miR-483-3p靶向调节AT2R/AKT/NO通路对甲状腺功能亢进症大鼠心血管损伤的影响

目的:探讨miR-483-3p通过调节血管紧张素2型受体/蛋白激酶B/一氧化氮(AT2R/AKT/NO)通路对甲状腺功能亢进症大鼠心血管损伤的影响。方法:将大鼠分为5组,即对照组、模型组、miR-483-3p mimics mock组、miR-483-3p mimics组和miR-483-3p mimics+PD123319组,每组10只。除对照组外,其余各组大鼠均通过皮下注射280μg/kg左旋甲状腺素钠制备甲状腺功能亢进症模型,造模成功后,miR-483-3p mimics mock组、miR-483-3p mimics组分别给予尾静脉注射miR-483-3p mimics mock、miR-483-3p mimics;miR-483-3p mimics+PD123319组尾静脉注射miR-483-3p mimics和3 mg/kg AT2R拮抗剂PD123319;对照组注射等量的生理盐水,连续7 d。酶联免疫吸附实验(ELISA)检测血清中三碘甲状腺原氨酸(T_(3))、甲状腺素(T_(4))、游离三碘甲状腺原氨酸(FT_(3))、游离甲状腺素(FT_(4))、促甲状腺素(TSH)以及白细胞介素(IL)-2、IL-10、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、IL-6水平;硝酸还原酶法检测血清中NO水平;血糖仪检测大鼠空腹血糖(FBG)含量;全自动电化学发光分析仪检测胰岛素(FINS)含量,并计算胰岛素抵抗指数(IRI)值;苏木精-伊红染色观察心血管病理损伤;TdT介导的缺口末端标记法(TUNEL)检测心肌细胞凋亡;实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测心脏组织中miR-483-3p水平;蛋白免疫印迹法检测AT2R、AKT、磷酸化AKT(p-AKT)、内皮型一氧化氮合酶(eNOS)、磷酸化eNOS(p-eNOS)水平。结果:与对照组比较,模型组大鼠心脏组织中miR-483-3p表达明显下调(P<0.05),血清中T_(3)、T_(4)、FT_(3)、FT_(4)、FBG水平、IRI值、IL-2/IL-10、TNF-α/IL-6及心肌细胞凋亡率均明显升高(P<0.05),TSH、NO水平及心脏组织中AT2R蛋白水平、p-AKT/AKT、p-eNOS/eNOS明显降低(P<0.05),心血管炎性损伤加重。miR-483-3p过表达可使上述各项指标均得到逆转,炎性损伤得到改善(P<0.05)。与miR-483-3p mimics组相比,miR-483-3p mimics+PD123319组大鼠心血管损伤加重,血清中T_(3)、T_(4)、FT_(3)、FT_(4)、FBG水平、IRI值、IL-2/IL-10、TNF-α/IL-6及心肌细胞凋亡率明显升高(P<0.05),TSH、NO、AT2R蛋白水平以及p-AKT/AKT、p-eNOS/eNOS明显降低(P<0.05)。结论:miR-483-3p可通过激活AT2R/AKT/NO通路,改善甲状腺功能亢进症大鼠心血管损伤。

外泌体LncRNA SFTA1P和miR-483-3p诊断乙型肝炎病毒相关性肝癌的价值研究

目的分析血浆外泌体长链非编码RNA(LncRNA)SFTA1P和miR-483-3p在乙型肝炎病毒(HBV)相关性肝癌(HCC)的表达水平,评估其诊断价值。方法选择2022年1月—2024年1月本院收治的58例HBV相关性HCC患者作为HCC组;将同期收治的55例HBV患者作为HBV组;另选同期50名体检健康者作为对照组。运用纳米颗粒跟踪分析系统和蛋白质印迹分析鉴定血浆外泌体,并采用RT-qPCR检测外泌体LncRNA SFTA1P和miR-483-3p水平,分析二者水平分别与HCC临床病理特征之间的关系,Pearson法分析LncRNA SFTA1P和miR-483-3p表达水平的相关性,受试者工作特征(ROC)曲线分析LncRNA SFTA1P和miR-483-3p对HCC患者诊断的敏感性和特异性。结果外泌体LncRNA SFTA1P与miR-483-3p表达水平呈负相关(r=-0.7277,P<0.001)。与对照组相比,HBV、HCC组LncRNA SFTA1P水平依次增高,而miR-483-3p水平依次降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。LncRNA SFTA1P、miR-483-3p表达水平与TNM分期,肿瘤分化程度、淋巴结转移、AFP及AST有关(P<0.05),而与年龄、肿瘤大小、ALT、γ-GGT无关(P>0.05)。LncRNA SFTA1P和miR-483-3p单独诊断HCC时的曲线下面积(AUC)分别为0.886、0.851,敏感度分别为86.20%、89.70%,特异度分别为78.00%、70.00%;联合诊断的AUC为0.957,敏感度和特异度分别为94.80%、82.00%。结论血浆外泌体LncRNA SFTA1P和miR-483-3p的联合诊断可提高HBV相关性HCC的诊断率,为其诊断及后续治疗提供新的研究思路。

