LncRNA BLACAT1调节miR-324-5p/MAP4K3轴对肝癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响

目的探讨长链非编码RNA膀胱癌相关转录本1(LncRNA BLACAT1)调节miR-324-5p/丝裂原活化蛋白激酶激酶激酶激酶3(MAP4K3)轴对人肝癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响。方法实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测肝癌组织、癌旁组织以及人正常肝细胞、人肝癌细胞(Huh-7、SMMC-7721、MHCC97 L)中BLACAT1、miR-324-5p、MAP4K3 mRNA的表达水平;将肝癌细胞系Huh-7细胞分为:ctrl组、si-NC组、si-BLACAT1组、si-BLACAT1+miR-NC组、si-BLACAT1+miR-324-5p inhibitor组;实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测各组细胞中BLACAT1、miR-324-5p、MAP4K3 mRNA的表达;CCK-8法检测细胞增殖;划痕实验检测细胞迁移;Transwell小室检测细胞侵袭;蛋白免疫印迹检测细胞中MAP4K3、PCNA、MMP2、MMP9、c-Myc、Cyclin D1的表达;双荧光素酶报告基因实验分别验证BLACAT1和miR-324-5p、miR-324-5p和MAP4K3的关系。结果肝癌组织和人肝癌细胞系中BLACAT1、MAP4K3 mRNA表达水平显著增加,miR-324-5p表达显著降低(P<0.05);与ctrl组、si-NC组比较,si-BLACAT1组Huh-7细胞的BLACAT1、MAP4K3 mRNA表达、A450值、迁移率、侵袭率、PCNA、MMP2、MMP9、MAP4K3、c-Myc、Cyclin D1表达明显降低(P<0.05),miR-324-5p表达显著增加(P<0.05);抑制miR-324-5p表达减弱了敲低BASCAT1对Huh-7细胞的增殖、迁移和侵袭能力的抑制作用;BASCAT1靶向负调控miR-324-5p表达,miR-324-5p靶向调控MAP4K3表达。结论敲低BLACAT1可能通过靶向miR-324-5p来下调MAP4K3表达,进而抑制肝癌细胞增殖、迁移和侵袭。

miR-223、miR-324-5p与慢性乙肝肝纤维化的相关性及其临床诊断价值

目的探讨miR-223、miR-324-5p与慢性乙肝肝纤维化的关系,以及其对慢性乙肝感染及肝纤维化程度的临床诊断价值。方法选取本院2018年1月至2019年12月收治的80例慢性乙型肝炎患者为乙肝组,80例健康者为对照组,采用RT-PCR法检测所有受试者血清中miR-223、miR-324-5p相对表达水平。根据肝组织活检Metavir评分标准将乙肝组分为无肝纤维化组(n=20)和肝纤维化组(n=60),采用二元Logistics回归分析miR-223、miR-324-5p与乙型肝炎肝纤维化的关系。随后再将乙肝组分为轻中度肝纤维化组(n=44)和重度肝纤维化组(n=36),绘制ROC曲线研究miR-223、miR-324-5p相对表达水平对乙型肝炎病毒感染和重度肝纤维化的诊断效能。结果乙肝组患者血清中miR-223和miR-324-5p水平均显著高于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。肝纤维化组患者血清中miR-223和miR-324-5p水平均显著高于无肝纤维化组,差异均有统计学意义(P<0.05)。二元Logistics回归分析提示miR-223水平是乙型肝炎患者肝纤维化的危险因素。重度肝纤维化患者血清中miR-223和miR-324-5p水平均显著高于轻中度肝纤维化患者,差异均有统计学意义(P<0.05)。在乙型肝炎的诊断中,miR-223、miR-324-5p及两者联合的ROC曲线下面积分别为0.855,0.818,0.879,均有统计学意义(P<0.05)。在重度肝纤维化的诊断中,miR-223、miR-324-5p及两者联合的ROC曲线下面积分别为0.792,0.676,0.830,均有统计学意义(P<0.05)。诊断效能统计结果显示,miR-223和miR-324-5p联合检测诊断乙型肝炎的准确度、特异度均优于各指标单独检测;miR-223和miR-324-5p联合检测诊断重度肝纤维化的准确度、敏感度均优于各指标单独检测。结论miR-223水平可能是乙型肝炎患者肝纤维化的危险因素,具有进一步研究价值。外周血miR-223和miR-324-5p水平可有效反映乙型肝炎病毒的感染情况和肝纤维化程度,同时监测两者表达水平,有助于对乙型肝炎的诊断和对肝纤维化程度的判断。

