血清miR-374a、TSGF、SCCAg对早期宫颈癌淋巴结转移的诊断价值

目的探讨血清miR-374a、肿瘤特异性生长因子(TSGF)、鳞状细胞癌抗原(SCCAg)对早期宫颈癌淋巴结转移(LNM)的诊断价值。方法对收治的109例早期宫颈癌患者进行回顾性分析,根据术后病理有无LNM分为LNM组(28例)和无LNM组(81例),对可能影响宫颈癌LNM的相关因素进行单因素、Logistic回归分析,包括年龄、分化程度、FIGO分期、间质浸润深度、淋巴脉管间隙浸润(LVSI)、肿瘤直径及血清miR-374a、TSGF、SCCAg。ROC曲线评价血清miR-374a、TSGF及SCCAg诊断宫颈癌LNM的价值。结果单因素分析显示,间质浸润深度、LVSI、肿瘤直径、血清miR-374a、TSGF及SCCAg与宫颈癌LNM有关(P<0.05);年龄、分化程度、FIGO分期与宫颈癌LNM无关(P>0.05)。Logistic回归分析显示,间质浸润深度≥1/2、肿瘤直径≥2 cm、血清miR-374a、TSGF及SCCAg均是宫颈癌LNM的危险因素(P<0.05);LVSI与宫颈癌LNM无关(P>0.05)。ROC曲线显示,血清miR-374a、TSGF、SCCAg单独及三者联合诊断宫颈癌LNM的AUC分别为0.695、0.681、0.714、0.786,敏感度分别为53.57%、82.14%、78.57%、82.14%,特异度分别为90.12%、53.09%、65.43%、72.84%。结论血清miR-374a、TSGF及SCCAg是早期宫颈癌LNM的危险因素,有助于诊断早期宫颈癌LNM,且三者联合的诊断的效果更佳。

M2型巨噬细胞外泌体包裹miR-374a促进前列腺癌恶性进展的机制研究

目的:探究M2型巨噬细胞外泌体包裹miR-374a对前列腺癌(prostate cancer,PCa)恶性进展的影响并探讨其分子机制。方法:在成功建立M2型巨噬细胞的基础上,抽提并鉴定其外泌体,检测外泌体中差异表达的miRNA,同时在不同PCa细胞中验证,选取miR-374a进行研究;M2细胞中转染cy3荧光标记的miR-374a与PC3细胞共培养,荧光显微镜观察PC3细胞中cy3荧光表达情况;DU145和PC3细胞中转染miR-374a inhibitor进行增殖、迁移等细胞功能学实验及裸鼠皮下成瘤实验;通过数据库筛选叉头盒转录因子(FOXO1)作为靶基因,通过Western blotting、荧光素酶报告基因实验及免疫荧光实验进行验证;干扰FOXO1后进行细胞功能学实验,观察是否能逆转miR-374a inhibitor对DU145及PC3细胞功能学的影响。结果:成功建立M2细胞并抽提其外泌体,其中miR-374a在M2细胞外泌体中高表达;荧光定量PCR实验结果证明miR-374a在PC3及DU145中表达量显著高于LNCaP,在M2细胞中表达量高于THP-1细胞,PC3细胞与M2细胞共培养后,M2细胞可通过外泌体传递miR-374a至PC3细胞内;敲低PC3和DU145细胞中miR-374a的表达量后显著降低其增殖、迁移能力并促进其凋亡,在PC3中敲低miR-374a表达后裸鼠皮下成瘤体积显著减小;Western blotting、荧光素酶报告基因实验及免疫荧光实验结果证明miR-374a可以直接结合FOXO1,抑制β-catenin入核并抑制PCa细胞EMT;挽救实验结果说明转染si-FOXO1后可逆转miR-374a对PC3和DU145细胞迁移的抑制作用。结论:M2细胞可通过外泌体传递miR-374a进入PCa细胞靶向FOXO1抑制其恶性进展。

