miR-3619-5p对乳腺癌细胞MCF-7和T47D增殖、凋亡的影响及分子机制

目的探讨miR-3619-5p转染对乳腺癌细胞系MCF-7和T47D增殖和凋亡的影响及可能的分子机制。方法乳腺癌培养至对数生长期,根据对其不同处理分为2组:对照组(转染ds Control)和实验组(转染miR-3619-5p)。5-乙炔基-2'脱氧尿嘧啶核苷(Ed U)增殖实验和集落形成实验检测乳腺癌细胞增殖能力变化;流式细胞术(flow cytometry,FCM)检测乳腺癌细胞周期分布和凋亡情况;实时定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测p21、CDK6和Cyclin D1 mRNA的表达;Western blot法检测p21、CDK6和Cyclin D1蛋白的表达变化。结果与dsControl组相比,转染miR-3619-5p的乳腺癌细胞增殖能力显著降低(P<0.05)。转染miR-3619-5p后,位于G_0/G_1期的细胞比例明显升高,位于S期和G_2/M期的细胞比例明显降低,细胞凋亡率显著上升。与ds Control组相比,转染miR-3619-5p后两种细胞系中p21 mRNA均明显上调(P<0.01),而CDK6和Cyclin D1 mRNA的表达均明显下调(P<0.01)。Western blot检测结果与qRT-PCR结果一致。结论 miR-3619-5p可显著抑制乳腺癌细胞的增殖能力,促进细胞凋亡,其分子机制可能是通过激活乳腺癌细胞中抑癌基因p21的表达。

甲基莲心碱通过miR-3619-5p调控结核分枝杆菌诱导的THP-1凋亡及炎性反应的分子机制

目的探讨甲基莲心碱对结核分枝杆菌(MTB)诱导的THP-1细胞凋亡、炎性反应的的影响及对miR-3619-5p的调控作用。方法体外培养人单核细胞THP-1、佛波酯(PMA)刺激细胞转化为巨噬细胞,MTB感染巨噬细胞,不同浓度的甲基莲心碱处理细胞,分别将miR-con、miR-3619-5p mimics转染至MTB感染的巨噬细胞,分别将miR-con、miR-3619-5p mimics转染至MTB感染的巨噬细胞后加入甲基莲心碱处理细胞;采用流式细胞术检测细胞凋亡率;采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-6(IL-6)、IL-10的水平;采用qRT-PCR法检测miR-3619-5p的表达水平;Western blot法检测Bax、Bcl-2蛋白表达量。结果与NC组比较,MTB组凋亡率、Bax蛋白水平及TNF-α、IL-6、IL-10水平升高(P<0.05),Bcl-2蛋白水平降低(P<0.05),甲基莲心碱可明显逆转上述作用(P<0.05);MTB感染的巨噬细胞中miR-3619-5p的表达水平降低(P<0.05),而甲基莲心碱可明显提高miR-3619-5p的表达水平(P<0.05);转染miR-3619-5p mimics可明显降低MTB感染的巨噬细胞凋亡率(P<0.05),降低Bax蛋白水平及TNF-α、IL-6、IL-10的水平(P<0.05),提高Bcl-2蛋白水平(P<0.05),而转染anti-miR-3619-5p可明显逆转上述作用(P<0.05);转染anti-miR-3619-5p可明显逆转甲基莲心碱对MTB感染的巨噬细胞凋亡及炎性反应的作用。结论甲基莲心碱可通过上调miR-3619-5p的表达而抑制MTB诱导的THP-1源巨噬细胞凋亡及炎性反应,从而缓解结核感染。

lncRNA PSMA3-AS1靶向miR-3619-5p调控宫颈癌SiHa细胞增殖、迁移及侵袭的分子机制研究

目的探讨lncRNA PSMA3-AS1调控宫颈癌细胞增殖、迁移及侵袭的分子机制.方法收集2020年3月至2021年6月西安医学院第二附属医院收治的42例宫颈癌患者的癌组织及其癌旁组织标本,采用qRT-PCR法检测宫颈癌组织、癌旁组织、人宫颈上皮永生化细胞H8、与人宫颈癌细胞系SiHa、HeLa、Cas-ki中lncRNA PSMA3-AS1、miR-3619-5p的表达量;以SiHa细胞为研究对象,分组为:si-NC组、si-lncRNA PSMA3-AS1组、miR-NC组、miR-3619-5p组、anti-miR-NC+si-lncRNA PSMA3-AS1组、anti-miR-3619-5p+si-lncRNA PSMA3-AS1组;MTT法与Transwells实验分别检测每组SiHa细胞的增殖活力、迁移及侵袭能力;双荧光素酶报告实验检测miR-3619-5p过表达对野生型载体lncRNA PSMA3-AS1-WT、突变型载体lncRNA PS-MA3-AS1-MUT荧光素酶活性的影响;Western印迹检测MMP2、MMP9蛋白表达量.结果宫颈癌组织中lncRNA PSMA3-AS1的表达量比癌旁组织增加(P<0.01),miR-3619-5p的表达量比癌旁组织减少(P<0.01);与H8细胞比较,SiHa、HeLa、Caski细胞中lncRNA PSMA3-AS1的表达量升高(P<0.01),miR-3619-5p的表达量降低(P<0.01);与si-NC组比较,si-lncRNA PSMA3-AS1组细胞活力和MMP2、MMP9蛋白水平降低(P<0.05),迁移及侵袭细胞数减少(P<0.05);与miR-NC组比较,miR-3619-5p组细胞活力和MMP2、MMP9蛋白水平降低(P<0.01),迁移及侵袭细胞数减少(P<0.05);miR-3619-5p过表达可抑制lncRNA PSMA3-AS1-WT的荧光素酶活性(P<0.01),而未能影响lncRNA PSMA3-AS1-MUT的荧光素酶活性;与anti-miR-NC+si-lncRNA PSMA3-AS1组比较,anti-miR-3619-5p+si-lncRNA PSMA3-AS1组细胞活力和MMP2、MMP9蛋白水平升高(P<0.01),迁移及侵袭细胞数增多(P<0.01).结论干扰lncRNA PSMA3-AS1表达可通过促进miR-3619-5p而降低宫颈癌细胞增殖、迁移及侵袭能力.