LncRNA SNHG15通过miR-483-3p/DDIT4轴调节非小细胞肺癌细胞的顺铂敏感性和上皮间质转化

目的 探究LncRNA SNHG15对非小细胞肺癌(NSCLC)细胞的顺铂(DDP)敏感性和上皮间质转化的影响以及miR-483-3p/DNA损伤诱导转录物4(DDIT4)轴在其中发挥的作用。方法 体外培养NSCLC细胞(A549)、NSCLC耐药细胞(A549/DDP),检测两种细胞对DDP的IC50及LncRNA SNHG15、miR-483-3p、DDIT4 mRNA与蛋白表达,将A549/DDP细胞随机分为A549/DDP组、si NC组、si SNHG15组、si SNHG15+inhibitor NC组、si SNHG15+miR-483-3p inhibitor组、si SNHG15+miR-483-3p inhibitor+si NC组、si SNHG15+miR-483-3p inhibitor+si DDIT4组;蛋白印迹分析法检测各组细胞E-cad、N-cad、DDIT4蛋白表达变化;双荧光素酶报告实验验证miR-483-3p与LncRNA SNHG15、DDIT4的靶向关系。结果 与A549细胞相比,A549/DDP细胞对DDP的IC50、LncRNA SNHG15、DDIT4 mRNA与蛋白升高,miR-483-3p水平降低(P <0.05);A549/DDP组细胞间黏附明显被破坏;si SNHG15组、si SNHG15+miR-483-3p inhibitor+si DDIT4组细胞排列相对紧密,呈现上皮细胞特性;si SNHG15+miR-483-3p inhibitor组较si SNHG15组细胞排列松散、扩散细胞多;与A549/DDP组相比,si SNHG15组A549/DDP细胞增殖抑制率、E-cad表达升高,侵袭细胞数、迁移细胞数、N-cad、DDIT4表达降低(P <0.05);与si SNHG15组相比,si SNHG15+miR-483-3p inhibitor组A549/DDP细胞增殖抑制率、E-cad表达降低,侵袭细胞数、迁移细胞数、N-cad、DDIT4表达升高(P <0.05)。结论沉默A549/DDP细胞中SNHG15表达可通过调控miR-483-3p/DDIT4,抑制A549/DDP细胞增殖、侵袭、迁移、EMT,并降低A549/DDP细胞对DDP的耐药性。

莫诺苷调控miR-483-5p表达对高糖诱导的人视网膜血管内皮细胞氧化应激和凋亡影响

目的探讨莫诺苷(Morroniside,Mor)对高糖诱导的人视网膜血管内皮细胞(human retinal microvascular endothelial cells,HRECs)氧化应激、凋亡的影响及其分子机制。方法将HRECs分为对照组(Con)、高糖组(HG)、HG+Mor-低剂量组(L)、HG+Mor-中剂量组(M)、HG+Mor-高剂量组(H)、HG+anti-miR-NC组、HG+anti-miR-483-5p组、HG+Mor+miR-NC组、HG+Mor+miR-483-5p组。流式细胞仪检测HRECs凋亡率及ROS水平,酶联免疫吸附检测MDA水平和SOD活性。实时定量PCR检测miR-483-5p表达。结果与Con组比较,HG组HRECs凋亡率、ROS和MDA水平升高(P<0.05),SOD活性降低(P<0.05),miR-483-5p表达升高(P<0.05)。与HG组比较,HG+Mor-L组、HG+Mor-M组、HG+Mor-H组HRECs凋亡率、ROS和MDA水平降低(P<0.05),SOD活性升高(P<0.05),miR-483-5p表达降低(P<0.05)。与HG+anti-miR-NC组比较,HG+anti-miR-483-5p组HRECs凋亡率、ROS和MDA水平降低(P<0.05),SOD活性升高(P<0.05)。与HG+Mor+miR-NC组比较,HG+Mor+miR-483-5p组HRECs凋亡率、ROS和MDA水平升高(P<0.05),SOD活性降低(P<0.05)。结论莫诺苷通过下调miR-483-5p表达可抑制高糖诱导的HRECs氧化应激和凋亡。

