MiR-30c-2-3p对足细胞Nephrin、Podocin保护作用及雷公藤甲素干预作用研究

目的:探讨miR-30c-2-3p对小鼠足细胞Nephrin、Podocin保护作用及雷公藤甲素(TP)干预作用。方法:采用嘌呤霉素(PAN)致小鼠足细胞损伤的体外模型,将足细胞分成5组:空白组、转染阴性质粒组(阴性质粒组)、转染阴性质粒+PAN组(阴性质粒+PAN组)、转染miR-30c-2-3p+PAN组(阳性质粒+PAN组)、转染miR-30c-2-3p+PAN+TP组(阳性质粒+PAN+TP组)。瞬时转染miR-30c-2-3p mimics,质粒终浓度均为50 nmol/L,转染6 h后进行药物干预,PAN干预浓度均为45 mg/L,TP干预浓度均为1 ng/ml,药物干预时间均为48 h。CCK-8法检测足细胞活力;实时荧光定量PCR检测细胞中miR-30c-2-3p表达;Western Blot检测足细胞Nephrin、Podocin蛋白表达。结果:(1)阴性质粒+PAN组足细胞活力明显低于空白组及阴性质粒组(P<0.01),阳性质粒+PAN组较阴性质粒+PAN组足细胞活力提高(P<0.05),使用TP干预后其活力进一步提高(P<0.05)。(2)与空白组、阴性质粒组比较,阴性质粒+PAN组miR-30c-2-3p表达减少,差异有统计学意义(P<0.01);与阴性质粒+PAN组相比,阳性质粒+PAN组、阳性质粒+PAN+TP组miR-30c-2-3p表达均增加(P<0.05);但与阳性质粒+PAN组相比,雷公藤甲素干预组未见统计学意义(P>0.05)。(3)与空白组及阴性质粒组比较,阴性质粒+PAN组Nephrin、Podocin两者表达均减少,差异有统计学意义(P<0.01);与阴性质粒+PAN组相比,阳性质粒+PAN组Nephrin、Podocin蛋白表达增加(P<0.05);在使用了TP干预后两者表达进一步增加(P<0.05)。结论:PAN能降低足细胞活力,降低miR-30c-2-3p表达,而增加其表达可以上调足细胞活力以及Nephrin、Podocin的表达。TP可以减轻PAN诱导的足细胞损伤以及Nephrin、Podocin的表达下降,但其作用机制似乎与miR-30c-2-3p无关。

MiR-30c-2-3p对足细胞活力及Nephrin和Podocin蛋白表达的影响

目的探讨MiR-30c-2-3p对足细胞活力及Nephrin和Podocin蛋白的表达影响。方法采用嘌呤霉素(PAN)诱导的足细胞体外模型,将足细胞分成4组,即空白组、PAN组、阴性质粒+PAN组、阳性质粒+PAN组。通过LipofectamineTM2000瞬时转染MiR-30c-2-3p mimic。通过Cell Counting Kit-8(CCK-8)法检测细胞活力、实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测细胞中MiR-30c-2-3p表达、Western blot检测Nephrin和Podocin蛋白的表达。结果(1)CCK-8结果提示PAN组足细胞活力明显低于空白组,差异有高度统计学意义(P<0.01),阴性质粒+PAN组较PAN组差异无统计学意义(P>0.05),阳性质粒+PAN组足细胞活力与PAN组和阴性质粒+PAN组相比均有所提高,差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。(2)qRT-PCR显示PAN组MiR-30c-2-3p的表达较空白组明显下降,差异有高度统计学意义(P<0.01);阴性质粒+PAN组较PAN组表达差异无统计学意义(P>0.05),而阳性质粒+PAN组MiR-30c-2-3p的表达较PAN组和阴性质粒+PAN组均提高,差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。(3)Western blot提示PAN组Nephrin和Podocin蛋白的表达较空白组明显下降,差异有高度统计学意义(P<0.01);与PAN组相比,阴性质粒+PAN组两者蛋白的表达差异无统计学意义(P>0.05),而阳性质粒+PAN组Nephrin和Podocin蛋白的表达较单纯PAN组和阴性质粒+PAN组均增加,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 PAN对足细胞的活力,MiR-30c-2-3p含量及Nephrin和Podocin蛋白的表达有抑制作用,而通过外源性增加MiR-30c-2-3p表达后可提高足细胞的活力,同时可增加Nephrin和Podocin蛋白的表达。

miR-30c-2-3p靶向MPO介导高糖诱导的肾小球系膜细胞凋亡及炎性反应

目的探讨miR-30c-2-3p对高糖诱导的肾小球系膜细胞凋亡及炎性反应的影响及其机制。方法用终浓度为30 mmol/L的高糖溶液刺激细胞作为高糖组(HG),同时以终浓度为5 mmol/L的糖溶液处理细胞作为对照组(NG);设置miR-NC组、miR-30c-2-3p组、anti-miR-NC组、anti-miR-30c-2-3p组、HG+miR-NC组、HG+miR-30c-2-3p组、HG+miR-30c-2-3p+pcDNA3.1组、HG+miR-30c-2-3p+pcDNA3.1-MPO组,转染均采用脂质体法。qRT-PCR检测miR-30c-2-3p的表达水平;Western Blot检测蛋白表达;流式细胞术检测细胞凋亡;ELISA法检测TNF-α和IL-6的表达;双荧光素酶报告基因检测实验检测荧光活性。结果高糖可以抑制miR-30c-2-3p的表达(P<0.05);过表达miR-30c-2-3p表达可抑制高糖作用的细胞HMC凋亡,抑制IL-6、TNF-α的表达(P<0.05)。miR-30c-2-3p靶向调控MPO的表达,过表达MPO能逆转miR-30c-2-3p过表达对高糖作用的HMC细胞凋亡及IL-6、TNF-α表达的抑制作用(P<0.05)。结论miR-30c-2-3p能抑制高糖作用的HMC细胞凋亡,其机制主要是下调MPO及炎性因子IL-6、TNF-α的表达。可为糖尿病肾病的治疗提供新思路和新靶点。

