p低表达患者的预后较差,miR-29c-3p是肺腺癌患者的独立预后因素,并与淋巴结转移状态和临床分期密切相关。细胞实验表明,抑制miR-29c-3p可促进A549细胞的增殖、迁移和侵袭。生物信息学分析表明,ERLIN2是miR-29c-3p的靶基因,二者表达呈负相关。通过双荧光素酶报告基因测定验证了上述靶向关系。在UALCAN数据库中,ERLIN2在肺腺癌组织中高表达,并与患者年龄、性别、吸烟、肿瘤分期、淋巴结转移和TP53突变状态密切相关,ERLIN2高表达患者总生存率低于低表达患者。结论:miR-29c-3p通过靶向ERLIN2抑制肺腺癌细胞的增殖、迁移和侵袭,是肺腺癌患者的独立预后因素。

miR-29c-5p通过上调LRP6调控铁死亡减轻脑梗死缺血再灌注损伤

目的:探究miR-29c-5p在脑缺血-再灌注损伤中调控铁死亡的机制。方法:在这项研究中,雄性SD大鼠接受大脑中动脉闭塞(MCAO)手术,随后恢复血液流动。采用神经功能评分和TTC染色来评估脑组织损伤和梗死体积。采用qPCR方法检测miR-29c-5p的相对表达水平。通过Western Blot检测谷胱甘肽过氧化物酶4(GPx4)、低密度脂蛋白受体相关蛋白6(LRP6)的表达水平。采用相应的检测试剂盒检测GSH、Fe和丙二醛(MDA)的含量,并通过双荧光素酶报告基因实验验证miR-29c-5p的靶基因。结果:随着大鼠缺血再灌注时间的增加,miR-29c-5p的相对表达水平升高,铁死亡加重。此外,agomiR-29c-5p干预也加重了脑组织损伤和铁死亡,而antagomiR-29c-5p干预则使这些影响得到逆转。此外,agomiR-29c-5p和Fer-1联合干预可减轻脑组织损伤和铁死亡。双荧光素酶报告基因实验结果表明,LRP6是miR-29c-5p的靶基因。结论:在本研究中,miR-29c-5p通过负调控LRP6促进铁死亡进而加重大鼠脑缺血-再灌注损伤。

血浆miR-30a、miR-29c联合FIB-4、APRI评分对慢性乙型肝炎肝纤维化及早期肝硬化的预测价值

目的探讨血浆miR-30a、miR-29c联合FIB-4、APRI评分对慢性乙型肝炎患者不同程度肝纤维化及早期肝硬化的预测价值。方法收集2019年12月1日至2021年12月31日河北省人民医院收治的慢性乙型肝炎患者,根据瞬时弹性成像(transient elastorgraphy,TE)结果选取轻中度(F_(0)~F_(2))、重度肝纤维化(F_(3))及早期肝硬化(F_(4))各40例,健康志愿者40名作为对照组。收集一般临床资料,检测血浆miR-30a、miR-29c在各组中的表达量,计算FIB-4、APRI评分。经Logistic多因素回归分析建立联合模型。用ROC曲线分析其对早期肝硬化的预测价值。结果血浆miR-30a、miR-29c表达和FIB-4、APRI评分对慢性乙型肝炎患者不同程度肝纤维化及早期肝硬化有一定的预测价值。将四者纳入Logistic多因素回归分析,提示miR-29c表达和FIB-4、APRI评分是预测早期肝硬化发生的独立影响因素,建立早期肝硬化的联合预测模型Y=2.717×FIB-4+2.043×APRI-0.86×miR-29c,该模型在预测早期肝硬化患者的AUC为0.950。结论血浆miR-30a、miR-29c和FIB-4、APRI评分对慢性乙型肝炎不同程度肝纤维化及早期肝硬化有一定的预测作用。miR-29c表达、FIB-4、APRI评分联合模型能更好地预测早期肝硬化。