探究miR-374a-5p与急性ST段抬高型心肌梗死患者PCI后6个月内支架内血栓形成的关系

目的探究与分析miR-374a-5p与急性ST段抬高型心肌梗死患者经皮冠状动脉介入术(PCI)后6个月内支架内血栓形成的关系。方法回顾性分析晋城市人民医院2020年4月至2022年3月收治的实施PCI治疗的急性ST段抬高型心肌梗死患者138例的临床资料,按照术后6个月是否出现了支架内血栓形成分为形成组(27例)及未形成组(111例),查阅患者的临床基线资料以及实验室检查指标等,采用单因素及多因素logistic回归分析ST段抬高型心肌梗死患者PCI后6个月内支架内血栓形成的影响因素;采用受试者工作特征曲线(ROC)分析miR-374a-5p在判断ST段抬高型心肌梗死患者PCI后6个月内支架内血栓形成的价值。结果形成组性别、年龄、体质量指数(BMI)、高血压病史、高血脂病史、梗死部位、急诊PCI时间、总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、收缩压(SBP)、舒张压(DBP)、血红蛋白(Hb)、血小板计数(PLT)、心率(HR)及左心室射血分数(LVEF)与未形成组相比,差异均无统计学意义(均P>0.05)。与未形成组相比,形成组糖尿病病史比例、多支架置入比例、血清miR-374a-5p水平较高,差异均有统计学意义(均P<0.05)。ROC下面积为0.699,标准误差为0.049,显著性为<0.001,渐进95%置信区间为0.604~0.795,该组患者实施PCI后6个月内发生支架内血栓形成的miR-374a-5p切点为1.115,提示miR-374a-5p具有较好的诊断价值。行logistic回归分析发现,糖尿病病史、多支架置入以及miR-374a-5p可作为ST段抬高型心肌梗死患者PCI后6个月内支架内血栓形成的高危因素(均P<0.05)。结论糖尿病病史、多支架置入以及miR-374a-5p可作为ST段抬高型心肌梗死患者PCI后6个月内支架内血栓形成的高危因素。检测miR-374a-5p水平可辅助评估ST段抬高型心肌梗死患者的预后。

LINC00707靶向miR-374a-3p对LPS诱导的肺上皮细胞炎症因子释放和凋亡的影响

目的:研究长基因间非编码RNA 00707(LINC00707)靶向miR-374a-3p对脂多糖(LPS)诱导的肺上皮细胞炎症因子释放和凋亡的影响。方法:采用10μg/ml LPS处理肺上皮细胞BEAS-2B建立细胞损伤模型,并分为对照组(Con)、LPS组、LPS+si-NC组、LPS+si-LINC00707组、LPS+miR-NC组、LPS+miR-374a-3p组、LPS+si-LINC00707+anti-miR-NC组、LPS+si-LINC00707+anti-miR-374a-3p组。RT-qPCR检测LINC00707和miR-374a-3p表达;ELISA试剂盒检测细胞培养液中IL-6和IL-1β水平;流式细胞仪检测BEAS-2B细胞凋亡率。双荧光素酶报告实验分析LINC00707和miR-374a-3p的靶向关系。结果:与Con组比较,LPS组BEAS-2B细胞凋亡率、IL-6和IL-1β释放量、LINC00707表达显著升高(P<0.05),miR-374a-3p表达显著降低(P<0.05)。与LPS+si-NC组比较,LPS+si-LINC00707组BEAS-2B细胞凋亡率、IL-6和IL-1β释放量显著降低(P<0.05)。与LPS+miR-NC组比较,LPS+miR-374a-3p组BEAS-2B细胞凋亡率、IL-6和IL-1β释放量显著降低(P<0.05)。miR-374a-3p是LINC00707的靶基因,LINC00707负调控miR-374a-3p表达。与LPS+si-LINC00707+anti-miR-NC组比较,LPS+si-LINC00707+antimiR-374a-3p组BEAS-2B细胞凋亡率、IL-6和IL-1β释放量显著升高(P<0.05)。结论:干扰LINC00707通过靶向上调miR-374a-3p抑制LPS诱导的肺上皮细胞凋亡和炎症因子释放。

LncRNA DLX6-AS1靶向miR-374a-3p调控糖尿病患者创面愈合的分子机制

目的探讨长链非编码RNA(LncRNA)DLX6-AS1靶向miR-374a-3p对糖尿病(DM)患者创面愈合的影响。方法将人微血管内皮细胞(HMECs)分为对照(NC)组、高糖(HG)组,小干扰RNA(siRNA)阴性对照(si-NC)+HG组(转染si-NC后用HG处理)、si-LncRNADLX6-AS1+HG组(转染si-LncRNADLX6-ASI后用HG处理)、miR-NC+HG组(转染miR-NC后用HG处理)、miR-374a-3p+HG组(转染miR-374a3p后用HG处理)、anti-miR-374a-3p+si-LncRNADLX6-AS1+HG组(转染imR-374a-3p+si-LncRNADLX6-AS1后用的HG处理)、anti-miR-NC+si-LncRNADLX6-AS1+HG组(转染anti-miR-NC+si-LncRNADLX6-AS1+HG后用HG处理)。采用实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)检测DM患者(DM组)和正常人(对照组)创面组织中miR-374a-3p和LncRNADLX6-AS1表达水平。CCK-8法检测细胞增殖,Transwell实验检细胞迁移和侵袭。LncRNADLX6-AS1和miR-374a-3p的靶向关系通过双荧光素酶报告实验确定。结果与对照组相比,DM组创面组织中miR-374a-3p表达显著降低(P<0.05),LncRNA DLX6-AS1表达显著升高(P<0.05)。与NC组比较,HG组HMECs中LncRNA DLX6-AS1表达显著升高(P<0.05),miR-374a-3p表达、细胞增殖率、迁移和侵袭数显著降低(P<0.05)。与si-NC+HG组比较,si-LncRNA DLX6-AS1+HG组HMECs增殖率、迁移和侵袭数显著升高(P<0.05)。与miR-NC+HG组比较,miR-374a-3p+HG组HMECs增殖率、迁移和侵袭数显著升高(P<0.05)。miR-374a-3p是LncRNA DLX6-AS1的靶基因。与anti-miR-NC+si-LncRNA DLX6-AS1+HG组比较,anti-miR-374a-3p+si-LncRNA DLX6-AS1+HG组HMECs增殖率、迁移和侵袭数显著降低(P<0.05)。结论下调LncRNA DLX6-AS1通过促进miR-374a-3p表达可诱导HMECs增殖、迁移和侵袭,促进DM患者创面愈合。

