急性心肌梗死病人外周血miR-499表达与病情及预后的关系

目的:探讨急性心肌梗死(AMI)病人外周血miR-499表达对近期预后的预测价值。方法:选取AMI病人218例(AMI组),根据入院后90 d主要心血管不良事件发生与否,分为预后良好组178例和预后不良组40例;另选取同期健康体检志愿者100名作为对照组。比较各组外周血miR-499表达水平,采用ROC曲线分析外周血miR-499表达对AMI病人近期预后的预测价值,采用logistic回归模型分析AMI病人近期预后不良的危险因素。结果:AMI组病人外周血miR-499表达水平明显高于对照组(P<0.01),预后不良组病人外周血miR-499表达水平亦明显高于预后良好组(P<0.01)。ROC曲线分析显示,外周血miR-499表达水平预测AMI病人近期预后不良的最佳截断值为0.775,AUC为0.823(95%CI 0.753~0.892),灵敏度、特异度分别为71.11%、70.00%;logistic回归分析显示,术前Killip分级≥Ⅱ级、术前肌酸激酶同工酶峰值较高、外周血miR-499表达水平>0.775均为AMI病人近期预后不良的独立危险因素(P<0.05)。结论:AMI病人入院后早期外周血miR-499表达水平较高是近期预后不良的独立危险因素,且对病人不良预后具有早期预测价值。

血清miR-499与急性冠脉综合征患者冠状动脉病变严重程度的相关性分析

目的·探讨急性冠脉综合征(acute coronary syndrome,ACS)患者血清中miR-499表达水平对冠状动脉病变严重程度的预测价值。方法·纳入就诊于上海交通大学医学院附属新华医院的ACS患者74例,根据Gensini评分将患者分为轻度组(30例)、中度组(21例)及重度组(23例)。荧光实时定量聚合酶链反应(real-time quantitative polymerase chain reaction,qPCR)技术检测血清miR-499的表达量,同时检测肌钙蛋白(cTnI)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)、肌红蛋白(Mb)、脑钠肽(BNP)、左心室射血分数(LVEF)等实验室指标。采用Spearman相关分析评估miR-499表达水平与Gensini评分、冠状动脉病变血管支数的相关性。受试者操作特征(receiver operating characteristic,ROC)曲线分析miR-499对冠状动脉病变严重程度的评估价值。结果·miR-499的表达水平随着冠状动脉病变程度的加重呈上升趋势,组间差异有统计学意义(P=0.000)。miR-499表达水平与Gensini评分、cTnI水平呈正相关(r值分别为0.331、0.143,P<0.05),与LVEF无相关性(P>0.05);Gensini评分与cTnI、LVEF均无相关性(P>0.05)。ROC曲线分析结果显示,miR-499评估冠状动脉病变严重程度的AUC为0.802(95%CI 0.698~0.906),灵敏度为65.2%,特异度为80.4%。miR-499表达水平随着冠状动脉病变支数的增多呈升高趋势,且与冠状动脉病变支数呈正相关(r=0.368,P<0.05)。结论·ACS患者血清中miR-499表达水平与冠状动脉病变严重程度及病变支数相关,对冠状动脉病变严重程度具有一定评估价值。

血清miR-499-5p、miR-423-5p及miR-210-3p水平对冠心病患者并发左心室肥厚的预测价值

目的:探讨血清miR-499-5p、miR-423-5p及miR-210-3p水平对冠心病患者并发左心室肥厚的预测价值。方法:选取198例冠心病患者为研究对象,根据是否并发左心室肥厚分为并发组(n=82)和未并发组(n=116)。比较两组患者一般资料、血清miR-499-5p、miR-423-5p、miR-210-3p、血脂及细胞因子水平,Logistic回归分析影响冠心病患者并发左心室肥厚的因素,受试者工作特征曲线(ROC)分析血清miR-499-5p、miR-423-5p及miR-210-3p水平对冠心病患者并发左心室肥厚的预测价值。结果:两组患者高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)及低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)水平无统计学差异(P>0.05)。并发组患者年龄、血清miR-499-5p、miR-423-5p、miR-210-3p及总胆固醇(TC)水平、中性粒细胞/淋巴细胞(NLR)及血小板/淋巴细胞比值(PLR)高于未并发组(P<0.05)。Logistic回归分析结果显示,患者年龄大、血清miR-499-5p、miR-423-5p、miR-210-3p及TC水平较高、NLR及PLR值较高是导致响患者冠心病患者并发左心室肥厚的相关因素(P<0.05)。ROC曲线分析显示,年龄、miR-499-5p、miR-423-5p、miR-210-3p、TC、NLR及PLR对预测冠心病患者并发左心室肥厚均较高价值,且各指标联合预测的价值更高(P<0.05)。结论:患者年龄大、微小核酸(miR-499-5p、miR-423-5p、miR-210-3p)及TC水平较高、NLR及PLR值较高是导致冠心病患者并发左心室肥厚风险因素,微小核酸、TC、NLR及PLR联合检测对预测冠心病患者并发左心室肥厚有较高价值。

