miR-339-5p通过靶向调节p53表达影响脑胶质瘤细胞的转移活性分析

目的研究miR-339-5p对脑胶质瘤U87细胞的影响,并探讨相关机制。方法将U87细胞分为4组:空白组、miR-339-5p mimic组、si-p53组、miR-339-5p mimic+si-p53组。通过MTT实验检测细胞增殖率;通过Transwell实验检测U87细胞侵袭能力;通过流式细胞术检测细胞凋亡率;通过荧光素酶报告基因实验检测miR-339-5p与p53的靶向关系;通过实时荧光定量聚合酶链反应和蛋白免疫印迹分析miR-339-5p和p53的表达水平。结果miR-339-5p mimic组和miR-339-5p mimic+si-p53组细胞的miR-339-5p表达水平高于空白组和si-p53组,miR-339-5p mimic组细胞的p53 mRNA和蛋白水平均高于空白组、si-p53组和miR-339-5p mimic+si-p53组(P<0.05)。miR-339-5p mimic和p53-WT共转染的细胞荧光素酶活性明显增加(P<0.05)。miR-339-5p mimic组细胞增殖率和细胞侵袭数量低于空白组、si-p53组和miR-339-5p mimic+si-p53组,同时miR-339-5p mimic组细胞凋亡率高于空白组、si-p53组和miR-339-5p mimic+si-p53组(P<0.05)。结论miR-339-5p能够抑制脑胶质瘤U87细胞的增殖和侵袭,并促进胶质瘤U87细胞凋亡,同时这一过程与靶向激活p53相关。

miR-339-5p调控EMT影响乳腺癌细胞化疗耐药的机制

目的分析miR-339-5p调控上皮细胞-间充质转化(EMT)影响乳腺癌细胞化疗耐药的机制。方法于2023年2月至2024年2月体外培养正常乳腺上皮细胞系(MCF10A)及乳腺癌细胞系MCF-7,构建乳腺癌紫杉醇耐药细胞系MCF-7/紫杉醇,将MCF-7/紫杉醇细胞分别转染miR-339-5p模拟物(miR-339-5p mimics组)、miR-339-5p模拟物阴性对照(miR-NC组)、miR-339-5p抑制剂(miR-339-5p inhibitor组)及miR-339-5p抑制剂对照(NC组)。采用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)对miR-339-5p水平予以检测,以噻唑蓝(MTT)法测定细胞增殖抑制率,经流式细胞仪测定细胞凋亡情况,采用Western Blot法检测EMT相关蛋白[E-cadhesin(E-cad)、Vimentin(Vim)]的表达。采用独立样本t检验、ONE-WAY ANOVA分析及LSD-t检验对所获得的数据进行统计学分析。结果miR-339-5p在MCF-7细胞的表达水平低于MCF10A细胞[(0.36±0.07)比(0.73±0.08),P<0.05];转染48 h后,miR-339-5p mimics组细胞增殖抑制率、细胞凋亡率高于miR-NC组[(45.86±4.92)%比(20.44±2.16)%、(16.54±1.67)%比(4.23±0.45)%,均P<0.05],miR-339-5p inhibitor组细胞增殖抑制率、细胞凋亡率低于NC组[(9.74±1.05)%比(17.18±1.84)%、(2.28±0.46)%比(5.43±0.59)%,均P<0.05];miR-339-5p mimics组E-cad水平高于miR-NC组,Vim低于miR-NC组[(0.78±0.07)比(0.42±0.05)、(0.42±0.05)比(0.61±0.07),均P<0.05],miR-339-5p inhibitor组E-cad低于NC组,Vim高于NC组[(0.23±0.04)比(0.34±0.05)、(0.84±0.09)比(0.69±0.08),均P<0.05]。结论miR-339-5p可降低乳腺癌细胞化疗耐药性,抑制细胞增殖并促进细胞凋亡,其机制可能是通过调控EMT相关蛋白E-cad、Vim而抑制EMT。

芪藤消浊颗粒介导miR-339-5p对慢性肾小球肾炎大鼠炎症指标的影响

目的:探讨芪藤消浊颗粒通过miR-339-5p对慢性肾小球肾炎(chronic glomerulonephritis,CGN)大鼠炎症指标的影响。方法:大鼠尾静脉注射阿霉素制备CGN模型,用芪藤消浊颗粒(21.6、10.8、5.4 g/kg)连续灌胃30 d,通过HE染色和电镜观察CGN大鼠肾脏组织中的病理变化情况,qRT-PCR、ELISA、Western blot检测大鼠血清及肾脏组织中的IL-1β、IL-6、IL-10、TNF-α的含量,Western blot检测miR-339-5p、Syk、p-Syk蛋白相对表达量,qRT-PCR检测miR-339-5p mRNA及Syk mRNA的相对表达量。结果:模型组大鼠出现基底膜增厚,肾小球萎缩等病变,与正常组相比,模型组大鼠的miR-339-5p和IL-10表达明显下调,IL-1β、IL-6、TNF-α、Syk的表达显著上调,芪藤消浊颗粒组可显著降低肾脏组织中IL-1β、IL-6、TNF-α、Syk的蛋白及mRNA的表达水平。结论:芪藤消浊颗粒治疗CGN大鼠的炎症症状可能是通过miR-339-5p下调炎症因子的表达水平。

