miR-455-3p在结直肠癌组织中表达的临床意义及对癌细胞增殖的影响

目的:探讨miR-455-3p在结直肠癌组织中表达的临床意义及对癌细胞增殖的影响。方法:基于GEO数据库(GSE30454和GSE108153),使用limma包分析结直肠癌组织中显著差异表达的miRNAs;借助包含TCGA数据库的UALCAN平台分析miR-455-3p在结直肠癌组织中的差异表达,并通过Kaplan-Meier Plotter网站初步分析miR-455-3p与患者生存的关联;原位杂交(in situ hybridization,ISH)法检测结直肠癌及配对癌旁组织(n=185对)中miR-455-3p的表达情况,并利用两样本秩和检验进行比较;通过Pearson χ^(2)检验和非条件Logistic回归分析miR-455-3p表达与患者临床病理参数的相关性;采用Kaplan-Meier法Log-rank检验、多因素COX回归以及多因子降维(multifactor dimensionality reduction,MDR)法分析miR-455-3p预测结直肠癌患者预后的潜力;qPCR和MTT法检测miR-455-3p在结直肠癌细胞株中的表达及对细胞增殖能力的影响。结果:miR-455-3p、miR-1181、miR-1290和miR-622是两组GEO芯片中的共同差异基因。基于TCGA数据的差异分析和Kaplan-Meier曲线发现miR-455-3p在结直肠癌中的下调与患者预后不良密切相关(P=0.007 9,HR=0.21)。miR-455-3p在结直肠癌中表达减少与肿瘤大小和原发位置显著相关(P<0.05)。miR-455-3p高表达预示结直癌患者生存时间延长(P<0.001),为预后的独立保护因素(P<0.001,HR<1)。miR-455-3p单因素模型具备有效评估无病生存期(disease-free survival,DFS)和总体生存期(overall survival,OS)的潜力(P<0.05,Cross-validation consistency=10/10)。miR-455-3p在结直肠癌细胞株中表达下调(P<0.05),过表达miR-455-3p显著抑制结直肠癌细胞的增殖能力(P<0.05)。结论:miR-455-3p抑制结直肠癌细胞增殖,其低表达有望成为结直癌患者早期诊断和预后评估的潜在生物标志物。

miR-455-3p对奶山羊化学诱导乳腺上皮细胞乳脂代谢的影响

【目的】探讨miR-455-3p对奶山羊化学诱导乳腺上皮细胞(CiMECs)乳脂代谢的影响,为研究微小RNA(miRNA)对山羊乳腺功能的调控机制提供理论依据。【方法】利用单一小分子化合物RepSox(TGFβR-1/ALK5抑制剂)诱导山羊成纤维细胞(GEFs),诱导8 d后观察细胞形态变化,采用特异性标记物免疫荧光染色和油红O染色鉴定CiMECs是否诱导成功。使用脂质体将miR-455-3p的过表达载体(miR-455-3p mimics、miR-455-3p mimics-NC)和干扰载体(miR-455-3p inhibitors、miR-455-3p inhibitors-NC)转染至CiMECs,通过细胞增殖及毒性检测(CCK-8)试剂盒、甘油三酯检测试剂盒、实时荧光定量PCR检测miR-455-3p对于CiMECs的增殖率、甘油三酯分泌情况及乳脂代谢基因表达量。【结果】GEFs诱导8 d后形成类似于山羊乳腺上皮细胞的岛状、多核和鹅卵石状细胞形状。免疫荧光结果显示,CiMECs可表达上皮特异性标志物抗原,包括细胞角蛋白14(CK14)和CK18;油红O染色结果显示,诱导后的细胞具有分泌脂滴的功能。CiMECs转染结果显示,miR-455-3p mimics极显著促进了miR-455-3p的表达(P<0.01),miR-455-3p inhibitors显著抑制了miR-455-3p的表达(P<0.05)。CCK-8及甘油三酯检测结果表明,与对照组相比,miR-455-3p mimics组细胞增殖率、甘油三酯分泌量均极显著降低(P<0.01),miR-455-3p inhibitors组细胞增殖率、甘油三酯分泌量均显著增加(P<0.05)。实时荧光定量PCR结果显示,与对照组相比,诱导后CiMECs中HADHB基因表达量极显著降低(P<0.01);miR-455-3p mimics组HADHB基因表达量极显著升高(P<0.01),miR-455-3p inhibitors组HADHB基因表达量显著降低(P<0.05)。【结论】通过抑制miR-455-3p可促进奶山羊CiMECs增殖,降低脂肪代谢基因HADHB的表达,从而提高山羊奶中脂肪酸含量。研究结果可为后续利用miRNA改善山羊乳品质提供参考。