血清miR-30c-2-3p与卵巢癌组织内质网应激相关蛋白表达及患者预后的相关性

目的:分析血清miR-30c-2-3p与卵巢癌(OC)组织内质网应激(ERS)相关蛋白表达、患者临床特征及预后的关系。方法:招募2018年1月至2020年12月期间70例于我院接受治疗的OC患者(OC组),并纳入同期100例健康志愿者作为对照组。采用蛋白质印迹法分析OC组织C/EBP同源蛋白(CHOP)、葡萄糖调节蛋白78(BIP)的表达情况。使用定量实时聚合酶链反应检测血清miR-30c-2-3p表达。随访记录患者的无病生存期(DFS)。结果:OC组患者基线血清miR-30c-2-3p表达显著低于对照组受试者(0.77±0.25 vs.1.15±0.39,t=7.869,P<0.001)。经受试者工作特征曲线分析,基线血清miR-30c-2-3p表达诊断OC的曲线下面积为0.785(95%CI 0.718~0.852)。基线血清miR-30c-2-3p表达≤0.703的患者FIGO分期Ⅲ~Ⅳ期概率更大,肿瘤直径也更大(P<0.05)。基线血清miR-30c-2-3p表达水平与OC组织CHOP表达呈正相关(r=0.483,P<0.001),与BIP表达呈显著负相关(r=-0.240,P=0.045)。经多元线性回归分析,OC组织中CHOP(t=4.080,P<0.001)、BIP(t=-2.048,P=0.045)都是影响基线血清miR-30c-2-3p表达水平的独立因子。绘制Kaplan-Meier生存曲线,基线血清miR-30c-2-3p低表达OC患者中位DFS显著短于高表达者(χ^(2)=7.515,P=0.006)。经多因素COX回归分析显示,基线血清miR-30c-2-3p低表达为OC患者术后复发的独立临床因素(OR=0.399,95%CI 0.201~0.791,P=0.009)。结论:血清miR-30c-2-3p在OC患者中多呈低表达,并可能通过调节ERS影响患者预后。因此,血清miR-30c-2-3p表达对OC患者术后复发具有预测价值。

miR-29c-3p调控ERLIN2抑制肺腺癌发展的作用

目的:探讨miR-29c-3p在肺腺癌(lung adenocarcinoma,LUAD)发生发展中的作用。方法:利用公共数据库分析miR-29c-3p和ERLIN2在肺腺癌中的表达及其与临床病理参数的相关性。采用qRT-PCR检测miR-29c-3p在LUAD细胞系和正常支气管上皮细胞系中的表达,CCK8、细胞克隆形成、Transwell和伤口愈合实验评估miR-29c-3p在细胞增殖、迁移和侵袭中的作用,利用生物信息学工具预测miR-29c-3p下游靶基因,并通过双荧光素酶报告基因分析验证靶向关系。结果:miR-29c-3p在肺腺癌组织和细胞中低表达。miR-29c-3p低表达患者的预后较差,miR-29c-3p是肺腺癌患者的独立预后因素,并与淋巴结转移状态和临床分期密切相关。细胞实验表明,抑制miR-29c-3p可促进A549细胞的增殖、迁移和侵袭。生物信息学分析表明,ERLIN2是miR-29c-3p的靶基因,二者表达呈负相关。通过双荧光素酶报告基因测定验证了上述靶向关系。在UALCAN数据库中,ERLIN2在肺腺癌组织中高表达,并与患者年龄、性别、吸烟、肿瘤分期、淋巴结转移和TP53突变状态密切相关,ERLIN2高表达患者总生存率低于低表达患者。结论:miR-29c-3p通过靶向ERLIN2抑制肺腺癌细胞的增殖、迁移和侵袭,是肺腺癌患者的独立预后因素。

Circ-SMG6调节miR-132-3p/BTG2轴对缺氧/复氧诱导心肌细胞损伤的影响

目的探讨Circ-SMG6对缺氧/复氧诱导的心肌细胞损伤的影响及对miR-132-3p/BTG2轴的调节作用。方法心肌H9c2细胞分为:NC组(不做任何处理)、缺氧/复氧组、缺氧/复氧+si-NC组、缺氧/复氧+si-CircSMG6组、缺氧/复氧+si-Circ-SMG6+anti-NC组、缺氧/复氧+si-Circ-SMG6+anti-miR-132-3p组。RT-qPCR检测miR-132-3p、Circ-SMG6表达;Western blot检测BTG2、Bcl-2、Bax、cleaved-Caspase-3蛋白水平;ELISA法检测SOD、MDA以及IL-1β、IL-6、TNF-α水平CCK8法测定心肌细胞增殖;流式细胞术检测心肌细胞凋亡;双荧光素酶验证Circ-SMG6与miR-132-3p,miR-132-3p与BTG2靶向关系。结果与NC组相比,缺氧/复氧组、缺氧/复氧+si-NC组BTG2 mRNA及蛋白、Circ-SMG6水平、MDA、IL-1β、IL-6、TNF-α含量、凋亡率及Bax、cleavedCaspase-3蛋白水平显著增加(P<0.01),miR-132-3p水平、SOD含量、72 h的细胞活力、Bcl-2蛋白水平显著降低(P<0.01)。与缺氧/复氧组相比,缺氧/复氧+si-Circ-SMG6组BTG2蛋白、Circ-SMG6水平、MDA、IL-1β、IL-6、TNF-α含量、凋亡率及Bax、cleaved-Caspase-3蛋白水平显著降低(P<0.01),miR-132-3p水平、SOD含量、72 h的细胞活力、Bcl-2蛋白水平显著增加(P<0.01)。与缺氧/复氧+si-Circ-SMG6组相比,缺氧/复氧+si-Circ-SMG6+antimiR-132-3p组BTG2蛋白、MDA、IL-1β、IL-6、TNF-α含量、凋亡率及Bax、cleaved-Caspase-3蛋白水平显著增加(P<0.01),miR-132-3p水平、SOD含量、72 h的细胞活力、Bcl-2蛋白水平显著下降(P<0.01)。结论敲低CircSMG6可能通过调节miR-132-3p/BTG2轴减轻缺氧/复氧诱导的心肌细胞损伤。