乳腺癌细胞中miR-339-5p对BCL-6表达的调节

目的预测和验证miR-339-5p下游直接靶基因。方法利用生物信息学方法预测miR-339-5p潜在靶基因;克隆目标基因3’UTR,将其与含荧光素酶报告基因的质粒psiCHECK-2连接后,与miR-339-5p mimics共转染乳腺癌细胞株T47D,做荧光素酶报告实验验证miR-339-5p靶基因;人乳腺癌细胞株T47D转染miR-339-5p mimics(模拟物)后,行Western blot法检测靶基因蛋白表达。结果生物信息学方法预测结果显示BCL-6为miR-339-5p潜在靶基因之一;荧光素酶报告实验显示,miR-339-5p可直接调节BCL-6基因3’UTR;Western blot法检测结果显示T47D细胞转染miR-339-5p mimics后,BCL-6蛋白表达水平明显下调。结论 miR-339-5p可以调节下游靶基因BCL-6的表达。

LncRNA NEAT1通过miR-339-5p/ITGA3轴调控舌鳞状细胞癌增殖、迁移及侵袭的分子机制

目的:探讨LncRNA NEAT1通过miR-339-5p/ITGA3轴调控舌鳞状细胞癌细胞增殖、迁移及侵袭的分子机制.方法:采用qRT-PCR和Western免疫印迹检测25例人舌鳞状细胞癌组织、与其对应的癌旁组织、人正常口腔黏膜细胞株HOK和人舌鳞状细胞癌细胞株Tscca、CAL27、SCC15、HN13中NEAT1、miR-339-5p、ITGA3 mRNA和ITGA3蛋白的表达.分别构建抑制NEAT1和过表达miR-339-5p的CAL27细胞株.利用MTT法检测细胞活力,Transwell法检测细胞的迁移和侵袭能力,Western免疫印迹检测CyclinD1和MMP-9蛋白的表达.采用双荧光素酶报告基因验证NEAT1、miR-339-5p和ITGA3的靶向关系,通过Western免疫印迹和qRT-PCR检测其调控关系.采用SPSS 17.0软件包对数据进行统计学分析.结果:与人正常口腔黏膜细胞株HOK相比,人舌鳞状细胞癌细胞株中NEAT1和ITGA3表达上调,miR-339-5p表达下调.抑制NEAT1或过表达miR-339-5p均可显著抑制CAL27细胞的增殖、迁移和侵袭,显著抑制CyclinD1和MMP-9蛋白的表达.双荧光素酶报告基因证实NEAT1靶向作用miR-339-5p并下调其表达水平,miR-339-5p可靶向负调控ITGA3的表达.抑制NEAT1可逆转抑制miR-339-5p表达对CAL27细胞增殖、迁移及侵袭的抑制作用.结论:LncRNA NEAT1通过下调miR-339-5p/ITGA3轴,进而促进舌鳞状细胞癌细胞增殖、迁移及侵袭.

弥漫大B细胞淋巴瘤中miR-339-5p的表达及意义

目的检测miR-339-5p在弥漫大B细胞淋巴瘤(diffuse large B-cell lymphoma,DLBCL)中的表达,探讨miR-339-5p表达与DLBCL临床病理特征的关系。方法采用显色原位杂交技术检测123例DLBCL和20例淋巴结反应性增生(reactive lymphoid hyperplasia,RH)组织中miR-339-5p的表达,并采用免疫组化En Vision两步法检测DLBCL组织中Ki-67和BCL-6蛋白的表达,分析miR-339-5p与BCL-6表达的相关性及二者表达与DLBCL临床病理特征的关系。结果 DLBCL组织中miR-339-5p的阳性率(39.8%,49/123)显著低于RH组织(90.0%,18/20)。活化的B细胞型(ABC型)DLBCL组织中miR-339-5p阳性率(31.0%,22/71)明显低于生发中心的次级B细胞型(GCB型)(51.9%,27/52)。miR-339-5p在DLBCL中表达降低与Ann Arbor分期晚以及国际预后指数IPI评分高有关(P均<0.05)。ABC型、GCB型DLBCL中miR-339-5p阴性患者生存率均明显低于miR-339-5p阳性患者(P均<0.01)。DLBCL中miR-339-5p与BCL-6蛋白表达呈显著负相关(P<0.01)。结论 miR-339-5p低表达可能与DLBCL进展和预后不良相关。