miR-455-3p调控sirt1表达对大鼠椎间盘髓核细胞增殖及凋亡的影响

目的探讨miR-455-3p调控沉默信息调节因子2同源蛋白1(silent mating type information regulation 2 homolog 1,sirt1)表达对大鼠椎间盘髓核(nucleus pulposus,NP)细胞增殖及凋亡的影响。方法采用Ⅱ型胶原酶从大鼠腰椎椎间盘中分离NP细胞,并用甲苯胺蓝和Ⅱ型胶原(CollagenⅡ)免疫荧光染色对其鉴定。NP细胞分成Ctrl组、白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)组、IL-1β+NC inhibitor组、IL-1β+miR-455-3p inhibitor组、IL-1β+miR-455-3p inhibitor+si-NC组、IL-1β+miR-455-3p inhibitor+si-sirt1组,除Ctrl组外的五组细胞均使用10 ng/mL的IL-1β诱导NP细胞退变模型。实时荧光定量聚合酶链式反应(real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction,qRT-PCR)检测miR-455-3p及sirt1 mRNA水平;细胞计数试剂盒8(cell counting kit 8,CCK-8)检测增殖;JC-1染色检测线粒体膜电位;Hoechst染色检测凋亡;蛋白免疫印迹检测sirt1、增殖(PCNA、Ki67、Cyclin D1)和凋亡(Bcl-2、Bax、Cleaved-caspase 3)相关蛋白及CollagenⅡ、Aggrecan表达;双荧光素酶报告分析实验验证miR-455-3p与sirt1的靶向关系。结果大鼠椎间盘NP细胞被成功分离。与IL-1β组、IL-1β+NC inhibitor组比较,IL-1β+miR-455-3p inhibitor组miR-455-3p表达、凋亡率、Bax、Cleaved-caspase 3表达及Bax/Bcl-2比值下降,细胞活力、PCNA、Ki67、Cyclin D1、Bcl-2、CollagenⅡ、Aggrecan表达升高(P<0.05)。miR-455-3p直接靶向负调控sirt1表达。干扰sirt1可逆转抑制miR-455-3p表达对NP细胞增殖、凋亡的影响。结论抑制miR-455-3p表达可通过靶向调控sirt1,抑制IL-1β诱导的NP细胞凋亡并促进NP细胞增殖。

急性胰腺炎患者血清miR-455-3p,miR-141-3p水平表达与病情严重程度的关系研究

目的 探讨急性胰腺炎(acute pancreatitis,AP)患者血清miR-455-3p,miR-141-3p水平表达与病情严重程度的关系。方法 选取2021年11月~2023年11月于都江堰市人民医院就诊的AP患者133例(AP组)作为研究对象;根据病情程度将AP患者分为重症组(n=43)和轻症组(n=90)。同期选取于该院体检健康者135例作为对照组。实时荧光定量PCR(RT-q RCR)法检测血清miR-455-3p和miR-141-3p水平。Spearman相关性分析血清miR-455-3p,miR-141-3p水平与急性生理与慢性健康评分Ⅱ(acute physiology and chronic health evaluation Ⅱ,APACHE Ⅱ)、Ranson评分的相关性;受试者工作特征(ROC)曲线分析血清miR-455-3p,miR-141-3p水平对重症AP的诊断价值;多因素Logistics回归分析影响重症AP的发生因素。结果 AP组血清miR-455-3p(0.61±0.13)低于对照组(1.12±0.21),miR-141-3p水平(1.37±0.11)高于对照组(1.04±0.15),差异具有统计学意义(t=23.863,20.513,均P<0.05)。重症组患者血清miR-455-3p水平(0.53±0.10)低于轻症组(0.64±0.12),miR-141-3p水平(1.51±0.14)高于轻症组(1.30±0.15),差异具有统计学意义(t=6.056,7.713,均P<0.05)。重症组患者血清淀粉酶(serum amylase,AMS)、脂肪酶(lipase,LPS)水平及APACHEⅡ,Ranson评分高于轻症组,差异具有统计学意义(t=2.227,2.290,18.267,11.259,均P <0.05)。Spearman相关性分析结果表明,AP患者血清miR-455-3p与APACHEⅡ,Ranson评分呈负相关(r=-0.702,-0.783,均P <0.05),miR-141-3p与APACHEⅡ,Ranson评分呈正相关(r=0.787,0.734,均P <0.05)。ROC曲线结果表明血清miR-455-3p,miR-141-3p水平单独及联合诊断重症AP的AUC分别为0.848,0.822和0.919,且二者联合诊断优于单独诊断(Z=3.081,2.524,均P<0.05)。多因素Logistic回归分析结果显示miR-455-3p是影响重症AP的保护因素,miR-141-3p是影响重症AP的危险因素(P<0.05)。结论 AP患者血清miR-455-3p下降和miR-141-3p升高与病情严重程度密切相关。