miR-374a在糖尿病肾病患者血清中的表达水平及其意义

目的探讨miR-374a在糖尿病肾病(DN)患者外周血中的表达及对炎症的调控机制。方法选择2017年1月-2020年1月河北省保定市第一中心医院收治的44例T2D患者为研究对象(T2D组)。根据是否并发DN,将患者分为无DN组(n=27)及DN组(n=17)。根据疾病严重程度,将DN组患者分为大量蛋白尿组(n=10)和微量蛋白尿组(n=7)。选择同期在本院治疗的13例合并视网膜病变且白蛋白尿检查正常的T2D患者为阳性对照(阳性对照组),以及同期在我院行健康体检的24名非糖尿病健康人为阴性对照组,比较各组血清miR-374a表达水平,检测并分析DN组和无DN组多形核白细胞(PMN)滚动速度和黏附性、血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)和细胞间黏附分子-1(ICAM-1)水平。结果T2D组与阴性对照组的血清miR-374a水平分别为(1.28±0.24)、(1.00±0.17),差异无统计学意义(P>0.05)。与无DN组相比,DN组血清中miR-374a水平较低(P<0.01),而阳性对照组的miR-374a水平高于DN组(P<0.01)。大量蛋白尿组miR-374a水平低于无DN组(P<0.01)及微量蛋白尿组(P<0.05)。Logistic多因素分析结果显示,超敏C-反应蛋白(hs-CRP)、空腹C肽及血清总胆固醇是miR-374a表达水平的独立影响因素(P<0.05)。与无DN组相比,DN组的PMN滚动速度较低(P<0.05),黏附性较高(P<0.01)。miR-374a与PMN滚动速度呈正相关(r=0.625;P<0.01),而与PMN黏附性呈负相关(r=-0.457;P<0.05)。与无DN组比较,DN组TNF-α、IL-6、ICAM-1水平较高(P<0.05)。miR-374a与TNF-α(r=-0.592,P<0.05)、IL-6(r=-0.491,P<0.05)和ICAM-1水平(r=-0.687,P<0.05)呈负相关。结论DN患者血清中miR-374a高表达,可能通过影响机体炎症反应参与DN的发生和发展。

DLEU2下调miR-374a-5p对肝癌细胞增殖、凋亡、迁移、侵袭的影响

目的探讨DLEU2对肝癌细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭的影响及潜在的作用机制。方法运用实时定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)检测肝癌细胞HepG2、BEL-7402和正常肝细胞HL-7702中DLEU2和miR-374a-5p的表达水平;将miR-NC组(转染miR-NC)、miR-374a-5p组(转染miR-374a-5pmimics)、pcDNA3.1组(转染pcDNA3.1)、pcDNA3.1-DLEU2组(转染pcDNA3.1-DLEU2)、si-NC组(转染si-NC)、si-DLEU2组(转染si-DLEU2)、anti-miR-NC组(转染anti-miR-NC)、anti-miR-374a-5p组(转染anti-miR-374a-5p)、miR-NC+WT-DLEU2组(共转染miR-NC和WT-DLEU2)、miR-NC+MUT-DLEU2组(共转染miR-NC和MUT-DLEU2)、miR-374a-5p+WT-DLEU2组(共转染miR-374a-5p和WT-DLEU2)、miR-374a-5p+MUT-DLEU2组(共转染miR-374a-5p和MUT-DLEU2)、pcDNA3.1-DLEU2+miR-NC组(共转染pcDNA3.1-DLEU2和miR-NC)、pcDNA3.1-DLEU2+miR-374a-5p组(共转染pcDNA3.1-DLEU2和miR-374a-5p)均用脂质体法转染至HepG2细胞;采用MTT法检测各组细胞增殖;Transwell检测各组细胞迁移和侵袭;流式细胞术检测各组细胞的凋亡;Western印迹检测蛋白表达;双荧光素酶报告基因检测实验检测荧光活性。结果相较于正常肝细胞HL-7702,肝癌细胞HepG2、BEL-7402中DLEU2 mRNA的表达水平显著降低(P<0.05);过表达DLEU2、抑制表达miR-374a-5p均可抑制HepG2细胞增殖、迁移和侵袭,促进细胞凋亡,抑制Bcl-2、N-cadherin蛋白的表达,促进Bax、E-cadherin蛋白的表达。DLEU2靶向调控miR-374a-5p的表达。过表达miR-374a-5p能逆转DLEU2对肝癌细胞HepG2增殖、迁移、侵袭的抑制和凋亡的促进作用。结论长链非编码RNA DLEU2可抑制肝癌细胞HepG2的增殖、迁移和侵袭,促进其凋亡,其机制可能与靶向miR-374a-5p基因有关,将为肝癌的预防和治疗提供新靶点。