寿胎丸抑制滋养细胞miR-29c-3p/Caspase-8/GSDME焦亡信号轴治疗URSA的作用与机制研究

目的:探讨寿胎丸通过靶向miR-29c-3p/Caspase-8/GSDME信号通路减轻滋养细胞焦亡治疗不明原因复发性自然流产(URSA)的作用与关键机制。方法:全转录组高通量测序分析正常早孕妇女(NP组)和URSA患者绒毛组织中的差异mRNAs;Western blot检测Caspase-8、Caspase-3和GSDME表达及活化水平;qRT-PCR检测miR-29c-3p和CASP8 mRNA表达。体外调控HTR-8/SVneo细胞miR-29c-3p表达,分析其对Caspase-8和细胞焦亡相关分子表达及细胞培养上清中IL-1β、IL-18蛋白水平的影响。补肾固冲经典方剂寿胎丸含药血清作用于HTR-8/SVneo细胞后,观察miR-29c-3p、CASP8 mRNA表达和Caspase-8、Caspase-3及GSDME蛋白表达及活性,并检测培养上清中IL-1β与IL-18蛋白水平。CBA/J雌鼠和DBA/2雄鼠交配构建URSA小鼠模型,随机分为溶剂对照组、寿胎丸组、寿胎丸+INC组及寿胎丸+miR-29c-3p inhibitor组,观察各组胚胎吸收情况;检测各组胎盘组织中miR-29c-3p、Caspase-8、Caspase-3和GSDME表达及血清中IL-1β、IL-18蛋白水平。结果:与NP组比较,URSA患者绒毛组织Caspase-8、Caspase-3及GSDME表达及活化水平显著升高,而miR-29c-3p表达显著降低,且与CASP8 mRNA表达呈显著负相关。上调HTR-8/SVneo细胞miR-29c-3p表达后,CASP8 mRNA表达显著降低,Caspase-8、Cleaved Caspase-8、Cleaved Caspase-3、GSDME-N及细胞培养上清中IL-1β、IL-18蛋白水平明显下降,而抑制miR-29c-3p表达作用相反。双荧光素酶报告基因系统显示,miR-29c-3p能够与CASP8 mRNA 3’UTR直接结合。与对照组血清相比,寿胎丸含药血清能够上调HTR-8/SVneo细胞miR-29c-3p表达,而Caspase-8、Caspase-3、GSDME活性及IL-1β、IL-18表达均显著下调。与溶剂对照组相比,寿胎丸治疗组小鼠胚胎吸收减少,胚胎吸收率显著降低,小鼠胎盘组织中miR-29c-3p显著升高,Caspase-8、Caspase-3、GSDME活性及血清中IL-1β、IL-18表达显著下降;而miR-29c-3p inhibitor能够抑制寿胎丸的妊娠保护作用。结论:miR-29c-3p低表达促进Caspase-8/GSDME介导的滋养细胞焦亡,参与URSA发生;寿胎丸靶向miR-29c-3p/Caspase-8/GSDME信号通路,减轻滋养细胞焦亡,进而保护妊娠,治疗URSA。

PBMCs miR-29c在肺炎支原体肺炎患儿中的表达及与Th17/Treg失衡的关系

目的探究外周血单个核细胞(PBMCs)miR-29c在肺炎支原体肺炎(MPP)患儿中的表达及Th17/Treg失衡的关系。方法2019年8月至2021年4月在我院儿科共纳入108例MPP患儿,包括58例大环内酯类抗菌药物敏感的MPP患儿(MSMP组)和50例难治性MPP(RMPP组)患儿。另外选择50例健康体检儿童作为对照组。采集入院时的血液样本。采用流式细胞术检测外周血Th17、Treg细胞百分比,酶联免疫吸附法测定血清白细胞介素17(IL-17)和转化生长因子β1(TGF-β1)水平。实时荧光定量PCR法检测PBMCs miR-29c表达。结果与对照组相比,MSMP组和RMPP组CD4^(+)Th17细胞百分比、CD4^(+)Treg细胞百分比、Th17/Treg比值以及血清IL-17水平升高,同时PBMCs miR-29c相对表达量降低(P<0.05);而且RMPP组患儿CD4^(+)Th17细胞百分比、CD4^(+)Treg细胞百分比、Th17/Treg比值以及血清IL-17水平高于MSMP组,PBMCs miR-29c相对表达量低于MSMP组(P<0.05)。对于所有MPP患儿,无论是MSMP组还是RMPP组,PBMCs miR-29c相对表达量与循环Th17细胞%、Th17/Treg比值、血清IL-17水平均呈负相关性(P<0.05)。经受试者工作特征曲线分析,PBMCs miR-29c预测RMPP的AUC为0.932(95%CI:0.888~0.976),最佳临界值为0.67。经多因素Logistic回归分析,PBMCs miR-29c是影响RMPP进展的独立影响因子,PBMCs miR-29c≥0.67患儿进展为RMPP风险较低(P<0.05)。结论MPP患儿中PBMCs miR-29c低表达可诱导Th17细胞分化,进而促进Th17/Treg失衡,这可能是导致RMPP进展的重要机制之一。