lncRNA DLEU2/miR-455-3p/OTUD7B轴通过PI3K/AKT信号通路促进宫颈癌恶性发展

目的:探讨长链非编码RNA DLEU2(lncRNA DLEU2,DLEU2)对宫颈癌恶性发展的影响。方法:利用TCGA数据库和qRT-PCR分析DLEU2在宫颈癌组织和细胞系中的表达。采用CCK-8、Western blotting、免疫荧光、细胞划痕、Transwell和TUNEL实验检测干扰DLEU2(sh-DLEU2)对宫颈癌细胞增殖、迁移、侵袭和凋亡的影响。生物信息学和双荧光素酶报告基因实验分析DLEU2和miR-455-3p的靶基因,评估miR-455-3p inhibitor/mimic对宫颈癌细胞生长和PI3K/AKT信号通路的影响。裸鼠荷瘤实验检测干扰DLEU2后对瘤体体内生长的影响。结果:宫颈癌组织和细胞系中DLEU2表达显著上调(P<0.01)。sh-DLEU2可抑制Hela和SiHa细胞的增殖、迁移和侵袭(P<0.01),促进细胞凋亡(P<0.001)。DLEU2与miR-455-3p相结合,OTUD7B为miR-455-3p的靶基因。miR-455-3p inhibitor促进细胞恶性发展并激活PI3K/AKT信号通路,而sh-DLEU2可逆转其作用(P<0.01);miR-455-3p mimic也可部分逆转Oe-OTUD7B对细胞的作用(P<0.01)。此外,sh-DLEU2抑制了裸鼠荷瘤组织的生长(P<0.01)。结论:DLEU2通过miR-455-3p/OTUD7B轴激活PI3K/AKT信号通路促进宫颈癌的恶性发展。

miR-455-3p靶向调控HDAC2抑制非小细胞肺癌细胞的恶性生物学过程

目的研究miR-455-3p在非小细胞肺癌中的生物学功能及其机制。方法通过实时荧光定量PCR和蛋白免疫印迹分析癌旁组织和癌组织中miR-455-3p和组蛋白脱乙酰基酶2(HDAC2)的表达水平。将A549细胞分为4组:miR NC组、miR-455-3p mimics组、si NC组和si HDAC2组。通过MTT实验分析细胞的增殖能力,流式细胞仪分析细胞的凋亡率,蛋白免疫印迹分析HDAC2和Ki-67的表达水平,通过双荧光素酶报告基因实验和生物信息学分析miR-455-3p的靶点。结果miR-455-3p在非小细胞肺癌组织中低表达而HDAC2高表达(癌旁组织和癌组织中miR-455-3p分别为1.03±0.02、0.46±0.01;癌旁组织和癌组织中HDAC2分别为0.17±0.01、0.43±0.02,P<0.05);过表达miR-455-3p或者抑制HDAC2后都能抑制A549细胞增殖和侵袭能力,并诱导A549细胞凋亡;miR-455-3p能够靶向抑制HDAC2的表达(癌旁组织和癌组织分别为1.01±0.03、0.21±0.01;P<0.05)。结论miR-455-3p在非小细胞肺癌组织中低表达而HDAC2高表达,此外,miR-455-3p通过靶向调节HDAC2进而抑制非小细胞肺癌的体外增殖。

miR-455-3p靶向调控VEGF-C对矽肺淋巴管增生的影响

目的探究微小RNA-455-3p(miR-455-3p)在大鼠矽肺模型淋巴管增生中的调控作用,并探讨miR-455-3p靶向血管内皮生长因子-C(VEGF-C)对人淋巴内皮细胞(HLECs)管状结构形成的影响。方法将大鼠随机分为矽肺模型组和正常对照组,矽肺模型组气管内滴注二氧化硅(SiO 2)悬浊液,对照组滴注等量0.9%氯化钠溶液,采用HE、Masson、免疫组织化学染色观察肺组织病理改变及淋巴管增生情况,实时荧光定量PCR(RT-qPCR)和Western blot检测大鼠肺组织内miR-455-3p、VEGF-C表达水平;将miR-455-3p抑制剂(Inhibitors)及其阴性对照(NC)转染至HLECs中,RT-qPCR和Western blot检测细胞内miR-455-3p、VEGF-C表达水平,划痕实验检测HLECs迁移能力,基质胶管形成实验检测管状结构形成能力,双荧光素酶报告基因验证miR-455-3p和VEGF-C的靶向关系。结果与正常对照组比较,大鼠矽肺模型组肺间质内大量炎性细胞聚集,胶原逐渐沉积,且肺内淋巴管增生,肺组织内miR-455-3p表达水平低于对照组,VEGF-C表达水平高于对照组;HLECs转染后,与NC组比较,Inhibitors组细胞内miR-455-3p表达水平降低,VEGF-C水平升高,细胞迁移能力及管状结构形成能力增强(P<0.05);双荧光素酶报告基因证实VEGF-C为miR-455-3p的靶基因。结论miR-455-3p可通过靶向调控VEGF-C表达从而影响HLECs的管状结构形成能力,调节淋巴管增生。

