miR-34c-5p靶向poFUT1对胎盘血管形成的影响

目的:探讨miR-34c-5p与poFUT1的靶向关系及对胎盘血管形成的影响。方法:利用ENCORI数据库预测miR-34c-5p与poFUT1的结合位点,采用双荧光素酶报告实验验证。随机选取2023年4至10月在郑州大学第三附属医院住院的胎儿生长受限(FGR)孕妇20例(FGR组),选择同期正常孕妇20例为对照。采用实时荧光定量PCR法检测两组胎盘组织中miR-34c-5p和poFUT1 mRNA的表达。取脐静脉内皮细胞,分组转染miR-34c-5p模拟物及其对照(NC)、miR-34c-5p抑制物及其NC、si-poFUT1 NC、si-poFUT1、si-poFUT1+miR-34c-5p抑制物,采用CCK-8法、Transwell实验以及成管实验检测细胞转染24、48、72、96 h后的增殖能力,转染48 h后的侵袭能力和成管能力。结果:FGR组和对照组胎盘组织中miR-34c-5p表达水平分别为(1.57±0.39)、(1.09±0.18),poFUT1 mRNA表达水平分别为(0.51±0.17)、(1.06±0.13),FGR组胎盘组织中miR-34c-5p表达水平高于对照组,poFUT1 mRNA表达水平低于对照组(P<0.05)。与miR-34c-5p模拟物NC组比较,模拟物组侵袭细胞数和管腔节点数减少,细胞增殖活性降低(P<0.05)。与miR-34c-5p抑制物NC组比较,抑制物组侵袭细胞数和管腔节点数增加,细胞增殖活性升高(P<0.05)。与si-poFUT1 NC组相比,si-poFUT1组侵袭细胞数和管腔节点数减少,细胞增殖活性降低(P<0.05),而si-poFUT1+miR-34c-5p抑制物组上述变化较si-poFUT1组部分逆转(P<0.05)。结论:miR-34c-5p可能通过调控poFUT1影响血管内皮细胞功能,从而影响胎盘的血管形成,参与FGR的发生。

感音神经性耳聋患者外周血miR-34c、miR-29b的表达及意义

目的探讨感音神经性耳聋(SNHL)患者外周血miR-34c、miR-29b的表达情况及临床意义。方法筛选2020年6月至2023年6月我院收治的神经性耳聋患者140例为观察组,同期选取体检健康者40例为对照组。根据听力损伤情况将SNHL患者分为轻度耳聋组63例,中度耳聋组42例,重度耳聋组35例。采用qRT-PCR检测miR-34c、miR-29b的表达,并检测VEGF、氧化应激水平(TAC、SOD、MDA)、NO和Cx26;采用Pearson检验进行相关性分析,采用logistic回归分析SNHL病情严重程度的独立危险因素,采用ROC曲线评估miR-34c、miR-29b对SNHL患者病情严重程度的预测价值。结果4组NO、TAC、SOD、Cx26水平比较,重度耳聋组<中度耳聋组<轻度耳聋组<对照组(P<0.05);VEGF和MDA水平比较,重度耳聋组>中度耳聋组>轻度耳聋组>对照组(P<0.05)。4组miR-34c mRNA和miR-29b mRNA表达水平比较,重度耳聋组>中度耳聋组>轻度耳聋组>对照组(P<0.05)。Pearson相关分析显示,SNHL患者外周血miR-34c、miR-29b与VEGF、MDA呈正相关,与NO、TAC、SOD、Cx26呈负相关(P<0.05)。多因素logistic回归分析显示,VEGF、MDA、NO、Cx26、TAC、SOD、miR-34c、miR-29b是影响SNHL病情严重程度的独立因素。结论miR-34c、miR-29b在SNHL患者中过表达,可作为预测评估SNHL患者病情严重程度的血清标志物。

Linc01419调控miR-34a-5p/E2F3轴促进膀胱癌细胞增殖与侵袭

目的:探讨长链非编码RNA Linc01419对膀胱癌细胞增殖和侵袭的影响及作用机制。方法:通过UALCAN软件(https://ualcan.path.uab.edu/)分析TCGA数据库中Linc01419在膀胱癌组织与正常膀胱组织中的表达差异;采用实时荧光定量聚合酶链反应(real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction,RT-qPCR)检测Linc01419在不同膀胱癌细胞系、22例经病理证实为膀胱癌的手术患者的肿瘤组织及癌旁正常膀胱组织中的表达水平;应用细胞增殖/毒性检测(cell counting kit-8,CCK-8)实验和Transwell小室侵袭实验检测敲低Linc01419表达对膀胱癌细胞增殖与侵袭的影响;采用双荧光素酶报告基因检测法分析Linc01419与miR-34a-5p及miR-34a-5p与E2F3之间的靶向调控关系。结果:UALCAN数据库分析显示相较正常膀胱组织,Linc01419在膀胱癌组织中显著高表达(P<0.001);RT-qPCR分析结果显示相较癌旁正常膀胱组织,Linc01419在22例膀胱癌组织中表达明显上调(P<0.001),与UALCAN数据库分析结果一致;Linc01419在4株膀胱癌细胞中的表达明显高于正常膀胱上皮细胞(P<0.01);敲低Linc01419表达,可显著抑制膀胱癌细胞的增殖、侵袭及N-cadherin、PCNA蛋白的表达,而显著促进E-cadherin的蛋白表达(P<0.05);miR-34a-5p过表达对膀胱癌细胞具有类似的抑制作用;双荧光素酶报告基因实验、RIP及Pull-down实验证实Linc01419可靶向结合miR-34a-5p,而后者进一步介导了对E2F3的靶向调控;抑制miR-34a-5p表达,可显著削弱Linc01419沉默对膀胱癌细胞生物学行为及E-cadherin、N-cadherin、PCNA、E2F3表达的影响。结论:Linc01419在膀胱癌中异常高表达,其通过调控miR-34a-5p/E2F3轴促进膀胱癌细胞增殖和侵袭,很可能是膀胱癌发生、发展过程中的一个重要环节。