温阳振衰颗粒通过调节lncRNA LOC103694972/miR-29c-3p减轻TGF-β1诱导NRK-49F细胞的纤维化

目的探讨温阳振衰颗粒通过lncRNA LOC103694972/miR-29c-3p对TGF-β1诱导的大鼠肾间质成纤维细胞(NRK-49F)的纤维化的影响。方法采用TGF-β1(10 ng·mL^(-1))处理NRK-49F细胞24 h,构建纤维化细胞模型。造模结束后给予空白血清、温阳振衰颗粒含药血清和缬沙坦胶囊含药血清干预。CCK-8法检测温阳振衰颗粒对NRK-49F增殖的影响。实时荧光定量PCR检测LOC103694972和miR-29c-3p表达。Western blot法检测纤维化相关因子Ⅰ型胶原(CollagenⅠ)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达。同时研究过表达或沉默LOC103694972,温阳振衰颗粒含药血清对TGF-β1干预的NRK-49F细胞的影响。双荧光素酶报告实验检测LOC103694972与miR-29c-3p之间的调控作用。结果温阳振衰颗粒明显减弱TGF-β1诱导的细胞增殖和LOC103694972的表达(P<0.05),促进miR-29c-3p的表达(P<0.05),其干预效果与缬沙坦胶囊含药血清效果一致。双荧光素酶实验证实LOC103694972靶向调控miR-29c-3p。过表达LOC103694972促进温阳振衰颗粒含药血清干预下TGF-β1诱导NRK-49F细胞的活力,以及α-SMA蛋白、CollagenⅠ蛋白的表达(P<0.05)。而沉默LOC103694972具有相反的效果(P<0.05)。结论温阳振衰颗粒通过下调LOC103694972促进miR-29c-3p的表达,进而抑制TGF-β1诱导的NRK-49F细胞纤维化。

血清miR-29c、miR-17与老年急性脑梗死后血管性认知障碍的相关性

目的探讨血清miR-29c、miR-17与老年急性脑梗死后血管性认知障碍(VCI)的相关性。方法选取2021年1月至2022年6月收治的老年急性脑梗死患者126例,均予以MoCA认知量表及Hachinski缺血指数量表评估,并根据VCI评估结果将患者分为VCI组(n=87)和非VCI组(n=39)。采用实时荧光定量聚合链式反应(qRT-PCR)法检测比较两组血清miR-29c、miR-17水平,分析血清miR-29c、miR-17水平对老年急性脑梗死后VCI的影响,并分析老年急性脑梗死患者血清miR-29c、miR-17水平与其MoCA评分和Hachinski评分的关系。绘制ROC曲线分析血清miR-29c、miR-17水平联合检测的老年急性脑梗死后VCI评估价值。结果VCI组血清miR-29c、年龄、饮酒率和既往脑梗死合并率均高于非VCI组(t/χ^(2)=6.435,6.134,4.171,4.469,P<0.05);血清miR-17水平则低于非VCI组(t=4.328,P<0.001)。Logistics回归分析显示,血清miR-29c、miR-17水平均为老年急性脑梗后VCI的影响因素(P<0.05)。Pearson相关分析显示,老年急性脑梗死患者血清miR-29c、miR-17水平与其MoCA评分和Hachinski评分均密切相关(r=-0.859,0.904,0.893,-0.866,P<0.05)。ROC曲线分析显示,血清miR-29c、miR-17水平对老年急性脑梗死后VCI均具有显著的预测价值,其中两者联合检测的老年急性脑梗死后VCI预测效能更高(P<0.05)。结论老年急性脑梗死患者血清miR-29c表达上调和miR-17表达下调与其VCI的发生和严重程度均相关,两者联合检测可用于老年急性脑梗死后VCI早期评估。