干扰miR-483-5p对骨关节炎软骨细胞增殖及炎症因子的影响

目的探讨miR-483-5p对骨关节炎软骨细胞增殖及炎症因子的影响及机制。方法分离培养骨关节炎软骨细胞,将其分为Con组、miR-483-5p inhibitor组、miR-483-5p inhibitor+LPS组;四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测细胞存活率;流式细胞仪检测细胞周期;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测肿瘤坏死因子(TNF)-α、白细胞介素(IL)-6水平;Western印迹检测蛋白表达。结果与Con组相比,miR-483-5p inhibitor组软骨细胞存活率明显升高,G0-G1期细胞所占比例明显降低,S期细胞所占比例明显升高,TNF-α、IL-6水平明显降低,TLR4、NF-κB p65蛋白表达水平明显降低(P<0.05)。与miR-483-5p inhibitor组相比,miR-483-5p inhibitor+LPS组软骨细胞存活率明显降低,G0-G1期细胞所占比例明显升高,S期细胞所占比例明显降低,TNF-α、IL-6水平明显升高(P<0.05)。结论干扰miR-483-5p可抑制骨关节炎软骨细胞的增殖及炎症因子的释放,其机制可能与Toll样受体(TLR)4/核转录因子(NF)-κB信号通路有关。

miR-483-5p促进膀胱癌细胞增殖、迁移和侵袭

目的:探讨miR-483-5p在膀胱癌细胞中的生物学功能。方法:运用生物信息学分析miR-483-5p在多种癌症中的表达情况以及其在膀胱癌的诊断和预后预测中的作用。实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测膀胱癌组织、癌旁组织和膀胱癌细胞中miR-483-5p的表达情况以及前列环素合成酶(PTGIS)基因的转录水平。细胞计数试剂盒-8(CCK-8)和5-乙基-20-脱氧尿苷(EdU)实验检测膀胱癌细胞的增殖能力。划痕和Transwell实验评估miR-483-5p对肿瘤细胞迁移和侵袭的影响。蛋白质印迹技术检测PTGIS蛋白的表达水平。双荧光素酶报告基因法验证miR-483-5p与PTGIS的靶向关系。结果:miR-483-5p在6种癌症中表达升高(P<0.05),在8种癌症中表达下降(P<0.05);miR-483-5p在膀胱癌组织和细胞中表达升高(P<0.01);miR-483-5p预测膀胱癌结局有一定准确性(AUC=0.746,95%CI:0.660~0.833);miR-483-5p高表达是膀胱癌患者预后的独立危险因素(HR=1.39,95%CI:1.03~1.87,P=0.032);miR-483-5p抑制剂组膀胱癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力下降(P<0.01);PTGIS被确定为miR-483-5p的直接靶标;miR-483-5p抑制剂组EJ和T24细胞中PTGIS mRNA和蛋白质表达升高(P<0.01)。结论:本研究证实miR-483-5p作为癌基因通过靶向沉默PTGIS促进膀胱癌细胞增殖、迁移和侵袭。miR-483-5p可能成为膀胱癌潜在的治疗靶点和诊断预后标志物。

