miR-33a-5p靶基因分析验证及对人肺腺癌A549细胞增殖的影响

目的研究miR-33a-5p过表达对人肺腺癌A549细胞增殖的影响及探索其可能的机制。方法在A549细胞中瞬时转染miR-33a-5p mimics,CCK-8和BrdU实验检测细胞增殖能力,转录组测序(RNA-seq)检测mRNA表达水平,targetscan(8.0)、miRDB(2020)、miRWalk(release_2022_01)和ENCORI(starbase,v2.0)联合筛选miR-33a-5p的潜在靶基因,并与RNA-seq的下调表达的基因取交集,RT-qPCR进行基因表达验证。结果RT-qPCR结果显示,miR-33a-5p在A549细胞中高表达(P<0.05);CCK-8实验和BrdU实验结果显示,细胞增殖能力受到抑制(P均<0.05);RNA-seq结果显示,差异基因共494个,其中上调266个,下调228个;GO功能富集主要在细胞外区组成、质膜的组成、受体复合物、细胞外泌体、细胞外基质结构组成、钙离子结合等,KEGG富集主要在补体和凝血途径、胰岛素抵抗、ABC转运途径、IL-17途径、NOD样受体途径和NF-κB信号通路等;靶基因预测分析和RT-qPCR表达验证显示,MTHFD2、OSBPL6、HADHB、HMGCLL1、GUCY1A2和DEPTOR是miR-33a-5p的潜在靶基因(P均<0.05)。结论miR-33a-5p可能通过调控MTHFD2、OSBPL6、HADHB、HMGCLL1、GUCY1A2和DEPTOR基因转录后表达水平来抑制A549细胞的增殖。

妊娠期糖尿病患者血清LncRNA DANCR和miR-33a-5p水平表达对妊娠结局预测价值研究

目的 探讨妊娠期糖尿病(gestational diabetes mellitus,GDM)患者血清长链非编码核糖核酸分化拮抗非蛋白编码RNA (long noncoding RNA differentiation antagonizing nonprotein coding RNA,LncRNA DANCR)、微小RNA-33a-5p (miR-33a-5p)水平表达对妊娠结局的预测价值。方法 选取2021年8月~2023年2月于衡水市第四人民医院产检和分娩的154例GDM患者为GDM组,并根据妊娠结局分为良好结局组(n=115)和不良结局组(n=39);同期收集24周葡萄糖耐量试验正常的149例健康孕产妇作为对照组。采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测血清LncRNA DANCR和miR-33a-5p水平;采用受试者工作特征(receiver operating characteristic,ROC)曲线分析血清LncRNA DANCR和miR-33a-5p预测GDM患者不良妊娠结局的价值;采用Pearson相关性分析GDM不良妊娠结局患者血清LncRNA DANCR,miR-33a-5p与空腹血糖(FBG)、空腹胰岛素(FINS)、稳态模式评估法计算胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)的相关性;Logistic回归分析GDM患者不良妊娠结局的影响因素。结果 GDM组血清LncRNA DANCR水平(0.69±0.15)显著低于对照组(1.01±0.22),miR-33a-5p (1.59±0.40)及不良妊娠结局总发生率(25.34%)显著高于对照组(1.02±0.23,5.36%),差异具有统计学意义(t/χ^(2)=14.835,15.140,23.011,均P<0.05)。不良妊娠结局组血清LncRNADANCR水平(0.50±0.14)显著低于良好结局组(0.75±0.18),miR-33a-5p (2.00±0.58),FBG (8.97±0.66mmol/L),FINS (18.63±1.31pmol/ml)和HOMAIR (7.42±0.98)显著高于良好结局组(1.45±0.26,8.01±0.59mmol/L,14.32±1.29pmol/ml,5.10±0.86),差异具有统计学意义(t=7.895~17.961,均P<0.05)。LncRNA DANCR,miR-33a-5p单独及二者联合预测GDM患者不良妊娠结局的曲线下面积(area under curve,AUC)分别为0.820,0.819和0.897。GDM不良妊娠结局患者血清LncRNA DANCR与FBG,FINS,HOMA-IR呈负相关(r=-0.498,-0.513,-0.509,均P<0.05),miR-33a-5p与FBG,FINS,HOMA-IR呈正相关(r=0.517,0.494,0.507,均P<0.05)。LncRNA DANCR是影响GDM患者不良妊娠结局的保护因素(OR=0.804,95%CI:0.693~0.933,P=0.004),miR-33a-5p是影响GDM患者不良妊娠结局的危险因素(OR=2.747,95%CI:1.444~5.225,P=0.002)。结论 GDM不良妊娠结局患者LncRNADANCR降低,miR-33a-5p升高,二者均是不良妊娠结局的影响因素。