miR-1-3p通过调控STC2抑制人食管鳞状细胞癌细胞的恶性生物学行为

目的探讨miR-1-3p对人食管鳞状细胞癌(ESCC)细胞的恶性生物学行为的影响及其可能的作用机制。方法利用基因表达数据库(GEO)筛选ESCC中差异表达的miRNA。采用qRT-PCR检测人ESCC细胞KYSE30、KYSE150、KYSE410、KYSE510和Eca109及正常食管上皮细胞HET-1A中miR-1-3p的表达水平。CCK-8试剂盒、划痕愈合和Transwell实验以及流式细胞术分别检测转染miR-1-3p mimic对ESCC细胞增殖、迁移和侵袭、凋亡能力的影响。使用生物信息学工具预测miR-1-3p的靶基因,Kaplan-Meier法分析癌症基因组图谱(TCGA)数据库中STC2表达水平与患者预后的关系。采用FISH检测miR-1-3p的亚细胞定位,双荧光素酶报告基因验证miR-1-3p与STC2的靶向关系。RNA免疫沉淀(RIP)实验检测miR-1-3phe STC2的结合。Western blot法检测转染miR-1-3p mimic对ESCC细胞中STC2及内质网应激相关蛋白p-PERK、p-eIF2α、ATF4表达水平的影响。CCK-8、划痕愈合、Transwell实验和流式细胞术分别检测过表达和敲低STC2对ESCC细胞增殖、迁移、侵袭和凋亡能力的影响。结果ESCC细胞中miR-1-3p的表达水平均低于HET-1A细胞(均P<0.05),转染miR-1-3p mimic可抑制ESCC细胞增殖、迁移和侵袭能力(均P<0.05),促进ESCC细胞凋亡(均P<0.001)。生物信息学工具预测miR-1-3p的靶基因为STC2,ESCC组织中STC2的表达水平高于正常食管上皮组织,与预后呈负相关(均P<0.05)。miR-1-3p位于胞质,并可直接与STC2 mRNA结合。转染miR-1-3p mimic可下调STC2、p-PERK、p-eIF2α、ATF4蛋白的表达水平(均P<0.05)。过表达STC2可促进ESCC细胞增殖、迁移和侵袭能力(均P<0.05),抑制ESCC细胞凋亡(均P<0.05)。敲低STC2可抑制ESCC细胞增殖、迁移和侵袭能力(均P<0.05),促进ESCC细胞凋亡(均P<0.05)。结论miR-1-3p通过靶向调控STC2抑制ESCC细胞的恶性生物学行为,促进ESCC细胞凋亡,可能是通过抑制内质网应激发挥作用。

miR-93-5p通过PI3K/AKT通路调控HepG2细胞自噬

目的:探究miR-93-5p对HepG2细胞增殖、自噬、葡萄糖消耗以及磷脂酰肌醇3-激酶(phosphatidylinositol 3-kinases,PI3K)/蛋白激酶B(protein kinase B,AKT)通路的影响。方法:高浓度葡萄糖诱导构建胰岛素抵抗(insulin resistance,IR)细胞模型,设计合成miR-93-5p inhibitor和NC,结合自噬抑制剂3-MA,将细胞分为Control组、IR组、IR+inhibitor NC组、IR+inhibitor组、IR+3-MA+inhibitor组。CCK8法检测各组细胞增殖活力,试剂盒检测各组细胞葡萄糖消耗量和细胞糖原合成情况,Western-Blot法检测细胞自噬基因微管相关蛋白1轻链3(autophagy genes microtubule-associated protein 1 light chain 3,LC3)-I、LC3-II、肝细胞生长因子(hepatocyte growth factor,HGF)蛋白、PI3K/AKT通路蛋白(AKT、p-AKT)的表达。结果:与对照组相比,IR组细胞增殖活力、葡萄糖消耗量和细胞糖原合成量、HGF蛋白、LC3-II蛋白表达下降(P<0.01),LC3-I蛋白和p-AKT/AKT值表达均增加(P<0.01)。与IR组和IR+inhibitor NC组相比,IR+inhibitor组细胞增殖活力、葡萄糖消耗量和细胞糖原合成量、HGF蛋白、LC3-II蛋白表达增加(P<0.01),LC3-I蛋白和p-AKT/AKT值表达均下降(P<0.01)。与IR+inhibitor组相比,3-MA能逆转miR-93-5p inhibitor的作用。结论:miR-93-5p通过PI3K/AKT通路促进HepG2细胞自噬,进而抑制胰岛素抵抗,缓解糖尿病造成的机体损伤。