miR-483-5p通过上调IGF2基因转录促进肝癌细胞生长、迁移与侵袭

目的:探讨miR-483-5p对人胰岛素样生长因子2(IGF2)基因P3启动子驱动的m RNA(P3 m RNA)表达的影响及其在肝细胞癌发生发展中的作用。方法:(1)采用real-time PCR检测人肝癌细胞株Huh7、Hep3B、Bel-7402、Hep G2和SMMC-7721,人正常肝细胞株HL-7702,83例人肝细胞癌组织和配对的癌旁组织,22例正常肝组织中miR-483-5p和P3 m RNA的表达水平,并应用Pearson相关分析评估P3 m RNA与miR-483-5p表达水平之间的关系。(2)将IGF2基因P3 m RNA的5’端非翻译区(5’UTR)克隆入p GL3启动子载体,构建P3 m RNA 5’UTR野生型(p GL3-P3-5’UTR-WT)及P3 m RNA 5’UTR突变型(p GL3-P3-5’UTR-MUT)重组萤光素酶报告质粒,将其分别与miR-483-5p mimic、miR-483-5p inhibitor及scrambled control共转染He La、293T及Huh7细胞,采用双萤光素酶报告系统检测萤光素酶活性。(3)分别将miR-483-5p mimic、miR-483-5p inhibitor及scrambled control转染Huh7及Hep3B肝癌细胞,应用real-time PCR检测这2种肝癌细胞P3 m RNA表达水平的变化。(4)应用real-time PCR检测肝癌细胞Huh7及Hep3B的细胞核和细胞质中miR-483-5p的表达水平;应用核连缀实验(nuclear run-on assay)分析miR-483-5p对P3 m RNA转录的影响;应用RNA稳定性实验分析miR-483-5p对P3 m RNA稳定性影响。(5)应用体外细胞功能实验研究miR-483-5p对Huh7肝癌细胞生长、凋亡、迁移与侵袭能力的影响。结果:(1)5种肝癌细胞株miR-483-5p及P3 m RNA表达水平均明显高于正常肝细胞株HL-7702(P<0.01),肝细胞癌组织中miR-483-5p及P3 m RNA表达水平均明显高于配对的癌旁组织及正常肝组织(P<0.01);线性相关分析显示,在5种肝癌细胞株及肝细胞癌组织中,P3 m RNA表达水平均与miR-483-5p水平呈正相关。(2)萤光素酶实验显示,miR-483-5p与P3m RNA 5’UTR的同源位点互补结合可促进P3 m RNA的表达。(3)瞬时转染实验显示,过表达miR-483-5p呈剂量依赖性促进Hep3B和Huh7肝癌细胞P3 m RNA表达水平的增高。(4)miR-483-5p表达实验显示,成熟miR-483-5p存在于肝癌细胞Hep3B和Huh7的细胞质和细胞核中;核连缀实验显示,miR-483-5p诱导Huh7肝癌细胞核中新生P3 m RNA转录;RNA稳定性实验表明,miR-483-5p不改变Huh7肝癌细胞P3 m RNA稳定性。(5)体外细胞功能实验显示,miR-483-5p促进Huh7肝癌细胞增殖,抑制其凋亡,并增强迁移与侵袭能力。结论:miR-483-5p高表达可部分通过上调IGF2基因P3 m RNA转录促进肝癌细胞生长、迁移与侵袭,进而参与肝细胞癌发生。

miR-483-5p在上皮性卵巢癌中的表达及其对顺铂敏感性的影响

背景与目的:顺铂是目前临床上治疗上皮性卵巢癌的一线化疗药物之一,但许多患者对铂类药物耐药。mi R-483-5p在肺癌中过表达,然而目前尚未见mi R-483-5p在上皮性卵巢癌中的研究。该研究检测mi R-483-5p在上皮性卵巢癌组织和上皮性卵巢癌细胞系中的表达并探讨其对上皮性卵巢癌细胞对顺铂敏感性的影响。方法:采用实时荧光定量聚合酶链反应(real-time fluorescent quantitative polymerase chain reaction,RTFQ-PCR)检测43例上皮性卵巢癌患者的肿瘤组织、8例正常卵巢组织和5种上皮性卵巢癌细胞系中mi R-483-5p的表达情况;通过慢病毒上调或敲低卵巢癌细胞mi R-483-5p表达,应用CCK-8实验检测mi R-483-5p对上皮性卵巢癌细胞系顺铂敏感性的影响。结果:上皮性卵巢癌组织中mi R-483-5p表达明显高于正常卵巢组织(P<0.01)。此外,mi R-483-5p在晚期上皮性卵巢癌组织中的表达水平显著高于早期肿瘤组织(P<0.05)。5种上皮性卵巢癌细胞系中SKOV3细胞表达mi R-483-5p的量最低;mi R-483-5p在上皮性卵巢癌顺铂耐药A2780/CP细胞中表达量最高。上调SKOV3细胞中mi R-483-5p的表达能够降低上皮性卵巢癌细胞对顺铂的敏感性,并下调p21及Bcl-2的表达;下调A2780/CP细胞mi R-483-5p的表达能够增加细胞对顺铂的敏感性,并上调p21及Bcl-2的表达。结论:mi R-483-5p在上皮性卵巢癌组织中高表达并对顺铂耐药,可以作为临床预测上皮性卵巢癌对顺铂敏感性的生物标志物之一。