miR-455-3p靶向HDAC2对卵巢上皮性癌细胞生长和运动的影响

目的研究miR-455-3p通过靶向HDAC2对卵巢上皮性癌细胞生长和运动的影响。方法荧光素酶报告实验验证miR-455-3p与HDAC2靶向关系;构建HDAC2pcDNA载体过表达HDAC2,细胞转染mimic,将细胞随机分为4组:Control组、mimic组、HDAC2组、mimic+HDAC2组进行后续实验。BRDU染色检测细胞增殖;流式细胞仪检测细胞凋亡;RT-PCR检测Ki67、PCNA、c-MycmRNA水平;Transwell检测细胞侵袭;划痕试验检测细胞迁移;Westernblot检测血管内皮生长因子(VEGF)、波形蛋白(Vimentin)、纤维粘连蛋白(Fibronectin)蛋白表达水平。结果miR-455-3p和HDAC2存在直接靶向作用关系。与HDAC2组相比较,mim-ic+HDAC2组BRDU阳性细胞数降低(P<0.05),细胞凋亡率升高(P<0.05),Ki67、PCNA、c-MycmRNA水平降低(P<0.05),侵袭细胞数降低(P<0.05),划痕愈合率降低(P<0.05),VEGF、Vimentin、Fibronectin蛋白水平降低(P<0.05)。结论miR-455-3p通过靶向HDAC2诱导卵巢癌细胞HO-8910凋亡,抑制细胞增殖、侵袭和迁移,降低运动能力。

miR-455-3p靶向HIPK2调控高糖环境下成骨细胞的增殖和凋亡

背景:以往研究表明多种miRNA在骨形成中发挥作用,miR-335-5p可保护成骨细胞免受氧化应激,对枸橼酸铁铵诱导的成骨细胞具有保护作用,但miR-335-5p对高糖环境下成骨细胞增殖和凋亡的影响尚未可知。目的:探讨miR-455-3p靶向HIPK2对高糖环境下成骨细胞增殖和凋亡的影响。方法:双荧光素酶报告基因分析法验证miR-455-3p对HIPK2的靶向作用。体外用高糖诱导MC3T3-E1细胞,分为空白组、高糖组、高糖+miR-control组、高糖+miR-455-3p组、高糖+si-control组、高糖+si-HIPK2组、高糖+miR-455-3p+pcDNA组和高糖+miR-455-3p+pcDNA-HIPK2组。qRT-PCR检测miR-455-3p和HIPK2mRNA的表达,MTT法检测细胞存活率,流式细胞检测细胞凋亡,Westernblot检测HIPK2、p-STAT3和STAT3蛋白的表达。结果与结论:①HIPK2是miR-455-3p的靶基因,miR-455-3p可负性调控HIPK2的表达;②高糖处理可抑制miR-455-3p的表达,促进HIPK2的表达;③过表达miR-455-3p或抑制HIPK2表达均可促进高糖条件下MC3T3-E1细胞的存活和抑制凋亡;④过表达HIPK2可部分逆转miR-455-3p对高糖条件下成骨细胞的存活促进和凋亡抑制作用;⑤miR-455-3p通过调控HIPK2抑制成骨细胞中p-STAT3的表达;⑥结果表明,miR-455-3p通过靶向下调HIPK2抑制高糖诱导的成骨细胞凋亡,促进成骨细胞增殖,这可能与抑制STAT3信号通路有关。

miR-455-3p通过靶向BMP2调节地塞米松诱导的软骨细胞自噬性死亡

目的:探究miR-455-3p通过靶向BMP2对地塞米松(Dex)诱导的软骨细胞自噬性死亡的影响。方法:荧光素酶报告实验验证miR-455-3p与BMP2靶向关系。从SD大鼠中分离软骨细胞,Dex处理后的软骨细胞转染miR-455-3p mimic或联合转染pcDNA-BMP2,将软骨细胞分为4组:Control组、Dex组、Dex+mimic组和Dex+mimic+BMP2组。RT-PCR检测BMP2、Ki67、PCNA mRNA水平,流式细胞仪检测细胞凋亡,CCK-8法检测细胞增殖,免疫荧光检测LC3含量,Western blotting法检测BMP2、Caspase-3、Caspase-9、LC3II、LC3I、Beclin1、ATG7蛋白表达水平。结果:miR-455-3p和BMP2存在直接靶向作用关系。与Control组比较,Dex组BMP2 mRNA水平和蛋白水平显著降低,细胞凋亡率显著升高,cleaved Caspase-3/Caspase-3、cleaved Caspase-9/Caspase-9比值显著升高,细胞增殖倍数显著降低,LC3含量显著升高,LC3II/LC3I比值和Beclin1、ATG7蛋白水平显著升高(均P<0.05)。与Dex组比较,Dex+mimic组BMP2 mRNA水平和蛋白水平显著降低,细胞凋亡率显著升高,cleaved Caspase-3/Caspase-3、cleaved Caspase-9/Caspase-9比值显著升高,细胞增殖倍数显著降低,LC3含量显著升高,LC3II/LC3I比值和Beclin1、ATG7蛋白水平显著升高(均P<0.05)。与Dex+mimic组比较,Dex+mimic+BMP2组BMP2 mRNA水平和蛋白水平显著升高,细胞凋亡率显著降低,cleaved Caspase-3/Caspase-3、cleaved Caspase-9/Caspase-9比值显著降低,细胞增殖倍数显著升高,LC3含量显著降低,LC3II/LC3I比值和Beclin1、ATG7蛋白水平显著升高(均P<0.05)。结论:miR-455-3p通过靶向BMP2调节Dex诱导的软骨细胞自噬性死亡。