miR-339-5p通过抑制NUDT5增强肺癌A549细胞的放射敏感性

目的:探讨miR-339-5p通过调控Nudix结构水解酶5(Nudix hydrolase 5,NUDT5)的表达对肺癌A549细胞放射敏感性的影响。方法:体外低浓度梯度递增结合大剂量间断冲击方法诱导产生耐X射线的肺癌A549细胞株(RA549),qPCR检测miR-339-5p在人正常肺上皮细胞(BEAS-2B)、肺癌细胞系(A549、L78、H1299、H460和RA549细胞)中的表达水平。根据对RA549细胞的处理,实验分为NC组、5 Gy组(5 Gy X射线处理RA549细胞)、5 Gy+miR-339-5p mimic组、5 Gy+si-NUDT5组和5 Gy+si-NUDT5+miR-339-5p inbibitor组,CCK-8法、Annexin V-FITC/PI双染流式术和WB分别检测各组细胞增殖、凋亡以及NUDT5、γ-H2AX和H2AX蛋白表达的变化,双荧光素酶报告基因系统验证miR-339-5p和NUDT5的靶向关系。结果:miR-339-5p在各肺癌细胞系中表达显著低于BEAS-2B细胞(均P<0.05),其中RA549细胞表达水平最低。验证显示NUDT5是miR-339-5p的靶基因。与NC组相比,5 Gy组RA549细胞增殖活力和NUDT5表达显著降低(均P<0.01),凋亡率显著升高(P<0.01);与5 Gy组相比,5 Gy+miR-339-5p mimic组RA549细胞的增殖活力显著降低(P<0.05)、凋亡率([12.97±1.48)%vs(5.21±0.62)%,P<0.01]和γ-H2AX的表达水平(P<0.05)显著升高,5 Gy+si-NUDT5组RA549细胞中NUDT5的表达水平(P<0.01)和细胞增殖活力(P<0.01)均显著降低,凋亡率([11.21±1.06)%vs(5.54±0.44)%,P<0.01]和γ-H2AX表达水平(P<0.01)均显著升高,而5 Gy+siNUDT5+miR-339-5p inhibitor组细胞中上述指标均回复至5 Gy组水平。结论:过表达miR-339-5p通过靶向下调NUDT5表达肺癌A549细胞的放射敏感性。

miR-339-5p过表达对带状疱疹后遗神经痛大鼠疼痛缓解的机制

目的探究miR-339-5p过表达对带状疱疹后遗神经痛大鼠的疼痛缓解机制。方法选取48只健康SPF级SD大鼠,分别将48只大鼠分为空白组、模型组、过表达组、沉默组各12只,模型组、过表达组、沉默组构建带状疱疹后遗神经痛模型,做miR-339-5p慢病毒滴定,采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测miR-339-5p基因表达量,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测大鼠5-羟色胺(HT)、神经生长因子(NGF)、白细胞介素(IL)-2、肿瘤坏死因子(TNF)-α,采用电子测痛仪进行测定机械痛阈,采用Western印迹检测大鼠同源性磷酸张力蛋白诱导激酶1/帕金森蛋白(PINK1/Parkin)信号通路基因表达量。结果与模型组相比,过表达组miR-339-5p基因表达量、不同时间点痛阈值、IL-2、TNF-α、5-HT、NGF、PINK1/Parkin信号通路表达量明显升高(P<0.05)。与模型组相比,沉默组miR-339-5p基因表达量、PINK1/Parkin信号通路表达量明显降低,不同时间点痛阈值、IL-2、TNF-α、5-HT、NGF明显升高(P<0.05)。与过表达组相比,沉默组miR-339-5p基因表达量、PINK1/Parkin信号通路表达量明显降低,不同时间点痛阈值、IL-2、TNF-α、5-HT、NGF明显升高(P<0.05)。结论miR-339-5p过表达基因通过作用于PINK1/Parkin信号通路,调控PINK1、Parkin表达量,显著减轻了带状疱疹后遗神经痛大鼠的疼痛程度。

肺腺癌患者血清中mi R-498,miR-339-5p和miR-210-3p水平表达的临床诊断价值

目的研究肺腺癌(lung adenocarcinoma,LA)患者血清中微核糖核酸(miRNA)在肺腺癌患者及正常人群组血清中的表达水平,分析其在肺腺癌诊断中的临床价值。方法收集60例肺腺癌及40例正常人群血清,通过实时荧光定量聚合酶链反应(quantitative real time PCR,qRT PCR)检测各组血清miR-498,miR-339-5p和miR-210-3p的表达情况。统计分析各组miRNA的表达差异以及单个miRNA在肺腺癌诊断中的价值,进一步用统计学方法分析三者联合检测的诊断价值。结果相比正常人群,肺腺癌患者血清中miR-210-3p表达增加(6.41±1.85 vs 4.52±1.45),miR-498(2.09±0.88vs 3.01±0.69)和miR-339-5p(0.8±0.53 vs 1.24±0.58)表达下降,差异有统计学意义(t=4.72,1.34,2.75,均P<0.05)。受试者工作特征曲线下面积(AUC)分析结果显示,miR-498,miR-339-5p和miR-210-3p的AUC分别为0.788(95%CI0.695~0.864),0.715(95%CI 0.616~0.801)和0.799(95%CI 0.707~0.872);三者联合检测在肺腺癌诊断中AUC值为0.902(95%CI 0.826~0.952),三者联合检测优于单个miRNA的检测,差异有统计学意义(t=14.09~18.65,均P<0.05)。结论miR-498,miR-339-5p和miR-210-3p在肺腺癌患者血清中的表达情况改变,对肺腺癌具有一定的临床诊断价值。

