滋金补水膏对慢性阻塞性肺疾病模型大鼠的治疗作用及对lncRNAPVT1、miR-30b-5p表达的影响

【目的】探讨滋金补水膏对慢性阻塞性肺疾病(COPD)模型大鼠的治疗作用及机制。【方法】将96只大鼠随机分为正常组,模型组,滋金补水膏低、中、高剂量组,盐酸氨溴索组、滋金补水膏高剂量+pcDNA组,滋金补水膏高剂量+pcDNA-人浆细胞瘤转化迁移基因1(PVT1)组,每组12只。除正常组外,其他各组大鼠采用气道滴注脂多糖(LPS)联合烟雾暴露法构建COPD模型。建模成功后,进行给药干预。给药结束后,采用酶联免疫吸附分析(ELISA)检测大鼠血清中白细胞介素6(IL-6)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平;流式细胞术检测大鼠外周血中辅助性T细胞17/调节性T细胞(Th17/Treg)水平,苏木素-伊红(HE)染色法观察肺组织病理变化,实时定量聚合酶链反应(qRT-PCR)法检测血清和肺组织中长链非编码RNA(lncRNA)PVT1、miR-30b-5p表达,Western Blot法检测肺组织中维甲酸相关孤核受体γt(RORγt)、叉头框蛋白P3(Foxp3)蛋白表达,双荧光素酶报告基因实验验证lncRNA PVT1与miR-30b-5p的关系。【结果】与正常组比较,模型组肺泡间隔变大,支气管周围有大量炎症细胞浸润,Treg细胞比例、miR-30b-5p表达水平、Foxp3蛋白表达水平降低,IL-6、TNF-α水平,Th17细胞比例、Th17/Treg比值,lncRNA PVT1表达水平,RORγt蛋白表达水平升高(均P<0.05);与模型组比较,滋金补水膏低、中、高剂量组及盐酸氨溴索组大鼠肺组织病理损伤减轻、Treg细胞比例、miR-30b-5p表达水平、Foxp3蛋白表达水平升高,IL-6、TNF-α水平,Th17细胞比例,Th17/Treg比值,lncRNA PVT1表达水平,RORγt蛋白表达水平降低(均P<0.05)。lncRNA PVT1靶向调控miR-30b-5p表达。【结论】滋金补水膏可能通过调节lncRNA PVT1/miR-30b-5p轴促进Th17/Treg细胞平衡来抑制COPD大鼠炎症反应。

miR-30b通过抑制NLRP3炎症小体激活降低心肌缺血再灌注损伤研究

目的:探究miR-30b通过靶向抑制NLRP3炎症小体的激活来降低心肌缺血再灌注大鼠心肌损伤的作用机制。方法:选取50只SD大鼠纳入研究,随机将大鼠分为Sham组(假手术组)、MIRI组(模型组)、miR-30b mimics组(miR-30b过表达组)、CY-09组(NLRP3信号通路抑制剂组)、miR-30b+CY-09组(miR-30b过表达+NLRP3信号通路抑制剂组),每组10只大鼠;RT-PCR检测各组大鼠心肌组织内miR-30b相对表达;超声心动图检测大鼠心功能参数(LVEDP、LVSP、+dp/dtmax、-dp/dtmax);ELISA法检测大鼠心肌组织损伤标志物(CK-MB、LDH、cTnI)水平;HE染色分析大鼠心肌组织病理形态;TUNEL法检测大鼠心肌细胞凋亡;Western-blot检测心肌组织炎症小体NLRP3信号通路相关蛋白NLRP3、ASC、Caspase-1蛋白表达。结果:与Sham组相比,MIRI模型可以下调大鼠心肌组织内miR-30b的mRNA表达(P<0.05);miR-30b的过表达可以上调大鼠心肌组织内miR-30b的mRNA表达(P<0.05);与Sham组相比,MIRI模型的建立可以上调心功能参数LVEDP、心肌损伤因子(CK-MB、LDH、cTnI)水平及心肌细胞凋亡能力,下调心功能参数(LVSP、+dp/dtmax、-dp/dtmax)(P<0.05);miR-30b过表达质粒转染及NLRP3信号通路被阻断均可以下调心功能参数LVEDP、心肌损伤因子(CK-MB、LDH、cTnI)水平及心肌细胞凋亡能力,上调心功能参数(LVSP、+dp/dtmax、-dp/dtmax)(P<0.05);二者联合可以进一步下调心功能参数LVEDP、心肌损伤因子(CK-MB、LDH、cTnI)水平及心肌细胞凋亡能力,上调心功能参数(LVSP、+dp/dtmax、-dp/dtmax)(P<0.05)。Sham组大鼠心肌形态较为正常;MIRI模型的建立可以导致心肌组织排列紊乱,出现心肌纤维断裂、心肌细胞空泡化及炎性细胞浸润的现象;miR-30b过表达质粒转染及NLRP3信号通路被阻断均可以改善MIRI大鼠心肌组织病理形态,二者联合组大鼠心肌形态改善力度最大;与Sham组相比,MIRI模型的建立可以上调大鼠心肌组织内NLPR3炎症小体信号通路关键蛋白NLRP3、ASC、Caspase-1的表达(P<0.05);miR-30b过表达质粒转染及NLRP3信号通路被阻断均可以下调大鼠心肌组织内NLRP3、ASC、Caspase-1的表达(P<0.05);二者联合可以进一步降低大鼠心肌组织内NLRP3、ASC、Caspase-1的表达(P<0.05)。结论:miR-30b通过靶向抑制MLPR3炎症小体的激活改善缺血再灌注损伤所引起的心脏功能低下、心肌细胞损伤加剧的表现,对缺血再灌注损伤的心肌组织起到保护作用,值得临床进一步研究。