miR-499通过抑制calcineurin抑制缺血/再灌注心肌细胞的凋亡

目的 探讨miR-499对钙调磷酸酶(calcineurin,CaN)的调控作用以及在缺血/再灌注(ischemia/repefusion,I/R)损伤心肌细胞中的作用机制。方法 将大鼠心肌细胞H9c2分成6组:对照组、I/R组、I/R+mimics组(转染miR-499 mimics后构建I/R细胞模型)、I/R+NC组(转染miR-NC后构建I/R细胞模型)、I/R+mimics+CsA组(转染miR-499 mimics后加入CaN抑制剂CsA处理,最后构建I/R细胞模型)和I/R+NC+CsA组(转染miR-NC后加入CsA处理,最后构建I/R细胞模型)。CCK-8检测各组细胞增殖能力,Hochest33258染色观察各组细胞形态的变化,TUNEL检测各组细胞凋亡情况,qRT-PCR检测各组细胞中miR-499、CaN和凋亡相关(Bcl-2、Bax、Caspase-3)基因的表达,Western blot检测各组细胞中CaN和凋亡相关(Bcl-2、Bax、Caspase-3)蛋白的表达。结果 与对照组相比,I/R组细胞增殖能力显著降低(P<0.01),细胞致密浓染,呈亮蓝色,凋亡细胞增多,细胞中miR-499、Bcl-2 mRNA和蛋白表达水平显著降低(P<0.01),CaN、Bax和Caspase-3 mRNA和蛋白水平显著升高(P<0.01);与I/R+NC组相比,I/R+mimics组和I/R+NC+CsA组细胞增殖能力均显著升高(P<0.01),致密浓染的细胞核均有所减少,凋亡细胞减少,细胞中miR-499、Bcl-2 mRNA和蛋白表达水平显著升高(P<0.05),CaN、Bax和Caspase-3 mRNA和蛋白水平显著降低(P<0.05);与I/R+NC+CsA组相比,I/R+mimics+CsA组上述作用更加显著。结论 miR-499能够抑制CaN的表达,抑制I/R损伤心肌细胞的凋亡,减轻心肌细胞损伤。

miR-499通过Drp1介导线粒体自噬保护缺氧/复氧心肌细胞

目的探究miR-499对心肌缺血/再灌注损伤的保护作用,并从线粒体自噬方面探究其可能机制。方法缺血/再灌注(I/R)诱导心肌细胞H9c2(2-1),建立缺氧/复氧(H/R)心肌细胞模型,使用miR-499 mimics和(或)P110处理细胞。将细胞分为BC组、I/R组、I/R+mi组、I/R+NC组、I/R+mi+P110组、I/R+NC+P110组。使用CCK8法检测细胞增殖,流式细胞术检测ROS、线粒体膜电位和细胞凋亡,试剂盒检测MDA、SOD、ATP含量,qRT-PCR和Western blot检测线粒体融合、分裂、自噬相关基因Fis1、Mfn1、Parkin、LC3-Ⅱ、p62和Drp1的mRNA和蛋白表达水平,透射电镜观察线粒体自噬。结果miR-499 mimics和/或P110可使I/R诱导的心肌细胞增殖抑制率和凋亡率下降;线粒体膜电位下降、线粒体自噬减少、ATP含量上升;Fis1、Parkin、LC3-Ⅱ和Drp1的基因和蛋白表达水平下降,Mfn1和p62的基因和蛋白表达水平上升;细胞内ROS和MDA含量减少,SOD含量增加。结论miR-499可通过降低Drp1介导的线粒体自噬减少氧化应激的发生,从而保护I/R诱导的心肌细胞。