血清miR-92a联合miR-33a对膀胱癌患者预后的预测价值

目的探讨血清miR-29a联合miR-33a对膀胱癌患者预后的预测价值。方法回顾性分析2018年5月至2020年3月江苏省海安市人民医院收治的105例膀胱癌患者的临床资料。术后随访2年,根据预后情况分为预后不良组与预后良好组。分析膀胱癌患者预后不良的影响因素,分析血清miR-92a、miR-33a水平对膀胱癌患者预后不良的预测价值。结果105例膀胱癌患者预后不良的发生率为36.19%(38/105)。预后不良组肿瘤直径>3 cm、T_(2)~T_(4)期、淋巴结转移、低分化占比高于预后良好组,血清miR-92a、miR-33a水平低于预后良好组,差异有统计学意义(P<0.05)。临床分期、淋巴结转移、肿瘤分化程度及血清miR-92a、miR-33a为膀胱癌患者预后不良的影响因素(P<0.05)。血清miR-92a、miR-33a联合预测膀胱癌患者预后不良的曲线下面积高于二者单独预测(P<0.05)。结论血清miR-92a、miR-33a水平可用于预测膀胱癌患者预后,且二者联合具有更高的预测价值。

miR-107、miR-33a-3p表达与胃癌临床病理特征及预后的关系

目的 探究胃癌组织中miR-107、miR-33a-3p的表达及与其临床病理特征和预后的关系。方法 选取胃癌患者100例。收集患者临床资料,RT-PCR检测miR-107、miR-33a-3p水平,分析其与临床病理特征的关系,应用多因素回归模型分析影响胃癌预后的独立因素。结果 miR-107和miR-133a-3p表达与患者年龄、性别等无关(P>0.05),与肿瘤最大直径、肿瘤分化程度、肿瘤分期、淋巴结远处转移等有关(P<0.05)。单因素分析发现,分化程度、淋巴结远处转移、miR-107和miR-133a-3p表达是影响胃癌预后的因素(P<0.05)。多因素分析显示:肿瘤分化程度、淋巴结远处转移、miR-107和miR-133a-3p表达是影响胃癌患者预后的独立危险因素(P<0.05)。结论 胃癌组织中miR-107、miR-33a-3p与临床病理特征有关,miR-107、miR-33a-3p表达可作为预测胃癌患者预后的生物标志物。

miR-33a基于Notch信号通路对幼年哮喘小鼠Th17/Treg细胞平衡的影响

目的 探究miR-33a通过调控Notch信号通路对幼年哮喘小鼠辅助性T细胞17(Th17)/调节性T细胞(Treg)平衡的影响。方法 小鼠随机分为对照组、哮喘组和miR-33a组(哮喘+miR-33a)。qRT-PCR检测各组肺组织miR-33a水平。比较各组大鼠气道阻力、Th17/Treg细胞平衡及其细胞因子、淋巴细胞Notch信号通路的水平。结果 与对照组比较,哮喘组肺组织miR-33a降低,气道阻力和肺组织损伤程度升高,Th17、Th17/Treg、白细胞介素-17及Notch信号通路水平升高,Treg水平降低(P<0.05);而与哮喘组比较,miR-33a组上述趋势均得到逆转(P<0.05)。结论 miR-33a可通过抑制Notch信号通路,使Th17/Treg平衡向Treg偏移,从而改善哮喘小鼠气道反应性。