血清miR-21、miR-30b对乳腺癌患者术后曲妥珠单抗靶向治疗心脏毒性的预测价值

目的探讨血清miR-21、miR-30b对乳腺癌患者术后曲妥珠单抗靶向治疗心脏毒性的预测价值。方法选取乳腺癌曲妥珠单抗靶向治疗患者138例为观察组,根据是否发生化疗相关心脏毒性事件分为非心脏毒性组和心脏毒性组2个亚组;另外选取同期体检健康女性150例为健康组。比较各组血清miR-21、miR-30b水平和临床资料。采用ROC评估血清miR-21、miR-30b对发生心脏毒性的预测价值,采用多因素Logistic回归分析发生心脏毒性的影响因素。结果观察组血清miR-21高于健康组,而miR-30b低于健康组;心脏毒性组血清miR-21和高血压占比高于非心脏毒性组,而miR-30b和左室射血分数(LVEF)低于非心脏毒性组(P<0.05)。LVEF、miR-21、miR-30b是乳腺癌术后化疗心脏毒性的影响因素(P<0.05)。血清miR-21、miR-30b联合预测乳腺癌术后化疗心脏毒性的诊断效能高于miR-21、miR-30b单独预测(P<0.05)。结论血清miR-21、miR-30b是乳腺癌术后化疗心脏毒性的影响因素,两者联合预测乳腺癌术后化疗心脏毒性的效能更高。

miR-30b靶向CXCR4对子宫腺肌症模型小鼠子宫内膜间质细胞的影响及机制研究

目的探究miR-30b对子宫腺肌症(AM)模型小鼠子宫内膜间质细胞(ESCs)的影响,并进一步探究其可能的潜在调控机制。方法选取24只ICR雌性小鼠,制备AM动物模型,另选取4只ICR小鼠作为正常对照;HE染色观察造模小鼠子宫病理学变化;反转录荧光定量-聚合酶链反应(qRT-PCR)检测AM模型小鼠及正常小鼠子宫组织中miR-30b表达情况。分离并培养AM模型小鼠ESCs,随机分为对照组(Control组)、miR-30b过表达组(miR-30b组)和miR-30b过表达阴性对照组(miR-NC组);qRT-PCR检测各组细胞中miR-30b表达;MTT法、Transwells法和流式细胞术分别检测细胞增殖、迁移、凋亡能力;蛋白质印迹(Western blot)检测细胞中趋化因子受体4(CXCR4)和血管内皮生长因子(VEGF)蛋白表达;双荧光素酶报告验证miR-30b和CXCR4的靶向关系。结果24只小鼠中AM造模成功22只(91.67%)。与正常小鼠相比,AM模型小鼠子宫扭曲变形且明显粗壮,表面可见明显突出的腺肌病结节,子宫肌层发育紊乱,内膜间质受到浸润,内膜间质细胞侵入肌肉内层。miR-30b在AM模型小鼠子宫组织中显著低表达(P<0.05),而过表达miR-30b可以降低模型小鼠ESCs的增殖能力和侵袭能力、加速细胞凋亡(P<0.05),且过表达miR-30b可显著降低ESCs中VEGF、CXCR4蛋白表达水平(P<0.05)。miR-30b直接靶向CXCR4。结论miR-30b可能通过直接靶向调控CXCR4表达,进而促进ESCs的增殖和侵袭,抑制细胞凋亡,参与AM发病。