miR-34a和米铂共载阳离子脂质体的构建及抗肿瘤活性研究

目的 构建共载miR-34a和米铂阳离子脂质体,以协同增效,用于肿瘤的化疗。方法 采用薄膜分散法制备米铂阳离子脂质体(MCL),将MCL与miR-34a共孵育,构建共载miR-34a和米铂的阳离子脂质体(MCL/miR-34a)。以粒径及多分散系数、电位、米铂含量和抗肿瘤活性为指标,对辅助磷脂(DOPE、DOPC、DMPC、DSPC、PC-98T)的种类、阳离子磷脂DOTAP/DOPE比、N/P、DSPE-mPEG2000及胆固醇用量进行筛选;选用磺酰罗丹明B染色法在细胞(人乳腺癌细胞系MDA-MB-231、人肝癌细胞系HepG2、人口腔表皮样癌细胞系KB和人胰腺癌细胞系As PC-1)水平评价MCL/miR-34a的抗肿瘤活性。结果 构建的MCL/miR-34a粒径均匀[(200±23)nm]且分布窄(PDI=0.242±0.01)、电位适宜[(45±8)m V]、包封率高(miR-34a的包封率99.2%,米铂的包封率99.8%),细胞水平上抗肿瘤活性显著优于单药米铂或mi R-34a。结论 成功构建的MCL/miR-34a可显著提高miR-34a和米铂的体外抗肿瘤活性,为核酸药物与小分子化疗药物共同递送提供新策略。

miR-34a-5p/PLCD3轴调控骨关节炎进展的机制

背景:目前已有针对miRNA/mRNA轴调节骨关节炎疾病进程的分子机制研究。先前生物信息学研究发现具有临床预测价值的mRNA(磷脂酶Cδ3:phospholipase C delta 3,PLCD3)及其靶向miRNA(miR-34a-5p),尚缺实验验证其调控骨关节炎的具体作用及机制。目的:探讨miR-34a-5p/PLCD3轴对骨关节炎进展的调控作用及机制。方法:选择15例膝骨关节炎患者的滑膜为骨关节炎组,同时选择同期因创伤致髌骨骨折行内固定术的15例年轻患者的健康滑膜为对照组,Real-time PCR法检测滑膜中PLCD3及miR-34a-5p的表达。通过细胞转染的方法,将人滑膜关节炎成纤维细胞(human fibroblast like synovial cells-osteoarthritis,HFLS-OA)进行处理,并分为miR-34a-5p模拟物组、pCDH-PLCD3组、miR-34a-5p模拟物+pCDH-PLCD3组、miR-34a-5p抑制剂组、si-PLCD3组、miR-34a-5p抑制剂+si-PLCD3组,通过Real-time PCR法检测PLCD3和miR-34a-5p表达的关系;通过CCK-8法、细胞划痕实验检测各组HFLS-OA细胞活力及细胞迁移的影响;使用Western Blot法检测凋亡标记蛋白表达水平;使用ELISA法检测炎症因子的表达。结果与结论:①PLCD3是miR-34a-5p的直接靶标,同时PLCD3和miR-34a-5p表达水平呈负相关。②PLCD3上调会促进HFLS-OA细胞的增殖并抑制细胞迁移,而miR-34a-5p上调会显著抑制HFLS-OA细胞的活性并增强细胞迁移;miR-34a-5p过表达使HFLS-OA细胞Casp3和Casp9蛋白水平显著升高,而PLCD3过表达则表现出相反趋势。③PLCD3过表达显著增加了HFLS-OA细胞白细胞介素6和肿瘤坏死因子α的表达,而miR-34a-5p模拟物则表现出保护活性。④结果说明,miR-34a-5p/PLCD3轴可能通过调节滑膜细胞的炎症过程或凋亡来影响骨关节炎的进展。

miR-34a调控PI3K/AKT通路对口腔癌细胞生物学行为的影响及机制

目的 探究微小RNAa(miR)-34a调控磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)/蛋白激酶B(AKT)通路对口腔癌细胞生物学行为的影响及机制。方法 选择口腔癌细胞系Tca8113、OEC-M1、OC3及人口腔角质形成细胞HOK,并对其中miR-34a相对表达量进行检测。将Tca8113细胞分为miR-34a组(转染miR-34a模拟物)、miR-34a NC组(转染miR-34a模拟物对照物)和不做处理的NC组,观察转染24、48、72 h时各组细胞增殖率,并比较各组细胞凋亡率、迁移细胞数、侵袭细胞数及PI3K/AKT通路相关因子表达。结果 miR-34a在Tca8113、OEC-M1、OC3细胞中的表达较HOK细胞明显减少(P<0.05)。miR-34a组细胞增殖率较NC组明显减少,凋亡率较NC组明显增加(P<0.05)。miR-34a组细胞迁移及侵袭细胞数均较NC组明显减少(P<0.05)。miR-34a组细胞PI3K、AKT mRNA及p-PI3K、p-AKt蛋白表达均较NC组明显减少(P<0.05)。结论 miR-34a在口腔癌细胞中呈低表达,上调其表达可抑制口腔癌细胞增殖、侵袭及迁移能力并促进口腔癌细胞凋亡,其作用机制可能是通过抑制PI3K/AKT通路实现的。