血浆miR-324-5p对单纯性先天性心脏病预后风险分级的评估

目的研究单纯性先天性心脏病(CHD)患者血浆miR-324-5p表达变化,评价其在CHD预后和风险分级等方面的临床应用价值。方法选取2012年1月至2013年1月沈阳军区总医院先天性心脏病内科收治的CHD患儿76例为CHD组,另选取13例健康者血清标本为对照组,应用实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测血浆中miR-324-5p的表达变化,通过Kalpan-Meier生存分析、Cox比例风险模型等综合评价血浆miR-324-5p在CHD预后和风险分级等方面的临床应用价值。结果与对照组相比,单纯性CHD患者外周血浆miR-324-5p表达升高,差异有统计学意义(P<0.05);Kaplan-Meier生存分析表明,miR-324-5p表达水平较高组患者复发风险及死亡概率更高(P<0.05);Cox比例风险模型分析表明,在单因素分析中,miR-324-5p表达水平和体质量指数(BMI)是CHD的发病危险因子(P<0.05),风险比(HR)分别为1.79和2.17;在多因素分析中,只有BMI是CHD的发病危险因子(P<0.05),HR为1.38,HR 95%置信区间(CI)为(1.12,1.79)。结论血浆miR-324-5p作为CHD诊断的生物学标志物具有一定的临床应用价值,但还需要与其他指标联合应用。

外泌体转运miR-324-5p对胃癌MGC-803细胞增殖及凋亡的影响

目的探讨外泌体转运微小RNA(miR)-324-5p对胃癌MGC-803细胞增殖及凋亡的影响。方法培养人胃癌细胞系MGC-803并提取外泌体,制备外泌体转运miR-324-5p模拟物(mimic)。细胞分为对照组(细胞不进行处理)、外泌体组(外泌体混悬液)和miR-324-5p mimic组(加入外泌体转运miR-324-5p mimic混悬液),制备移植瘤模型。检测各组摄取外泌体效率。MTT法和流式细胞术检测细胞增殖率和凋亡率,qRT-PCR和Western blotting法检测各组瘤体中miR-324-5p、细胞周期依赖性蛋白激酶抑制因子1A(p21)、细胞周期蛋白D1(CyclinD1)和微管相关蛋白1轻链3(LC3)mRNA及蛋白的表达。结果外泌体组和miR-324-5p mimic组MGC-803细胞摄取外泌体效率分别为60%和57%。与对照组和外泌体组比较,miR-324-5p mimic组MGC-803细胞增殖率降低,凋亡率增加(P<0.05);裸鼠移植瘤质量和CyclinD1 mRNA及蛋白降低,抑瘤率、miR-324-5p、p21、LC3 mRNA及蛋白增加(P<0.05)。结论外泌体转运miR-324-5p能抑制MGC-803细胞增殖和促进MGC-803细胞凋亡,其机制可能是增加移植瘤中p21和LC3水平,降低CyclinD1水平,从而提高抑瘤率,降低移植瘤质量。

白藜芦醇通过miR-324-5p/FUBP1信号轴调控肝癌细胞增殖和凋亡

目的探究白藜芦醇(RES)对miR-324-5p表达的调控及其在体外对肝细胞癌(HCC)细胞增殖和凋亡的影响。方法实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测RES对miR-324-5p表达的调控;CCK8实验和流式细胞术检测细胞增殖和凋亡情况;双荧光素酶报告基因和Western blot实验验证miR-324-5p的作用靶点。结果RES组经RES处理SMMC-7721细胞后,miR-324-5p的表达为2.28±0.64,明显高于对照组(1.01±0.02),差异有统计学意义(t=24.75,P<0.05)。miR-324-5p mimics组在SMMC-7721细胞中转染miR-324-5p mimics后,48 h和72 h的细胞增殖活性明显低于NC mimics组(t分别=10.39、18.14,P均<0.05)。RES+NC inhibitor组在48 h和72 h的SMMC-7721细胞的增殖活性低于NC inhibitor组(t分别=4.37、5.06,P均<0.05)。RES+miR-324-5p inhibitor组在72 h SMMC-7721细胞中的增殖活性高于RES+NC inhibitor组(t=5.21,P<0.05)。miR-324-5p mimics组在SMMC-7721细胞中转染miR-324-5p mimics后,细胞凋亡率高于NC mimics组(t=11.50,P<0.05);RES+NC inhibitor组SMMC-7721细胞的凋亡率高于NC inhibitor组(t=16.98,P<0.05),RES+miR-324-5p inhibitor组的细胞凋亡率低于RES+NC inhibitor组(t=6.17,P<0.05)。通过TargetScan和microRNA.org数据库,发现FUBP1是miR-324-5p的潜在作用靶点。与NC mimics组比较,miR-324-5p过表达明显降低了pmirGLO-FUBP1-wt报告质粒的荧光素酶活性(t=14.30,P<0.05)。Western blot实验结果显示,与NC mimics组比较,miR-324-5p mimics组FUBP1蛋白的表达明显降低;与NC inhibitor组比较,RES+NC inhibitor组SMMC-7721细胞中FUBP1的蛋白表达明显降低,而RES+miR-324-5p inhibitor组细胞中FUBP1的蛋白表达高于RES+NC inhibitor组。结论RES可通过miR-324-5p/FUBP1信号轴调控HCC细胞增殖和凋亡,RES有望成为治疗HCC的有效药物。