rno-miR-30b-5p在葡萄膜炎发病过程中对白细胞介素-10和Toll样受体4表达的调控作用

目的探讨rno-miR-30b-5p在葡萄膜炎中对白细胞介素10(interleukin-10,IL-10)和Toll样受体4(toll-like receptor 4,TLR4)表达的调控作用。方法构建IL-10、TLR4基因的3’端非编码区域(3’UTR)荧光素酶质粒载体以及结合位点突变质粒载体,将rnomiR-30b-5p模拟物(mimic)与构建好的报告基因载体共转染293T细胞,通过报告基因相对荧光值的表达改变检测rno-miR-30b-5p对IL-10、TLR4表达的调控作用;制备实验性自身免疫性葡萄膜炎(experimental autoimmune uveitis,EAU)模型,通过注射视网膜光感受器间维生素A类结合蛋白乳糜液,在造模后12 d分离EAU大鼠的脾脏和淋巴结,实时荧光定量PCR检测rno-miR-30b-5p和IL-10、TLR4基因的表达情况;ELISA检测IL-10和TLR4蛋白的表达情况。结果双荧光素酶报告基因表达结果表明,经rno-miR-30b-5p mimic干预后IL-10、TLR4野生型的报告荧光有明显的下调作用,对其预测靶位点进行突变后,突变型载体中的报告荧光也存在明显的下调作用,与阴性对照相比,差异均有统计学意义(均为P<0.01)。实时荧光定量PCR检测结果发现rno-miR-30b-5p在EAU大鼠脾脏和淋巴结中的表达均较对照组明显降低(均为P<0.01),而IL-10 mRNA、TLR4 mRNA表达明显升高(均为P<0.01);ELISA检测发现IL-10、TLR4蛋白表达升高,与对照组相比,差异均有统计学意义(均为P<0.05)。结论rno-miR-30b-5p对带有IL-10、TLR4基因片段3’UTR基因表达的调控作用可能不是通过预测到的位点起作用而是通过其他的调控结合位点发挥作用;rno-miR-30b-5p在EAU大鼠脾脏和淋巴结的下调表达导致IL-10和TLR4的表达水平升高,进而调控葡萄膜炎的发展。本研究为进一步探索microRNA在葡萄膜炎发生发展进程中的调控作用、治疗葡萄膜炎奠定了基础。

miR-30b/Snail调控糖尿病肾病肾小管上皮细胞EMT

目的:探讨miR-30b/Snail调控高糖诱导人源肾小管上皮细胞(HK2)-间充质转化(EMT)的可能机制,为糖尿病肾病(DN)间质纤维化的防治提供新的实验依据及思路。方法:通过生物信息学预测调控Snail的候选miRNAs;在db/db小鼠肾组织中验证所有候选miRNAs的表达并分别与Snail做pearson相关性分析,筛选出与Snail负相关最显著的miRNA;以高糖诱导的HK2细胞为载体,转染该miRNA mimics 72 h后,采用real-time PCR、western blot方法,观察该miRNA、Snail以及EMT相关蛋白的表达改变。结果:调控Snail的候选miRNAs共6个,分别是miR-30b-5p、miR-25-3p、miR-199a-5p、miR-128-3p、miR-22-3p、miR-27-3p,其中miR-30b与Snail存在明显负相关,r2=0.775 49;高糖诱导HK2细胞miR-30b表达下调,肾小管上皮细胞标志蛋白E-cadherin表达减少;过表达miR-30b-5p可抑制HK2细胞Snail表达,同时上调E-cadherin表达,而Vimentin、α-SMA表达下调。结论:miR-30b/Snail参与调控高糖引起的肾小管上皮细胞EMT。