miR-506-3p、sST2和CEA在恶性胸腔积液患者中表达水平及诊断价值分析

目的分析miR-506-3p、可溶性生长刺激表达基因2蛋白(sST2)和癌胚抗原(CEA)在恶性胸腔积液患者中表达水平及其诊断价值。方法选取108例胸腔积液患者作为研究组,根据超声检查及病理检查结果,将32例结核性胸腔积液患者纳入结核性组,41例癌性胸腔积液患者和35例淋巴瘤性胸腔积液患者纳入恶性组。另随机抽取54例本院健康体检者纳入对照组。比较研究组患者及对照组健康体检者的血清sST2、CEA水平;比较恶性组与结核性组患者胸水miR-506-3p、sST2和CEA水平。采用ROC分析各指标对恶性胸腔积液的诊断价值。结果血清sST2和CEA水平,恶性组>结核性组>对照组(P<0.05)。与结核性组比较,恶性组胸水miR-506-3p水平降低(P<0.05),而sST2和CEA水平升高(P<0.05)。ROC结果显示,血清sST2、CEA及胸水miR-506-3p、sST2、CEA对恶性胸腔积液均具有诊断价值,且联合诊断的灵敏度最高。结论在恶性胸腔积液患者中,胸水miR-506-3p低表达,而血清和胸水sST2、CEA高表达;对恶性胸腔积液具有一定诊断价值,且联合诊断的灵敏度最高。

MicroRNA-330通过靶向SPATS2/c-myc/p21通路调控乳腺癌的增殖

本研究旨在是深入了解微RNA-330(miR-330)在乳腺癌病理下的作用途径,尤其是它如何影响SPATS2/c-myc/p21的通路从而控制乳腺癌的生长,以及miR-330-3p在癌细胞侵入功能上的影响。方法 创建乳腺癌细胞模型,采集了乳腺癌组织样本,并从其中提取了miR-330的表达水平进行数据分析。转染miR-330及其相关质粒,然后检测SPATS2/c-myc/p21通路中相关蛋白的表达,进一步开展了肿瘤增长的试验。考虑到miR-330-3p对癌细胞渗透能力的潜在影响,使用了95D和95C的癌细胞系,对miR-330-3p mimics和inhibitor进行了转染处理,进而检查了细胞的形态特征,并执行了Transwell的细胞侵袭试验,同时也对这些试验结果进行了对比分析。结果 根据研究,miR-330的呈现程度与乳腺癌的差异、大小、其淋巴细胞转移、远处转移以及T分期等方面的临床和病变特点有着显著的关联性。miR-330-3p mimics的研究结果揭示,95D细胞系的细胞浸润能力有所减弱,而miR-330-3p inhibitor对95C细胞系的细胞浸润能力产生了明显的增强效果。这暗示了miR-330-3时p在癌细胞的侵入及其扩散中有潜力扮演关键角色。结论 miR-330主要是利用SPATS2/c-myc/p21这一通道来调节乳腺癌的增长,但miR-330-3p很可能会显著影响癌细胞的渗透性能。因此,miR-330-3p预计将会是未来乳腺癌治疗研究以及临床实际应用中值得关注的潜在治疗目标。

miR-223-3p与ECT2表达在食管鳞状细胞癌组织中的相关性及与其预后的关系

目的探讨miR-223-3p与ECT2表达在食管鳞状细胞癌中的相关性及与其预后的关系。方法纳入85例食管鳞状细胞癌的石蜡包埋食管鳞状细胞癌组织、相应的正常食管黏膜组织。实时荧光定量PCR检测miR-223-3p与ECT2 mRNA水平,Pearson相关系数分析miR-223-3p与ECT2 mRNA表达水平的相关性。Kaplan-Meier生存分析和Cox比例风险模型分析miR-223-3p、ECT2表达对食管鳞状细胞癌预后的影响。结果ECT2高表达食管鳞状细胞癌患者46例,ECT2低表达食管鳞状细胞癌患者39例。ECT2 mRNA表达水平食管鳞状细胞癌组织高于正常食管黏膜组织,miR-223-3p表达水平食管鳞状细胞癌组织低于正常食管黏膜组织。ECT2表达水平与肿瘤大小、分化程度、TNM分期、血管侵犯相关。miR-223-3p表达水平与肿瘤大小、分化程度、TNM分期、血管侵犯相关。此外,食管鳞状细胞癌中miR-223-3p与ECT2 mRNA表达存在相关性(ρ=-0.5223,P<0.0001),miR-223-3p与ECT2蛋白表达存在相关性(χ^(2)=21.56,P<0.0001)。Kaplan-Meier生存分析显示:TNM分期、淋巴结转移、神经侵犯、miR-223-3p表达水平、ECT2表达水平对食管鳞状细胞癌患者的总生存期有影响。Cox比例风险模型发现TNM分期、淋巴结转移、神经侵犯、miR-223-3p表达水平、ECT2表达水平对总生存期有影响。结论miR-223-3p与ECT2的表达水平在食管鳞状细胞癌中存在相关性。TNM分期、淋巴结转移、神经侵犯、miR-223-3p表达水平、ECT2表达水平可作为ESCC的独立预后因素。