miR-374a对肺腺癌细胞增殖与侵袭迁移的影响

目的探究分析miR-374a对非小细胞肺癌细胞增殖、侵袭、迁移等生物学行为能力的影响。方法采用RT-PCR检测miR-374a在正常肺上皮细胞CCD-8L及非小细胞肺癌细胞A549、H1975中的表达情况。采用miR-374a mimic和miR-374a inhibitor转染非小细胞肺癌细胞A549、H1975,采用RT-PCR检测各组细胞转染效率。分别采用CCK8细胞增殖实验、平板克隆实验、Transwell迁移实验和Transwell侵袭实验检测转染前后非小细胞肺癌细胞株增殖、迁移及侵袭能力变化情况。结果与正常肺上皮细胞CCD-8L比较,非小细胞肺癌细胞A549、H1975中miR-374a呈稳定高表达(P<0.05)。miR-374a mimic、miR-374a inhibitor可分别瞬时过表达、低表达非小细胞肺癌细胞A549、H1975中miR-374a表达情况(P<0.05)。过表达miR-374a可促进非小细胞肺癌细胞A549、H1975的增殖、迁移和侵袭(P<0.05);靶向抑制miR-374a表达可抑制非小细胞肺癌细胞A549、H1975的增殖、迁移和侵袭(P<0.05),组间差异显著,具有统计学意义。结论miR-374a在非小细胞肺癌细胞A549、H1975中呈稳定高表达,过表达miR-374a可明显促进非小细胞肺癌细胞A549、H1975的增殖、迁移和侵袭。

血清miR-374a在非小细胞肺癌中的表达及临床意义

目的探讨microRNA-374a(miR-374a)在非小细胞肺癌患者血清中的表达及临床意义。方法采用实时荧光定量PCR(SYBgreen法)检测65例非小细胞肺癌(NSCLC)患者和70例健康人(健康对照组)血清中miR-374a的表达水平。结果 miR-374a在NSCLC患者血清中表达水平显著高于健康对照组(3.84±1.21 vs.1.09±0.16,P<0.05),并且其表达与临床TNM分期和淋巴结转移有关(P<0.05)。血清miR-374a在受试者工作特征曲线(ROC曲线)下面积(AUC)为0.927(95%CI:0.875~0.975)。当血清miR-374a临界值取1.615时,对NSCLC诊断的灵敏度为87.69%,特异度为97.14%。结论血清miR-374a有望成为一种新的生物标志物用于NSCLC的辅助诊断。

下调miR-374a通过靶向TCF21抑制宫颈癌细胞SiHa增殖、迁移、侵袭的分子机制

目的:阐明下调miR-374a靶向转录因子21(TCF21)调控宫颈癌细胞增殖、迁移、侵袭的分子机制。方法:采用Realtime PCR法检测微小RNA(miR)-374a在正常宫颈上皮细胞和宫颈癌细胞中的表达变化。在宫颈癌细胞Si Ha中转染miR-374a inhibitor,MTT检测细胞增殖,Transwell小室检测细胞侵袭以及迁移能力变化,Western blot检测细胞中基质金属蛋白酶2(MMP-2)、基质金属蛋白酶9(MMP-9)蛋白表达变化。在线靶基因预测软件预测miR-374a的靶基因可能为TCF21,荧光素酶报告系统鉴定靶向关系。在宫颈癌细胞Si Ha中共转染miR-374a inhibitor和TCF21 siRNA,检测细胞增殖、侵袭、迁移变化。结果:miR-374a在正常宫颈上皮细胞中的表达水平明显低于宫颈癌细胞。转染miR-374a inhibitor后的宫颈癌细胞Si Ha增殖、迁移和侵袭能力下降,细胞中MMP-2和MMP-9蛋白表达减少。miR-374a靶向负调控TCF21表达。TCF21 siRNA逆转miR-374a inhibitor对宫颈癌细胞Si Ha增殖、侵袭和迁移的抑制作用。结论:下调miR-374a通过靶向TCF21抑制宫颈癌细胞Si Ha增殖、迁移、侵袭。