miR-455-3p通过靶基因HDAC2抑制心肌梗死后心肌肥厚

目的:探讨miR-455-3p在心肌梗死后心肌肥厚中的作用。方法:比较miR-455-3p在心肌梗死组和空白对照组的表达。心肌细胞过表达miR-455-3p情况下分析细胞表面积和心肌肥厚基因表达。荧光素酶活性检测和Western blot法确定受miR-455-3p调控的靶基因。通过心肌梗死模型组大鼠体内miR-455-3p的过表达确定miR-455-3p对心肌肥厚的影响。结果:在体外和体内试验中发现在心肌肥厚中miR-455-3p均被下调。体外实验,过度表达miR-455-3p可以抑制心肌肥厚。与miR-455-3p相比,心肌肥厚中HDAC2被上调。HDAC2是一种新型的miR-455-3p靶基因。心肌梗死大鼠过表达miR-455-3p通过降低HDAC2的表达能抑制心肌梗死后心肌肥厚。结论:miR-455-3p是心肌肥厚的重要调节因子,为心肌梗死后心肌肥厚的治疗提供新的理论基础。

miR-455-3p通过靶向调控转脂蛋白4抑制卵巢癌细胞SKOV-3的增殖、迁移及上皮间质转化

目的:探讨miR-455-3p对卵巢癌细胞SKOV-3增殖、迁移能力及上皮间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)的影响,并研究其作用机制。方法:人卵巢上皮细胞株IOSE80、卵巢细胞系SKOV-3和A2780细胞培养完成后,将miR-455-3p mimic及其阴性对照分别瞬时转染至细胞中。qPCR实验检测IOSE80、SKOV-3和A2780细胞miR-455-3p和转脂蛋白4(fatty acid-binding protein 4,FABP4)mRNA表达水平,Wb检测FABP4和EMT相关蛋白的表达水平,CCK-8法检测细胞增殖活性,Transwell实验用于评估细胞迁移能力,生物信息学预测miR-455-3p的靶基因,应用双荧光素酶报告基因验证miR-455-3p与FABP4的靶向关系。结果:与正常卵巢上皮细胞IOSE80相比,卵巢癌细胞SKOV-3和A2780中miR-455-3p低表达(均P<0.05),而FABP4高表达(均P<0.05)。此外,过表达miR-455-3p明显抑制SKOV-3细胞的增殖和迁移能力(均P<0.05)。过表达miR-455-3p通过上调E-cadherin表达、下调N-cadherin和Vimentin表达而抑制EMT进程(均P<0.05)。FABP4是miR-455-3p的靶基因,且miR-455-3p能特异性结合FABP4 3’-UTR,并负调控其表达水平(P<0.05)。过表达FABP4能够明显逆转miR-455-3p对SKOV-3细胞增殖和迁移的抑制作用(均P<0.05)。结论:miR-455-3p在卵巢癌中作为一个抑癌蛋白,通过靶向调控FABP4从而抑制卵巢癌细胞增殖、迁移及EMT,有望成为卵巢癌新的潜在治疗靶点。

miR-455-3p在胃癌中的表达及其与MVD和VEGF表达的相关性研究

目的探讨miR-455-3p在胃癌中的水平及其与微血管密度(MVD)和血管内皮生长因子(VEGF)表达的关系。方法采用实时荧光定量PCR检测80例胃癌组织(胃癌组)中miR-455-3p水平,免疫组化法检测80例胃癌组织中MVD和VEGF表达,并分析胃癌组织中miR-455-3p水平与MVD和VEGF表达的相关性。选取同期的37例浅表性胃炎和12例正常胃黏膜组织作对照(对照组)。结果胃癌组的miR-455-3p水平为1.16±0.59,低于对照组的2.61±0.88,差异有统计学意义(P<0.05);胃癌组的VEGF阳性表达率和MVD分别为71.3%(57/80)和54.9±7.3,均高于对照组的28.6%(14/49)和27.5±6.1,差异均有统计学意义(P<0.05);胃癌组织中miR-455-3p水平与VEGF表达(r=-0.783,P<0.05)和MVD(r=-0.824,P<0.05)均呈负相关。结论 miR-455-3p在胃癌中为低表达,并与VEGF表达和MVD呈负相关,有可能在调控胃癌组织血管生长中发挥重要作用。