CRNDE介导miR-33a-5p/CDK6轴影响细胞周期调控人体肝癌细胞增殖的实验研究

目的探讨CRNDE介导miR-33a-5p/CDK6轴影响细胞周期,调控人体肝癌细胞增殖的作用机制。方法运用细胞转染技术构建稳定干扰CRNDE/低表达CRNDE的人体肝癌细胞模型shRNA-CRNDE-HuH-7;RT-qPCR及Western blotting技术检测HL-7702人体肝细胞株、HuH-7人体肝癌细胞株及shRNA-CRNDE-HuH-7细胞株中CRNDE、miR-33a-5p及CDK6的表达情况,评估其相关性及miR-33a-5p/CDK6轴随CRNDE表达量变化的相关程度;对上述三组细胞株进行细胞增殖实验(CCK8)、细胞凋亡检测、细胞侵袭测试及细胞周期检测,评估在不同CRNDE表达情况下三组细胞株的增殖、凋亡、侵袭能力及细胞周期的变化。结果RT-qPCR及Western blotting技术检测shRNA-CRNDE-HuH-7细胞株中CRNDE表达低于HuH-7人体肝癌细胞株(P<0.05);当控制位点为CDK6时,三组细胞株中CRNDE表达量与其呈正相关(r=0.856,P<0.05);当控制位点为miR-33a-5p时,三组细胞株中miR-33a-5p表达量与CDK6及CRNDE均呈负相关(r=-0.883,P<0.05;r=-0.937,P<0.05);在三组细胞株中,随CRNDE表达下调,细胞增殖、侵袭能力及细胞周期均受到抑制(P<0.05),shRNA-CRNDE-HuH-7细胞株中肿瘤细胞凋亡高于HuH-7细胞株(P<0.05)。结论CRNDE与miR-33a-5p存在靶向关系,CRNDE以靶向调节作用抑制miR-33a-5p的表达,进而介导CDK6的升高,通过miR-33a-5p/CDK6轴促进肝细胞肝癌的增殖,其可能成为肝细胞肝癌的新肿瘤标志物和分子生物治疗靶点。

miR-33a通过下调lumican基因抑制结肠癌细胞的侵袭和迁移

目的:探讨不同级别结肠癌中miR-33a和基膜聚糖(lumican)基因的表达情况,同时研究miR-33a对于结肠癌细胞侵袭和迁移的影响。方法:收集2015年1月至2016年1月新乡医学院第一附属医院肿瘤科收治的141例结肠癌患者,Western blotting和qPCR检测不同级别结肠癌组织中miR-33a和lumican的表达情况。使用miR-33a mimic转染人结肠癌细胞SW480,q PCR检测miR-33a mimic转染后细胞miR-33a和lumican mRNA的表达变化情况,使用Transwell侵袭实验检测miR-33a对人结肠癌细胞SW480侵袭能力的影响,使用划痕实验检测miR-33a对人结肠癌细胞SW480迁移能力的影响。裸鼠皮下成瘤实验检测miR-33a对结肠癌移植瘤生长以及裸鼠生存的影响。结果:随着结肠癌肿瘤级别的增加,miR-33a表达明显降低,而lumican表达水平明显增加;随着结肠癌病理分期和分级的增加,miR-33a表达逐渐降低;淋巴结转移的结肠癌组织中miR-33a的表达明显降低。转染miR-33a-mimic可以明显上调miR-33a的表达,上调miR-33a可以显著降低lumican蛋白表达水平、可以抑制结肠癌细胞的侵袭和迁移能力。miR-33a-mimic组荷瘤裸鼠肿瘤增长幅度明显减慢,而荷瘤裸鼠生存期明显延长。结论:miR-33a与结肠癌分期、分级以及是否有淋巴结转移有关,miR-33a可通过下调lumican抑制结肠癌细胞的侵袭和迁移。