hsa_circ_0005221通过miR-339-5p/STAT5A通路促进前列腺癌进展

目的:研究hsa_circ_0005221通过miR-339-5p/STAT5A通路调控前列腺癌的进展的分子机制。方法:核质分离检测hsa_circ_0005221和miR-339-5p在细胞中的表达定位;Pulldown检测hsa_circ_0005221结合的miRNA;软件预测结合荧光素酶报告基因确定与hsa_circ_0005221结合的RNA是miR-339-5p;定量PCR检测hsa_circ_0005221在前列腺上皮细胞和前列腺癌细胞的表达量;在前列腺癌细胞分别转染hsa_circ_0005221过表达质粒和siRNA测DU145和LNCaP增殖、侵袭和迁移能力及上皮间质转化(EMT)和凋亡水平;在敲低hsa_circ_0005221基础上,转染miR-339-5P mimics和inhibitor测DU145和LNCaP增殖、侵袭和迁移能力及EMT标志性蛋白、STAT5A和凋亡水平。结果:hsa_circ_0005221在前列腺癌细胞的表达水平明显高于前列腺上皮细胞。核质分离实验表明hsa_circ_0005221、miR-339-5P均主要在胞质中表达。在DU145和LNCaP敲低hsa_circ_0005221,其增殖、侵袭、迁移及EMT能力明显下降;凋亡水平增加。过表达hsa_circ_0005221则结果相反。在软件预测排名前5的miRNA中,Pulldown实验结果显示与hsa_circ_0005221结合的有miR-339-5P、miR-17、miR-520H;敲低或过表达hsa_circ_0005221,miR-339-5P变化最明显。荧光素酶报告基因结果显示hsa_circ_0005221与miR-339-5P结合。在DU145和LNCaP敲低hsa_circ_0005221基础上转染miR-339-5P mimics,其增殖、侵袭和迁移能力明显下降,凋亡水平增加,E-cad水平增加,N-cad水平下降,STAT5A表达水平增加。敲低hsa_circ_0005221基础上上转染miR-339-5P mimics则结果相反。结论:hsa_circ_0005221通过miR-339-5p/STAT5A通路促进前列腺癌的进展。

干扰lncRNA RHPN1-AS1表达通过靶向miR-339-5p对肝癌细胞增殖和凋亡的影响

目的:探讨长链非编码RNA PCNA1(lncRNA RHPN1)反义AS1(RHPN1-AS1)对肝癌细胞增殖和凋亡的影响及其作用机制。方法:将si-NC(lncRNA RHPN1-AS1阴性对照组)、si-RHPN1-AS1(沉默lncRNA RHPN1-AS1组)、pcDNA(真核表达载体组)、pcDNA-RHPN1-AS1(沉默lncRNA RHPN1-AS1真核表达载体组)、miR-NC(微小RNA-339-5p阴性对照组)及miR-339-5p(微小RNA-339-5p组)分别转染至肝癌细胞Huh7中,记为si-NC组、si-RHPN1-AS1组、pcDNA组、pcDNA-RHPN1-AS1组、miR-NC组和miR-339-5p组;将si-RHPN1-AS1质粒分别与anti-miRNC(微小RNA-339-5p抗结剂阴性对照)、anti-miR-339-5p(微小RNA-339-5p抗结剂)共转染至Huh7细胞中,记为si-RHPN1-AS1+anti-miR-NC组(沉默lncRNA RHPN1-AS1+微小RNA-339-5p抗结剂阴性对照组)、si-RHPN1-AS1+anti-miR-339-5p组(沉默lncRNA RHPN1-AS1+微小RNA-339-5p抗结剂组);转染均采用脂质体法。采用实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)(RT-qPCR)检测正常肝细胞(THLE-2)、肝癌细胞株(Huh7、MHCCLM3、MHCC97H)中miR-339-5p和RHPN1-AS1表达水平;双荧光素酶报告实验检测RHPN1-AS1和miR-339-5p的靶向关系;用蛋白质印迹法检测细胞周期素D1(Cyclin D1)蛋白、P21蛋白、B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)及Bcl-2相关X蛋白(Bax)的表达水平;用流式细胞术检测细胞凋亡情况;用四甲基偶氮唑(MTT)比色法检测细胞活性。结果:与正常肝细胞THLE-2相比,肝癌细胞株Huh7、MHCCLM3、MHCC97H中RHPN1-AS1高表达,miR-339-5p低表达。RHPN1-AS1靶向调控miR-339-5p的表达。干扰RHPN1-AS1表达和miR-339-5p过表达的肝癌细胞Huh7中P21蛋白、Bax蛋白表达水平显著升高,Cyclin D1、Bcl-2水平显著降低,细胞活性显著降低,细胞凋亡率显著升高。下调miR-339-5p表达逆转了干扰RHPN1-AS1表达对肝癌细胞Huh7的增殖抑制和凋亡促进作用。结论:干扰RHPN1-AS1表达可抑制肝癌细胞的增殖,促进细胞凋亡,其机制可能与miR-339-5p表达有关,将可为肝癌的靶向治疗提供新靶点。