基于β-catenin/TCF4信号通路探究miR-455-3p对人结肠癌细胞增殖、凋亡及糖酵解的影响

目的基于β-catenin/TCF4信号通路探究miR-455-3p对人结肠癌细胞增殖、凋亡及糖酵解的影响。方法HCT116细胞转染miR-455-3p mimics为miR-455-3p转染组,HCT116细胞转染miR-455-3p NC为miR-NC组,HCT116细胞不转染任何质粒为空白组。MTT法检测各组HCT116细胞增殖情况;流式细胞术检测细胞凋亡情况;检测各组细胞糖酵解葡萄糖摄取量和乳酸生成量;Western blotting检测各组细胞中HK2、β-catenin、TCF4蛋白水平。结果空白组和miR-NC组细胞中miR-455-3p表达量分别为0.99±0.09和1.01±0.10,均低于miR-455-3p转染组的1.82±0.12,差异具有统计学意义(P<0.05)。空白组和miR-NC组48 h吸光值(A)分别为0.75±0.05和0.78±0.06,均高于miR-455-3p转染组的0.32±0.02,差异具有统计学意义(P<0.05)。空白组和miR-NC组细胞凋亡率分别为(2.35±0.6)%和(2.46±0.5)%,均低于miR-455-3p转染组的(22.6±2.1)%,差异具有统计学意义(P<0.05)。和空白组比较,miR-455-3p组细胞中葡萄糖消耗量和乳酸生成量均显著降低(P<0.05)。和空白组比较,miR-455-3p组细胞中HK2、β-catenin和TCF4蛋白均显著降低(P<0.05)。结论过表达miR-455-3p通过抑制β-catenin/TCF4信号通路的转导,抑制人结肠癌细胞增殖、凋亡及糖酵解水平。

miR-455-3p过表达对宫颈癌C33a细胞放疗敏感性的影响研究

目的研究微小RNA(miR)-455-3p过表达对宫颈癌C33a细胞放疗敏感性的影响,并探讨相关机制。方法取对数期宫颈癌C33a细胞,采用脂质体转染法将miR-455-3p mimics、miR-NC转染至C33a细胞,分别设为miR-455-3p mimics组、miR-NC组。取未经处理的细胞设为空白组。荧光显微镜观察转染效率;实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)、Western blot检测miR-455-3p mRNA,去乙酰化酶2(HADC2)mRNA及蛋白相对表达量;生物信息学软件及双荧光素酶实验验证miR-455-3p与HADC2的靶向关系;二甲基噻唑(MTT)法检测不同照射剂量对C33a细胞增殖抑制率;流式细胞术检测细胞凋亡率;PI染色检测细胞周期;Western blot检测磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)、p-PI3K、蛋白激酶B(AKT)、p-AKT蛋白相对表达量。结果荧光显微镜观察结果显示,miR-NC组、miR-455-3p mimics组转染效率均>80%;miR-455-3p mimics组miR-455-3p mRNA相对表达量、不同照射剂量对C33a细胞增殖抑制率、细胞凋亡率、细胞周期G_(0)/G_(1)占比高于空白组、miR-NC组(P<0.05),HADC2 mRNA及蛋白相对表达量、HADC2-WT相对荧光素酶活性值、IC_(50)值、G_(2)/M占比、p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT低于空白组、miR-NC组(P<0.05)。结论miR-455-3p过表达可增强C33a细胞放疗敏感性,推测其作用机制与下调HADC2表达,抑制PI3K/AKT信号通路有关。

甲状腺微小乳头状癌miR-455-3p水平表达与临床病理特征的关系

目的探究甲状腺微小乳头状癌(PTMC)微小RNA(miR)-455-3p水平表达与临床病理特征的关系。方法回顾性选取2020年12月至2021年12月中国人民解放军联勤保障部队第910医院收治的96例PTMC患者,采集PTMC肿瘤组织标本和癌旁正常甲状腺组织标本各96例。应用实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)技术,检测PTMC肿瘤组织和癌旁正常甲状腺组织中miR-455-3p表达水平。分析miR-455-3p表达水平与临床病理特征之间的关系,并应用受试者工作特征(ROC)曲线法分析miR-455-3p表达水平对PTMC的诊断效能。结果PTMC肿瘤组织中miR-455-3p表达水平为5.05±1.08,显著高于癌旁正常甲状腺组织(1.10±0.19),差异有统计学意义(P<0.05)。miR-455-3p表达水平与PTMC患者性别、体重指数、肿瘤多灶性、肿瘤双叶多灶性、桥本甲状腺炎、结节性甲状腺肿无明显相关(P>0.05),与PTMC患者年龄、肿瘤直径、TNM分期、腺外浸润、淋巴结转移、淋巴结侵犯数目呈明显相关(P<0.05)。PTMC肿瘤组织中miR-455-3p表达水平对PTMC有一定的预测价值,曲线下面积为0.827,最佳截断值为4.520,敏感度为0.724,特异度为0.800。结论miR-455-3p在PTMC肿瘤组织中表达上调,与年龄、肿瘤直径、TNM分期、腺外浸润、淋巴结转移、淋巴结侵犯数目密切相关,可能与参与了PTMC的发生及发展。