miR-324-5p通过靶向调控DAPK1降低胰腺癌细胞的放射敏感性

目的:探讨死亡相关蛋白激酶1(death-associated protein kinase 1,DAPK1)在胰腺癌(pancreatic cancer,PaC)细胞放射敏感性中的作用,验证miR-324-5p通过靶向调控DAPK1影响胰腺癌细胞放射敏感性的机制。方法:通过生物信息学预测靶向DAPK1的miRNAs,并利用双荧光素酶报告基因检测miR-324-5p对DAPK1的调控作用。在PANC-1和MIA PaCa-2细胞中过表达miR-324-5p和DAPK1或抑制miR-324-5p后,对各细胞株进行放射诱导,检测细胞增殖和凋亡情况,以及凋亡相关分子的表达情况。结果:GEO数据集结果显示,胰腺癌组织中miR-324-5p的表达水平高于正常组织。与正常胰腺导管上皮细胞系(HPDE6-C7)相比,胰腺癌细胞系(Capan-1、Bxpc-3、PANC-1和MIA PaCa-2)中miR-324-5p表达水平更高(P均<0.001)。双荧光素报告基因检测结果表明,miR-324-5p靶向DAPK1的3'UTR,并且可下调DAPK1的表达。细胞实验结果证实,过表达miR-324-5p通过靶向调控DAPK1降低放射诱导的细胞凋亡和DNA的损伤,进而降低了胰腺癌细胞的放射敏感性。结论:miR-324-5p通过负调控DAPK1降低胰腺癌细胞对放射的敏感性,从而影响DNA修复和细胞凋亡。miR-324-5p/DAPK1途径可能为胰腺癌的靶向治疗提供了潜在的治疗靶点。

miR-324-5p通过抑制Syk/Ras/c-fos通路降低脂多糖诱导的大鼠肾小球系膜细胞增殖

目的探讨miR-324-5p调控Syk/Ras/c-fos信号通路对大鼠肾小球系膜(HBZY-1)细胞增殖能力的影响。方法体外培养HBZY-1细胞;设计并合成miR-324-5p mimics,miR-324-5p mimics-NC片段;采用Lipo3000试剂盒瞬时转染miR-324-5p mimics,miR-324-5p mimics-NC片段至脂多糖(LPS)诱导的HBZY-1细胞内,RT-qPCR验证转染效率;将HBZY-1细胞分为对照组(生理盐水),LPS组(LPS 0.5μg/mL),LPS+mimics组(LPS 0.5μg/mL+miR-324-mimics),LPS+mimics-NC组(LPS 0.5μg/mL+miR-324-mimics-NC);MTT法检测各组HBZY-1细胞增殖活性;RT-qPCR法检测各组细胞miR-324-5p及Syk、Ras、MEK1/2、ERK1/2、c-fos mRNA的表达;Western blot和免疫荧光法检测各组细胞p-Syk、Ras、p-MEK1/2、p-ERK1/2、c-fos蛋白的表达。结果MTT结果显示,LPS组细胞增殖水平较正常组显著升高,与LPS组及LPS+mimics-NC组相比,LPS+mimics组细胞增殖能力降低;RT-qPCR结果显示,LPS+mimics组中miR-324-5p表达明显高于LPS组及LPS+mimics-NC组,且LPS+mimics组中Syk、Ras、MEK1/2、ERK1/2、c-fos mRNA的表达显著低于LPS组及LPS+mimics-NC组,差异具有统计学意义(P<0.05);Western Blot结果显示,与LPS组及LPS+mimics-NC组相比LPS+mimics组中p-Syk、Ras、p-MEK1/2、p-ERK1/2、c-fos蛋白表达显著降低,差异具有统计学意义(P<0.05);免疫荧光结果显示,与LPS组及LPS+mimics-NC组相比,LPS+mimics组p-Syk、Ras、p-MEK1/2、p-ERK1/2、c-fos蛋白标记细胞数目明显减少。结论miR-324-5p可通过抑制Syk/Ras/c-fos信号通路降低LPS诱导的慢性肾小球肾炎细胞的增殖活性,miR-324-5p有望成为慢性肾小球肾炎诊断和治疗的潜在靶标。