miR-339-5p调控IGF2对肺炎链球菌诱导的肺泡上皮细胞凋亡和内质网应激的影响

目的:探讨微小RNA(miRNA)-339-5p是否通过调控胰岛素样生长因子2(IGF2),影响肺炎链球菌诱导的肺泡上皮细胞凋亡和内质网应激。方法:逆转录定量聚合酶链反应(RT-qPCR)测定1×10^(8)CFU·ml^(-1)肺炎链球菌感染的肺泡上皮细胞A549中miR-339-5p和IGF2 mRNA表达。在A549细胞中转染miR-339-5p mimic、si-IGF2或共转染miR-339-5p mimic与pcDNA IGF2,并以1×10^(8)CFU·ml^(-1)肺炎链球菌感染。流式细胞术评检测细胞凋亡,免疫印迹实验(Western blot)检测B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、C/EBP同源蛋白(CHOP)和活化转录因子6(ATF6)蛋白表达,比色法检测丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、乳酸脱氢酶(LDH)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)水平。双荧光素酶报告实验验证miR-339-5p对IGF2的靶向作用。结果:miR-339-5p在肺炎链球菌处理的A549细胞中低表达,IGF2 mRNA高表达,差异有统计学意义(P<0.05)。过表达miR-339-5p或敲低IGF2后,肺炎链球菌处理的A549细胞凋亡率、Bax蛋白、CHOP蛋白、ATF6蛋白、MDA、LDH水平减少,Bcl-2蛋白、SOD、GSH-Px水平增加,差异有统计学意义(P<0.05)。miR-339-5p靶向调控IGF2 mRNA表达。过表达IGF2逆转了miR-339-5p对肺炎链球菌处理的A549细胞凋亡及内质网应激的影响。结论:miR-339-5p可能通过靶向调控IGF2,抑制肺炎链球菌诱导的肺泡上皮细胞凋亡和减轻内质网应激。

LncRNA UNC5B-AS1靶向miR-339-5p调控人肺腺癌细胞系A549增殖和凋亡

目的旨在研究lncRNA UNC5B-AS1靶向miR-339-5p对肺癌细胞增殖和凋亡的影响及分子机制。方法体外培养人肺腺癌细胞系A549;将si-NC、si-UNC5B-AS1、miR-NC、miR-339-5p mimics、si-UNC5B-AS1与anti-miR-NC、si-UNC5B-AS1与anti-miR-339-5p分别转染至A549细胞。RT-qPCR检测肺癌组织和癌旁组织中UNC5B-AS1和miR-339-5p表达;CCK-8法检测细胞增殖;流式细胞测量术检测细胞凋亡;双荧光素酶报告基因实验检测UNC5B-AS1与miR-339-5p的靶向调控关系;Western blot检测细胞周期蛋白D1(cyclin D1)、p21蛋白、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、B淋巴细胞瘤-2相关蛋白(Bax)表达。结果与癌旁组织比较,肺癌组织中UNC5B-AS1表达水平显著升高(P<0.05),miR-339-5p表达水平显著降低(P<0.05)。与si-NC组比较,si-UNC5B-AS1组细胞活力显著降低(P<0.05),细胞凋亡率显著升高(P<0.05)。与miR-NC组比较,miR-339-5p组细胞活力显著降低(P<0.05),细胞凋亡率显著升高(P<0.05)。与(si-UNC5B-AS1+anti-miR-NC)组比较,(si-UNC5B-AS1+anti-miR-339-5p)组细胞活力显著升高(P<0.05);细胞凋亡率显著降低(P<0.05)。结论通过干扰UNC5B-AS1上调人肺腺癌细胞系A549的miR-339-5p表达,促进其凋亡、抑制其增殖。