CYP2C19基因多态性、miR-374b-5p与ACI患者神经功能缺损和近期预后的关系

目的探讨细胞色素P4502C19(CYP2C19)基因多态性、血清miR-374b-5p水平与急性脑梗死(ACI)患者神经功能缺损和近期预后的关系。方法选取2019年1月—2022年12月郑州市第七人民医院ACI患者164例,收集所有患者的一般资料,并检测CYP2C19基因型和血清miR-374b-5p相对表达量。采用美国国立卫生研究院卒中量表(NIHSS)评估ACI患者神经功能缺损程度。根据治疗15 d后的NIHSS评分将ACI患者分为预后良好组和预后不良组。采用Spearman相关分析评估miR-374b-5p与入院时NIHSS评分的相关性。采用多因素Logistic回归分析评估ACI患者近期预后不良的危险因素。采用受试者工作特征(ROC)曲线评估CYP2C19基因型和血清miR-374b-5p判断ACI患者近期预后的效能。结果164例ACI患者CYP2C19基因型中,GG型(野生纯合子)26例(15.86%)、GA型(突变杂合子)66例(40.24%)、AA型(突变纯合子)72例(43.90%)。A等位基因频率为64.02%,G等位基因频率为35.98%。基因型分布符合Hardy-Weinberg平衡定律(χ^(2)=2.620,P=0.106)。GG基因型、GA基因型、AA基因型的ACI患者入院时NIHSS评分依次升高(P<0.001)。血清miR-374b-5p相对表达量与入院时NIHSS评分呈负相关(r_(s)=-0.510,P<0.001)。ACI患者预后不良发生率为19.51%(32/164)。预后不良组与预后良好组之间年龄、梗死体积、发病至就诊时间、白细胞(WBC)计数、CYP2C19基因型为AA型所占比例和血清miR-374b-5p相对表达量差异均有统计学意义(P<0.05)。梗死体积、发病至就诊时间、WBC计数、CYP2C19基因型为AA型均是ACI患者预后不良的危险因素(P<0.05),miR-374b-5p相对表达量为保护因素(P=0.007)。AA基因型和血清miR-374b-5p单项检测和联合检测判断ACI患者预后不良的曲线下面积(AUC)分别为0.631、0.730、0.802。结论CYP2C19基因多态性、血清mi R-374b-5p相对表达量均与ACI患者神经功能缺损有关,或可作为ACI患者近期预后的评估指标。

miR-374b-5p靶向调控PTEN抑制七氟醚诱导的小鼠海马神经元HT22细胞凋亡

目的 探究miR-374b-5p对七氟醚(sevoflurane,Sev)引起的小鼠海马神经元HT22细胞损伤的保护作用。方法 将HT22细胞并分为6组:对照组、Sev组、miR-con+Sev组、miR-374b-5p+Sev组、miR-374b-5p+pcDNA+Sev组、miR-374b-5p+pcDNA-PTEN+Sev组。RT-qPCR检测各组miR-374b-5p和PTEN mRNA的表达水平,蛋白质免疫印迹(Western blot)检测各组PTEN、Bax、Bcl-2、Cleaved caspase-3的表达水平,双荧光素酶活性实验验证miR-374b-5p对PTEN的靶向作用,CCK8检测HT22细胞活性;流式细胞术检测HT22细胞凋亡;DCFH-DA探针检测HT22细胞ROS水平;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测HT22细胞中丙二醛(MDA)和谷胱甘肽(GSH)含量。结果 与对照组比较,在Sev处理组miR-374b-5p的表达水平下降,PTEN mRNA和PTEN蛋白表达水平增加,差异有统计学意义(P<0.05)。miR-374b-5p通过与HT22细胞中PTEN mRNA的3’UTR结合而抑制PTEN的表达。与对照组比较,Sev组HT22细胞中PTEN mRNA、PTEN、ROS、MDA含量、Cleaved caspase-3、Bax表达量和细胞凋亡率升高,而miR-374b-5p、GSH含量、Bcl-2表达量和细胞存活率降低,差异有统计学意义(P<0.05);与miR-con+Sev组比较,miR-374b-5p+Sev组的HT22细胞中PTEN mRNA、PTEN、ROS、MDA含量Cleaved caspase-3、Bax表达量和细胞凋亡率降低,而miR-374b-5p、GSH含量、Bcl-2表达量和细胞存活率升高,差异有统计学意义(P<0.05);与miR-374b-5p+pcDNA+Sev组比较,miR-374b-5p+pcDNA-PTEN+Sev组的HT22细胞中PTEN mRNA、PTEN、ROS、MDA含量、Cleaved caspase-3、Bax表达量和细胞凋亡率升高,而GSH含量、Bcl-2表达量和细胞存活率含量降低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 预处理miR-374b-5p可能通过抑制PTEN抑制Sev处理HT22细胞凋亡,从而发挥对神经细胞的保护作用。