基于Syk/Ras/c-fos信号轴探讨miR-324-5p对HBZY-1细胞增殖的影响

目的:探讨微小RNA-324-5p(miR-324-5p)对各组HBZY-1细胞增殖的影响及其机制。方法:采用MTT法检测各组HBZY-1细胞增殖活性,流式细胞术检测细胞凋亡情况,RT-qPCR检测HBZY-1细胞内miR-324-5p、Syk、Ras、MEK1、MEK2、ERK1、ERK2以及c-fos的表达水平,免疫荧光检测HBZY-1细胞中Syk/Ras/c-fos信号轴相关表达蛋白及对其进行亚细胞定位。结果:与LPS组相比,转染miR-324-5p-inhibitor后,miR-324-5p的表达水平显著下降,促进HBZY-1细胞增殖,Syk、Ras、MEK1、MEK2、ERK1、ERK2以及c-fos的表达水平均显著升高,Syk/Ras/c-fos信号轴被激活。p-Syk、Ras、p-MEK1/2、p-ERK1/2以及c-fos主要在细胞质中表达。结论:miR-324-5p-inhibitor可通过激活Syk/Ras/c-fos信号轴促进HBZY-1细胞的增殖,表明miR-324-5p可能参与了慢性肾小球肾炎(CGN)中肾小球系膜细胞(GMC)增殖过程,初步探讨了CGN的发病机制。

LncRNA FoxD2-AS1靶向miR-324-5p对结肠癌SW480细胞增殖和迁移侵袭的影响

目的探讨长链非编码RNA(lncRNA)FoxD2-AS1是否通过靶向miR-324-5p影响结肠癌SW480细胞增殖、迁移和侵袭。方法RT-qPCR检测人正常结肠黏膜上皮细胞株NCM460及结肠癌细胞株SW480、HCT116和HT29中FoxD2-AS1和miR-324-5p表达水平;MTT法检测FoxD2-AS1和miR-324-5p表达对结肠癌SW480细胞增殖活力的影响;Transwell小室实验检测FoxD2-AS1和miR-324-5p表达对结肠癌SW480细胞迁移和侵袭能力的影响;双荧光素酶报告基因实验检测FoxD2-AS1是否靶向miR-324-5p。结果与NCM460细胞相比,结肠癌各细胞株中FoxD2-AS1表达明显上调(P<0.05),miR-324-5p表达明显下调(P<0.05);双荧光素酶报告基因实验证实FoxD2-AS1靶向抑制miR-324-5p的表达;MTT和Transwell小室实验结果表明,干扰FOXD2-AS1和过表达miR-324-5p后结肠癌SW480细胞增殖活力均明显降低,细胞迁移和侵袭能力均明显减弱;与干扰FOXD2-AS1相比,同时干扰FOXD2-AS1和miR-324-5p后细胞增殖、迁移和侵袭能力明显增强(P<0.05)。结论lncRNA FOXD2-AS1通过靶向负调控miR-324-5p的表达影响结肠癌SW480细胞增殖、迁移和侵袭能力。

TFESB调控lncRNA LINC00858/miR-324-5p通路抑制宫颈癌细胞的增殖、迁移和侵袭

目的:探讨半枝莲总黄酮提取物(total flavonoids extract from Scutellaria barbata D.Don,TFESB)调控长链非编码RNA(lncRNA)LINC00858/miR-324-5p通路对宫颈癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响及其机制。方法:qRT-PCR检测20例宫颈癌组织和与其对应的癌旁组织中LINC00858和miR-324-5p的表达水平。以宫颈癌SiHa细胞为研究对象,将SiHa细胞随机分为Con组、TFESB处理组、si-NC组、si-LINC00858组、miR-NC组、miR-324-5p组、TFESB+pcDNA组和TFESB+pcDNA-LINC00858组。qRT-PCR检测各组细胞中LINC00858和miR-324-5p的表达水平。细胞计数(CCK-8)试剂盒检测细胞增殖活力。Transwell实验检测细胞的迁移和侵袭能力。Western blot检测增殖相关蛋白(CyclinD1、p21)和迁移侵袭相关蛋白(MMP-2、MMP-9)的表达水平。双荧光素酶报告基因实验和qRT-PCR验证LINC00858和miR-324-5p的靶向调控关系。结果:与癌旁组织相比,宫颈癌组织中LINC00858的表达水平显著升高,miR-324-5p的表达水平显著降低。与Con组比较,TFESB处理组SiHa细胞LINC00858的表达水平显著降低,miR-324-5p的表达水平显著升高,细胞的增殖、迁移和侵袭能力显著降低,并呈显著的浓度依赖性;与si-NC组比较,si-LINC00858组SiHa细胞的增殖、迁移和侵袭能力显著降低;与miR-NC组比较,miR-324-5p组SiHa细胞的增殖、迁移和侵袭能力显著降低;与TFESB+pcDNA组比较,TFESB+pcDNA-LINC00858组SiHa细胞的增殖、迁移和侵袭能力显著提高。结论:半枝莲总黄酮提取物可抑制宫颈癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力,其机制与调控lncRNA LINC00858/miR-324-5p通路有关。