长链非编码RNA淋巴样增强因子1反义RNA 1调控miR-339-5p对骨肉瘤细胞增殖和凋亡作用的研究

背景:长链非编码RNA(lncRNA)淋巴样增强因子1反义RNA 1(LEF1-AS1)在骨肉瘤中的生物学意义及机制尚不清楚。目的:研究LEF1-AS1对微小RNA(miR)-339-5p的靶向调控及对骨肉瘤细胞增殖和凋亡的影响。方法:实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测LEF1-AS1、miR-339-5p在人骨肉瘤组织和瘤旁组织中的表达。在细胞U2OS中转染si-LEF1-AS1,细胞计数试剂盒8(CCK-8)和克隆形成测定细胞增殖与克隆能力,流式细胞术检测细胞凋亡,免疫印迹实验检测P21和含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(Caspase-3)蛋白表达。生物信息学预测和双荧光素酶报告实验分析LEF1-AS1和miR-339-5p的靶向关系。在细胞U2OS中共转染si-LEF1-AS1和anti-miR-339-5p,或共转染siLEF1-AS1和miR-339-5p,观察其在细胞增殖和凋亡中的作用。结果:与瘤旁组织比较,骨肉瘤组织中的LEF1-AS1表达量明显升高,miR-339-5p表达量显著减少(P<0.05)。抑制LEF1-AS1明显降低细胞U2OS的存活率和克隆形成数,显著提高凋亡率、P21和Caspase-3蛋白水平(P<0.05)。LEF1-AS1靶向、调控miR-339-5p的表达。si-LEF1-AS1和anti-miR-339-5p共转染明显减少细胞U2OS中miR-339-5p表达量、P21、Caspase-3蛋白表达量、细胞凋亡率,显著增加细胞U2OS存活率和克隆形成数(P<0.05)。si-LEF1-AS1和miR-339-5p共转染明显提高miR-339-5p表达量、P21、Caspase-3蛋白表达量和细胞凋亡率,显著降低细胞U2OS存活率和克隆形成数(P<0.05)。结论:LEF1-AS1靶向调控miR-339-5p的表达,抑制LEF1-AS1可抑制骨肉瘤细胞的增殖并诱导细胞凋亡。

丹皮酚通过上调miR-339-5p靶向HMGB1减轻神经病理性疼痛大鼠的炎症反应

目的:探究丹皮酚(Pae)通过上调微小RNA-339-5p(miR-339-5p)靶向高迁移率族蛋白B1(HMGB1)对神经病理性疼痛大鼠炎症反应的影响。方法:通过L5神经结扎横切构建神经病理性疼痛大鼠模型,将72只SD大鼠随机分为6组,假手术组(Sham)、模型组(Model)、Pae组、Pae+antagomir-NC组、Pae+miR-339-5p-antagomir组、Pae+miR-339-5p-antagomir+HMGB1抑制剂-甘草酸(GA)组,每组12只,给药7 d。手术前1 d及手术后3 d、11 d,测定大鼠行为学机械痛阈值(MWT)、热缩足反射潜伏期(TWL),手术后第12天,酶联免疫吸附法测定脊髓组织中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)水平,实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-PCR)法测定脊髓组织中miR-339-5p、HMGB1、IL-1β、TNF-αmRNA的表达,蛋白免疫印迹法(Western Blot)检测脊髓组织中HMGB1、IL-1β、TNF-α蛋白表达,双荧光素酶报告实验分析miR-339-5p与HMGB1的靶向关系。结果:术前1 d,各组大鼠MWT、TWL比较差异无统计学意义(P>0.05)。与Sham组比较,Model组大鼠术后MWT、TWL及miR-339-5p水平降低,IL-1β、TNF-α水平,HMGB1、IL-1β、TNF-αmRNA及蛋白水平升高(P<0.05);与Model组比较,Pae组大鼠术后MWT、TWL、miR-339-5p水平升高,IL-1β、TNF-α水平及HMGB1、IL-1β、TNF-αmRNA及蛋白水平降低(P<0.05);与Pae组比较,Pae+antagomir-NC组大鼠各指标差异无统计学意义(P>0.05),Pae+miR-339-5p-antagomir组大鼠术后MWT、TWL及miR-339-5p水平降低,IL-1β、TNF-α水平,HMGB1、IL-1β、TNF-αmRNA及蛋白水平升高(P<0.05);与Pae+miR-339-5p-antagomir组比较,Pae+miR-339-5p-antagomir+GA组大鼠术后MWT、TWL升高,IL-1β、TNF-α水平,HMGB1、IL-1β、TNF-αmRNA及蛋白水平降低(P<0.05);mir-339-5p与HMGB1存在靶向关系。结论:Pae通过上调miR-339-5p,靶向抑制HMGB1的表达,减轻神经病理性疼痛大鼠的炎症反应。