连翘苷通过调控miR-483-3p对oxLDL诱导的血管平滑肌细胞损伤的影响

目的:探讨连翘苷(PHN)对氧化型低密度脂蛋白(oxLDL)诱导的血管平滑肌细胞炎症损伤的影响及分子机制。方法:人主动脉血管平滑肌细胞(HA-VSMC)随机分为对照组、oxLDL组(50 mg·ml^(-1))、oxLDL(50 mg·ml^(-1))+PHN低(1μmol·L^(-1))、中(10μmol·L^(-1))、高(100μmol·L^(-1))剂量组、oxLDL(50 mg·ml^(-1))+anti-miR-483-3p组、oxLDL(50 mg·ml^(-1))+anti-miR-NC组、oxLDL(50 mg·ml^(-1))+PHN(100μmol·L^(-1))+miR-483-3p组、oxLDL(50 mg·ml^(-1))+PHN(100μmol·L^(-1))+miR-NC组。采用流式细胞术检测细胞凋亡率;Western Blot法检测活化的半胱胺酸蛋白酶(Cleaved-Caspase)3和Cleaved-Caspase9蛋白表达;ELISA法检测白细胞介素1β(IL^(-1)β)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平;RT-qPCR检测miR-483-3p表达水平。结果:低、中、高浓度连翘苷处理后,oxLDL诱导的HA-VSMC细胞凋亡率、Cleaved-Caspase3和Cleaved-Caspase9蛋白表达水平、IL^(-1)β和TNF-α水平、miR-483-3p表达水平显著降低(P<0.05),且呈浓度依赖性。抑制miR-483-3p降低oxLDL诱导的HA-VSMC细胞凋亡率、Cleaved-Caspase3、Cleaved-Caspase9、IL^(-1)β、TNF-α水平(P<0.05)。过表达miR-483-3p逆转了连翘苷对oxLDL诱导的HA-VSMC炎症损伤的作用。结论:连翘苷通过下调miR-483-3p表达从而抑制oxLDL诱导的HA-VSMC炎症损伤。

术前血清miR-483-5p水平在肝内胆管细胞癌诊断及预后中的价值

目的:探讨术前血清miR-483-5p水平在肝内胆管细胞癌(ICC)早期诊断及预后评估中的价值。方法:选择2015年12月—2017年12月收治的91例ICC患者为ICC组,选择同期40例健康体检者为对照组,统计一般临床资料并检测血清miR-483-5p水平,采用受试者工作特征曲线,分析miR-483-5p对ICC的诊断效能。根据miR-483-5p中位值将ICC患者分为低表达组和高表达组,分析比较两组患者病理特征的差异,应用Kaplan-Meier法进行生存分析,并对生存期进行单因素和多因素Cox回归分析。结果:ICC组患者血清miR-483-5p水平明显高于对照组(P<0.05);miR-483-5p诊断ICC的曲线下面积为0.758,敏感性55.00%,特异性86.81%。高表达组和低表达组之间的肿瘤分化程度和淋巴结转移比较,差异有统计学意义(P<0.05)。Kaplan-Meier生存分析显示,高表达组患者的整体生存期明显低于低表达组(P<0.05)。单因素及多因素Cox回归分析发现,血清miR-483-5p水平与ICC患者术后生存期有关,但不是生存期的独立影响因素。结论:血清miR-483-5p水平对ICC具有一定诊断价值,且高miR-483-5p水平ICC患者的术后生存期相对较短,可作为ICC早期诊断及预后评估辅助评价指标。

miRNA“海绵”重组质粒的构建及对miR-483-5p的敲减

目的建立microRNA失功能(loss of function)研究模型,为功能研究提供实验材料。方法针对miR-483-5p成熟体序列设计含6个拷贝反义序列的DNA片段,称为"S-483",将其连接入含CAG启动子的pCAGGs载体中,构建pCAGGs-S-483重组质粒。利用脂质体技术瞬时转染Hep1-6细胞,经re-al-time PCR对成熟miR-483-5p含量进行检测。结果转染pCAGGs-S-483组miRNA-483含量(0.33±0.04)较转染空质粒组(1.00)明显下降(P<0.01),但对其它miRNAs无影响。结论 S-483海绵策略可有效"吸附"并降低miR-483-5p,成功构建了pCAGGs-S-483重组质粒,为其功能研究和miRNA敲减动物的建立提供了有益借鉴。

miR-483-5p抑制BALB/c裸鼠体内胶质瘤生长

目的研究miR-483-5p在体内对胶质瘤生长的影响。方法建立裸鼠皮下胶质瘤移植瘤动物模型,分为U87细胞对照组及miR-483-5p组,于接种细胞后观测瘤体变化,并于24 d后称量瘤体重量。应用免疫组化方法检测增殖细胞核抗原(PCNA)的表达,观察两组移植瘤细胞增殖变化情况。结果 miR-483-5p抑制胶质瘤移植瘤生长,其生长速度及瘤体重量与对照组比较有统计学差异(P<0.05);miR-483-5p使移植瘤PCNA指数下降,与对照组相比较有统计学差异(P<0.05)。结论 miR-483-5p能够抑制裸鼠脑胶质瘤PCNA表达并抑制瘤体生长。