血清miR-33a、miR-29c、miR-126联合检测对脑动脉粥样硬化的诊断价值

目的探讨血清miR-33a、miR-29c、miR-126联合检测对脑动脉粥样硬化的诊断价值。方法选择2018年1月至2020年1月该院收治的脑动脉粥样硬化患者120例为研究组,同期体检健康者120例为对照组。根据不同脑动脉硬化严重程度将患者分为单动脉组(23例)、双动脉组(53例)、多动脉组(44例)。采用实时荧光定量PCR检测研究组与对照组及不同脑动脉粥样硬化严重程度患者血清miR-33a、miR-29c、miR-126的相对表达水平。采用受试者工作特征曲线(ROC曲线)分析血清miR-33a、miR-29c、miR-126对脑动脉粥样硬化的诊断价值。结果研究组血清miR-33a、miR-29c、miR-126的相对表达水平明显高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。血清miR-33a、miR-29c、miR-126在不同脑动脉粥样硬化严重程度患者中的相对表达水平差异有统计学意义(P<0.05)。血清miR-33a、miR-29c、miR-126单项检测对脑动脉粥样硬化诊断的灵敏度分别为95.00%、93.00%、92.00%,特异度分别为95.00%、92.00%、91.00%。血清miR-33a、miR-29c、miR-126联合检测对脑动脉粥样硬化诊断的灵敏度为96.67%,特异度为90.00%,准确度为93.33%。结论血清miR-33a、miR-29c、miR-126可作为联合诊断脑动脉粥样硬化的潜在标志物。

过表达miR-33a抑制卵巢癌细胞SKOV3增殖和侵袭

目的研究miR-33a过表达对卵巢癌细胞增殖和侵袭行为的影响。方法转miR-33a模拟物以高表达SKOV3细胞中miR-33a的表达;qRT-PCR实验检测转染效率;MTT实验观察miR-33a模拟物对SKOV3细胞增殖的影响;细胞侵袭实验观察miR-33a模拟物对SKOV3细胞侵袭能力的变化。结果 qRT-PCR结果显示,miR-33a模拟物组SKOV3细胞中miR-33a的表达水平与无关序列对照组比较明显增高,差异有统计学意义(P <0. 01);MTT实验显示,转染miR-33a模拟物组的SKOV3细胞的增殖能力明显受到抑制,与对照组相比差异有统计学意义(P <0. 01);细胞侵袭实验显示,转染miR-33a模拟物组的SKOV3细胞的侵袭力明显受到抑制,与对照组相比差异有统计学意义(P <0. 01)。结论在卵巢癌SKOV3细胞中过表达miR-33a可抑制卵巢癌细胞的增殖与侵袭。

miR-33a-5p靶向SMAD7对血管平滑肌细胞增殖、凋亡、迁移及细胞外基质降解的影响

目的:探究miR-33a-5p靶向SMAD7对血管平滑肌细胞增殖、凋亡、迁移及细胞外基质降解的影响。方法:生物信息学预测靶向关系,荧光素实验进一步验证靶向关系,RT-PCR检测miR-33a-5p和SMAD7的表达,CCK-8法检测VSMC的增殖,流式检测细胞凋亡,划痕实验检测细胞迁移,Western blot检测Ki67、PCNA、Caspase-3、Caspase-9、MMP-2和MMP-9蛋白表达水平。结果:PDGF-bb处理能够增强血管平滑肌细胞增殖,抑制miR-33的表达;miR-33a-5p与SMAD7在3′UTR区存在结合位点,miR-33a-5p直接靶向作用于SMAD7,且miR-33a-5p过表达抑制SMAD7的表达;miR-33a-5p靶向SMAD7抑制PDGF-bb诱导的血管平滑肌细胞增殖、下调增殖标记蛋白PCNA和Ki67表达,促进细胞凋亡、上调凋亡标记蛋白Caspase-3和Caspase-9的表达,降低伤口愈合率、抑制细胞迁移,下调MMP-2和MMP-9的表达(P<0.01)。结论:miR-33a-5p靶向SMAD7抑制PDGF-bb诱导的血管平滑肌细胞增殖、迁移和细胞外基质的降解,并促进凋亡。