真武汤介导lncRNA NEAT1/miR-31-5p/IGFBP7分子轴抑制慢性心力衰竭进程的机制研究

目的:探讨真武汤通过lncRNA NEAT1/miR-31-5p/IGFBP7分子轴抑制慢性心力衰竭(CHF)进程的机制。方法:将雄性SD大鼠分为对照组、模型组、阳性对照组和真武汤低、中、高剂量组,每组各10只。除对照组外,其余各组采用腹腔注射阿霉素的方法建立CHF模型,阳性对照组给予美托洛尔灌胃,真武汤低、中、高剂量组给予真武汤(生药含量6、12、18 g/kg)灌胃。检测各组大鼠左心室射血分数(LVEF)、左心室短轴缩短率(LVFS),血清脑钠肽(BNP)水平,心脏体重比,心肌病理改变,心肌中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)水平及lncRNA NEAT1、miR-31-5p、IGFBP7表达水平。培养大鼠心肌H9c2细胞,采用双荧光素酶报告基因实验检测lncRNA NEAT1靶向miR-31-5p、miR-31-5p靶向IGFBP7。结果:与模型组比较,真武汤低、中、高剂量组的LVEF、LVFS增加,血清BNP水平降低(P<0.05);与模型组比较,真武汤低、中、高剂量组的心肌TNF-α、IL-1β、MDA水平降低,SOD水平增加(P<0.05);与模型组比较,真武汤低、中、高剂量组的心肌lncRNA NEAT1、IGFBP7表达降低,miR-31-5p表达增加(P<0.05)。H9c2心肌细胞中,lncRNA NEAT1靶向miR-31-5p、miR-31-5p靶向IGFBP7。结论:真武汤可能通过lncRNA NEAT1/miR-31-5p/IGFBP7分子轴改善CHF大鼠心功能并减轻炎症反应、氧化应激反应。

LncRNA SNHG3/miR-339-5p/PPIB轴对结直肠癌细胞恶性生物学行为的影响

目的探讨长链非编码RNA(LncRNA)小核仁RNA宿主基因(SNHG)3/miR-339-5p/肽酰脯氨基顺反异构酶(PPI)B轴对结直肠癌(CRC)细胞恶性生物学行为的影响。方法以SW620细胞为实验对象,分为:SW620组(未处理的SW620细胞)、si-NC组、si-SNHG3组、si-SNHG3+NC inhibitor组、si-SNHG3+miR-339-5p inhibitor组、si-SNHG3+pcDNA组、si-SNHG3+pcDNA PPIB组。荧光原位杂交实验和双荧光素酶报告基因检测LncRNA SNHG3、miR-339-5p、PPIB三者的靶向关系;实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测LncRNA SNHG3、miR-339-5p、PPIB表达;CCK-8检测SW620细胞活性;Tran-swell试验检测SW620细胞迁移、侵袭;Western印迹检测E-钙黏蛋白(cadherin)、波形蛋白(vimentin)、锌指转录因子(Snail)表达。结果与NC组相比,CRC组LncRNA SNHG3、PPIB相对表达量显著升高,miR-339-5p相对表达量显著下降(P<0.05);与NCM460组相比,SW620组LncRNA SNHG3、PPIB相对表达量显著上升,miR-339-5p相对表达量显著下降(P<0.05);LncRNA SNHG3与miR-339-5p存在靶向关系,miR-339-5p与PPIB存在靶向关系;下调LncRNA SNHG3显著降低SW620细胞增殖、迁移、侵袭能力及vimentin、Snail蛋白表达,显著升高E-cadherin蛋白表达(P<0.05),而下调miR-339-5p和上调PPIB均显著升高了SW620细胞增殖、迁移、侵袭能力及vimentin、Snail蛋白表达,显著降低E-cadherin蛋白表达(P<0.05)。结论敲低Ln-cRNA SNHG3可能通过调节miR-339-5p/PPIB轴调控CRC细胞增殖、侵袭等恶性生物学行为。

miR-155-5p介导PIK3R1负调控PI3K/AKT信号通路促进原发性干燥综合征人唾液腺上皮细胞增殖

目的探讨miR-155-5p靶向作用于PIK3R1调控PI3K/AKT信号通路对原发性干燥综合征人唾液腺上皮细胞(pSSHSGECs)的影响。方法通过双荧光素酶验证miR-155-5p与PI3K/AKT通路的靶向关系。利用TRAIL及INF-γ刺激细胞,模拟pSS-HSGECs细胞模型;空白组:HSGECs,模型组:TRAIL+INF-γ+HSGECs,空转组:TRAIL+INF-γ+HSGECs+miR-155-inhibitor-NC;miR-155抑制组:TRAIL+INF-γ+IHSGECs+miR-155-inhibitor;CKK-8法、流式细胞术、平板克隆形成实验分别检测细胞活力、细胞周期及凋亡率、细胞增殖能力。ELISA、RT-PCR方法分别检测相关细胞因子、miR-155-5p表达。蛋白质免疫印迹法检测PI3K/AKT信号通路蛋白表达。结果双荧光素酶检测结果表明,miR-155-5p与PI3K/AKT通路存在靶向关系,且PIK3R1mRNA为二者的结合位点。与空白组相比,模型组细胞活力、细胞克隆形成能力、IL-10、IL-4水平降低;细胞凋亡率、细胞周期G2期比例、TNF-α、IL-6、miR-155-5p、PIK3R1 mRNA表达、p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT比率、PIK3R1mRNA蛋白相对表达显著升高(P<0.01)。与模型组及空转组相比,miR-155抑制组细胞活力、G1期比例、克隆形成能力、IL-10和IL-4水平上升;同时细胞凋亡率、细胞周期G2期比例、TNF-α、IL-6、miR-155-5p、PIK3R1 mRNA表达、p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT比率及PIK3R1蛋白相对表达下降(P<0.05)。结论miR-155-5p可靶向作用于PI3K1mRNA,负向调节PI3K/AKT信号通路的过表达,改善pSSHSGECs增殖与凋亡异常,调节炎症反应。