Mir-483增加鼻咽癌细胞的生长、侵袭和迁移能力

目的:探讨mir-483对鼻咽癌细胞增殖、侵袭和迁移能力的影响。方法:利用实时定量聚合酶链反应(RT-q PCR)方法检测不同鼻咽癌细胞株(CNE-1、CNE-2)中mir-483表达量及照射后其表达量的变化;选取鼻咽癌细胞株CNE-1,采用阳离子脂质体法,分别转染mir-483 mimics和阴性对照后,采用MTT细胞增殖实验检测细胞增殖能力;应用划痕实验及transwell实验检测mir-483对鼻咽癌细胞侵袭和迁移能力的影响。结果:mir-483在放疗抵抗鼻咽癌细胞株CNE-1中表达量较放疗敏感鼻咽癌细胞株CNE-2明显增加。过表达mir-483后,其增殖、迁移、侵袭能力均明显增强。结论:mir-483促进鼻咽癌细胞的增殖、侵袭和迁移能力。

miR-483与结直肠癌关系的研究

背景:胰岛素样生长因子2(IGF2)基因在多种恶性肿瘤中呈高表达,在肿瘤发生中起重要作用。miR-483位于IGF2基因第7号内含子中,与宿主基因共表达,但其具体功能尚未明确。目的:检测miR-483-3p、miR-483-5p在结直肠癌中的表达情况,探讨其作为结直肠癌分子标记物的可能性。方法:收集75对结直肠癌组织和相应癌旁非癌组织样本,以real-time PCR检测miR-483-3p、miR-483-5p表达并分析两者间以及两者与肿瘤临床病理特征的关系,以ROC曲线分析两者对结直肠癌的诊断性能。结果:结直肠癌组织中的miR-483-3p、miR-483-5p相对表达量均显著高于相应癌旁非癌组织(P<0.000 1),且两者在癌组织中的表达量呈显著正相关(rs=0.554 5,P<0.000 1)。miR-483-3p和miR-483-5p诊断结直肠癌的最佳截点分别为9.22和11.61,相应诊断敏感性、特异性分别为78.67%、62.67%和50.67%、85.33%;如两者联合检测(并联试验),诊断敏感性可提高至89.48%。两者表达与结直肠癌患者的性别、年龄以及肿瘤大小、部位、分化程度和TNM分期均无相关性。结论:miR-483-3p、miR-483-5p在结直肠癌中呈高表达,可能与肿瘤发生有关。两者有望成为结直肠癌诊断潜在的分子标记物。

血清miR-193a-3p,miR-337-5p和miR-483-5p在食管鳞状细胞癌诊断和预后中的应用

目的探讨miR-193a-3P,miR-337-5p和miR-483-5p在食管鳞状细胞癌(esophageal squamous cell carcinoma,ESCC)患者血清中的表达水平,评估其临床应用价值。方法收集2011年6月~2014年5月南京军区南京总医院及徐州市肿瘤医院住院的63例ESCC患者术前、术后血清及随访信息,同时收集63例年龄、性别相匹配的健康体检者血清作为正常对照。利用TaqMan低密度芯片方法筛选出ESCC患者中异常表达的miRNA;实时荧光定量PCR法验证芯片检测到的ESCC中明显上调的miR-193a-3p,miR-337-5P以及文献报道在口腔鳞状细胞癌(OSCC)表达上调的miR-483-5P;最后评价它们的诊断和预后价值。结果与健康对照相比,ESCC患者血清miR-193a-3p(0.459±0.339 vs 0.195±0.084),miR-337-5p(5.686±5.211 vs 2.476±0.808)和miR-483-5p(32.545±22.479 vs 19.509±10.601)的相对含量均显著升高(U值分别为591,605和1037,P值均<0.0001),且在患者术后明显降低(P值均<0.05);三种miRNA的ROC AUC分别为0.851,0.848和0.739,三种miRNA组合在一起的AUC为0.873,均明显大于癌胚抗原;术后高表达miR-483-5p的患者较之低表这的生存期短(P=0.022)。结论血清miR-193a-3p,miR-337-5p和miR-483-5p可作为ESCC患者诊断或预后评估的潜在分子标志物。