miR-34a通过激活lncRNA NORHA转录诱导猪卵巢颗粒细胞早期凋亡

【目的】探索miR-34a诱导GCs凋亡的RNA激活机制,为揭示猪卵泡闭锁的分子机理、筛选调控母猪繁殖的小核酸调节物提供依据。【方法】利用生物信息学方法分析猪miR-34a特征及其与潜在靶基因lncRNA NORHA启动子的结合情况。利用核质分离技术分析猪GCs中miR-34a的亚细胞定位。qPCR检测miR-34a对猪GCs中NORHA、凋亡标志基因BCL-2和BAX表达的影响。利用荧光素酶活性分析验证miR-34a对NORHA启动子转录活性的靶向调控关系。利用染色质免疫沉淀(ChIP)检测miR-34a对猪GCs中NORHA启动子miRNA反应元件(MRE)处AGO2和组蛋白修饰因子富集情况。利用western blot和流式细胞术分析miR-34a通过NORHA对下游因子FOXO1的表达和细胞凋亡的调控作用。【结果】猪miR-34a为基因间miRNA,其序列在哺乳动物中具有高度保守性。亚细胞定位分析显示,miR-34a在猪GCs中细胞核与细胞质均有分布。生物信息学分析显示miR-34a的MRE位于NORHA启动子-194 nt至-173 nt处,且两者结合自由能为-23.9 kcal·mol^(-1)。qPCR结果表明miR-34a显著上调猪GCs中NORHA的表达。荧光素酶活性分析显示,miR-34a极显著上调NORHA启动子报告载体活性,而对MRE突变型启动子活性没有显著影响。ChIP试验显示,miR-34a可增加NORHA启动子MRE处RNA诱导转录激活(RITA)复合物核心成员AGO2和转录激活型组蛋白H3K4me3的富集,而减少转录抑制型组蛋白H3K9me3的富集。共转试验显示,敲减NORHA可显著或极显著逆转由miR-34a过表达引起的FOXO1蛋白水平和早期凋亡率的上调,以及BCL-2/BAX比值的下调。【结论】细胞核miR-34a是猪GCs中的内源性小激活RNA(saRNA),通过靶向激活促凋亡lncRNA NORHA的转录,诱导猪GCs早期凋亡(细胞膜完整),可能参与猪卵泡闭锁的启动。

miR-34a-5p提高顺铂在宫颈癌细胞中的敏感性及其可能机制

目的:探究miR-34a-5p对宫颈癌细胞顺铂敏感性的影响及其可能机制。方法:分别使用0、1、2、4、8μg/mL浓度的顺铂处理Hela细胞,CCK8检测细胞活力,qRT-PCR检测miR-34a-5p表达。设计并合成miR-34a-5p mimics,将细胞分成Blank、NC、miR-34a-5p、AG490、miR-34a-5p+AG490组。CCK8检测细胞活力,流式细胞术检测细胞凋亡率,Transwell实验检测侵袭细胞数,Western blot检测MDM4、STAT3、MRP1、Bax和BCL-2蛋白表达水平。结果:随着顺铂浓度的增加,Hela细胞活力和miR-34a-5p表达逐渐下降。与Blank/NC组相比,miR-34a-5p和AG490组细胞活力、侵袭细胞数、MRP1、BCL-2、MDM4、p-STAT3/STAT3蛋白表达显著下降(P<0.05),细胞凋亡率、Bax蛋白表达显著上升(P<0.05);与miR-34a-5p/AG490组相比,miR-34a-5p+AG490组细胞活力、侵袭细胞数、MRP1、BCL-2、MDM4、p-STAT3/STAT3蛋白表达显著下降(P<0.05),细胞凋亡率、Bax蛋白表达显著上升(P<0.05)。结论:miR-34a-5p可增加宫颈癌细胞对顺铂化疗的敏感性,其机制可能与MDM4/JAK/STAT3信号通路相关。