糖肾地黄汤通过调控lncRNA-ARAP1/miR-25-3p/SGLT2轴延缓糖尿病肾病进展的机制研究

目的 探究糖肾地黄汤通过调控lncRNA-ARAP1/miR-25-3p/SGLT2轴延缓糖尿病肾病进展的机制。方法 用小鼠单侧肾切除+腹腔注射链脲佐菌素(Streptozotocin, STZ)诱导糖尿病肾病(Diabetic nephropathy, DN)模型,选择糖尿病肾病小鼠模型组共45只小鼠,雌性CBA/J 30只,雄性DBA/2 15只,另选正常健康小鼠10只作为正常对照组。将造模的糖尿病肾病小鼠分为模型组、糖肾地黄汤高剂量组(TSDHDHD组)、糖肾地黄汤中剂量组(TSDHDMD组)、糖肾地黄汤低剂量组(TSDHDLD组),每组10只。HE染色检测小鼠的病理学变化,应用全自动生化分析仪对所获得小鼠血清空腹血糖(Fasting blood glucose, FBG),甘油三酯(Triglyceride, TG),胆固醇(Cholesterol, TC)水平,RT-PCR法分析ARAP1、miR-25-3p、SGLT2、Bax/Bcl-2mRNA的表达,免疫印迹法(Westernblot, Wb)分析ARAP1、miR-25-3p、SGLT2、Bax/Bcl-2的蛋白表达。采用SPSS 23.0统计软件。结果 对照组中细胞排列致密整齐、完整,存在少量脂肪细胞(P>0.05);与对照组比较,模型组细胞结构较为散乱,且由稀疏变细,近端脂肪细胞数目增多,差异存在统计学意义(P<0.05);相比模型组,各剂量组糖肾地黄汤脂肪细胞数目下降,比较存在统计学差异(P<0.05)。与对照组相比,模型组、不同剂量糖肾地黄汤组油红O染色镜下IOD表达明显升高(P<0.05);与模型组相比,不同剂量糖肾地黄汤组油红O染色镜下IOD表达降低(P<0.05);与中、低剂量糖肾地黄汤组相比,高剂量糖肾地黄汤组油红O染色镜下IOD表达降低(P<0.05)。治疗前与对照组相比,模型组、不同剂量糖肾地黄汤组模型组FBG水平升高(P<0.05),模型组与不同剂量糖肾地黄汤组相比无统计学差异(P>0.05);与治疗前相比,治疗12周后不同剂量糖肾地黄汤组模型组FBG水平均降低(P<0.05)。与对照组相比,模型组、不同剂量糖肾地黄汤组TG、TC水平明显升高(P<0.05);与模型组相比,不同剂量糖肾地黄汤组TG、TC水平降低(P<0.05);与中、低剂量糖肾地黄汤组相比,高剂量糖肾地黄汤组TG、TC水平降低(P<0.05)。与对照组相比,模型组、不同剂量糖肾地黄汤组ARAP1、miR-25-3p、SGLT2mRNA水平明显升高,Bax/Bcl-2mRNA水平明显降低(P<0.05);与模型组相比,不同剂量糖肾地黄汤组ARAP1、miR-25-3p、SGLT2mRNA水平降低,Bax/Bcl-2mRNA水平明显升高(P<0.05);与中、低剂量糖肾地黄汤组相比,高剂量糖肾地黄汤组ARAP1、miR-25-3p、SGLT2mRNA水平降低,Bax/Bcl-2mRNA水平明显升高(P<0.05)。与对照组相比,模型组、不同剂量糖肾地黄汤组ARAP1、miR-25-3p、SGLT2蛋白表达明显升高,Bax/Bcl-2蛋白表达明显降低(P<0.05);与模型组相比,不同剂量糖肾地黄汤组ARAP1、miR-25-3p、SGLT2水平降低,Bax/Bcl-2蛋白表达明显升高(P<0.05);与中、低剂量糖肾地黄汤组相比,高剂量糖肾地黄汤组ARAP1、miR-25-3p、SGLT2蛋白表达降低,Bax/Bcl-2蛋白表达明显升高(P<0.05)。结论 糖肾地黄汤可能通过调节lncRNA-ARAP1/miR-25-3p/SGLT2轴,从而达到延缓糖尿病肾病进展的目的。

miR-223-3p通过靶向TGFBR3促进LncRNA ADAMTS9-AS2表达上调抑制肺癌细胞的增殖和迁移作用

目的:探讨miR-223-3p通过靶向转化生长因子-βⅢ型受体(TGFBR3)促进长链非编码RNA(LncRNA)ADAMTS9-AS2表达上调抑制肺癌细胞增殖和迁移的作用及可能机制。方法:采用RT-PCR检测肺癌H1299细胞中miR-223-3p和TGFBR3 mRNA表达水平,Western blotting检测TGFBR3的蛋白表达水平,RT-qPCR检测LncRNA ADAMTS9-AS2的表达水平,CCK-8检测细胞增殖能力,Transwell细胞迁移实验和划痕实验检测细胞迁移能力。采用脂质体转染miR-223-3p模拟物(过表达组)、抑制剂(抑制组)、对照质粒(对照组)于H1299细胞中,比较各组转染前后miR-223-3p、TGFBR3、LncRNA ADAMTS9-AS2表达水平、细胞增殖能力、细胞迁移能力。结果:与转染前比较,过表达组转染后的H1299细胞中miR-223-3p、LncRNA ADAMTS9-AS2表达水平均升高(P<0.05),TGFBR3蛋白和mRNA表达水平均降低(P<0.01和P<0.05),细胞增殖和迁移能力下降(P<0.05);抑制组转染后的细胞中miR-223-3p和LncRNA ADAMTS9-AS2表达水平均降低(P<0.05),TGFBR3蛋白和mRNA表达水平均升高(P<0.01和P<0.05),细胞增殖和迁移能力均增加(P<0.05)。转染72 h后,TGFBR3蛋白表达水平及mRNA的表达水平细胞增殖与迁移能力:抑制组>观察组>过表达组(P<0.01)。3组miR-223-3p、LncRNA ADAMTS9-AS2 mRNA表达水平逐渐降低,抑制组<对照组<过表达组(P<0.01)。结论:miR-223-3p抑制肺癌H1299细胞的增殖和迁移,靶向下调TGFBR3和上调LncRNA ADAMTS9-AS2表达可能为其作用机制。