miR-483-5p通过靶基因ERK1调控人类颗粒细胞增殖凋亡平衡

目的证明miR-483-5p及其靶基因ERK1参与调控人类颗粒细胞增殖凋亡平衡。方法 1体外培养人正常颗粒细胞,调控其miR-483-5p超表达,聚合酶链反应(PCR)及Western blot法检测ERK1的mRNA及蛋白表达情况;将包含野生型或突变型的ERK1 mRNA 3'UTR的DNA片段克隆在荧光素酶标记的质粒,共转染miR-483-5p mimics、controlmiR mimics和野生型、突变型重组质粒,检测其颗粒细胞相对荧光素酶活性;2将miR-483-5p mimics及ERK1 siRNAs单独及共同转染颗粒细胞,MTT法及TUNEL法分别检测三种情况下卵巢颗粒细胞的增殖、凋亡情况。结果 1 miR-483-5p超表达后,ERK1基因及蛋白表达均下降;与controlWt(野生型)转染组相比,miR-483-Wt组的荧光素酶活性显著降低;miR-483-Mut(突变型)与control-Mut转染组间荧光素酶活性的比较差异无统计学意义;2 miR-483-5p mimics与ERK1 siRNAs单独及共同转染颗粒细胞,三种转染条件下颗粒细胞增殖均显著受抑制、凋亡率显著升高,且三种作用效果差异无统计学意义。结论 miR-483-5p通过直接与靶基因ERK1结合,参与调控人类颗粒细胞增殖凋亡平衡。

MiR-483在人稽留流产胎盘绒毛组织中表达模式

目的研究人不同年龄阶段稽留流产(MA)胎盘绒毛组织中miR-483的表达模式,分析其与稽留流产的关系。方法通过把研究对象按照1∶1匹配的方法,将2013年1月至2014年12月期间在石家庄市第六医院进行治疗的稽留流产患者以及同期正常人工流产孕妇进行分组,即为稽留流产组(80例)和对照组(80例);依据年龄差异,将两个组别进一步分为4个亚组,依次为:年龄≤25岁组、26～30岁组、31～35岁组、≥36岁组,分别利用qRT-PCR方法和原位杂交定量和定性分析miR-483在人稽留流产胎盘绒毛组织中的表达与定位。结果 qRT-PCR检测发现与对照组相比,在≤25岁组和26～30岁组MA患者胎盘绒毛组织中miR-483的表达量均显著下调(P均<0.01),在31～35岁组MA患者绒毛组织中miR-483的表达量显著增加(P<0.05),在≥36岁组MA患者绒毛组织中没有明显变化。进行个体化分析发现,在≤25岁组中,100%MA患者miR-483表达显著降低(P均<0.01);在26～30岁组,80%MA患者miR-483表达显著下调(P均<0.05);而在31～35岁组和≥36岁组,miR-483的表达没有明显规律。原位杂交检测显示miR-483表达与胎盘绒毛合体滋养层和间质细胞。结论 miR-483在小于30岁人稽留流产患者胎盘组织中表达下调,提示其可能与稽留流产发生相关。

miR-483-5p通过靶向FKBP4加重顺铂诱导的小鼠卵巢损伤

目的探讨FKBP4蛋白在顺铂诱导的早发性卵巢功能不全(POI)中的作用及其机制研究。方法采用ITRAQ技术测定4对顺铂诱导的小鼠POI模型组及生理盐水对照组卵巢组织的差异蛋白。使用TargetScan软件进行靶点预测,利用qRTPCR和Western blot方法确定顺铂诱导组及生理盐水对照组miR-483-5p及FKBP4的表达水平。收集POI患者及正常患者血清各6例,并利用qRT-PCR检测miR-483-5p表达水平。利用细胞转染及双荧光素酶实验验证miR-483-5p和FKBP4的关系。利用转染和/或顺铂分别处理原代颗粒细胞及KGN细胞系(人颗粒细胞系),将细胞分为对照(NC)组、miR-483-5p组、miR-483-5p+顺铂处理组和miR-483-5p+FKBP4+顺铂处理组。以此验证miR-483-5p、FKBP4在顺铂处理的颗粒细胞中的作用;利用Cre-loxp系统构建卵母细胞特异性过表达miR-483-5p及同窝未过表达的转基因小鼠,用免疫荧光、原位杂交及ELISA检测卵巢功能。结果与生理盐水组相比,顺铂诱导的POI小鼠的卵巢中FKBP4表达下降(P<0.05)。靶点预测软件发现miR-483-5p的潜在靶点是FKBP4,并且较生理盐水对照组,它在顺铂诱导的POI小鼠的卵巢、血清以及POI患者的血清中均高水平表达(P<0.01)。体外实验进一步证实FKBP4是miR-483-5p的作用靶点。人颗粒细胞系及小鼠原代颗粒细胞过表达FKBP4缓解了顺铂联合miR-483-5p过表达引起的细胞凋亡(n=5,P<0.05)。与同窝未过表达的小鼠比较,卵母细胞过表达miR-483-5p的小鼠顺铂诱导造成的卵巢损伤更严重。结论miR-483-5p/FKBP4在顺铂诱导的POI中发挥作用。顺铂诱导的卵巢损伤过程可能与上调的miR-483-5p靶向作用FKBP4,导致的FKBP4表达下降有关。miR-483-5p上调可能增加卵巢对顺铂药物的敏感性,使卵巢功能降低。检测血清miR-483-5p可以用来预测POI的发生和发展。