miR-34a阻断Wnt/β-catenin信号通路下调PD-L1表达抑制肺腺癌细胞的生长和转移

目的:研究miR-34a对肺腺癌细胞增殖、转移及凋亡的影响及其作用机制。方法:选取105例肺腺癌患者,根据患者PD-L1表达分为高、中、低三组,收集患者腺癌组织及癌旁组织,运用实时荧光定量PCR法(qRT-PCR)和Western blot法(WB)检测miR-34a和Wnt信号相关基因mRNA和蛋白表达量。构建miR-34a mimcs-pCMV、miR-34a inhibitor-pCMV载体和空载pCMV,利用脂质体转染肺腺癌A549细胞,采用MTT法检测miR-34a高表达、低表达和阴性对照NC组细胞增殖活性,采用Transwell小室实验、细胞划痕实验、EdU实验检测细胞侵袭、迁移和增殖能力;采用qPCR和WB法检测各组细胞中PD-L1、Wnt信号相关基因以及肺腺癌相关基因及蛋白表达水平;采用双荧光素酶系统检测miR-34a和Wnt1、PD-L1靶向结合作用。结果:在三组患者中miR-34a的表达与PD-L1表达水平呈负相关(P<0.05),而Wnt信号通路相关蛋白的表达水平与PD-L1表达呈正相关(P<0.05)。与对照NC组相比,miR-34a mimcs组细胞增殖活性、迁移能力和侵袭能力均显著降低,而miR-34a inhibitor组细胞的增殖及迁移、侵袭能力显著提高(均P<0.05);qPCR和WB结果显示,PD-L1、Wnt通路相关蛋白Wnt1、β-catenin、GSK-3β、PTEN,凋亡相关蛋白Bcl-2,肺腺癌相关驱动基因EGFR、ROS1、ALK,转移相关基因MMP2、Vimentin的表达量在miR-34a mimcs组中显著低于它们在miR-34a inhibitor组中的表达水平;而细胞凋亡相关的Cleaved caspase-3、p53蛋白表达量则在miR-34a mimcs组显著高于miR-34a inhibitor组。双荧光素酶报告基因实验验证miR-34a与Wnt1和PD-L1均能特异性结合,Wnt1和PD-L1是miR-34a调控的靶基因。结论:miR-34a能够抑制PD-L1蛋白和肺腺癌相关驱动基因的表达,并通过调控Wnt1蛋白抑制Wnt信号通路从而抑制肺腺癌细胞的增殖、迁移和侵袭过程;同时诱导细胞凋亡相关基因表达,促进肺腺癌细胞的凋亡。

急性冠状动脉综合征患者PCI治疗前后血清miR-34a、miR-146a水平变化及近期预后预测价值

目的探讨急性冠脉综合征(acute coronary syndrome,ACS)患者血清微小RNA-34a(miR-34a)、微小RNA-146a(miR-146a)水平变化及近期预后预测价值。方法选取2018年2月~2020年6月收治的拟行经皮冠状动脉介入治疗(percutaneous coronary intervention,PCI)术的ACS患者86例,所有研究对象均采用Judkins法进行冠脉造影,并根据造影图像结果中冠脉血管狭窄程度分为单支病变组(23例),双支病变组(36例),三支病变组(27例);同时对冠脉造影结果进行Gensini评分,<50分为轻度病变组(46例),50~90分为中度病变组(30例),>90分为重度病变组(10例)。采用实时荧光定量聚合酶链式反应(PCR)法检测ACS患者PCI术前、术后1个月的miR-34a、miR-146a的表达水平。并随访ACS患者术后1年内主要不良心血管事件(MACE)的发生情况,并根据是否发生MACE事件分为MACE组与非MACE组,比较两组血清miR-34a、miR-146a的表达水平。结果ACS患者PCI术前血清miR-34a、miR-146a水平明显高于PCI术后(P<0.001);ACS患者冠脉中度病变组血清miR-34a、miR-146a表达水平高于轻度病变组(P<0.001),而重度病变组中血清miR-34a、miR-146a表达水平明显高于中度病变组与轻度病变组(P<0.001);ACS患者冠脉双支病变组血清miR-34a、miR-146a表达水平高于单支病变组(P<0.05);而三支病变组中血清miR-34a、miR-146a表达水平明显高于双支病变组与单支病变组(P<0.05);MACE组患者血清miR-34a、miR-146a表达水平显著高于非MACE组(P<0.001)。结论PCI可明显降低ACS患者体内血清miR-34a、miR-146a的表达水平。而血清miR-34a、miR-146a的表达水平随着冠脉病变程度的加重而增高,故可通过血清miR-34a、miR-146a来预测冠脉的病变程度。同时监测ACS患者PCI术后的血清miR-34a、miR-146a的表达水平也具有重要意义,能预防MACE事件的发生。

特发性扩张型心肌病患者miR-34a-5p、miR-17-5p表达水平及其与心衰的关系

目的 探讨特发性扩张型心肌病(IDCM)患者miR-34a-5p、miR-17-5p表达水平及其与心衰的关系。方法 选取2019年1月至2023年1月绵阳市游仙区中医医院和四川省人民医院联合收治的IDCM患者136例(IDCM组),根据IDCM患者是否继发心力衰竭分为心衰组40例和非心衰组96例。选取同期68名无心脏病的健康志愿者设为对照组。比较IDCM组与对照组、心衰组与非心衰组的血清miR-34a-5p、miR-17-5p表达水平、N末端B型利钠肽(NT-proBNP)、超敏肌钙蛋白T(hs-TnT)、左室射血分数(LVEF)、左室舒张末期内径(LVEDD)。分析血清miR-34a-5p、miR-17-5p表达水平与心功能指标的相关性。采用ROC曲线分析miR-34a-5p、miR-17-5p对IDCM继发心衰的预测价值。结果 IDCM组的血清miR-34a-5p、miR-17-5p表达水平高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。IDCM组的血清NT-proBNP、hs-TnT水平高于对照组,LVEF低于对照组,LVEDD高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。心衰组的血清miR-34a-5p、miR-17-5p表达水平高于非心衰组,差异有统计学意义(P<0.05)。心衰组的血清NT-proBNP水平高于非心衰组,LVEF低于非心衰组,LVEDD高于非心衰组,差异有统计学意义(P<0.05)。血清miR-34a-5p、miR-17-5p表达水平与血清NT-proBNP水平呈正相关(r=0.498,r=0.306,P<0.001)。血清miR-34a-5p联合miR-17-5p预测IDCM继发心衰的灵敏度为0.875,特异度为0.802。结论 IDCM患者存在miR-34a-5p、miR-17-5p表达水平上调情况,且miR-34a-5p、miR-17-5p表达水平与心衰具有关联,对预测心衰有一定价值。