miR-29c-3p/IGF1分子轴对肝星状细胞活化,增殖和凋亡的作用机制

目的探讨miR-29c-3p通过IGF-1对肝星状细胞(hepatic stellate cells,HSCs)活化,增殖和凋亡的影响。方法原代培养小鼠HSCs,并通过免疫荧光检测HSCs标志物ɑ-SMA表达。双荧光素酶报告基因实验验证miR-29c-3p和IGF-1的靶向关系。TGF-β激活HSCs,并且外源性调控miR-29c-3p和IGF-1的表达水平后,分别采用Westernbolt,CCK-8,克隆形成实验和流式细胞术检测活化HSCs中活化相关蛋白(ɑ-SMA,DDR2,FN1,ITGB1和GFAP)的表达,增殖,克隆形成数和凋亡。结果ɑ-SMA阳性表达表明成功分离小鼠HSCs。miR-29c-3p mimic可降低野生型IGF-1的荧光素酶活性,但是对突变型IGF-1没有影响。过表达miR-29c-3p和低表达IGF-1能减少ɑ-SMA,DDR2,FN1和ITGB1表达,增加GFAP的表达,并且降低HSCs的增殖活力和克隆形成数,上调其凋亡比例。结论miR-29c-3p通过靶向抑制IGF-1表达,进而抑制HSCs活化和增殖,并促进其凋亡。

大动脉粥样硬化型缺血性脑卒中患者外周血miR-29c和miR-370水平与颈动脉内中膜厚度的相关性

目的研究外周血miR-29c和miR-370水平在大动脉粥样硬化(LAA)型缺血性脑卒中患者及健康人群间的差异,分析二者与颈动脉内中膜厚度(IMT)的相关性,进而探究其作为LAA型缺血性脑卒中发生生物标志物的价值。方法收集2020年10月至2022年3月在郑州大学附属洛阳中心医院就诊的69例LAA型缺血性脑卒中患者作为观察组,并选取同期在医院健康管理中心体检的54例体检者作为健康对照组,采用实时荧光PCR法检测其血浆中miR-29c和miR-370的相对表达水平,采用颈动脉超声检查测定IMT值,比较其差异性、相关性并评估诊断效能。结果LAA型缺血性脑卒中组miR-29c的相对表达量低于健康对照组,miR-370的相对表达量高于健康对照组,IMT值高于健康对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。miR-29c相对表达量与IMT呈低度负相关(r=-0.229,P<0.05),miR-370相对表达量与IMT呈低度正相关(r=0.492,P<0.05)。ROC曲线分析显示miR-29c、miR-370和IMT三者联合检测AUC达0.995。结论血浆miR-29c低表达、miR-370高表达、颈总动脉IMT值增厚与LAA型缺血性脑卒中的发生密切相关,三者联合检测可提高LAA型缺血性脑卒中的临床诊断效能。

急性淋巴细胞白血病患儿血清miR-17、miR-29c的表达及临床意义

研究急性淋巴细胞白血病(ALL)患儿血清中miR-17、miR-29c表达水平及其与患儿生存率的关系。方法:选择 2010年9月~2013年2月在笔者医院初诊为ALL并住院治疗的43例患儿作为病例组,同时期体检健康儿童40例作为对照组。采用RT-PCR检测两组儿童血清中miR-17、miR-29c相对表达量,分析病例组血清miR-17、miR-29c表达水平与患儿初诊白细胞(WBC)计数、免疫分型等临床指标及患儿5年无事件生存率、总生存率的关系。结果:病例组儿童血清中miR-17相对表达量显著高于对照组( P <0.05),miR-29c相对表达量显著低于对照组( P <0.05);病例组血清中miR-17表达水平与患儿初诊WBC计数、免疫分型有关( P <0.05),miR-29c表达水平与患儿初诊WBC计数、免疫分型及泼尼松诱导敏感度有关( P <0.05);病例组患儿5年无事件生存率51.16%,总生存率72.09%;生存组患儿血清miR-17相对表达量显著低于死亡组患儿( P <0.05),miR-29c相对表达量显著高于死亡组患儿( P <0.05);miR-17高表达组患儿5年无事件生存率、总生存率均显著低于miR-17低表达组患儿;miR-29c高表达组患儿5年无事件生存率、总生存率均显著高于miR-29c低表达组患儿。结论:ALL患儿血清中miR-17表达上调,miR-29c表达下调,与患儿预后不良有关。