不同剂量咪达唑仑通过上调miR-33a-5p抑制胶质瘤细胞的增殖、凋亡

目的探讨咪达唑仑(Mida)对胶质瘤细胞的增殖、凋亡的影响及其作用机制。方法胶质瘤细胞SHG139和U87分为不同浓度Mida(0、15、30、60μg/ml)组、对照(NC)组、miR-con组、miR-33a-5p组、Mida+anti-miR-con组、Mida+anti-miR-33a-5p组;实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测miR-33a-5p和同源盒蛋白(Six)1 mRNA表达水平;Western印迹法检测Six1、增殖细胞核抗原(PCNA)和裂解半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(Cleaved caspase)-3蛋白表达;四甲基偶氮唑盐比色法(MTT)和克隆形成实验检测细胞活性和克隆形成能力;流式细胞术检测细胞凋亡;双荧光素酶报告基因检测miR-33a-5p和Six1的靶向关系。结果不同剂量的Mida可减弱SHG139和U87细胞活性、克隆形成能力;降低PCNA、Six1表达,提高细胞凋亡率和Cleaved caspase-3、miR-33a-5p表达水平。miR-33a-5p靶向调控Six1,转染miR-33a-5p可减弱SHG139和U87细胞活性、克隆形成能力;降低PCNA、Six1表达,提高细胞凋亡率和Cleaved-caspase-3表达水平。干扰miR-33a-5p部分逆转了Mida对胶质瘤细胞SHG139和U87增殖抑制和凋亡促进作用。结论Mida可抑制胶质瘤细胞增殖,促进细胞凋亡,其机制可能与miR-33a-5p、Six1相关,将为胶质瘤的治疗提供新思路和新靶点。

miR-33a靶向Lipin1和IRS2调节绵羊前体脂肪细胞分化的研究

旨在揭示miR-33a在绵羊前体脂肪细胞分化中的生物学功能。本研究以15日龄雄性绵羊背部皮下前体脂肪细胞为试验材料,所有的试验均设立3个重复;利用生物信息学软件预测miR-33a的靶基因,并通过双荧光素酶报告试验对预测的潜在靶基因进行验证;用qPCR和Western blotting分别检测miR-33a、Lipin1和IRS2及其编码蛋白的表达,以揭示miR-33a与其靶基因在绵羊前体脂肪细胞分化中的表达规律;慢病毒介导实现miR-33a的过表达和干扰后,检测Lipin1、IRS2和成脂标志基因的表达,并用油红O染色检测脂滴沉积能力,以解析miR-33a对其靶基因的调节机制。生物信息学分析发现,miR-33a与Lipin1和IRS23′-UTR都存在结合位点,miR-33a显著下调Lipin1和IRS2野生型双荧光质粒的相对荧光活性(P<0.05);在绵羊前体脂肪细胞分化中,miR-33a与Lipin1和IRS2的表达趋势相反;过表达miR-33a后,显著下调了Lipin1(P<0.01)和IRS2(P<0.05)及其编码蛋白以及成脂标志基因的表达;干扰miR-33a后,这些基因和蛋白的表达则显著上调;过表达miR-33a减少了脂滴沉积,干扰miR-33a促进了脂滴沉积。在绵羊前体脂肪细胞分化中,miR-33a与Lipin1和IRS2的表达呈负相关。miR-33a靶向Lipin1和IRS2的3′-UTR抑制绵羊前体脂肪细胞分化和脂滴沉积。

血清miR-122、miR-33a水平在老年原发性肝癌患者中的意义及其对TACE治疗预后的影响

目的探讨血清miR-122、miR-33a水平在老年原发性肝癌患者中的意义,并分析二者对经肝动脉化疗栓塞术(TACE)治疗预后的影响。方法前瞻性选取2017年1月至2020年6月在该院接受TACE治疗的80例老年原发性肝癌患者作为研究对象,治疗2个周期后至少随访1个月,根据患者预后情况分为预后良好组与预后不良组,设计基线资料调查表,统计两组基线资料及实验室指标,重点分析治疗前血清miR-122、miR-33a水平对老年原发性肝癌患者TACE治疗预后的影响。结果80例老年原发性肝癌患者TACE治疗后预后不良35例,预后不良率为43.75%;预后不良组与预后良好组血清甲胎蛋白(AFP)、miR-122、miR-33a水平比较,差异有统计学意义(P<0.05),组间其他资料比较差异无统计学意义(P>0.05);Logistic回归分析检验结果显示,血清miR-122、miR-33a水平过表达可能是老年原发性肝癌患者TACE治疗预后不良的保护因子(OR=0.023、0.494,P<0.05),血清AFP过表达可能是老年原发性肝癌患者TACE治疗预后不良的风险因子(OR=1.045,P<0.05);治疗前血清miR-122、miR-33a水平预测老年原发性肝癌患者TACE治疗预后不良风险的ROC曲线下面积均>0.80,预测价值均较为理想,且以联合预测价值最高。结论老年原发性肝癌患者治疗前血清miR-122、miR-33a水平异常低表达对TACE治疗预后不良具有一定影响。