lncRNA DNAJC3-AS1/miR-3619-5p轴影响脑胶质瘤细胞迁移、侵袭和上皮-间质转化的分子机制研究

目的:探讨lncRNA DNAJC3-AS1对胶质瘤细胞迁移、侵袭和上皮-间质转化(EMT)的影响及可能机制。方法:收集34例脑胶质瘤组织和34例因外伤行颅内减压术患者的正常脑组织,体外培养正常神经胶质细胞HEB及胶质瘤细胞系LN18、SW1088和Hs683。RT-qPCR检测组织及细胞中lncRNA DNAJC3-AS1与miR-3619-5p表达量。以胶质瘤LN18细胞为研究对象,分别转染lncRNA DNAJC3-AS1小干扰RNA、miR-3619-5p模拟物或共转染lncRNA DNAJC3-AS1小干扰RNA与miR-3619-5p抑制剂,Transwell检测细胞迁移和侵袭,Western blot检测细胞中EMT相关蛋白E-cadherin、N-cadherin和Vimentin表达。双荧光素酶报告基因实验验证lncRNA DNAJC3-AS1与miR-3619-5p的调控关系。结果:脑胶质瘤组织中lncRNA DNAJC3-AS1表达明显高于正常脑组织(P<0.05),而miR-3619-5p表达明显低于正常脑组织(P<0.05)。与HEB细胞相比,胶质瘤细胞系中lncRNA DNAJC3-AS1表达升高(P<0.05),miR-3619-5p表达降低(P<0.05)。下调lncRNA DNAJC3-AS1或上调miR-3619-5p后,LN18细胞迁移数、侵袭数及细胞中N-cadherin和Vimentin蛋白表达降低(P<0.05),E-cadherin蛋白表达升高(P<0.05)。lncRNA DNAJC3-AS1可靶向负调控miR-3619-5p,下调miR-3619-5p可逆转下调lncRNA DNAJC3-AS1对LN18细胞迁移、侵袭及EMT的影响。结论:lncRNA DNAJC3-AS1在胶质瘤组织及细胞系中呈高表达,下调其表达可能通过靶向上调miR-3619-5p阻碍胶质瘤细胞迁移、侵袭及EMT过程,其可能成为胶质瘤治疗的分子靶点。

龙胆苦苷通过调控LncRNA LINC00324/miR-3619-5p表达对皮肤鳞癌SCL-1细胞增殖、迁移及侵袭的影响

目的探讨龙胆苦苷(Gentiopicroside,GPS)对皮肤鳞癌SCL-1细胞增殖、迁移、侵袭的影响及其对LncRNA LINC00324/miR-3619-5p的调控作用。方法采用不同浓度的GPS处理人皮肤鳞癌细胞SCL-1(GPS-L组、GPS-M组、GPS-H组),同时将正常培养的细胞记为Con组,si-NC、si-LINC00324分别转染至si-NC组、si-LINC00324组,pcDNA、pcDNA-LINC00324分别转染入SCL-1细胞后加入40μmol/L GPS处理细胞(GPS+pcDNA组、GPS+pcDNA-LINC00324组);采用MTT实验、Transwell小室实验分别检测细胞增殖、迁移及侵袭能力;采用qRT-PCR法检测LINC00324、miR-3619-5p的表达量;双荧光素酶报告实验检测LINC00324与miR-3619-5p的靶向关系。结果与Con组比较,GPS-L组、GPS-M组、GPS-H组细胞增殖抑制率升高(P<0.05),细胞转移及侵袭数量明显降低(P<0.05),LINC00324的表达水平降低(P<0.05),miR-3619-5p的表达水平升高(P<0.05);双荧光素酶报告实验证实LINC00324可靶向结合miR-3619-5p;与si-NC组比较,si-LINC00324组细胞增殖抑制率升高(P<0.05),迁移及侵袭细胞数减少(P<0.05);转染pcDNA-LINC00324可减弱GPS对SCL-1细胞增殖、迁移及侵袭的作用。结论龙胆苦苷可通过抑制LINC00324的表达而促进miR-3619-5p的表达,进一步降低皮肤鳞癌SCL-1细胞增殖、迁移及侵袭的能力。