miR-30a和miR-30b靶向GW182的生物学功能研究

目的:通过证明miR-30a、miR-30b靶向GW182,探索HeLa细胞中miR-30a、miR-30b及GW182的生物学功能。方法:生物信息学预测分析表明GW182的3'UTR区存在4个保守的miR-30a、miR-30b靶位点,将含有靶位点的序列片段构建到萤光素酶报告载体中,检测miR-30a、miR-30b与靶位点的结合情况;用阳离子脂质体转染GW182siRNA和miR-30a、miR-30b mimics,检测GW182下游功能的变化。结果:miR-30a、miR-30b能够靶向GW182;qPCR及Western印迹证明miR-30a、miR-30b可以在mRNA与蛋白水平上降低GW182的表达,同时影响GW182所参与的miRNA/siRNA对靶基因的抑制作用。结论:GW182是miR-30a、miR-30b的靶基因,揭示了miR-30a、miR-30b通过靶向GW182影响miRNA/siRNA作用途径的新功能。

rno-miR-30b-5p调控Atg5、Atg12和Becn1自噬基因表达在实验性自身免疫性葡萄膜炎中的作用

目的探讨rno-miR-30b-5p对Atg5、Atg12和Becn1自噬基因表达的调控作用及其在实验性自身免疫性葡萄膜炎(experimental autoimmune uveitis,EAU)中的表达变化。方法 双荧光素酶检测mo-miR-30b-5p对Atg5、Atg12和Becn1自噬基因表达的调控作用。Lewis大鼠随机分为正常对照组和EAU组,每组各6只,EAU组诱导EAU模型,两组大鼠每天用Genesis-A眼底相机观察眼底情况。免疫后12 d,取眼球观察睫状体、视网膜的病理学表现;分离大鼠的脾脏和淋巴结,实时荧光定量PCR(Q-PCR)检测rno-miR-30b-5p、Atg5、Atg12和Becn1 mRNA的表达情况;ELISA方法检测Atg5、Atg12和Becn1蛋白的表达水平。结果双荧光素酶检测结果证实Atg5、Atg12和Becn1为rno-miR-30b-5p调控的靶基因。免疫后12 d,EAU组大鼠眼底血管严重肿胀,病理学检测可见睫状体、视网膜内大量炎性细胞浸润。Q-PCR检测结果示,与正常对照组相比,免疫后12 d EAU组大鼠脾脏和淋巴结中rno-miR-30b-5p mRNA水平分别为0.46±0.01和0.29±0.17,均呈下调表达(均为P<0.01);Atg5、Atg12和Becn1 mRNA水平均呈上调表达,差异均有统计学意义(均为P<0.05)。ELISA检测结果示,EAU组大鼠脾脏和淋巴结中Atg5、Atg12和Becn1蛋白表达水平均明显高于正常对照组大鼠(均为P<0.05)。结论 rno-miR-30b-5p可调控Atg5、Atg12和Becn1的表达。在EAU大鼠脾脏和淋巴结中,rno-miR-30b-5p的下调表达使Atg5、Atg12和Becn1基因和蛋白的表达水平均明显升高,从而影响葡萄膜炎的发展进程。

胃癌组织miR-30b和HOXA1的表达及与临床病理特征的关系

目的探讨胃癌组织miR-30b和HOXA1表达及其与临床病理特征的关系。方法选择胃癌患者142例,实时荧光逆转录法及免疫组化法测定miR-30b及HOXA1在胃癌组织(胃癌组)及正常胃组织(癌旁组)中的表达水平,分析其与临床病理参数和预后的关系。结果胃癌组MiR-30bmRNA表达水平低于癌旁组,HOXA1mRNA表达水平高于癌旁组(P<0.01);胃癌组MiR-30b蛋白表达评分低于癌旁组,HOXA1蛋白表达评分高于癌旁组(P<0.01);胃癌组MiR-30b蛋白表达阳性率低于癌旁组、HOXA1蛋白表达阳性率高于癌旁组(P<0.01);MiR-30b、HOXA1蛋白表达与年龄相关性不明显(P>0.05);与TMN分期、病理学分级、复发、浸润深度、淋巴血管间隙浸润、肿瘤最大径、淋巴结转移相关性明显,且TMN分期越高、病理学分期越高、有复发、浸润深度越深、有淋巴血管间隙浸润、肿瘤最大径≥5cm、有淋巴结转移,MiR-30b蛋白阳性表达率越低、HOXA1蛋白阳性表达率越高(P<0.01);MiR-30b阳性组3年生存率及生存期均明显高于MiR-30b阴性组,HOXA1阴性组3年生存率及生存期均明显高于HOXA1阳性组(P<0.01)。结论胃癌组织MiR-30b表达降低,HOXA1表达增加;MiR-30b在胃癌的发生发展过程中起抑制作用,HOXA1起促进作用;MiR-30b高表达、HOXA1低表达的胃癌患者能获得较好的预后。