疼痛调控相关miRNAs的筛选及脊髓miR-29c对神经病理性痛大鼠痛阈的影响

目的通过microRNAs(miRNAs)芯片技术筛选疼痛调控相关的miRNAs,观察microRNA-29c(miR-29c)对神经病理性痛大鼠痛阈的影响。方法实验一:雌性SD大鼠,随机分为神经病理性痛组(SNI组)及妊娠神经病理性痛组(PSNI组),测定机械缩足阈值(MWT),观察分娩对疼痛的影响。在SNI组及PSNI组大鼠分娩后MWT差异显著时,取脊髓腰膨大组织,筛选差异表达的miRNAs。实验二:选取目的miRNAs,包被过表达或沉默慢病毒,脊髓内注射干预后观察SNI组大鼠MWT变化。结果与SNI组大鼠比较,PSNI组大鼠分娩后第3天MWT明显升高,脊髓c-Fos蛋白含量明显降低(P<0.05);miRNAs芯片分析共发现71条差异表达的miRNAs,在PSNI大鼠显著上调37条,显著下调34条;选取并包被miR-124a过表达、miR-29c沉默慢病毒注射,miR-29c表达沉默可明显提高SNI组大鼠MWT。结论miR-29c是通过基因芯片筛选获得的miRNA,下调SNI大鼠脊髓miR-29c表达,能够显著改善病理性痛状态。

血清miR-33a、miR-29c、miR-126联合检测对脑动脉粥样硬化的诊断价值

目的探讨血清miR-33a、miR-29c、miR-126联合检测对脑动脉粥样硬化的诊断价值。方法选择2018年1月至2020年1月该院收治的脑动脉粥样硬化患者120例为研究组,同期体检健康者120例为对照组。根据不同脑动脉硬化严重程度将患者分为单动脉组(23例)、双动脉组(53例)、多动脉组(44例)。采用实时荧光定量PCR检测研究组与对照组及不同脑动脉粥样硬化严重程度患者血清miR-33a、miR-29c、miR-126的相对表达水平。采用受试者工作特征曲线(ROC曲线)分析血清miR-33a、miR-29c、miR-126对脑动脉粥样硬化的诊断价值。结果研究组血清miR-33a、miR-29c、miR-126的相对表达水平明显高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。血清miR-33a、miR-29c、miR-126在不同脑动脉粥样硬化严重程度患者中的相对表达水平差异有统计学意义(P<0.05)。血清miR-33a、miR-29c、miR-126单项检测对脑动脉粥样硬化诊断的灵敏度分别为95.00%、93.00%、92.00%,特异度分别为95.00%、92.00%、91.00%。血清miR-33a、miR-29c、miR-126联合检测对脑动脉粥样硬化诊断的灵敏度为96.67%,特异度为90.00%,准确度为93.33%。结论血清miR-33a、miR-29c、miR-126可作为联合诊断脑动脉粥样硬化的潜在标志物。

TRPV1在小儿支气管哮喘中的表达以及与B7-H3和miR-29c相关性分析

目的 探究瞬时受体电位通道香草醛亚型-1(TRPV1)在小儿支气管哮喘中的表达以及与B7-H3和miR-29c相关性分析。方法 选取2019年4月—2020年4月收治的小儿支气管哮喘患儿172例作为研究对象,另选取同时段接受常规检查的健康儿童172例为健康志愿者。监测儿童肺功能水平变化,采用酶联免疫吸附法检测IgE、IFN-γ、EOS水平。分析TRPV1与B7-H3、miR-29c在小儿支气管哮喘中表达及相关性。结果 与健康志愿者相比,支气管哮喘儿童肺功能水平明显较低,具有统计学差异(P<0.05);与健康志愿者相比,支气管哮喘患儿TRPV1、B7-H3、miR-29c水平较高,具有统计学差异(P<0.05);与健康志愿者相比,支气管哮喘儿童血清IgE、EOS水平较高,INF-γ水平较低,具有统计学差异(P<0.05);与急性期患儿相比,缓解期患儿TRPV1、B7-H3、miR-29c表达均较低,具有统计学差异(P<0.05)。TRPV1、B7-H3呈正相关(r=0.254,P=0.001);TRPV1、miR-29c呈正相关(r=0.286,P=0.001);B7-H3、miR-29c呈正相关(r=0.214,P=0.004)。结论 TRPV1、B7-H3、miR-29c水平对小儿支气管哮喘患者的诊断及预后具有重要意义,且TRPV1与B7-H3、miR-29c在小儿支气管哮喘中具有一定相关性。