miR-483-3p靶向调节AT2R/AKT/NO通路对甲状腺功能亢进症大鼠心血管损伤的影响

目的:探讨miR-483-3p通过调节血管紧张素2型受体/蛋白激酶B/一氧化氮(AT2R/AKT/NO)通路对甲状腺功能亢进症大鼠心血管损伤的影响。方法:将大鼠分为5组,即对照组、模型组、miR-483-3p mimics mock组、miR-483-3p mimics组和miR-483-3p mimics+PD123319组,每组10只。除对照组外,其余各组大鼠均通过皮下注射280μg/kg左旋甲状腺素钠制备甲状腺功能亢进症模型,造模成功后,miR-483-3p mimics mock组、miR-483-3p mimics组分别给予尾静脉注射miR-483-3p mimics mock、miR-483-3p mimics;miR-483-3p mimics+PD123319组尾静脉注射miR-483-3p mimics和3 mg/kg AT2R拮抗剂PD123319;对照组注射等量的生理盐水,连续7 d。酶联免疫吸附实验(ELISA)检测血清中三碘甲状腺原氨酸(T_(3))、甲状腺素(T_(4))、游离三碘甲状腺原氨酸(FT_(3))、游离甲状腺素(FT_(4))、促甲状腺素(TSH)以及白细胞介素(IL)-2、IL-10、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、IL-6水平;硝酸还原酶法检测血清中NO水平;血糖仪检测大鼠空腹血糖(FBG)含量;全自动电化学发光分析仪检测胰岛素(FINS)含量,并计算胰岛素抵抗指数(IRI)值;苏木精-伊红染色观察心血管病理损伤;TdT介导的缺口末端标记法(TUNEL)检测心肌细胞凋亡;实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测心脏组织中miR-483-3p水平;蛋白免疫印迹法检测AT2R、AKT、磷酸化AKT(p-AKT)、内皮型一氧化氮合酶(eNOS)、磷酸化eNOS(p-eNOS)水平。结果:与对照组比较,模型组大鼠心脏组织中miR-483-3p表达明显下调(P<0.05),血清中T_(3)、T_(4)、FT_(3)、FT_(4)、FBG水平、IRI值、IL-2/IL-10、TNF-α/IL-6及心肌细胞凋亡率均明显升高(P<0.05),TSH、NO水平及心脏组织中AT2R蛋白水平、p-AKT/AKT、p-eNOS/eNOS明显降低(P<0.05),心血管炎性损伤加重。miR-483-3p过表达可使上述各项指标均得到逆转,炎性损伤得到改善(P<0.05)。与miR-483-3p mimics组相比,miR-483-3p mimics+PD123319组大鼠心血管损伤加重,血清中T_(3)、T_(4)、FT_(3)、FT_(4)、FBG水平、IRI值、IL-2/IL-10、TNF-α/IL-6及心肌细胞凋亡率明显升高(P<0.05),TSH、NO、AT2R蛋白水平以及p-AKT/AKT、p-eNOS/eNOS明显降低(P<0.05)。结论:miR-483-3p可通过激活AT2R/AKT/NO通路,改善甲状腺功能亢进症大鼠心血管损伤。

circFOXK2靶向miR-409-3p调控肺癌细胞的增殖、迁移及侵袭

目的 探讨circFOXK2对肺癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响及可能机制。方法 收集45例肺癌患者的癌组织和癌旁组织,采用qRT-PCR法检测组织中circFOXK2和miR-409-3p表达。体外培养肺癌细胞A549和H1299,双荧光素酶报告基因实验验证circFOXK2和miR-409-3p的调控关系。转染circFOXK2小干扰RNA、miR-409-3p模拟物、或共转染circFOXK2小干扰RNA与miR-409-3p抑制剂至A549和H1299细胞。细胞增殖、迁移和侵袭用CCK-8法、克隆形成实验和Transwell分析。蛋白质印迹法检测细胞中E-cadherin和N-cadherin蛋白表达。结果 肺癌组织中circFOXK2水平明显上升(P<0.05),而miR-409-3p水平明显下降(P<0.05)。circFOXK2在A549和H1299细胞中靶向结合并负调控miR-409-3p。敲减circFOXK2或过表达miR-409-3p后,肺癌细胞增殖、迁移和侵袭能力显著下降(均P<0.05),N-cadherin水平降低(P<0.05),而E-cadherin水平上升(P<0.05)。circFOXK2敲低对A549和H1299细胞增殖、迁移和侵袭的抑制作用可以被miR-409-3p抑制剂逆转。结论 circFOXK2在肺癌中表达升高,其通过靶向miR-409-3p促进肺癌细胞增殖、迁移和侵袭。