hsa-miR-374a-3p与VEGFB在结直肠癌中的相关性和作用

目的 探讨hsa-miR-374a-3p与VEGFB在结直肠癌中的相关性和作用。方法 TCGA数据集分析VEGFB在结直肠癌中的表达和对生存曲线的影响;免疫组织化学方法检测59例结直肠癌组织中VEGFB蛋白的表达;ELISA方法检测结直肠正常细胞和结直肠癌细胞中VEGFB的表达。重组人VEGFB蛋白或VEGFB抗体处理后,MTT法检测细胞活力;膜联蛋白V-PE和7-氨基放线菌素D(7-AAD)染色法检测细胞凋亡水平;FASAria细胞分选仪检测细胞周期。miRNA测序检测细胞中miRNA总体表达水平;实时荧光定量PCR检测miRNA-374a-3p与VEGFB mRNA的表达水平;荧光素酶报告实验验证miRNA-374a-3p与VEGFB-3′-UTR的靶向关系。结果 VEGFB在结直肠癌组织中的mRNA和蛋白表达水平显著高于正常组织。VEGFB高表达患者的中位生存期明显低于低表达患者。与结直肠正常细胞相比,结直肠癌细胞VEGFB表达水平明显升高。VEGFB蛋白处理后,结直肠正常细胞NCM460的细胞活力水平上升、细胞凋亡水平下降。结直肠癌组织中miR-374a-3p与VEGFB的表达水平存在负相关。miR-374a-3p靶向VEGFB mRNA的3′端非编码区。敲低miR-374a-3p后,细胞中VEGFB的mRNA和蛋白表达水平均上升,细胞活力上升,细胞凋亡减少。结论 miR-374a-3p与VEGFB的表达水平在结直肠癌中存在负相关,VEGFB/miR-374a-3p轴调控结直肠癌细胞的增殖与凋亡。

miR-374b、miR-765、miR-126在2型糖尿病变化中的相关性分析

目的 研究miR-374b、miR-765、miR-126在2型糖尿病变化中的相关性分析。方法 选择2020年3月—2022年3月于本院行健康体检的健康志愿者50名作为健康组,并将同期收治的102例2型糖尿病患者作为疾病组,采用荧光定量PCR法检测所有研究对象miR-374b、miR-765、miR-126表达量。对比疾病组、健康组各指标表达水平、各指标在疾病组疾病不同时期、不同严重程度中的表达,并分析miR-374b、miR-765、miR-126在2型糖尿病变化中的相关性。结果 在miR-374b、miR-765水平上,疾病组高于健康组,在miR-126水平上,疾病组低于健康组(P<0.05);随着疾病的加重,患者miR-374b、miR-765水平逐渐升高,重度>中度>轻度,miR-126水平逐渐下降,重度<中度<轻度(P<0.05);相关性分析发现miR-374b与miR-765均为正相关;miR-765与miR-126为负相关,miR-374b与miR-126均负相关,(均P<0.05)。结论 miR-126在疾病中均为低表达,miR-374b、miR-765在疾病中均为高表达,检测miR-374b、miR-765、miR-126水平有助于评价2型糖尿病患者疾病严重程度。

circTLK1通过调控miR-374a-5p表达对高糖诱导的肾小球系膜细胞损伤的影响

为探讨circTLK1对高糖诱导的肾小球系膜细胞损伤的影响及分子机制,该研究将人肾小球系膜细胞HMCL分为对照(Con)组、高糖(HG)组、HG+si-NC组、HG+si-circTLK1组、HG+miR-NC组、HG+miR-374a-5p组、HG+si-circTLK1+anti-miR-NC组、HG+si-circTLK1+anti-miR-374a-5p组。采用RT-qPCR检测circTLK1和miR-374a-5p的表达水平;ELISA检测TNF-α、IL-6水平;MTT检测细胞增殖活性;Western blot法检测蛋白表达;双荧光素酶报告实验验证circTLK1和miR-374a-5p的靶向关系。结果显示,高糖诱导的肾小球系膜细胞中circTLK1、TNF-α、IL-6、CyclinD1表达水平及细胞活性升高,miR-374a-5p、p21表达水平降低(P<0.05)。下调circTLK1表达或过表达miR-374a-5p,高糖诱导的肾小球系膜细胞中TNF-α、IL-6、CyclinD1表达水平和细胞活性降低,p21表达水平升高(P<0.05)。circTLK1靶向调控miR-374a-5p;抑制miR-374a-5p表达逆转了下调circTLK1表达对高糖诱导的肾小球系膜细胞损伤的作用。该研究得出,下调circTLK1表达可能通过上调miR-374a-5p抑制高糖诱导的肾小球系膜细胞损伤。