miR-33a-5p对骨肉瘤细胞Saos-2增殖的影响及其机制

目的观察miR-33a-5p对骨肉瘤细胞Saos-2增殖的影响,并探讨其相关机制。方法采用Real timePCR法检测骨肉瘤细胞Saos-2及正常人成骨细胞h FOB1.19中miR-33a-5p mRNA相对表达量。将对数生长期的骨肉瘤细胞Saos-2分为两组,分别转染miR-33a-5p mimics(mimics组)及Scramble(对照组)。采用MTT法检测两组培养24、48、72、96及120 h细胞增殖能力,细胞克隆形成实验检测细胞克隆形成能力(以克隆形成率表示),流式细胞术比较细胞周期,Westen blotting法检测细胞周期蛋白激酶2(CDK2)、CDK4、细胞周期蛋白D(Cyclin D)及Cyclin E蛋白相对表达量。结果骨肉瘤细胞Saos-2及正常人成骨细胞h FOB1.19中miR-33a-5p mRNA相对表达量分别为2.65±0.43和24.32±3.21,两者比较P<0.01。随着培养时间延长,两组细胞增殖能力均呈升高趋势;与对照组同时间点比较,mimics组细胞增殖能力均降低(P均<0.01)。mimics组和对照组克隆形成率分别为25.34%±3.46%、53.27%±5.82%,两组比较P<0.01。mimics组和对照组分别有46.37%±4.28%、30.64%±3.52%的细胞处于G1期,分别有13.25%±1.25%、22.62%±2.01%的细胞处于G2期,两组比较P均<0.01。mimics组CDK2、CDK4、Cyclin D、Cyclin E蛋白相对表达量均低于对照组(P均<0.01)。结论骨肉瘤细胞Saos-2中miR-33a-5p表达降低,上调其表达可抑制细胞增殖;下调CDK2、CDK4、Cyclin D及Cyclin E等细胞周期相关蛋白的表达可能为miR-33a-5p的作用机制。

miR-33a在哮喘患儿痰液的表达及对哮喘小鼠气道炎症的影响

目的探讨miR-33a在哮喘患儿及哮喘小鼠中的表达及其对气道炎症的作用。方法应用real-time PCR方法检测哮喘患儿和健康儿童痰液,以及卵清蛋白诱导的哮喘小鼠和正常小鼠肺组织中miR-33a的表达;化学合成miR-33a模拟物与阴性对照,并分别鼻滴至哮喘小鼠,HE染色验证哮喘小鼠模型的成功建立,免疫荧光方法和Western blot方法检测各组小鼠肺组织肿瘤坏死因子-α(TNF-α)与白介素-6(IL-6)的蛋白表达。结果与对照组相比,哮喘患儿痰液及哮喘小鼠肺组织中miR-33a表达显著降低(P<0.01);HE染色显示哮喘模型组小鼠炎症细胞浸润明显高于正常对照组,哮喘小鼠模型成功建立。miR-33a模拟物滴入后,哮喘小鼠肺组织TNF-α与IL-6的蛋白表达显著降低(P<0.01)。结论 miR-33a在支气管哮喘患儿及支气管哮喘小鼠模型中低表达,miR-33a模拟物能够抑制哮喘小鼠的气道炎症。