血清miR-103a、miR-30b、miR-29a相对表达量对帕金森病的诊断效能

目的评价血清miR-103a、miR-30b、miR-29a相对表达量在帕金森病中的诊断效能。方法采用RTPCR法检测90例帕金森病患者(观察组)及24例健康人(对照组)外周血清中miR-103a、miR-30b、miR-29a。采用受试者工作曲线法观察血清miR-103a、miR-30b、miR-29a用于诊断帕金森病的效能。结果观察组外周血清miR-103a、miR-30b、miR-29a相对表达量分别为1.12±0.10、1.57±0.37、1.23±0.09,对照组分别为0.43±0.03、0.97±0.07、0.51±0.04,观察组外周血清miR-103a、miR-30b、miR-29a相对表达量均高于对照组,P均<0.05。外周血清miR-103a诊断帕金森病的AUC为0.816,选择0.715为诊断阈值时约登指数最大,此时外周血清miR-103a诊断帕金森病的灵敏度为71.3%,特异度为83.9%。外周血清miR-30b诊断帕金森病的AUC为0.789,选择1.120为诊断阈值时约登指数最大,此时外周血清miR-30b诊断帕金森病的灵敏度为70.5%,特异度为84.6%。外周血清miR-29a诊断帕金森病的AUC为0.756,选择1.001为诊断阈值时约登指数最大,此时外周血清miR-29a诊断帕金森病的灵敏度为72.1%,特异度为80.8%。结论帕金森病患者外周血清miR-103a、miR-30b、miR-29a相对表达量升高。外周血清miR-103a、miR-30b、miR-29a相对表达量在帕金森疾病中的诊断效能好。

miR-30b靶向Beclin1参与慢性肾脏病血管钙化

目的 探究miR-30b在慢性肾脏病(CKD)大鼠血管钙化(VC)中的作用及miR-30b与自噬基因Beclin1的靶向关系。方法 将SD雄性大鼠随机分成对照组、模型组(CKD)、miR-30b组(CKD+miR-30b模拟物)和miR-30b阴性对照(NC)组(CKD+miR-30b NC)。使用全自动生化分析仪检测血清中血尿素氮(BUN)、血钙(Ca)、血磷(P)、血肌酐(Scr)的含量;苏木素-伊红(HE)染色观察肾组织和肾主动脉组织的病理学变化;茜素红染色观察主动脉钙化结节情况;使用试剂盒检测血管壁钙含量及碱性磷酸酶(ALP)水平;反转录荧光定量(qRT)-聚合酶链反应(PCR)检测主动脉miR-30b水平;Western印迹检测主动脉中Beclin1和LC3Ⅱ/Ⅰ蛋白相对表达水平;透射电镜观察血管平滑肌细胞(VSMC)中自噬小体的变化;双荧光素酶测定miR-30b与Beclin1的靶向关系。结果 与对照组相比,模型组肾小球萎缩,间质增宽,肾小管扩张严重,炎性细胞浸润严重,血清中BUN、Ca、P、Scr水平、主动脉钙含量及ALP水平显著升高(P<0.05),自噬小体数量、miR-30b相对表达水平及Beclin1、LC3Ⅱ/Ⅰ蛋白表达水平显著降低(P<0.05)。与模型组和miR-30b NC组相比,miR-30b组肾组织损伤明显减轻,血清中BUN、Ca、P、Scr水平、主动脉钙含量及ALP水平显著降低(P<0.05),细胞的自噬小体数量及Beclin1和LC3Ⅱ/Ⅰ蛋白表达水平显著升高(P<0.05)。结论 miR-30b可通过靶向Beclin1对CKD大鼠的血管钙化起到保护作用。