lncRNA PSMA3-AS1调节miR-142-3p/HMGA2轴对卵巢癌恶性进展的影响

目的:探讨lncRNA PSMA3-AS1通过调节miR-142-3p/HMGA2轴对卵巢癌恶性进展的影响及其机制。方法:选择2019年3月至2022年7月期间在本院确诊的53例卵巢癌患者作为研究对象,收集患者卵巢癌组织及癌旁组织。体外培养人正常卵巢细胞HOSEpiC和卵巢癌细胞系SKOV3、OVCAR3、A2780、COV362,RT-qPCR检测卵巢癌细胞中lncRNA PSMA3-AS1表达,筛选最佳干预细胞系。双荧光素酶报告基因实验验证lncRNA PSMA3-AS1、HMGA2与miR-142-3p的靶向关系;将SKOV3细胞分为si-NC组、si-PSMA3-AS1组、si-PSMA3-AS1+anti-miR-NC组、si-PSMA3-AS1+anti-miR-142-3p组、miR-NC组、miR-142-3p mimics组、miR-142-3p mimics+pcDNA组、miR-142-3p mimics+HMGA2组,检测细胞增殖、凋亡、迁移、侵袭;Western blot检测Ki67、Cyclin D1、Bcl-2、cleaved caspase 3、HMGA2蛋白表达;小鼠移植瘤实验验证lncRNA PSMA3-AS1对卵巢癌肿瘤生长的影响。结果:与癌旁组织比较,卵巢癌组织中lncRNA PSMA3-AS1和HMGA2表达升高,miR-142-3p表达降低(P<0.05);lncRNA PSMA3-AS1和HMGA2在SKOV3细胞中表达水平最高,miR-142-3p在SKOV3细胞中表达水平最低;下拉实验和双荧光素酶报告显示,lncRNA PSMA3-AS1、HMGA2与miR-142-3p存在靶向关系;敲低lncRNA PSMA3-AS1或过表达miR-142-3p后,细胞OD值、细胞克隆数、划痕愈合率、细胞侵袭数及Ki67、Cyclin D1、Bcl-2、HMGA2表达显著降低,细胞凋亡率、cleaved caspase 3表达显著增加(P<0.05);抑制miR-142-3p表达或过表达HMGA2可逆转敲低lncRNA PSMA3-AS1或过表达miR-142-3p对卵巢癌细胞恶性行为的抑制作用;体内实验表明,敲低lncRNA PSMA3-AS1表达可抑制小鼠肿瘤生长。结论:lncRNA PSMA3-AS1在卵巢癌中高表达,敲低lncRNA PSMA3-AS1可调节miR-142-3p/HMGA2轴抑制卵巢癌恶性发展。

膀胱癌病人血清miR-143-3p、ATG2B水平与临床病理及预后生存的关系

目的探讨miR-143-3p、ATG2B在膀胱癌病人血清中的表达及其与临床病理和病人预后的关系。方法2017年1月~2019年1月在我院进行膀胱癌根治术的病人88例为研究组,本院行健康体检的志愿者80例为对照组。实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测病人术前、术后4周静脉血miR-143-3p、ATG2B水平;pearson分析二者的相关性。通过受试者工作特征(ROC)曲线评估miR-143-3p、ATG2B对膀胱癌的预测价值。用Kaplan-Meier法绘制生存曲线;通过多因素Cox回归分析膀胱癌根治术病人预后的影响因素。结果miR-143-3p在膀胱癌病人血清中表达水平较对照组降低(0.68±0.12 vs.0.87±0.26),ATG2B表达水平升高(1.02±0.30 vs.0.61±0.18),差异有统计学意义(P<0.05);病人术后血清中miR-143-3p水平较术前升高(0.77±0.23 vs.0.68±0.12),ATG2B水平较术前降低(0.85±0.26 vs.1.02±0.30),差异有统计学意义(P<0.05);研究组miR-143-3p与ATG2B表达呈负相关(r=-0.454,r=-0.407,P<0.01);miR-143-3p对膀胱癌的诊断AUC为0.846(95%CI:0.783~0.897),敏感度、特异度分别为79.55%、78.75%;ATG2B对膀胱癌诊断AUC为0.883(95%CI:0.824~0.927),敏感度、特异度分别为78.41%、81.25%;二者联合诊断膀胱癌的AUC为0.939(95%CI:0.891~0.970),敏感度、特异度分别为87.50%、88.75%。miR-143-3p低表达组3年生存率(34.88%,15/43)低于高表达组(77.78%,35/45),ATG2B高表达组3年生存率(40.91%,18/44)低于低表达组(72.73%,32/44),差异有统计学意义(Log-rankχ^(2)=18.055,8.658,P=0.000,0.003)。多因素Cox回归分析表明,淋巴结转移、远处转移、肿瘤病理分级、TNM分期、miR-143-3p、ATG2B是膀胱癌病人生存状况的影响因素。结论膀胱癌病人血清中miR-143-3p呈低表达,ATG2B呈高表达,二者表达与膀胱癌病人临床病理特征和预后密切相关。