miR-324-5p通过靶向TRIP13基因调控宫颈癌细胞增殖、侵袭、迁移和凋亡

目的探讨miR-324-5p对宫颈癌细胞增殖、侵袭、迁移和凋亡的影响及调控机制。方法培养正常宫颈细胞Ectl/E6E7和宫颈癌细胞系Hela、C-33A、CaSki、SiHa,实时定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)检测细胞中miR-324-5p和甲状腺激素受体因子(TRIP)13 mRNA表达,Western印迹检测TRIP13蛋白表达。转染miR-324-5p模拟物或TRIP13小干扰RNA、或共转染miR-324-5p模拟物和TRIP13过表达载体至Hela细胞,噻唑蓝(MTT)检测细胞增殖,Transwell检测细胞迁移和侵袭,流式细胞仪检测细胞凋亡,Western印迹检测细胞Nanog、细胞周期蛋白(Cyclin)D1、基质金属蛋白酶(MMP)-2和含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶(Caspase-3)蛋白表达。双荧光素酶报告基因实验验证miR-138-5p与TRIP13的调节关系。结果与Ectl/E6E7细胞比较,宫颈癌细胞系Hela、C-33A、CaSki、SiHa中miR-324-5p表达明显降低(P<0.05),TRIP13 mRNA和蛋白表达明显升高(P<0.05)。过表达miR-324-5p或沉默TRIP13均抑制了Hela细胞增殖、迁移和侵袭,诱导Hela细胞凋亡,并抑制Hela细胞中Nanog、CyclinD1和MMP-2蛋白表达,促进Caspase-3蛋白表达。miR-324-5p在Hela细胞中靶向负调控TRIP13。上调TRIP13部分逆转了过表达miR-324-5p对Hela细胞增殖、侵袭、迁移和凋亡的影响。结论miR-324-5p通过靶向抑制TRIP13阻碍宫颈癌细胞增殖、侵袭和迁移,并诱导细胞凋亡,其可能是宫颈癌治疗的分子靶点。

血浆miR-324-5p对单纯性先天性心脏病早期诊断的应用评估

目的：研究单纯性先天性心脏病（CHD）患者血浆中 miR-324-5p表达变化，评价其在 CHD诊断方面的临床应用价值。方法收集2012年6月-2013年2月76例CHD患儿及13例健康正常对照血清标本，应用 Real-time PCR检测血浆中miR-324-5p表达变化，通过受试者工作曲线（ROC），评价血浆 miR-324-5p在 CHD诊断方面的临床应用价值。结果与正常对照相比，单纯性CHD患者外周血浆miR-324-5p表达升高（P＝0.032）；受试者工作曲线（ROC）分析显示，曲线下面积（AUC）为0.731，最佳诊断临界值为0.1161，敏感度为64.5％，特异度为84.6％。结论血浆 miR-324-5p作为CHD早期排除诊断的生物学标志物并具有一定的临床应用价值，但还需要与其它指标联合应用。