雷公藤甲素通过miR-34b-5p/Notch1轴抑制骨肉瘤U2OS细胞增殖并诱导其铁死亡

目的:探究雷公藤甲素(TPL)通过miR-34b-5p调控Notch1表达对骨肉瘤U2OS细胞铁死亡影响的机制。方法:常规培养U2OS细胞,将其分为对照组、TPL(10μmol/L)组、TPL(10μmol/L)+Fer-1(铁死亡抑制剂,20μmol/L)组、miR-NC组、miR-34b-5p组、miR-34b-5p+Fer-1(20μmol/L)组、TPL(10μmol/L)+anti-miR-34b-5p组、anti-miR-34b-5p+Fer-1(20μmol/L)组。qPCR法、CCK-8法、铁离子检测试剂、DHE-荧光探针和WB法分别检测各组U2OS细胞中miR-34b-5p的表达、增殖能力、Fe2+水平、ROS水平以及铁死亡相关蛋白(GPX4、SLC7A11及Notch1蛋白)的表达,双萤光素酶报告基因实验验证miR-34b-5p与Notch1的靶向结合关系。结果:TPL可促进U2OS细胞中miR-34b-5p表达,Fer-1和anti-miR-34b-5p则抑制miR-34b-5p的表达(均P<0.05)。TPL明显抑制U2OS细胞的增殖、GPX4、SLC7A11、Notch1蛋白的表达、增加细胞中Fe2+和ROS的含量,Fer-1可逆转TPL对U2OS细胞的作用(均P<0.05)。过表达miR-34b-5p与TPL对U2OS细胞的作用相似(均P<0.05)。miR-34b-5p可靶向结合Notch1(均P<0.05)。miR-34b-5p抑制剂可明显抑制TPL对U2OS细胞的影响,Fer-1可增强miR-34b-5p抑制剂的作用(均P<0.05)。结论:TPL可抑制U2OS细胞的增殖能力并促进其铁死亡,其作用机制可能与miR-34a-5p靶向调节Notch1表达有关。

miR-34a-5p靶向Notch1对H/R诱导的人心肌细胞凋亡的影响及机制

目的探讨微小RNA(miR)-34a-5p/跨膜融合蛋白1(Notch1)信号轴介导内质网应激对缺氧/复氧(H/R)人心肌细胞的改善作用。方法人心肌细胞随机分为对照组(Control组)、缺氧复氧组(H/R组)、模拟物阴性对照组(mimic NC组)、模拟物组(mimic组)、抑制物阴性对照组(inhibitor NC组)、抑制物组(inhibitor组)。除Control组外,其余组细胞建立H/R损伤模型。定量反转录聚合酶链式反应(qRT-PCR)法检测miR-34a-5p和Notch1表达量,噻唑蓝(MTT)法检测细胞存活率,流式细胞仪检测细胞凋亡率,双荧光素酶基因报告法检测miR-34a-5p和Notch1的靶向关系,蛋白印迹法检测转录激活因子6(ATF6)、肌醇需求酶1(IRE1)、蛋白激酶样内质网激酶(PERK)以及葡萄糖调节蛋白78(GRP78)表达量。结果与Control组比较,H/R组miR-34a-5p表达量、细胞凋亡率以及ATF6、IRE1、PERK和GRP78蛋白表达量均升高,细胞存活率以及Notch1 mRNA和蛋白表达量均降低(P<0.05);与H/R组和mimic NC组比较,mimic组miR-34a-5p表达量、细胞凋亡率以及ATF6、IRE1、PERK和GRP78蛋白表达量均升高,细胞存活率以及Notch1 mRNA和蛋白表达量均降低(P<0.05);与H/R组和inhibitor NC组比较,inhibitor组miR-34a-5p表达量、细胞凋亡率以及ATF6、IRE1、PERK和GRP78蛋白表达量均降低,细胞存活率以及Notch1 mRNA和蛋白表达量均升高(P<0.05)。结论下调miR-34a-5p可抑制H/R人心肌细胞凋亡,其可能是通过靶向激活Notch1介导内质网应激发挥作用。