GAS6-AS1调节miR-370-3p/SPATA2轴对卵巢癌细胞增殖、迁移、侵袭、凋亡和EMT的影响

目的:探讨长链非编码RNA GAS6反义RNA1(long non-coding RNA GAS6 antisense RNA1, lncRNA GAS6-AS1)调节miR-370-3p/精子发生相关蛋白2 (spermatogenesis-associated protein 2, SPATA2)轴对卵巢癌细胞增殖、迁移、侵袭、凋亡和上皮间质转化(epithelial mesenchymal transformation, EMT)的影响。方法:qRT-PCR、Western blot分别检测癌旁组织、卵巢癌组织、人正常卵巢上皮细胞IOSE80及卵巢癌细胞系HO-8910、SKOV3、A2780中GAS6-AS1、miR-370-3p及SPATA2蛋白表达。将SKOV3细胞分为:对照组(NC组)、 si-NC组、si-GAS6-AS1组、mimic NC组、miR-370-3p mimic组、si-GAS6-AS1+inhibitor NC组、si-GAS6-AS1+miR-370-3p inhibitor组,qRT-PCR检测细胞中GAS6-AS1、miR-370-3p表达;CCK-8法检测细胞增殖;流式细胞术检测细胞凋亡;划痕愈合实验检测细胞迁移;Transwell实验检测细胞侵袭;Western blot检测SPATA2、细胞周期素D1(CyclinD1)、Bcl-2相关X蛋白(Bcl-2-associated X,Bax)、E-钙黏蛋白(E-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)、神经钙黏蛋白(N-cadherin)表达;双荧光素酶报告基因实验检测GAS6-AS1与miR-370-3p、 miR-370-3p与SPATA2的关系。结果:在卵巢癌组织和细胞中GAS6-AS1、SPATA2蛋白高表达,miR-370-3p低表达,且在SKOV3细胞中GAS6-AS1、SPATA2蛋白表达量最高,miR-370-3p表达水平最低,因此,选择SKOV3细胞为后续研究对象。与NC组、si-NC组比较,si-GAS6-AS1组GAS6-AS1、OD450值(24 h、48 h、72 h)、划痕愈合率、侵袭细胞数、SPATA2、CyclinD1、Vimentin、N-cadherin蛋白表达降低,miR-370-3p表达、细胞凋亡率、Bax、E-cadherin蛋白表达升高(P<0.05);与NC组、mimic NC组比较,miR-370-3p mimic组OD450值(24 h、48 h、72 h)、划痕愈合率、侵袭细胞数、SPATA2、CyclinD1、Vimentin、N-cadherin蛋白表达降低,miR-370-3p表达、细胞凋亡率、Bax、E-cadherin蛋白表达升高(P<0.05);miR-370-3p inhibitor减弱了沉默GAS6-AS1对SKOV3细胞增殖、迁移、侵袭及EMT的抑制及对细胞凋亡的促进作用。GAS6-AS1与miR-370-3p、miR-370-3p与SPATA2存在靶向调控关系。结论:沉默GAS6-AS1通过上调miR-370-3p来抑制SPATA2表达,从而抑制SKOV3细胞增殖、迁移、侵袭及EMT,并促进细胞凋亡。

超声微泡介导miR-545-3p通过调节SEPT2抑制乳腺癌的恶性进展

目的:研究超声微泡介导miR-545-3p通过调节胞裂蛋白2(septin 2,SEPT2)抑制乳腺癌恶性进展的机制。方法:以实时荧光定量PCR和免疫印迹实验检测人正常乳腺上皮细胞MCF-10A、人乳腺癌细胞MCF-7、HS-578T及HCC-1937细胞中miR-545-3p、SEPT2表达。体外培养MCF-7细胞并随机分为对照组、空微泡组、miR-545-3p微泡组、miR-545-3p+SEPT2过表达微泡组,分组处理后以实时荧光定量PCR和免疫印迹实验检测各组细胞miR-545-3p、SEPT2表达;以CCK-8、集落形成实验与流式细胞实验检测各组细胞增殖与凋亡;以细胞划痕、Transwell侵袭实验检测各组细胞迁移与侵袭。于裸鼠腹壁皮下接种MCF-7细胞构建其移植瘤模型并以同样方法分组,经分组处理后检测各组裸鼠肿瘤体积与质量。结果:与MCF-10A细胞相比,MCF-7、HS-578T及HCC-1937细胞中miR-545-3p表达降低(P<0.05),SEPT2 mRNA与蛋白表达升高(P<0.05)。与对照组相比,miR-545-3p微泡组细胞miR-545-3p表达、凋亡率升高(P<0.05),细胞SEPT2 mRNA与蛋白表达、细胞活力、集落形成率、迁移率、侵袭数、裸鼠肿瘤体积与质量降低(P<0.05);与miR-545-3p微泡组相比,miR-545-3p+SEPT2过表达微泡组细胞凋亡率降低(P<0.05),细胞SEPT2 mRNA与蛋白表达、细胞活力、集落形成率、迁移率、侵袭数、裸鼠肿瘤体积与质量升高(P<0.05)。结论:超声微泡介导miR-545-3p可通过降低SEPT2表达而减弱乳腺癌细胞增殖、迁移与侵袭,促使其凋亡,并抑制裸鼠移植瘤生长,最终抑制乳腺癌细胞恶性进展。

circFOXK2靶向miR-4677-3p促进口腔鳞癌细胞增殖、侵袭和迁移

目的:探讨circFOXK2靶向miR-4677-3p对口腔鳞癌(OSCC)细胞恶性行为的影响。方法:RT-qPCR检测circFOXK2和miR-4677-3p在OSCC组织和癌旁组织的表达。分别将si-circFOXK2、si-NC、miR-NC、miR-4677-3p模拟物、pcDNA、pcDNA-circFOXK2、si-circFOXK2+anti-miR-NC、si-circFOXK2+anti-miR-4677-3p转染OSCC细胞HSC3。通过划痕愈合实验、CCK-8法、Transwell实验、集落形成实验检测circFOXK2和miR-4677-3p表达对HSC3细胞恶行行为的影响。circFOXK2和miR-4677-3p的靶向关系通过双荧光素酶法确定。结果:OSCC组织中circFOXK2表达水平显著高于癌旁组织(P<0.01),miR-4677-3p表达水平显著低于癌旁组织(P<0.01)。抑制circFOXK2表达后HSC3细胞吸光度(OD)值、划痕愈合率、克隆形成数、侵袭数显著降低(P<0.01),miR-4677-3p表达水平显著升高(P<0.01)。过表达miR-4677-3p后HSC3细胞OD值、划痕愈合率、克隆形成数、侵袭数显著降低(P<0.01)。miR-4677-3p是circFOXK2的靶基因。下调miR-4677-3p显著减弱抑制circFOXK2表达对HSC3细胞OD值、划痕愈合率、克隆形成数、侵袭数的影响(P<0.01)。结论:抑制circFOXK2可通过促进miR-4677-3p表达来抑制OSCC细胞增殖、迁移和侵袭。