miR-33a-3p通过调控EphA2影响结直肠癌化疗耐药

目的探讨微小RNA-33a-3p(miR-33a-3p)对结直肠癌化疗耐药的影响及其调控机制。方法实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测结直肠癌亲本株(HCT8)及耐药细胞株(HCT8/5-Fu及HCT8/DDP)中miR-33a-3p的表达。构建miR-33a-3p模拟物和阴性对照转染至结直肠癌耐药细胞后检测细胞增殖、凋亡、周期分布及化疗敏感性变化,运用生物信息学方法预测miR-33a-3p的靶基因,运用qRT-PCR和Western blot检测过表达miR-33a-3p对下游靶基因EphA2的影响。结果结直肠癌耐药细胞系中miR-33a-3p的表达显著低于亲本株(均P<0.01)。与阴性对照组相比,过表达miR-33a-3p的耐药细胞增殖能力降低,细胞凋亡增加,细胞于G;/M周期阻滞,化疗敏感性增强(均P<0.05)。生物信息学预测结果显示EphA2可能为miR-33a-3p的下游靶基因。当过表达miR-33a-3p时,耐药细胞EphA2表达明显降低。结论 miR-33a-3p可能通过调控下游靶基因EphA2的水平逆转结直肠癌化疗耐药。

MiR-33a抑制肝癌细胞的增殖、侵袭和迁移

miR-33a参与许多肿瘤发展的调控。然而,其对肝癌的作用还未完全清楚。本研究探讨了miR-33a在肝癌细胞中的表达及其功能。实时荧光定量PCR显示,与永生化的正常肝细胞系LO2相比,miR-33a在SMMC-7721、Bel-7405、Hep3B细胞中表达量较高,在SK-Hep-1、HepG2、Huh7细胞中表达量较低。其中,在SMMC-7721中表达量最高,在Huh7中表达量最低。分别用miR-33a模拟物和抑制物转染表达量最高和最低的细胞系SMMC-7721和Huh7,实时荧光定量PCR显示,模拟物转染细胞后,36 h转染效率最高;cy3染色法显示,抑制物转染细胞后,各时间点被标记的细胞均大于60%;CCK-8法和Transwell法显示,miR-33a抑制SMMC-7721和Huh7细胞增殖、迁移和侵袭;Western印迹显示,miR-33a抑制SMMC-7721、Huh7细胞claudin-1表达,促进E-钙粘蛋白表达;balb/c裸鼠成瘤实验表明,皮下注射miR-33a拮抗剂能促进肿瘤生长。上述结果证明,miR-33a在不同的肝癌细胞系中表达水平高低不一,在SMMC-7721中最高,Huh7中最低;miR-33a可以抑制肝癌细胞增殖,并可能通过抑制claudin-1及促进E-钙粘蛋白表达,抑制上皮间质转化进程抑制肝癌细胞侵袭和迁移。

低表达miR-33a诱导胰腺癌细胞对吉西他滨的耐药

背景与目的:胰腺癌是一种恶性程度很高的肿瘤。由于其对一线化疗药物吉西他滨的耐受,往往导致预后较差。Micro RNA(mi RNA,mi R)是一类非编码小RNA,参与肿瘤的多种生物学功能。mi R-33a作为代谢相关的mi RNA被广泛研究,而与耐药之间关系的报道较少。该研究通过探讨mi R-33a参与胰腺癌吉西他滨耐药及其作用解析,为胰腺癌化疗提供新的理论依据。方法:采用原位杂交方法检测胰腺癌组织中mi R-33a的表达情况;采用实时荧光定量PCR(Real-time PCR)检测各胰腺癌细胞系中mi R-33a的表达情况。利用SW1990和Miapaca-2胰腺癌亲本细胞株,构建吉西他滨耐药细胞株(SW1990res,Miapaca-2res)及mi R-33a稳定表达细胞株(SW1990-mi R-33a,Miapaca-2-mi R-33a、SW1990res-mi R-33a和Miapaca-2res-mi R-33a);采用细胞毒性实验检测mi R-33a的表达对胰腺癌细胞对吉西他滨敏感性的影响。结果:mi R-33a在胰腺癌组织样本中普遍低表达。与HEK293T正常人胚肾细胞相比,其在各胰腺癌细胞系中均呈低表达。mi R-33a过表达可以增加胰腺癌细胞对吉西他滨的药物敏感性,能有效逆转胰腺癌细胞对吉西他滨的耐药。结论:mi R-33a在胰腺癌组织中低表达,导致胰腺癌患者对吉西他滨获得性耐药。增加mi R-33a表达,从而增强了胰腺癌细胞对吉西他滨的药物敏感性,为开发新型胰腺癌分子靶向治疗药物,联合化疗提供新的理论依据。