miR-141-3p对腰椎间盘突出症大鼠背根神经节炎症及下肢疼痛的抑制和改善作用

背景:研究表明,胰岛素样生长因子1/血小板源性生长因子有抑制纤维环细胞凋亡的作用。miR-141-3p微小RNA在骨髓基质细胞中随着年龄的增加而增加,且与炎症信号通路的活化存在一定关系,提示其可能成为腰椎间盘突出症的治疗靶点。目的:探究miR-141-3p通过调控胰岛素样生长因子1/血小板源性生长因子对腰椎间盘突出症大鼠背根神经节炎症及下肢疼痛的影响。方法:选取50只SPF级SD雄性大鼠,随机分为正常组、模型组、miR-NC组、miR-141-3p inhibitor组、miR-141-3p mimics组,每组10只。除正常组外,其余大鼠采用自体髓核移植法进行腰椎间盘突出症建模。建模成功后,对miR-NC组、miR-141-3p inhibitor组和miR-141-3p mimics组大鼠鞘内分别注射10μL 20μmol/L miR-NC,miR-141-3p inhibitor,miR-141-3p mimics,均每天注射1次,连续注射28 d;正常组、模型组同期同位置注射同体积生理盐水。采用热缩足潜伏期阈值评价大鼠下肢疼痛,实时荧光定量PCR检测背根神经节组织miR-141-3p mRNA表达,ELISA法检测背根神经节组织炎症因子,免疫印迹法检测背根神经节组织胰岛素样生长因子1/血小板源性生长因子蛋白表达,并分析miR-141-3p与胰岛素样生长因子1/血小板源性生长因子的相关性。结果与结论:miR-NC组各项指标与模型组比较,差异均无显著性意义。①大鼠热缩足潜伏期阈值:模型组明显低于正常组(P<0.05),miR-141-3p inhibitor组明显低于miR-NC组(P<0.05),miR-141-3p mimics组明显高于miR-141-3p inhibitor组(P<0.05)。②背根神经节组织miR-141-3p mRNA表达:模型组明显低于正常组(P<0.05),miR-141-3p inhibitor组明显低于miR-NC组(P<0.05),miR-141-3p mimics组明显高于miR-141-3p inhibitor组(P<0.05)。③背根神经节组织肿瘤坏死因子α、白细胞介素1β、白细胞介素1含量:模型组明显高于正常组(P<0.05),miR-141-3p inhibitor组明显高于miR-NC组(P<0.05),miR-141-3p mimics组明显低于miR-141-3p inhibitor组(P<0.05)。④背根神经节组织胰岛素样生长因子1、血小板源性生长因子蛋白表达:模型组明显低于正常组(P<0.05),miR-141-3p inhibitor组明显低于miR-NC组(P<0.05),miR-141-3p mimics组明显高于miR-141-3p inhibitor组(P<0.05)。⑤胰岛素样生长因子1与miR-141-3p呈正相关(r=0.904,P<0.001),血小板源性生长因子与miR-141-3p呈正相关(r=0.879,P<0.001)。⑥结论:miR-141-3p可显著改善腰椎间盘突出症大鼠下肢疼痛,抑制背根神经节炎症,其机制可能与促进胰岛素样生长因子1/血小板源性生长因子表达有关。

lncRNA MEG8通过调控miR-367-3p/PTEN介导慢性阻塞性肺疾病发展的分子机制研究

目的 探究长链非编码RNA(lncRNA)MEG8通过调控miR-367-3p/磷酸酶张力蛋白同源物基因(PTEN)介导慢性阻塞性肺疾病(COPD)发展的分子机制。方法 采用实时荧光定量聚合酶链反应(qPCR)检测16HBE细胞和COPD组织lncRNA MEG8表达水平;在香烟烟雾提取物(CSE)刺激后的16HBE细胞中过表达lncRNA MEG8及加入miR-367-3p inhibitor后同时敲减lncRNA MEG8或PTEN,采用MTT法、流式细胞术、酶联免疫吸附试验和免疫印迹法检测细胞凋亡、细胞增殖和炎症因子水平的变化;利用双荧光素酶报告系统对lncRNA MEG8、miR-367-3p、PTEN的靶向关系进行验证。结果 MEG8在CSE刺激的16HBE细胞和COPD临床组织样本中表达降低(P<0.05)。相比于CSE组,过表达MEG8后CSE刺激的16HBE细胞凋亡和炎症因子白细胞介素(IL)-1β、IL-6和肿瘤坏死因子(TNF)-α水平降低(P<0.05),促凋亡蛋白Bax、Caspase3和Cleaved-caspase3表达水平降低(P<0.05),凋亡抑制因子Bcl-2表达水平升高(P<0.05)。双荧光素酶报告基因实验验证了MEG8可靶向抑制miR-367-3p(P<0.05),同时miR-367-3p可靶向抑制PTEN的表达(P<0.05),进而抑制CSE刺激的16HBE细胞的凋亡和炎症反应(P<0.05)。在CSE刺激下,相较于Control组,加入miR-367-3p inhibitor可显著上调16HBE细胞中PTEN的蛋白表达水平(P<0.05),增强细胞增殖活性(P<0.05),减少细胞凋亡(P<0.05),显著下调促凋亡蛋白Bax、Caspase 3和Cleaved-caspase3的表达水平(P<0.05),上调抗凋亡蛋白Bcl-2的表达水平(P<0.05),抑制炎症因子IL-1β、IL-6和TNF-α的水平(P<0.05),随后敲降MEG8或PTEN可恢复PTEN的蛋白表达水平(P<0.05),抑制细胞增殖活性(P<0.05),逆转miR-367-3p inhibitor导致的细胞凋亡(P<0.05)以及对凋亡相关蛋白的调控作用(P<0.05),增强炎症因子IL-1β、IL-6和TNF-α的水平(P<0.05)。结论 MEG8通过调控miR-367-3p/PTEN轴抑制CSE刺激的16HBE细胞的凋亡和炎症反应,并可能为临床COPD的治疗提供新的治疗策略。