牙周炎患者牙周膜组织miR-106a、miR-34a水平与炎症反应、牙槽骨吸收的相关性

目的:分析牙周炎患者牙周膜组织miR-106a、miR-34a水平与炎症反应、牙槽骨吸收的相关性。方法:选取2021年6月至2023年6月期间在杭州师范大学附属萧山医院接受治疗的81例牙周炎患者为牙周炎组,另选取在本院接受治疗的牙齿正畸患者81例作为对照组。入院后行牙周检查,包括菌斑指数(PLI)、龈沟出血指数(BI)、探诊深度(PD)、附着丧失(AL)。采用RT-PCR法测定牙周膜组织miR-106a、miR-34a的表达水平;采用ELISA测定热休克蛋白60(HSP60)、趋化因子12(CXCL12)、细胞间黏附分子-1(ICAM-1)、IL-17、I型胶原交联C-末端肽(CTX)、I型前胶原氨基末端肽(PINP)、骨保护素(OPG)、Runt相关转录因子2(Runx2)、I型胶原交联氨基末端肽(NTX)表达水平。Pearson法分析牙周膜组织miR-106a、miR-34a表达与炎症反应、牙槽骨吸收指标的相关性;ROC曲线分析牙周膜组织miR-106a、mi R-34a对牙周炎的诊断价值。结果:与对照组相比,牙周炎组患者PLI、BI、PD、AL表达水平显著升高(P<0.05)。与对照组相比,牙周炎组患者牙周膜组织中miR-106a表达水平降低,miR-34a表达水平显著增加(P<0.05)。与对照组相比,牙周炎组患者HSP60、CXCL12、ICAM-1、IL-17表达水平均显著升高(P<0.05),槽骨吸收指标中CTX、NTX表达水平显著升高,PINP、OPG、Runx2表达水平显著降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。Pearson相关性分析显示,miR-106a与HSP60、CXCL12、ICAM-1、IL-17、CTX、NTX水平呈负相关(P<0.05),与PINP、OPG、Runx2水平呈正相关(P<0.05)。miR-34a表达水平与HSP60、CXCL12、ICAM-1、IL-17、CTX、NTX水平呈正负相关(P<0.05),与PINP、OPG、Runx2水平呈负正相关(P<0.05)。牙周膜组织miR-106a、miR-34a二者联合诊断牙周炎的AUC最高,优于牙周膜组织miR-106a、miR-34a各自单独诊断(Z_(二者联合-miR-106a)=2.553、P=0.011,Z_(二者联合-miR-34a)=2.834、P=0.005)。结论:牙周炎患者牙周膜组织miR-106a水平显著降低,miR-34a水平显著升高,二者与炎症反应、牙槽骨吸收之间具有相关性,二者联合诊断牙周炎有效性提高。

基于AMPK/mTOR信号通路探究下调miR-34a对非酒精性脂肪肝大鼠的干预效果

目的 基于AMP活化蛋白激酶(AMPK)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)信号通路探究下调miR-34a对非酒精性脂肪肝(NAFLD)大鼠的干预效果。方法 43只雄性SD大鼠随机选取10只作为空白组,其余33只建立NAFLD模型,成功建模30只分为模型组、上调miR-34a组、下调miR-34a组各10只,将10μl miR-34a过表达慢病毒悬液、miR-34a沉默慢病毒悬液分别转染于上调miR-34a组、下调miR-34a组,其余两组进行同剂量蒸馏水干预,干预4 w后,进行葡萄糖耐受实验(OGTT),采集血清,检测血脂及胰岛素水平,计算胰岛素抵抗指数(HOMA-IR),解剖肝脏、胰腺进行脏器系数计算,检测肝组织中miR-34a表达,苏木素-伊红(HE)染色进行肝组织病理学观察,检测AMPK/mTOR通路蛋白相对表达量。结果 与模型组相比,上调miR-34a组miR-34a表达量、总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、血糖、曲线下面积(AUC)、肝脏系数、脂肪变性、小叶内炎症、气球样变积分、胰腺系数、空腹胰岛素(FINS)、HOMA-IR、mTOR表达升高,高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)水平、AMPK表达降低,下调miR-34a组miR-34a表达量、TC、TG、LDL-C、血糖、AUC水平、肝脏系数、脂肪变性、小叶内炎症、气球样变积分、胰腺系数、FINS、HOMA-IR、mTOR表达下降,HDL-C水平、AMPK表达上升,具有统计学差异(P<0.05);与上调miR-34a组相比,下调miR-34a组miR-34a表达量、TC、TG、LDL-C、血糖、AUC水平、肝脏系数、脂肪变性、小叶内炎症、气球样变积分、胰腺系数、FINS、HOMA-IR、mTOR表达下降,HDL-C水平、AMPK表达上升,具有统计学差异(P<0.05)。结论 下调miR-34a可改善NAFLD大鼠血脂代谢紊乱及胰岛素抵抗,其机制可能与调控AMPK/mTOR信号通路有关。