胃癌患者血清中MiR-374a的表达及其对胃癌预后判断的价值

目的:探讨miR-374a表达水平与胃癌临床及预后的潜在相关性。方法:实时荧光定量PCR检测胃癌病人及来源于常规体检的健康人血清的miR-374a表达水平,然后对胃癌病人miR-374a表达水平和一系列临床参数(肿瘤大小、TNM分期、病理分期、总生存率、无复发生存率及预后等)进行分析。结果:实时荧光定量PCR结果显示胃癌病人血清miR-374a表达水平比正常健康人明显升高(P<0.01),而且与肿瘤大小、TNM分期、病理分期等临床病理学参数密切相关。miR-374a高表达的胃癌病人总生存率及无复发生存率均比miR-374a低表达的胃癌病人明显下降。多因素分析结果显示血清miR-374a表达水平可以用来作为判断胃癌预后的独立因素。结论:血清miR-374a表达水平在胃癌病人中明显升高并且和不良预后密切相关,因此血清miR-374a有可能成为预测胃癌预后的分子标志物。

miR-210和miR-374a联合预测新生儿缺氧缺血性脑病的严重程度和预后

目的探究miR-210、miR-374a是否能辅助提高S100B蛋白以及血清神经元特异性烯醇化酶(NSE)诊断缺血缺氧性脑病(HIE)的严重程度及预后的准确性。方法纳入2016年3月-2018年3月于该院就诊的HIE足月新生儿80例,根据HIE的严重程度分为3组(轻度、中度、重度),选择同期的健康足月新生儿80例作为对照组,检测每组新生儿的血清NSE水平、S100B蛋白水平、miR-210、miR-374a表达情况以及神经行为评分(NBNA评分),分析比较miR-210、miR-374a、S100B蛋白以及NSE预测/联合预测新生儿缺氧缺血性脑病的严重程度及预后的诊断价值。结果 HIE患儿的血清NSE水平、S100B蛋白水平显著高于对照组,miR-210、miR-374a表达量显著低于对照组(P<0. 05);血清NSE水平、S100B蛋白水平与NBNA评分、HIE预后(智力发展)呈负相关;miR-210、miR-374a与NBNA评分、HIE预后呈正相关;联合运用miR-210、miR-374a、S100B蛋白以及NSE预测新生儿HIE的严重程度及预后的诊断价值最大。结论联合运用miR-210、miR-374a、S100B蛋白以及NSE可有效预测新生儿HIE的严重程度及预后。

miR-374促进急性心肌梗死诱导心肌纤维化的机制

目的研究微小RNA(miR)-374通过调控白细胞介素(IL)-10对急性心肌梗死(AMI)诱导心肌纤维化的影响。方法采用实时荧光定量-聚合酶链反应(qRT-PCR)检测AMI患者和健康对照组血清中miR-374的表达水平。构建AMI小鼠模型,随机分为假手术组(n=6)、AMI组(n=12)、AMI+miR-374组(n=12,AMI小鼠心肌注射miR-374)。采用qRT-PCR检测假手术组和AMI组心肌组织中miR-374的表达水平及各组Ⅰ型胶原(COL1)A1和Ⅲ型胶原(COL3)A1 mRNA表达水平。检测各组心脏功能,记录左室射血分数(LVEF)、左室长轴缩短分数(FS)、左室舒张末期内径(LVDd)和左室收缩末期内径(LVDs)。比色法检测各组半胱氨酸-天冬氨酸蛋白酶(Caspase)3和Caspase8活性。Massontrichrome染色检测各组心肌纤维化程度。miR靶基因数据库预测IL-10为miR-374的潜在靶基因并采用荧光素酶报告基因法验证。采用qRT-PCR检测转染miR-374 mimics对IL-10 mRNA表达的影响。采用Western印迹检测AMI组和AMI+miR-374组心肌组织中IL-10、P65和P50蛋白表达。结果AMI患者血清中miR-374的表达水平明显高于健康对照组(P<0.001)。AMI组心肌组织中miR-374表达水平明显高于假手术组(P<0.001)。相比AMI组,AMI+miR-374组LVEF和FS明显降低、LVDd和LVDs明显升高、Caspase3和Caspase8活性明显升高、COL1A1和COL3A1 mRNA表达水平明显升高、心肌纤维化程度增加(P<0.05、P<0.01、P<0.001)。miR-374可靶向调控IL-10并抑制其mRNA表达。相比AMI组,AMI+miR-374组心肌组织中IL-10蛋白表达明显降低,而P65和P50蛋白磷酸化明显增加(P<0.05)。结论miR-374可能通过抑制IL-10的表达显著促进心肌梗死诱导心肌纤维化的发展。