miR-30b在子宫内膜异位症中的表达及功能研究

目的检测miR-30b在子宫内膜异位症中的表达水平,并探究miR-30b对子宫内膜异位症的治疗作用。方法2018年7月至2020年7月在温州医科大学附属第二医院手术获取的27例子宫内膜异位症患者病理组织为子宫内膜异位症组,15例子宫肌瘤患者子宫内膜组织为正常子宫内膜组。实时定量PCR(qRT-PCR)检测组织中miR-30b的表达量。培养人原代子宫内膜间质细胞(HESCs),5-乙炔基-2′-脱氧尿苷掺入(EdU)法来检测miR-30b对细胞增殖能力的影响。根据starBase 2.0软件预测与miR-30b相互作用的长链非编码RNA(lncRNA),使用qRT-PCR初步验证该lncRNA在异位内膜中的表达量及与miR-30b的相互关系。进一步建造子宫内膜异位症SD大鼠模型,在活体实验水平,使用miR-30b的模拟物来验证miR-30b对子宫内膜异位症异位囊肿的治疗作用。结果与正常子宫内膜(EN)相比,miR-30b在子宫内膜异位症(EC)中的表达显著下降。miR-30b的外源性过表达抑制了HESCs的增殖能力,同时,下调miR-30b的表达量可促进HESCs的增殖能力。StarBase 2.0软件预测lncRNA OIP5-AS1与miR-30b有多个结合位点,与正常内膜比较,lncRNA OIP5-AS1在异位内膜中表达上调,且与miR-30b的表达量呈负相关。此外,在子宫内膜异位症的大鼠模型中,miR-30b模拟物显著抑制子宫内膜异位症异位囊肿的生长。结论miR-30b在异位子宫内膜中低表达且抑制HESCs的增殖能力,可能成为子宫内膜异位症潜在的治疗靶点。

血清miR-30b、miR-199a在新生儿缺氧缺血性脑病患儿中的表达及意义

目的探讨血清miR-30b、miR-199a在新生儿缺氧缺血性脑病(HIE)患儿中的表达及意义。方法选择2018年1月至2020年6月该院收治的HIE患儿90例,其中轻度组29例、中度组36例、重度组25例,选取同期在该院出生的足月健康新生儿30例作为对照组。比较各组血清miR-30b、miR-199a表达水平,以及神经功能和神经损伤指标水平。随访1年,根据预后分为预后良好组和预后不良组,分析影响HIE患儿预后的因素。结果随HIE病情的加重,患儿的血清miR-30b、miR-199a表达水平越低(P<0.05);预后不良组的血清miR-30b、miR-199a表达水平明显低于预后良好组(P<0.05)。miR-30b≥0.85、miR-199a≥1.25是HIE患儿不良预后的保护因素(P<0.05)。结论HIE患儿血清miR-30b、miR-199a表达异常降低,其表达水平与神经损伤程度和患儿预后相关,血清miR-30b≥0.85、miR-199a≥1.25是HIE患儿预后不良的保护因素。

miR-30b在高磷诱导的血管平滑肌细胞凋亡中的作用

目的 观察微小RNA30b(microRNA 30b, miR-30b)在高磷诱导的血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells, VSMCs)凋亡中的作用及机制。方法 体外培养大鼠胸主动脉VSMCs,分为正常组和高磷组(给予10 mmol/Lβ-甘油磷酸盐刺激)。采用实时荧光定量PCR检测各组VSMCs miR-30b表达、Western blot法测定促凋亡基因BAX、抑凋亡基因Bcl-2的表达情况,采用MTT法检测各组细胞的增殖情况、采用流式细胞法检测各组细胞的凋亡情况。为进一步验证miR-30b对VSMCs凋亡的影响,给与转染miR-30b的抑制物inhibitor-30b和类似物mimic-30b,观察VSMCs增殖和凋亡情况以及BAX、Bcl-2表达情况。结果 (1)高磷对VSMCs凋亡的影响:流式结果显示,高磷组VSMCs凋亡细胞显著增多(P<0.05);MTT结果显示,高磷组细胞增殖减少(P<0.05);高磷组BAX表达升高、Bcl-2表达降低(P<0.05);高磷组miR-30b的表达显著下降(P<0.05)。(2)miR-30b对VSMCs凋亡的影响:转染inhibitor-30b后VSMCs凋亡细胞显著增多(P<0.05);转染inhibitor-30b后MTT显示细胞增殖减少(P<0.05);转染inhibitor-30b后,BAX表达升高、Bcl-2表达降低(P<0.05);转染mimic-30b后VSMCs凋亡细胞显著减少(P<0.05);转染mimic-30b后,BAX表达降低、Bcl-2表达升高(P<0.05)。结论 高磷可以诱导细胞凋亡,其可能机制之一是高磷通过抑制miRNA-30b表达,进而促进凋亡基因BAX表达,降低抑凋亡基因Bcl-2表达,导致VSMCs发生凋亡。