重症急性胰腺炎患者外周血miR-22-3p和miR-324-5p水平及其对重症急性胰腺炎相关性急性肺损伤的诊断价值分析

目的检测miR-22-3p、miR-324-5p在重症急性胰腺炎(SAP)患者外周血中表达情况,探讨二者与SAP患者临床病理参数的关系及在SAP相关性急性肺损伤(ALI)诊断中的应用价值。方法回顾性收集2015年2月至2017年2月确诊并治疗的86例急性胰腺炎患者为研究对象,根据是否合并ALI分为合并ALI组(n=49)和未合并ALI组(n=37)。选取同期健康体检者45例作为健康对照组。实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测各受试者外周血miR-22-3p、miR-324-5p水平,并计算受试者工作曲线(ROC曲线)下面积(AUC)和对SAP诊断校能,观察上述指标与临床病理参数的相关性。结果健康对照者、未合并ALI、合并ALI的SAP患者外周血miR-22-3p水平逐渐升高、miR-324-5p水平逐渐降低,两两比较差异有统计学意义(P<0.05)。检测外周血miR-22-3p、miR-324-5p水平诊断SAP疾病的AUC分别为:0.729、0.683,灵敏度分别为:57.41%、50.89%,特异度分别为:83.70%、78.61%。miR-22-3p、miR-324-5p表达与SAP患者CT分级、胸水情况、APACHEⅡ评分和是否并发ALI疾病有关(P<0.05)。miR-22-3p、miR-324-5p水平诊断SAP合并ALI疾病的AUC分别为:0.791、0.748,灵敏度分别为:63.82%、58.90%,特异度分别为:83.91%、81.71%。COX比例风险模型分析结果显示,miR-22-3p、miR-324-5p水平、CT分级是影响SAP患者ALI发生风险的独立危险因素。结论 miR-22-3p在SAP患者外周血中高表达,miR-324-5p低表达,且在合并ALI患者和未合并ALI患者中存在明显差异,检测外周血miR-22-3p、miR-324-5p水平对SAP合并ALI疾病的诊断具有一定应用价值。

miR-324-5p靶向调控CARD9对急性胰腺炎腺泡细胞增殖、凋亡的影响及机制

目的探讨微小RNA-324-5p(miR-324-5p)靶向调控胱天蛋白酶募集域蛋白(CARD)9对急性胰腺炎(AP)腺泡细胞增殖、凋亡的影响及机制。方法采用雨蛙肽处理大鼠胰腺腺泡细胞株AR42J构建急性胰腺炎模型。实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)与Western印迹技术分别检测miR-324-5p、CARD9 mRNA及蛋白表达。应用脂质体转染技术分别将miR-NC、miR-324-5p mimic、si-NC、si-CARD9转染入AP腺泡AR42J细胞,噻唑蓝(MTT)与流式细胞仪分别检测AR42J细胞增殖及凋亡。双荧光素酶报告实验验证CARD9与miR-324-5p的作用关系。Western印迹检测细胞周期蛋白(Cyclin)D1、p21、p27、Bcl-2、Bax、酶切含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶(caspase)-3蛋白表达。结果雨蛙肽素处理后AR42J细胞中miR-324-5p表达水平显著低于对照组,而CARD9 mRNA及蛋白表达水平显著高于对照组(P<0.05);分别转染miR-324-5p mimic、si-CARD9后,由雨蛙肽素诱导的AR42J细胞凋亡明显受到抑制,而细胞增殖能力明显增强,CyclinD1、Bcl-2蛋白表达上调,p21、p27、Bax、酶切caspase-3蛋白表达下调(均P<0.05);CARD9是miR-324-5p的靶基因;CARD9过表达逆转了miR-324-5p过表达对雨蛙肽诱导的胰腺炎腺泡细胞AR42J增殖和凋亡的作用。结论miR-324-5p可通过抑制CARD9表达进而促进AR42J细胞增殖,抑制细胞凋亡。

miR-324-5p和miR-215-5p在多发性骨髓瘤中的表达及预后分析

目的检测多发性骨髓瘤(MM)患者血清中miR-324-5p和miR-215-5p的表达水平,研究其表达水平和预后的关系.方法收集60例MM患者血清标本,为初治组(20例)、巩固治疗组(20例)、复发难治组(20例);20例健康人血清标本(健康对照组),实时荧光定量PCR检测血清中miR-324-5p和miR-215-5p的表达水平.结果与健康对照组比较,MM患者血清中miR-215-5p表达水平下降(P<0.0083),初治组和难治复发组患者血清miR-324-5p表达水平下降(P<0.0083),巩固治疗组与健康对照组血清miR-324-5p表达水平差异无统计学意义(P>0.0083);巩固治疗组血清miR-324-5p表达水平高于初治组及难治复发组(P<0.0083);巩固治疗组血清miR-215-5p表达水平高于初治组(P<0.0083),巩固治疗和难治复发患者间差异无统计学意义(P>0.0083);初治组与复发难治组之间两种miRNAs表达水平差异无统计学意义(P>0.0083).miR-324-5p和miR-215-5p表达水平与β2微球蛋白和红细胞体积分布宽度呈负相关,与血红蛋白呈正相关.初治MM患者血清miR-324-5p和miR-215-5p高表达组无进展生存期高于低表达组,差异有统计学意义(P<0.05).结论miR-324-5p和miR-215-5p在MM血清中表达水平降低,miR-324-5p和miR-215-5p可能与疾病密切相关,其低表达可能提示预后不良.