茶多酚通过miR-33a-5p/RUNX2介导人牙槽骨成骨细胞增殖和凋亡

目的:探讨茶多酚对人牙槽骨成骨细胞增殖和凋亡的影响及分子机制。方法:分离培养人牙槽骨成骨细胞,用含0.0001~100μg·ml^(-1)茶多酚的DMEM培养基培养人牙槽骨成骨细胞,记为不同浓度茶多酚处理组,用不含茶多酚的正常培养基培养的细胞作为对照组;将pcDNA3.1-NC、pcDNA3.1-RUNX2、anti-NC、anti-miR-33a-5p、mimics-NC、miR-33a-5p分别转染至人牙槽骨成骨细胞中,记为pcDNA3.1-NC组、pcDNA3.1-RUNX2组、anti-NC组、anti-miR-33a-5p组、mimics-NC组、miR-33a-5p组。细胞计数试剂盒8(CCK-8)检测细胞活力;流式细胞术检测细胞凋亡;蛋白质印迹(Western blot)法检测细胞增殖核抗原Ki67(Ki-67)、增殖细胞核抗原(PCNA)、B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、runt相关转录因子2(RUNX2)蛋白表达;实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测miR-33a-5p和RUNX2 mRNA表达;荧光素酶报告实验检测miR-33a-5p对RUNX2的靶向调控。结果:各浓度茶多酚处理的人牙槽骨成骨细胞的细胞活力显著升高,凋亡率显著降低(P<0.05),其中茶多酚浓度为1μg·ml^(-1)处细胞活力和凋亡率达到极值;1μg·ml^(-1)茶多酚处理的成骨细胞中Ki-67、PCNA、Bcl-2水平及RUNX2 mRNA和蛋白表达水平显著升高,Bax和miR-33a-5p水平显著降低(P<0.05)。过表达RUNX2或抑制miR-33a-5p表达,细胞活力及Ki-67、PCNA、Bcl-2水平显著升高,细胞凋亡率和Bax水平显著降低(P<0.05)。miR-33a-5p靶向负调控RUNX2。结论:茶多酚可能通过miR-33a-5p/RUNX2轴促进人牙槽骨成骨细胞增殖,抑制细胞凋亡。

miR-33a miR-133a对慢性乙肝感染患者肝纤维化评估作用

目的:分析慢性乙型肝炎病毒(HBV)感染患者血清miR-33a、miR-133a表达水平,并探讨其表达水平与患者肝纤维化的关系及其对重度肝纤维的诊断价值。方法:2017年1月至2018年6月在本院就诊的132例慢性HBV感染患者(乙肝组)均行肝组织活检,根据Metavir系统评分对患者肝纤维化进行分级,并分为轻中度肝纤维化组78例和重度肝纤维化组54例。同时选择100例无家族乙肝病史的健康者为对照组。RT-PCR检测受试者血清miR-33a、miR-133a表达水平,Pearson相关系数(r)法和受试者工作特征曲线(ROC)分别用于分析miR-33a、miR-133a水平与患者肝纤维化分级的关系及对重度肝纤维化的诊断价值。结果:乙肝组血清ALT、AST、TBIL、miR-33a表达水平高于对照组(P<0.05),miR-133a表达水平低于对照组(P<0.05);重度肝纤维化组血清miR-33a表达水平高于轻中度肝纤维化组(P<0.05),miR-133a水平低于轻中度肝纤维化组(P<0.05);乙肝组血清miR-33a与肝纤维化分级呈正相关关系(r=0.613,P=0.005),血清miR-133与肝纤维化分级呈负相关关系(r=-0.598,P=0.009);血清miR-33a、miR-133a诊断重度肝纤维的ROC曲线下面积(AUC)分别为0.740、0.694,miR-33a诊断临界值为1.79,敏感性、特异性分别为74.97%、89.39%,miR-133a诊断临界值为0.86,敏感性、特异性分别为70.70%、80.45%。结论:慢性HBV感染患者血清miR-33a水平升高,miR-133a水平降低,与肝纤维化分级有关,可作为临床评估肝纤维化程度的生物标志物。