调脾安肠方对裸鼠结肠癌肝转移灶miR-34a-5p、Notch1/NF-κB表达的影响

目的探讨调脾安肠方对裸鼠结肠癌肝转移(colorectal cancer liver metastasis,CLM)灶组织中MicroRNA-34a-5p(miR-34a-5p)及其靶基因Notch1/核转录因子-κB(nuclear factor-kappa B,NF-κB)通路表达的影响。方法选取30只雄性Balb/c裸鼠随机分为空白组、模型组、中药组,每组10只。脾脏原位注射HCT-116人结肠癌细胞(细胞数约为1×107个/mL)法构建CLM模型。中药组在CLM造模完成2周后开始调脾安肠方(2 g/mL,每日0.2 mL)灌胃2周,空白组和模型组同期予等体积0.9%生理盐水灌胃。苏木素—伊红染色观察肝转移灶病理组织形态;蛋白免疫印迹法测定肝转移灶Notch1、NF-κB p65蛋白水平;实时荧光定量PCR测定肝转移灶miR-34a-5p及Notch1、NF-κB p65 mRNA水平。结果与模型组比较,中药组裸鼠镜下病理转移灶面积明显减小,核分裂像减少,提示调脾安肠方抑制了结直肠癌细胞在肝脏的定植和迁移。与空白组比较,模型组肝转移灶中miR-34a-5p含量显著降低(P<0.01),Notch1、NF-κB p65蛋白表达升高(均P<0.05),Notch1、NF-κB p65的mRNA表达显著升高(均P<0.01)。与模型组比较,中药组Notch1蛋白及mRNA表达降低(P<0.05),NF-κB p65的mRNA表达显著降低(P<0.01)。miR-34a-5p与Notch1 mRNA在结肠癌肝转移灶组织中表达水平呈负相关(r^(2)=0.8845,P<0.05),Notch1与NF-κB p65在结肠癌肝转移灶组织中mRNA表达水平呈显著正相关(r^(2)=0.9291,P<0.01)。结论中药复方调脾安肠方能抑制裸鼠结肠癌肝转移灶形成,其机制可能与通过抑癌基因miR-34a-5p靶向负性调节Notch1/NF-κB通路表达有关。

miR-34a在艾灸延缓皮肤衰老机制中的作用

衰老是许多慢性退行性疾病和癌症的主要危险因素,miRNA与衰老关系的研究已成近年来衰老研究的新热点。大量文献表明艾灸可延缓皮肤衰老,通过查阅近年来miRNA与艾灸延缓衰老机制相关文献,分析其作用机制并进行探讨。讨论研究发现miR-34家族成员miR-34a在诱导皮肤衰老中扮演着重要的角色,受p53调控的信号通路是皮肤衰老中至关重要的一环,p53/miR-34a信号通路可调控衰老进程,艾灸可下调p53、CDK4等的表达水平。艾灸延缓皮肤衰老机制与p53/miR-34a信号通路密切相关,且艾灸或可通过该通路直接影响皮肤衰老进程。文章以此为阐明艾灸延缓衰老的作用机制提供思路,以期为艾灸抗衰研发与治疗提供新方向。

CircBCAR3/miR-34调控desmuslin在原发性大隐静脉曲张中的表达及其临床意义

探讨在原发性大隐静脉曲张中异常表达的circRNA和miRNA,初步研究异常表达的circRNA和miRNA的相互作用以及对原发性大隐静脉曲张(PGSVV)发生发展的影响及作用机制。方法 收集20例在佛山市禅城区中心医院(佛山复星禅诚医院)行大隐静脉切除术的PGSVV患者的32个大隐静脉标本,同时收集同一患者相邻正常节段大隐静脉作为对照。提取新鲜静脉标本中的总RNA。通过高通量测序获得曲张静脉和正常静脉组织中circRNA和miRNA差异表达谱。通过CSCD预测circRNA和miRNA的结合位点,通过qRT-PCR验证差异表达的miRNA。通过Transwell和CCK-8实验验证差异表达的circRNA在PGSVV得功能。结果 circBCAR3与miR-34分别是表达差异最高的circRNA和miRNA。ROC曲线分析表明circBCAR3对PGSVV有极高的预测能力,可作为PGSVV的诊断生物标记物。Transwell和CCK-8实验显示 circBCAR3具有促进VSMC增殖和迁移的功能,提示circBCAR3可能通过调控 SV-SMC表型转换、增殖、迁移参与静脉曲张的发生、发展过程。高通量分析和qRT-PCR均显示miR-34a是PGSVV和正常静脉样本差异表达最显著的miRNA。通过MiRTaebase数据库预测发现desmuslin 的 3'UTR 端与 miR-34 存在 3 个互补结合位点,通过双荧光素酶报告基因证实了miR-34与desmuslin的结合。结论 本研究初步表明circBCAR3下调导致miR-34a表达增加,抑制下游基因desmuslin表达,最终导致PGSVV的发生,但仍需后续更多实验进行验证。