lncRNA HCG18调控miR-324-5p/GLI1轴在急性髓系白血病细胞增殖和侵袭中的作用机制

目的长链非编码RNA人类白细胞抗原复合体18(lncRNA HCG18)调对急性髓系白血病(AML)的作用机制尚不清楚。探讨lncRNA HCG18控微小RNA-324-5p(miR-324-5p)/胶质瘤相关基因同源蛋白1(GLI1)轴对AML细胞增殖、迁移与侵袭的影响。方法选择2017年1月-2021年3月在本院血液科住院治疗的AML患者35例作为研究对象(AML组),另选取同期在本院治疗并进行骨髓穿刺检查的非血液系统肿瘤性疾病患者30例作为对照组,实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测所有入选人员骨髓单个核细胞中lncRNA HCG18与miR-324-5p的表达。体外培养AML细胞HL-60,将细胞分为对照组、si-NC组、lncRNA HCG18 siRNA组、miR-NC组、miR-324-5p mimics组、miR-324-5p mimics+GLI1 NC组、miR-324-5p mimics+GLI1组、lncRNA HCG18 siRNA+NC inhibitor组、lncRNA HCG18 siRNA+miR-324-5p inhibitor组,分别检测检测HL-60细胞中lncRNA HCG18、miR-324-5p表达、HL-60细胞增殖、迁移与侵袭及GLI1、细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)、基质金属蛋白酶(MMP)-2和MMP-9蛋白表达。双荧光素酶报告系统分析miR-324-5p与lncRNA HCG18、GLI1的靶向关系。结果与对照组比较,AML组患者骨髓单个核细胞中lncRNA HCG18表达水平(2.85±0.32)较对照组(1.03±0.11)显著升高(P<0.01),而miR-324-5p表达水平(0.47±0.05)较对照组(1.05±0.09)显著降低(P<0.01);沉默lncRNA HCG18表达或过表达miR-324-5p后HL-60细胞增殖、细胞迁移与侵袭数、Cyclin D1、MMP-2、MMP-9蛋白表达显著降低(P<0.05);双荧光素酶报告基因实验显示,miR-324-5p与lncRNA HCG18、GLI1均有靶向关系;抑制miR-324-5p表达可逆转沉默lncRNA HCG18表达对HL-60细胞增殖、迁移与侵袭的抑制作用;GLI1过表达可逆转过表达miR-324-5p对HL-60细胞增殖、迁移与侵袭的抑制作用。结论lncRNA HCG18在AML细胞中高表达,抑制lncRNA HCG18表达可通过调控miR-324-5p/GLI1轴抑制AML细胞增殖、迁移与侵袭。

MiR-324-5p可能通过靶向淀粉样前体蛋白抑制棕榈酸诱导的3T3-L1脂肪细胞凋亡

miRNAs是一种非编码的小RNA,通过靶向mRNA的3′UTR调控基因的转录后翻译。为明确miR-324-5p对棕榈酸诱导的3T3-L1脂肪细胞凋亡的作用和机制,体外培养3T3-L1脂肪细胞,利用棕榈酸诱导细胞凋亡的同时过表达或抑制miR-324-5p,通过Annexin-V/FITC染色、RT-qPCR等方法检测miR-324-5p对3T3-L1脂肪细胞凋亡的作用。通过在线软件预测miR-324-5p的靶基因并进行验证。结果显示,过表达miR-324-5p能够显著抑制凋亡相关基因BCL-2相关X蛋白(BCL2-associated X protein, Bax)和胱天蛋白酶3(caspase3)的表达水平(P<0.05);而抑制miR-324-5p后能够显著促进这些基因的表达(P<0.05);靶基因预测及验证结果表明,miR-324-5p能够显著降低淀粉样前体蛋白(amyloid precursor protein, APP)的表达水平(P<0.05)。本研究认为,miR-324-5p可能通过靶定APP抑制棕榈酸诱导的3T3-L1脂肪细胞凋亡。