MiR-374a通过PTEN/AKT信号通路调节乳腺癌细胞的增殖和凋亡

[目的]探讨miR-374a在乳腺癌细胞增殖和凋亡中的作用,并进一步探讨其机制。[方法]采用实时荧光定量PCR (qRT-PCR)检测人乳腺癌细胞MCF-7及正常人乳腺细胞Hs 578Bst的miR-374a及PTEN mRNA转录水平,Western blot法测定MCF-7、Hs 578Bst组细胞及对照、 miR-374a抑制剂组细胞的PTEN、p-AKT蛋白表达变化,用CCK-8法及Tunel法分别观察对照组和miR-374a抑制剂组细胞的增殖和凋亡,并用Western blot法检测两组细胞的凋亡相关蛋白Bcl-2、Cleaved caspase-3、Cleaved caspase-9表达。[结果 ]与人正常乳腺Hs 578Bst细胞相比,乳腺癌MCF-7细胞的miR-374a表达水平显著性增高(P<0.001),PTEN mRNA及蛋白的表达水平显著性降低(P<0.001),而p-AKT蛋白表达水平明显升高(P<0.001)。miR-374a抑制剂可抑制乳腺癌细胞的增殖(P<0.001),并促进其凋亡的发生(P<0.001),降低抗凋亡蛋白Bcl-2表达水平(P<0.001)的同时活化凋亡相关蛋白Caspase-3和Caspase-9(P<0.001)。miR-374a通过靶点PTEN影响AKT通路,miR-374a组细胞PTEN mRNA表达水平显著性降低(P<0.001),而miR-374a抑制剂处理后,PTEN蛋白水平显著性升高(P<0.001),p-AKT表达降低(P<0.001)。[结论] miR-374a在乳腺癌细胞高表达,并通过调节PTEN/AKT信号通路抑制乳腺癌细胞的增殖,促进凋亡的发生。miR-374a/PTEN/AKT信号通路有望成为乳腺癌的新治疗靶点。

lncRNA BLACAT1通过靶向miR-374b-5p对卵巢癌细胞紫杉醇耐药性的影响及其机制

目的探讨长链非编码RNA(lncRNA)膀胱癌相关转录本(BLACAT)1靶向miR-374b-5p对卵巢癌细胞紫杉醇(Taxol)耐药性的影响。方法实时荧光定量-聚合酶链反应(qRT-PCR)检测卵巢癌组织、与其对应的癌旁组织、卵巢癌细胞SKOV3及卵巢癌Taxol耐药细胞SKOV3/Taxol中BLACAT1和miR-374b-5p表达水平。采用不同浓度Taxol处理SKOV3和SKOV3/Taxol细胞,CCK-8法检测细胞增殖抑制率,计算IC50。将si-BLACAT1和miR-374b-5p mimics分别转染SKOV3/Taxol细胞,经Taxol干预处理后,流式细胞术检测细胞凋亡,Western印迹检测细胞周期蛋白(Cyclin)D1、p21、B细胞淋巴瘤(Bcl)-2蛋白和Bcl-2相关X蛋白(Bax)表达水平。双荧光素酶报告基因实验和qRT-PCR验证BLACAT1和miR-374b-5p的靶向关系。结果与癌旁组织比较,卵巢癌组织中BLACAT1的表达水平显著升高,miR-374b-5p的表达水平显著降低;与SKOV3细胞相比,SKOV3/Taxol细胞中BLACAT1的表达水平显著升高,miR-374b-5p的表达水平显著降低(P<0.05)。SKOV3/Taxol细胞的IC50显著高于SKOV3细胞(P<0.05)。沉默BLACAT1或过表达miR-374b-5p均可明显抑制SKOV3/Taxol细胞CyclinD1和Bcl-2表达,明显促进p21和Bax表达,明显促进细胞凋亡(P<0.05)。BLACAT1可靶向负性调控miR-374b-5p表达。干扰miR-374b-5p表达可逆转沉默BLACAT1对SKOV3/Taxol细胞Taxol耐药性的影响。结论沉默BLACAT1通过上调miR-374b-5p表达,抑制SKOV3/Taxol细胞增殖,促进细胞凋亡,从而提高卵巢癌耐药细胞SKOV3/Taxol细胞对Taxol敏感性。