马钱苷联合miR-3619-5p靶向迁移侵袭增强因子1对宫颈癌SiHa细胞迁移和凋亡的影响

目的研究马钱苷联合miR-3619-5p靶向迁移侵袭增强因子1(migration and invasion enhancer 1,MIEN1)对宫颈癌SiHa细胞迁移和凋亡的影响。方法采用qRT-PCR法检测宫颈癌SiHa、Hela、CasKi细胞和正常宫颈上皮Ect1/E6E7细胞中miR-3619-5p m RNA表达。在宫颈癌SiHa细胞中转染miR-3619-5p mimics上调miR-3619-5p的表达,给予马钱苷处理,采用CCK-8法分析细胞增殖;流式细胞术分析细胞凋亡;Transwell小室分析细胞迁移和侵袭能力的变化;Western blotting法分析剪切型半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(cleaved cystein-asparate protease-3,cleaved Caspase-3)和基质金属蛋白酶-2(matrix metalloprotease-2,MMP-2)蛋白表达。生物信息学软件预测miR-3619-5p的靶基因,利用荧光素酶报告系统鉴定二者的靶向关系。在宫颈癌SiHa细胞中共转染miR-3619-5p mimics和MIEN1过表达载体,考察细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭能力的变化。结果宫颈癌SiHa、Hela、CasKi细胞中miR-3619-5p mRNA表达水平低于正常宫颈上皮Ect1/E6E7细胞(P<0.05),并且宫颈癌SiHa细胞中miR-3619-5p表达水平最低。上调miR-3619-5p、马钱苷处理或二者联合处理后的宫颈癌SiHa细胞增殖、迁移和侵袭能力均下降(P<0.05),细胞凋亡升高(P<0.05),细胞cleaved Caspase-3蛋白表达水平升高(P<0.05),MMP-2蛋白表达水平降低(P<0.05),并且二者联合处理后对细胞增殖、凋亡、侵袭和迁移的作用更强。miR-3619-5p靶向促进MIEN1表达。MIEN1过表达载体逆转马钱苷联合mi R-3619-5p对宫颈癌Si Ha细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭的作用(P<0.05)。结论马钱苷联合miR-3619-5p靶向MIEN1能够抑制宫颈癌SiHa细胞增殖、迁移、侵袭能力,并促进细胞凋亡。

环状RNA circ_0006988对胶质瘤细胞凋亡和迁移的影响

目的探讨下调hsa_circ_0006988(circ_0006988)对胶质瘤细胞凋亡和迁移的作用。方法实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测胶质瘤组织中circ_0006988、miR-3619-5p表达变化。胶质瘤细胞BT325分为Control、si-NC(转染siRNA control)、si-circ(转染circ_0006988 siRNA)、miR-NC(转染mimics control)、miR-3619-5p(转染miR-3619-5p mimics)、si-circ+anti-miR-NC(共转染circ_0006988 siRNA、inhibitor control)、si-circ+anti-miR-3619-5p组(共转染circ_0006988 siRNA、miR-3619-5p inhibitor),qRT-PCR检测miR-3619-5p表达,CCK-8实验检测增殖,流式细胞术检测凋亡,Transwell小室检测迁移,Western Blot检测Bax、B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl-2)、基质金属蛋白酶2(MMP-2)蛋白表达。靶基因预测软件预测circ_0006988和miR-3619-5p结合位点,二者关系通过荧光素酶系统确定。结果与瘤旁组织比较,胶质瘤组织中circ_0006988表达水平升高,miR-3619-5p表达水平下降,并且胶质瘤组织中circ_0006988和miR-3619-5p表达水平负相关(r=-0.2897,P<0.001)。与Control、si-NC组比较,si-circ组胶质瘤细胞中miR-3619-5p水平增加,细胞增殖活性、迁移数目以及Bcl-2、MMP-2蛋白表达减少,凋亡率和Bax蛋白表达增多(P<0.05)。与Control、miR-NC组比较,miR-3619-5p组胶质瘤细胞中miR-3619-5p水平增加,细胞增殖活性、迁移数目以及Bcl-2、MMP-2蛋白表达减少,凋亡率和Bax蛋白表达增多(P<0.05)。与si-circ+anti-miR-NC组比较,si-circ+anti-miR-3619-5p组胶质瘤细胞中miR-3619-5p水平降低,细胞增殖活性、迁移数目以及Bcl-2、MMP-2蛋白表达增多,凋亡率和Bax蛋白表达减少(P<0.05)。下调circ_0006988靶向负调控miR-3619-5p表达。结论下调circ_0006988靶向促进miR-3619-5p表达诱导胶质瘤细胞凋亡,并抑制细胞迁移。