miR-192-5p在增生性瘢痕组织及成纤维细胞中的表达及调控

背景:研究表明,miRNAs的表达与肝纤维化、肾纤维化及皮肤纤维化发生有关;并证实在痛风性关节炎中miR-192-5p与表皮调节素存在靶向调控关系。目的:探讨miR-192-5p在增生性瘢痕中的表达及调控作用,并验证miR-192-5p与表皮调节素之间存在靶向调控关系。方法:①在新疆医科大学第一附属医院收集6例增生性瘢痕组织及6例正常皮肤组织,采用qRT-PCR法检测miR-192-5p与表皮调节素mRNA表达。②组织块法获取原代增生性瘢痕成纤维细胞,传代培养至3-6代用于后续实验,实验分为3个组:阴性对照组、miR-192-5p模拟物组和miR-192-5p抑制物组,分别转染对应的序列。采用CCK-8法和EdU试剂盒检测细胞增殖活力,划痕实验检测细胞迁移能力,流式细胞术检测细胞凋亡,qRT-PCR和Western blot法检测表皮调节素、Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原和α-SMA的基因和蛋白表达,生物信息学网站预测miR-192-5p靶点,双荧光素酶实验验证靶向结合。结果与结论:①与正常皮肤组织及其成纤维细胞相比,miR-192-5p和表皮调节素在增生性瘢痕和增生性瘢痕成纤维细胞中均呈高表达(P<0.05或P<0.01);②过表达miR-192-5p后,与阴性对照组比较,细胞增殖能力增强(P<0.05),EdU阳性细胞率增加(P<0.01);抑制miR-192-5p后细胞活力降低(P<0.05),EdU阳性细胞率减少(P<0.05);③过表达miR-192-5p 24 h后,与阴性对照组比较,模拟物组细胞划痕间面积、细胞凋亡率减小(P<0.05),miR-192-5p抑制物组细胞划痕间面积、细胞凋亡率增加(P<0.01);④转染48 h后,miR-192-5p模拟物组表皮调节素mRNA及蛋白水平显著降低、Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原和α-平滑肌肌动蛋白mRNA及蛋白水平显著增高(P<0.05或P<0.01);miR-192-5p抑制物组上述4项指标呈现相反的变化(P<0.05或P<0.01);⑤Targetscan网站预测表皮调节素与miR-192-5p有潜在结合位点;⑥双荧光素酶实验显示,miR-192-5p能够与表皮调节素靶向结合。结果说明:miR-192-5p过表达可降低表皮调节素的表达,二者可能存在负向调控;提示通过调控表皮调节素可能起到抑制增生性瘢痕成纤维细胞增殖的作用。

MiR-31-5p调控非小细胞肺癌吉非替尼耐药机制的研究

目的:探讨miR-31-5p对吉非替尼耐药的影响及其作用机理。方法:利用TargetScan、miRDB、mirDIP和ENCORI等在线工具预测PRSS8的靶向miRNAs,并从高通量数据库(GEO)搜索并下载与吉非替尼耐药相关的miRNA芯片数据,筛选差异表达的miRNAs。利用实时荧光定量PCR技术(RT-qPCR)检测miR-31-5p在吉非替尼敏感的NSCLC(PC9)和对吉非替尼产生耐药的NSCLC(PC9/GR)表达。将PC9/GR细胞分为两组,分别转染miR-31-5p NC、miR-31-5p mimic;应用CCK8技术测定经转染处理后的细胞对吉非替尼的敏感性;应用蛋白免疫印迹分析法(WB)测定细胞PRSS8、BAX、BCL-2的表达。结果:生信分析表明miR-31-5p为靶向PRSS8且在吉非替尼耐药细胞中异常表达的miRNA。实时定量PCR分析表明,miR-31-5p在PC9/GR细胞中的表达量相比PC9细胞有所降低(P<0.0001)。miR-31-5p mimic组细胞增殖速度明显低于NC组(均P<0.0001)。在miR-31-5p mimic组中,与NC组相比,BAX蛋白的表达水平显示出上升趋势(P<0.001),而BCL-2水平下降(P<0.05)。进一步研究发现,miR-31-5p mimic组PRSS8 mRNA(P<0.0001)、蛋白均下调(P<0.05)。结论:非小细胞肺癌耐药细胞PC9/GR中miR-31-5p表达明显下降,且miR-31-5p通过降低PRSS8的表达可能有助于逆转PC9/GR细胞对吉非替尼药物耐药的情况。