阿尔茨海默病中miR-29c对APP表达调控的初步研究

目的探讨microRNA29c(miR-29c)在阿尔茨海默病中的作用。方法采用了microarray芯片检测3月龄、6月龄APPswe/PSΔE9双转基因阿尔茨海默病小鼠大脑中microRNA表达情况并利用实时定量PCR验证结果可靠性,通过microRNA靶基因数据库预测选出与阿尔茨海默病相关的靶基因,构建miR-29c表达载体,将其转染SH-SY5Y及HEK-293T细胞,在高表达miR-29c的SH-SY5Y及HEK-293T细胞系中验证miR-29c对靶基因的调控作用。将靶基因APP mRNA的野生及突变3’UTR序列克隆到双荧光素酶报告基因载体,用双荧光素酶报告检测系统检测miR-29c与靶基因的结合位点。结果根据microRNA芯片结果筛选出在3、6月龄APPSWE/PS1ΔE9双转基因小鼠大脑表达均有差异的miR-29c,通过实时定量PCR证实miR-29c在3月、6月、9月龄小鼠中表达明显升高。通过microRNA靶基因数据库预测miR-29c可以调控阿尔茨海默病的靶基因APP,利用Western blot检测到高表达miR-29c的SH-SY5Y细胞及HEK-293T细胞中APP蛋白表达减少。将miR-29c表达载体与带有野生及突变APPmRNA的3’UTR的双荧光素酶报告载体共转染HEK-293T细胞,通过双荧光素酶检测系统检测未找到miR-29c与APP mRNA 3’UTR的结合位点。结论 miR-29c对APP表达的具有负向调控作用,但其调控位点可能不位于其3’UTR区域。

^(125)碘粒子植入联合肿瘤切除术治疗脑胶质瘤患者疗效及对血清miR-128、miR-29c表达的影响

目的探究^(125)碘粒子植入联合肿瘤切除术治疗脑胶质瘤的临床效果及对患者血清miR-128、miR-29c表达的影响。方法选取2015年3月-2018年3月于郴州市第一人民医院神经外科接受治疗的脑胶质瘤患者80例,按照随机数字表法分为对照组和观察组,每组各40例。对照组患者给予开颅肿瘤切除术,观察组患者在对照组的基础上给予^(125)碘粒子植入治疗。荧光定量PCR法检测血清中miR-128和miR-29c表达水平,选用KPS功能状态评分对患者的功能状态进行衡量,比较2组患者的不良反应发生情况。结果观察组患者治疗总有效率为95. 00%,显著高于对照组的80.00%,差异具有统计学意义(χ~2=4.114,P=0.043)。肿瘤分化程度Ⅰ～Ⅱ级患者血清miR-128表达高于Ⅲ～Ⅳ级患者(χ~2=3.643,P=0.000),miR-29c表达水平低于Ⅲ～Ⅳ级患者(χ~2=3.934,P=0.000)。治疗后,2组患者血清中miR-128水平均降低,miR-29c水平均升高,且观察组的变化明显优于对照组,差异有统计学意义(t/P=3.468/0.001,t/P=5.926/0.000)。治疗后2组患者KPS评分均明显提高,且观察组患者的KPS评分显著高于对照组,差异具有统计学意义(t=8. 519,P=0. 000)。观察组患者的不良反应发生率为5. 00%,显著低于对照组的20.00%,差异有统计学意义(χ~2=4.114,P=0.043)。结论采用^(125)碘粒子植入联合肿瘤切除术治疗脑胶质瘤的效果明显优于单独采用肿瘤切除术,不仅可以改善患者血清中miR-128、miR-29c的表达水平,且不良反应发生率较低。