miR-34a/SIRT1在重症监护病房获得性衰弱中的作用及其机制

目的探讨miR-34a/SIRT1在重症监护病房获得性衰弱(ICU-AW)中的作用及其机制。方法(1)诱导C2C12小鼠骨骼肌细胞分化成肌管,并分为ICU-AW模型组[ICU-AW组,用脂多糖(LPS)干预12 h]与正常对照组(等量无菌水干预12 h)。采用Western blotting检测两组肌肉环指蛋白1(MuRF-1)、萎缩相关基因1(Atrogin-1)蛋白、沉默调节蛋白1(SIRT1)表达水平,RT-qPCR检测两组微小核糖核酸-34a(miR-34a)及MuRF-1、Atrogin-1、SIRT1 mRNA的表达水平,并在光镜下观察两组小鼠C2C12骨骼肌细胞生长及分化情况。(2)将ICU-AW细胞分为对照组(siRNA的转染剂干预)、Scra siRNA组(转染剂和非特异性siRNA干预)、miR-34a siRNA组(miR-34a siRNA转染剂和特异性siRNA干预)、Vehicle组(SIRT1激动剂的溶剂二甲基亚砜干预)及SRT1720组(SIRT1激动剂SRT1720干预)。采用Western blotting检测各组SIRT1、Atrogin-1、MuRF-1蛋白表达水平,RT-qPCR检测各组miR-34a及MuRF-1、Atrogin-1、SIRT1 mRNA表达水平。(3)将ICU-AW细胞分为对照组(miR-34a siRNA的转染剂干预)、miR-34a siRNA组(转染剂和特异性siRNA干预)、miR-34a siRNA+Vehicle组(转染剂、特异性siRNA和二甲基亚砜干预)及miR-34a siRNA+EX-527组(转染剂、特异性siRNA和SIRT1抑制剂EX-527干预),采用Western blotting检测并比较各组Atrogin-1、MuRF-1蛋白表达水平,RT-qPCR检测并比较各组Atrogin-1、MuRF-1 mRNA表达水平。结果光镜下可见第4天C2C12小鼠骨骼肌细胞肌管分化形成,与正常对照组比较,ICU-AW组肌管明显萎缩。RT-qPCR及Western blotting检测结果显示,与正常对照组比较,ICU-AW组Atrogin-1、MuRF-1 mRNA及蛋白相对表达水平明显升高(P<0.05),miR-34a相对表达水平明显升高(P<0.001),SIRT1 mRNA及蛋白相对表达水平明显降低(P<0.01)。RT-qPCR检测结果显示,与对照组(转染剂干预)比较,miR-34a siRNA组的miR-34a及Atrogin-1、MuRF-1 mRNA和蛋白相对表达水平明显降低(P<0.01或P<0.001),SIRT1 mRNA和蛋白相对表达水平明显升高(P<0.01);与Vehicle组比较,SRT1720组SIRT1 mRNA和蛋白相对表达水平明显升高(P<0.05),而Atrogin-1、Mu RF-1 mRNA和蛋白相对表达水平明显降低(P<0.05)。与miR-34a siRNA组比较,Scra siRNA组miR-34a及Atrogin-1、MuRF-1 mRNA和蛋白相对表达水平明显升高(P<0.05、P<0.01或P<0.001),而SIRT1 mRNA和蛋白相对表达水平明显降低(P<0.01)。RT-qPCR及Western blotting检测结果显示,与miR-34a siRNA+Vehicle组比较,miR-34a siRNA+EX-527组Atrogin-1、MuRF-1 mRNA及蛋白表达水平明显升高(P<0.05)。结论ICU-AW状态下miR-34a过度激活,通过抑制SIRT1的表达导致骨骼肌萎缩,可能在ICU-AW发病过程中起重要作用。

姜黄素通过上调miR-34a抑制人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞的恶性生物学行为

目的探讨姜黄素对人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞恶性生物行为的影响及其可能作用机制。方法CCK8法检测姜黄素(0、6.25、12.5、25、50和100μmol·L^(-1))作用下细胞活力并筛选出后续姜黄素处理浓度(0、6.25、12.5、25μmol·L^(-1)),流式细胞法、划痕实验、Transwell实验和Western blot分别检测细胞凋亡、迁移、侵袭及相关蛋白水平。使用qRT-PCR法检测SH-SY5Y细胞miR-34a表达水平,构架miR-34a低表达SH-SY5Y细胞系(miR-34a inhibitor组)及其阴性对照(NC组)、对照组(Control组),三组细胞系均给予姜黄素(25μmol·L^(-1))处理分别记为黄素+miR-34a inhibitor组、姜黄素+NC组、姜黄素组,另设置空白对照组,采用上述相同方法检测各组细胞凋亡、迁移、侵袭及相关蛋白水平和p-p65、p-IκBα蛋白水平。结果当姜黄素干预浓度达到12.5μmol·L^(-1)时,SH-SY5Y细胞存活率显著低于无姜黄素处理的细胞(P<0.05);姜黄素(12.5、25μmol·L^(-1))组细胞凋亡率、Cleaved cas3/cas3、Cleaved cas9/cas9、E-cadherin蛋白表达和miR-34a表达水平均显著高于姜黄素(0μmol·L^(-1))组(P<0.01),划痕细胞闭合率、侵袭细胞数目和N-cadherin、Snail蛋白表达均显著低于黄素(0μmol·L^(-1))组(P<0.05);姜黄素组细胞凋亡率和Cleaved cas3/cas3、Cleaved cas9/cas9、E-cadherin蛋白表达均显著高于空白对照组(P<0.01),而划痕细胞闭合率、侵袭细胞数目和N-cadherin、Snail、p-p65/p65、p-IκBα/IκBα蛋白表达均显著低于空白对照组(P<0.01);姜黄素+miR-34a inhibitor组细胞凋亡率和Cleaved cas3/cas3、Cleaved cas9/cas9、E-cadherin蛋白表达均显著低于姜黄素+NC组(P<0.01),而划痕细胞闭合率、侵袭细胞数目和N-cadherin、Snail、p-p65/p65、p-IκBα/IκBα蛋白表达均显著高于姜黄素+NC组(P<0.01)。结论姜黄素可以促进SH-SY5Y细胞凋亡、抑制细胞迁移和侵袭,可能与上调miR-34a表达抑制NF-κB信号通路有关。