心肌细胞特异性miR-30b转基因小鼠的建立及其功能研究

MicroRNAs(miRNAs)基因芯片结果显示,携带有MYH7基因突变的家族性肥厚性心肌病病人的心脏组织以及小鼠心力衰竭模型中miR-30b表达下调,提示miR-30b可能在心脏疾病发生发展过程中发挥了重要功能.为研究miR-30b在心脏组织中的功能,本实验室首先建立了在心肌细胞特异性启动子琢肌球蛋白重链(琢-MHC,5.5 kb)控制下过表达miR-30b的转基因小鼠.通过qRT-PCR方法,证实miR-30b表达水平在转基因小鼠心脏组织中明显升高(P<0.05).miR-30b转基因小鼠心重/体重比和左心室/体重比无明显变化,心肌组织结构未见异常.目前,关于miR-30b在心肌梗死中的功能及相关机制未见报道.本文通过冠状动脉左前降支结扎法建立心肌缺血再灌注(ischemia-reperfusion,I/R)模型,以假手术组作为对照组.生化检测结果及TTC-Evans blue双染结果显示,I/R损伤后,与野生型小鼠相比,转基因小鼠LDH、CK-MB和cTn玉浓度显著减小(P<0.05),并且心肌梗死面积明显减少(P<0.05).超声心动图检测结果显示,转基因小鼠心功能显著改善.由此得出结论:miR-30b对缺血再灌注损伤的心肌具有保护作用,该研究成果可能为预防和治疗心肌梗死提供新策略.

rno-miR-30b-5p对葡萄膜炎大鼠Notch1和Dll4基因表达的调控作用

目的探讨rno-miR-30b-5p对Notch1和Dll4基因表达的调控作用及其在实验性自身免疫性葡萄膜炎(experimental autoimmune uveitis,EAU)中的表达变化。方法应用双荧光素酶检测rno-miR-30b-5p对Notch1和Dll4基因表达的调控作用。6～8周龄健康Lewis大鼠12只,随机分为对照组和EAU模型组,EAU模型组大鼠建立EAU模型。于免疫后12 d分离大鼠的脾脏、淋巴结和眼组织,Q-PCR检测rno-miR-30b-5p、Notch1和Dll4基因的表达水平,ELISA检测Notch1和Dll4蛋白的表达变化;流式细胞仪检测两组大鼠脾脏和淋巴结中Th17和Treg细胞的表达水平。结果双荧光素酶检测结果表明,Notch1和Dll4为rno-miR-30b-5p调控的靶基因。Q-PCR分析结果显示,相比于正常对照组(1. 00),免疫后12 d,rno-miR-30b-5p基因在EAU模型组大鼠脾脏、淋巴结和眼组织中的相对表达水平分别为0. 41±0. 12、0. 37±0. 09和0. 25±0. 07,均呈显著下调表达,而Notch1和Dll4基因呈显著上调表达,且差异均有统计学意义(均为P <0. 05)。ELISA检测结果显示,免疫后12 d,EAU模型组大鼠脾脏、淋巴结和眼组织中Notch1和Dll4蛋白的表达水平均明显高于对照组(均为P <0. 05)。流式细胞仪检测结果显示,免疫后12 d,EAU模型组大鼠脾脏和淋巴结中Th17细胞因子的表达水平明显升高,而Treg细胞因子的表达水平明显降低。结论 rno-miR-30b-5p可负调控Notch1和Dll4基因的表达。在EAU模型大鼠的脾脏、淋巴结和眼组织中,rno-miR-30b-5p的下调表达可使Notch1和Dll4基因的表达水平显著升高,并使Th17/Treg比例发生紊乱,从而影响葡萄膜炎的发生发展。