卵巢癌组织中miR-29c、miR-133b和miR-1的水平分析及临床意义

目的探讨卵巢癌组织中miR-29c、miR-133b和miR-1的表达水平,分析3者与卵巢癌临床病理特征的关系。方法收集本院确诊的65例卵巢癌患者经手术切除的上皮性卵巢癌组织标本(卵巢癌组),采用实时定量RT-PCR(qRTPCR)法检测miR-29c、miR-133b及miR-1水平,收集对应卵巢癌患者的临床病理参数(年龄、临床分期、分化程度、组织类型及淋巴结转移),同时选取32例正常卵巢上皮组织(正常组)和39例良性卵巢上皮囊肿组织(良性组)作对照,以正常组的各指标均数为界值,将卵巢癌组miR-29c、miR-133b及miR-1水平分为高水平组(>正常组)和低水平组(≤正常组),比较miR-29c、miR-133b及miR-1不同表达水平与卵巢癌临床病理参数的关系,同时分析卵巢癌组织中3者水平的关系。结果卵巢癌组miR-29c水平高于正常组和良性组,而miR-133b和miR-1水平均低于正常组和良性组,差异有统计学意义(P<0.05);卵巢癌组miR-29c、miR-133b及miR-1水平均与分化程度有关,miR-29c水平与临床分期及淋巴结转移有关,而miR-133b亦与淋巴结转移有关,差异均有统计学意义(P<0.05);卵巢癌miR-29c水平与miR-133b和miR-1均呈负相关(r=-0.541、-0.361),miR-133b与miR-1呈正相关(r=0.447),差异均有统计学意义(P<0.05)。结论卵巢癌患者组织中miR-29c呈高表达,miR-133b及miR-1呈低表达,与临床病理学特征有关,且在卵巢癌诊断中有一定的价值,可用于辅助卵巢癌的诊断和病情评估。

MiR-29c模拟物对骨肉瘤细胞侵袭和迁移能力的影响

目的:观察miR-29c在具有不同转移能力的F4和F5M2细胞系中的表达差异;研究miR-29c模拟物对骨肉瘤细胞侵袭和迁移能力的影响。方法:利用qRT-PCR技术检测F4与F5M2间miR-29c的表达差异;将骨肉瘤细胞F5M2分为3组,运用细胞转染技术分别对两组转染miR-29c模拟物、模拟物阴性对照,第3组不作处理,随后用qRT-PCR技术检测3组间miR-29c的表达差异。Transwell法检测3组不同处理的F5M2细胞的侵袭和迁移能力是否存在差异。结果:MiR-29c在F4和F5M2细胞系中表达差异显著,miR-29c在高转移性的F5M2细胞中表达水平显著下降。与阴性对照组和空白组相比,转染miR-29c模拟物的F5M2细胞侵袭和迁移能力均明显减弱,且差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:MiR-29c在高转移性骨肉瘤细胞中低表达,且miR-29c模拟物具有抑制骨肉瘤细胞侵袭和转移的作用。MiR-29c有可能作为骨肉瘤转移基因治疗的一个新靶点。

miR-29c过表达载体的构建及其对95D肺癌细胞增殖的影响

目的构建miR-29c真核表达载体并转染95D肺癌细胞,观察miR-29c过表达对95D细胞增殖能力的影响。方法克隆miR-29c片段插入质粒pcDNA3.1,构建miR-29c表达质粒pcDNA3.1-miR-29c;通过脂质体瞬时转染人肺癌细胞株95D,荧光PCR检测细胞miR-29c表达水平,MTT法检测过表达miR-29c对细胞增殖能力的影响。结果重组质粒pcDNA3.1-miR-29c经酶切及测序证明构建成功,荧光PCR证实转染后95D细胞miR-29c表达水平显著升高,是对照组的36倍。MTT检测结果表明,过表达miR-29c的95D细胞增殖受到显著抑制,至72 h抑制率最高,达38.63%。结论成功构建miR-29c真核表达质粒pcDNA3.1-miR-29c,初步观察显示过表达miR-29c显著抑制95D肺癌细胞增殖效应。为进一步深入研究miR-29c对肺癌的作用打下良好基础。