hsa-circ-002179靶向miR-143-3p调控自噬-凋亡平衡在胃癌5-氟尿嘧啶化疗耐药性中的作用研究

目的探究hsa-circ-002179靶向miR-143-3p调控自噬-凋亡平衡对胃癌的5-氟尿嘧啶(5-Fu)化疗耐药性的影响。方法通过5-Fu处理AGS细胞构建5-Fu耐药细胞模型(AGS/5-Fu),采用CCK8法检测5-Fu对AGS和AGS/5-Fu细胞活性的影响,采用荧光定量PCR(qRT-PCR)检测细胞中hsa-circ-002179和miR-143-3p的表达;通过流式细胞术和Western blot分别检测细胞凋亡水平与自噬相关蛋白LC3、Beclin-1和p62的表达。同时,通过软件预测hsa-circ-002179与miR-143-3p的结合位点,并采用RIP和双荧光素酶实验验证其结合作用。结果与对照组比较,耐药组的细胞活性[(172.33±9.53)%比(106.00±6.16)%,P<0.01]和自噬水平升高、凋亡率(20.5%比43.8%,P<0.01)降低,hsa-circ-002179表达升高[(4.46±0.34)比(1.05±0.66),P<0.01];转染si-002179后,耐药细胞活性降低[(80.00±2.45)%比(102.67±7.13)%,P<0.05],而凋亡水平升高(31.3%比21.8%,P<0.05)。RIP和双荧光素酶报告实验证实hsa-circ-002179与miR-143-3p直接结合,且与对照组比较,耐药细胞中miR-143-3p的表达降低[(0.38±0.05)比(1.04±0.07),P<0.01]。并且,hsa-circ-002179能够调控miR-143-3p的水平。同时,miR-143-3p抑制剂处理能够升高转染si-002179后的耐药细胞自噬水平。自噬抑制剂处理降低了耐药细胞的自噬水平和细胞活性,升高凋亡水平;在此基础上转染OE-002179则升高自噬水平和细胞活性,降低凋亡水平,进一步转染miR-143-3p模拟物可以逆转以上变化。结论hsa-circ-002179靶向miR-143-3p可能可以调控自噬-凋亡平衡,进而影响胃癌细胞的5-Fu化疗耐药性。

miR-132-3p/CAMTA1对I-125粒子处理的面神经损伤大鼠施万细胞的调控作用

目的探讨miR-132-3p通过钙调素结合转录因子1(CAMTA1)对I-125粒子处理的面神经损伤大鼠(FNI)中施万细胞的调控作用。方法用I-125粒子辐射大鼠施万细胞,并在细胞中转染miR-132-3p mimic、miR-132-3p inhibitor以及sh-CAMTA1。免疫荧光检测S100B和β-TubulinⅢ荧光强度。RT-qPCR检测miR-132-3p的表达,Western blot检测CAMTA1蛋白表达。EdU染色评估细胞增殖,Transwell检测细胞迁移。同时,构建FNI大鼠模型并在大鼠面部植入I-125粒子,HE、LFB染色以及IF染色评估大鼠面神经组织的病理损伤。StarBase v2.0数据库和双荧光素酶报告实验验证miR-132-3p和CAMTA1的靶向关系。结果S100B和β-TubulinⅢ在大鼠施万细胞中显著表达。I-125粒子辐射组中miR-132-3p表达降低(P<0.001),抑制细胞的增殖(P<0.001)和迁移(P<0.001)。过表达miR-132-3p或敲降CAMTA1显著促进施万细胞的增殖(P<0.001)和迁移(P<0.05),敲降miR-132-3p则具有相反的作用。机制研究显示,miR-132-3p靶向负调控CAMTA1。体内实验结果显示,过表达miR-132-3p通过抑制CAMTA1的蛋白表达,减弱I-125粒子对FNI大鼠面神经损伤的促进作用。结论过表达miR-132-3p抑制CAMTA1的表达,促进施万细胞的增殖和迁移,抑制I-125对FNI大鼠面神经损伤的促进作用。