多发性骨髓瘤患者体内硼替佐米累计量与miR-324-5p、miRNA-21表达量的相关性研究

目的分析多发性骨髓瘤患者体内硼替佐米累计量与miR-324-5p、miRNA-21表达量的相关性。方法选择多发性骨髓瘤患者90例。使用硼替佐米治疗,计算体内硼替佐米累计量,检测miR-324-5p、miRNA-21表达量。比较3个疗程患者硼替佐米累计量和miR-324-5p、miRNA-21表达量,分析其相关性。结果3个疗程硼替佐米累计量比较两两比较均有统计学意义(P<0.05),随着疗程增加,患者体内硼替佐米累计量逐渐增加。三个疗程miR-324-5p、miRNA-21表达量比较两两比较均有统计学意义(P<0.05),随着疗程增加,患者体内miR-324-5p、miRNA-21表达量逐渐下降。硼替佐米累计量与miR-324-5p表达量、miRNA-21表达量呈负相关,其累计量越多,miR-324-5p表达量、miRNA-21表达量越低(P<0.05)。结论多发性骨髓瘤患者体内硼替佐米累计量直接影响miR-324-5p、miRNA-21表达量,其水平越高,表达量越低。

circSEC31A调控miR-324-5p对脂肪干细胞增殖、凋亡和成骨分化的影响

目的探讨环状非编码RNA SEC31A(circSEC31A,又名hsa_circ_0006618)对脂肪干细胞增殖、凋亡和成骨分化的影响和机制。方法在脂肪干细胞中分别转染sh-circSEC31A和LV-circSEC31A后,细胞增殖采用CCK8法检测;细胞凋亡采用流式细胞仪检测;circSEC31A和miR-324-5p靶点结合情况采用双荧光素酶测定法检测;成骨分化相关分子RUNX2和OPN的mRNA和蛋白水平分别采用Western blot和RT-qPCR检测。结果在脂肪干细胞中转染sh-circSEC31A后能够明显抑制细胞的增殖和成骨分化相关分子RUNX2、OPN的表达水平(P<0.05),促进细胞的凋亡(P<0.05)。在脂肪干细胞中转染LV-circSEC31A后能够明显促进细胞的增殖和成骨分化相关分子RUNX2、OPN的表达水平(P<0.05),抑制细胞的凋亡(P<0.05)。双荧光素酶结果显示circSEC31A能够靶向结合miR-324-5p(P<0.05)。回复实验显示,在脂肪干细胞中共转染LV-circSEC31A和miR-324-5p mimics后能够反转单独转染LV-circSEC31A对脂肪干细胞增殖、凋亡和成骨分化的影响;共转染LV-circSEC31A和miR-324-5p inhibitors后能够进一步加强单独转染LV-circSEC31A对脂肪干细胞增殖、凋亡和成骨分化的影响。结论circSEC31A能够通过靶向调控miR-324-5p参与脂肪干细胞增殖、凋亡和成骨分化,circSEC31A可能成为干预脂肪干细胞生物学功能的靶点。

miR-324-5p通过调控KLF3/JAK2/STAT3通路对胰腺癌细胞耐药性的影响

目的:探讨miR-324-5p对胰腺癌细胞耐药性的影响及其可能的分子机制,为寻找胰腺癌新的治疗靶点提供理论及实验依据。方法:收集化疗前后胰腺癌患者的血浆标本,用不同浓度的吉西他滨处理胰腺癌细胞,qRT-PCR检测吉西他滨处理后胰腺癌细胞及胰腺癌患者血浆miR-324-5p的表达。转染miR-324-5p模拟物或抑制剂,用一定浓度的吉西他滨处理胰腺癌细胞,流式细胞术检测细胞凋亡,Western blot检测凋亡相关蛋白的表达,观察miR-324-5p对细胞凋亡的影响。CCK-8法检测胰腺癌细胞吉西他滨的IC50,Western blot检测耐药相关蛋白的表达,观察miR-324-5p对细胞耐药的影响。转染KLF3过表达质粒,Western blot检测JAK2/STAT3信号通路的表达,进一步探讨miR-324-5p参与细胞耐药的分子机制。结果:miR-324-5p在吉西他滨处理的胰腺癌细胞及接受化疗的胰腺癌患者血浆中高表达。miR-324-5p可抑制吉西他滨处理后胰腺癌细胞凋亡及凋亡相关蛋白的表达。miR-324-5p可增强胰腺癌细胞对吉西他滨的耐药性及耐药相关蛋白的表达。过表达KLF3不仅可以部分逆转miR-324-5p对细胞凋亡及凋亡相关蛋白表达的影响,也可部分逆转miR-324-5p对细胞耐药及耐药相关蛋白表达的影响,这可能是通过调控JAK2/STAT3信号通路实现的。结论:miR-324-5p与胰腺癌细胞耐药相关,并可通过调控KLF3激活JAK2/STAT3信号通路影响胰腺癌细胞耐药。