miR-30b在三叉神经痛模型大鼠中的表达及作用

目的探讨miR-30b在三叉神经痛(TN)模型大鼠三叉神经节(TG)中发挥的作用。方法采用眶下神经缩窄术(ION-CCI)构建大鼠TN模型。用Von Frey毛刷检测大鼠的机械痛阈。通过qRT-PCR及Western blot检测术侧TG内miR-30b和激活转录因子3(ATF3)表达变化。经眶下孔分别向ION-CCI大鼠的TG内定位注射miR-30b的类似物(agomir)和agomir的阴性对照(agomir NC),检测大鼠的机械痛阈及干预后ATF3表达的变化。结果ION-CCI组大鼠在术后第2~28天出现机械痛阈的降低(P<0.05)。ION-CCI组较假手术组(Sham组)术后TG中miR-30b表达降低,ATF3表达升高(P<0.05)。ION-CCI组过表达miR-30b后,大鼠机械痛阈升高,TG中ATF3表达降低(P<0.05)。结论miR-30b参与调控TN的发生、发展,miR-30b可能是TN潜在的治疗靶点。

MiR-30b通过靶向CCL22调控人NK/T细胞淋巴瘤细胞株SNK-6和YTS顺铂耐受的研究

目的:探讨miR-30b对人NK/T细胞淋巴瘤(NKTCL)SNK-6和YTS细胞对顺铂耐受的调控及其作用机制。方法:培养正常NK细胞以及SNK-6和YTS细胞,应用real-time PCR法和Western blot分别检测miR-30b和巨噬细胞来源的趋化因子(CCL22)mRNA和蛋白的表达。以miR-30b过表达和miR-30b抑制剂分别转染SNK-6和YTS细胞,MTT法检测SNK-6和YTS细胞对顺铂耐受性的影响;caspase-3试剂盒检测caspase-3活性;流式细胞术检测细胞凋亡水平。双荧光素酶报告基因检测miR-30b与CCL22的靶向关系。Western blot法检测CCL22表达,评估CCL22对细胞耐受性和caspase-3活性的影响。结果:与正常NK细胞相比,SNK-6和YTS细胞中miR-30b表达均显著降低(P<0.01),CCL22 mRNA表达均显著升高(P<0.01)。miR-30b过表达可降低细胞活性,顺铂耐受性显著降低(P<0.05),细胞凋亡比例显著增高(P<0.05),Caspase-3活性增加(P<0.05)。miR-30b抑制剂作用与miR-30b过表达作用相反。荧光素酶活性分析显示,miR-30b过表达显著降低荧光素酶报告基因的荧光强度,而结合位点突变后荧光素酶活性不变,表明CCL22是miR-30b的直接靶分子。此外,miR-30b过表达显著降低CCL22表达(P<0.05)。而CCL22过表达可增加SNK-6细胞活性,降低Caspase-3活性,逆转miR-30b的作用,增加对顺铂的耐受性。结论:miR-30b可通过靶向CCL22抑制人NKTCL SNK-6和YTS细胞的顺铂耐受性。

miR-30b的生物学功能研究进展

miRNAs是一类由18~25个核苷酸组成的非编码RNA。这些核苷酸通过与目标信使RNA(mRNA)的3'或5'端非编码区域结合来实现对目标基因的调节。miRNAs可与目标mRNA结合促进其降解,进而抑制目标mRNA的翻译,是一种快速、灵敏的调节基因的机制[1]。miR-30家族是miRNAs重要成员之一,在实体肿瘤发生信号网络中发挥“中枢”作用,它的表达水平对肿瘤发生有着深远的影响[2]。miR-30家族成员包括miR-30a、-30b、-30c、-30d、-30e和-384-5p。在人类肿瘤中,miR-30b已被证实是一种在癌症发病机制中起着重要作用的肿瘤抑制基因,但在少数情况下发挥类似致癌基因的作用[3-4]。本文拟对miR-30b在肿瘤发生发展过程中的作用机制进行综述。

miR-30b的生物学功能研究进展

微小RNA(miRNAs)是一类细胞内源性表达的小分子非编码RNA,在转录后调控基因表达中起着重要作用。近年来,在乳腺癌、肺癌和胃癌等多种肿瘤中发现miR-30b表达下调,研究表明miR-30b可通过抑制肿瘤细胞增殖和侵袭。对于miR-30b调控的靶基因及相关信号通路的深入研究,有助于阐明肿瘤发生发展的分子机制,并有望为临床肿瘤治疗提供新的靶点。本文就miR-30b的靶基因在肿瘤中的生物学作用作一综述。