MiR-483-3P下调RIOK3蛋白表达促进神经母细胞瘤的增殖和迁移

目的探讨microRNA-483-3P(miR-483-3P)对神经母细胞瘤细胞的增殖、侵袭及迁移能力的影响,预测并验证miR-483-3P的靶基因及其对靶基因的影响。方法 miRNA微阵列芯片结果发现miR-483-3P在神经母细胞瘤中表达上调,差异倍数显著,并居于差异表达miRNA的首位。利用阳离子脂质体LipofectamineTM2000将化学合成的miR-483-3P inhibitor、miR-483-3P inhibitor的阴性对照序列分别瞬时转染人人神经母细胞瘤SH-SY-5Y细胞株中,RT-qPCR技术检测各组中miR-483-3P的表达水平,CCK-8法检测各组癌细胞的增殖情况,Transwell小室实验检测各组癌细胞的体外侵袭和迁移能力。利用生物信息学软件预测miR-483-3P的靶基因并用荧光素酶报告基因检测实验、Western blot实验加以验证。结果与癌旁正常组织相比,miR-483-3P在神经母细胞瘤中高表达(P<0.01);与阴性对照组相比,癌细胞转染miR-483-3P inhibitor后,miR-483-3P表达显著下调(P<0.01),细胞的增殖情况和体外迁移能力均降低(P<0.05)。生物信息学软件预测出RIOK3是miR-483-3P的靶基因之一,当细胞转染了miR-483-3P inhibitor后荧光酶活性升高(P<0.01)。与阴性对照组相比,当细胞转染了miR-483-3P inhibitor后在蛋白质水平RIOK3表达升高(P<0.01)。结论.RIOK3是miR-483-3P的靶基因之一,miR-483-3P能下调RIOK3的表达并显著促进神经母细胞瘤细胞的增殖和体外迁移。

LncRNA NR003508通过海绵吸附miR-483-3p并靶向MLKL调控BCG感染小鼠巨噬细胞坏死

旨在探讨LncRNA NR_003508在牛分枝杆菌卡介苗(Bacillus Calmette-Guérin, BCG)感染中对小鼠巨噬细胞坏死的调控作用。本研究利用小干扰RNA技术干扰小鼠巨噬细胞系RAW264.7中LncRNA NR_003508的表达,并结合BCG感染,采用Western blot、免疫荧光和流式细胞术等技术检测坏死相关调控因子混合谱系激酶结构域样蛋白(MLKL)的表达水平和细胞坏死率,以及通过生物信息学和双荧光素酶报告基因技术分别预测和验证LncRNA NR_003508与miR-483-3p的靶向结合。结果表明,BCG感染巨噬细胞后,LncRNA NR_003508表达水平显著上调(P<0.01);转染siRNA-LncRNA NR_003508后,MLKL蛋白表达显著下调(P<0.01),同时巨噬细胞坏死率也显著降低(P<0.05);LncRNA NR_003508可以与miR-483-3p特异性结合并发挥海绵吸附作用,并且干扰LncRNA NR_003508可显著上调miR-483-3p的表达(P<0.01),而过表达miR-483-3p显著抑制MLKL的表达(P<0.01),同时抑制巨噬细胞坏死。以上研究结果表明,LncRNA NR_003508通过海绵吸附miR-483-3p并靶向MLKL的表达来促进BCG诱导的巨噬细胞坏死。