EGFR/ALK野生型晚期NSCLC患者血清miR-499 miR-144-3p变化及对预后的预测价值

目的:分析表皮生长因子受体(EGFR)/间变性淋巴瘤激酶(ALK)野生型晚期非小细胞肺癌(NSCLC)患者血清微小RNA(miR)-499、miR-144-3p变化,并评估其对预后的预测价值。方法:收集2018年1月至2020年我院收治的107例EGFR/ALK野生型晚期NSCLC患者临床资料(NSCLC组),另取同期健康体检者107例作为对照组,采用实时荧光RCR技术检测血清miR-499、miR-144-3p表达,比较其在两组中的差异,并评估不同临床病理特征晚期NSCLC患者血清miR-499、miR-144-3p表达的变化;以出院时为随访起点,2023年1月为截止时间,死亡为终点事件,以大于等于平均值作为高表达的标准,分别比较miR-499、miR-144-3p高表达与低表达的晚期NSCLC患者预后生存率。结果:NSCLC组血清miR-499[(0.74±0.18)vs(1.05±0.20)]、miR-144-3p相对表达量[(0.82±0.19)vs(1.22±0.21)]均低于对照组(P<0.05)。晚期NSCLC患者中,Ⅳ期患者血清miR-499[(0.64±0.17)vs(0.86±0.21)]、miR-144-3p相对表达量[(0.71±0.16)vs(0.95±0.22)]低于ⅢB及ⅢC期者(P<0.05),低分化者则低于中高分化者[(0.63±0.16)vs(0.85±0.21),(0.70±0.15)vs(0.94±0.22),P<0.05]。晚期NSCLC患者随访时间为4~56个月,中位随访时间34个月,血清miR-499高表达者生存率明显高于低表达者(P<0.05),血清miR-144-3p高表达者生存率明显高于低表达者(P<0.05)。结论:miR-499、miR-144-3p在EGFR/ALK野生型晚期NSCLC患者血清中呈低表达,Ⅳ期及低分化者表达更低,且表达水平对预后生存率有一定预测价值。

急性心肌梗死患者血清miR-133a、miR-499-5p表达与PCI术后冠状动脉无复流的关系

目的探讨急性心肌梗死(AMI)患者血清微小核糖核酸(miR)-133a、miR-499-5p表达及其与AMI患者经皮冠状动脉介入(PCI)术后冠状动脉无复流的关系。方法选取2019年2月至2021年10月该院收治的290例接受PCI治疗的AMI患者作为研究对象。依据PCI术后3个月患者冠状动脉血流情况分为无复流组[心肌梗死溶栓治疗(TIMI)分级1~2级]、复流正常组(TIMI 3级)。分析术前血清miR-133a、miR-499-5p表达与AMI患者PCI术后无复流的关系。结果随访3个月后,290例AMI患者PCI术后TIMI分级1~2级66例,3级224例;冠状动脉无复流发生率为22.76%(66/290)。无复流组发病至PCI时间长于复流正常组,术前白细胞计数(WBC)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)、心肌肌钙蛋白I(cTnI)、miR-133a、miR-499-5p表达水平高于复流正常组,差异均有统计学意义(P<0.05).Logistic回归分析结果显示,发病至PCI时间长,以及术前WBC、CK-MB、cTnI、miR-133a、miR-499-5p高是AMI患者PCI术后血流TIMI分级低的危险因素(OR>1,P<0.05);受试者工作特征(ROC)曲线分析结果显示,术前血清miR-133a、miR-499-5p及二者联合预测AMI患者PCI术后冠状动脉无复流的曲线下面积(AUC)为0.727、0.697、0.773,具有一定的预测价值;决策曲线分析结果显示,在高风险阈值0.00~1.00范围内血清miR-133a、miR-499-5p联合预测AMI患者PCI术后冠状动脉无复流的净收益率>0,有临床意义。结论AMI患者PCI术前血清miR-133a、miR-499-5p水平与术后冠状动脉无复流有关。

miR-499a-5p靶向调控CDKN1A基因在心肌细胞肥大中的作用机制研究

目的:探讨miR-499a-5p靶向细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂1A(CDKN1A)抑制血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的心肌细胞肥大的作用机制。方法:体外培养大鼠心肌细胞H9c2,并将H9c2细胞随机分为正常对照(Con)组、细胞肥大模型(AngⅡ)组、转染对照(AngⅡ+miR-NC)组和转染(AngⅡ+miR-499a-5p)组。采用Image J软件测量单细胞表面积,实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)分析各组细胞中miR-499a-5p的表达水平,细胞计数试剂盒(CCK-8)检测细胞活性,流式细胞术检测细胞凋亡率,蛋白免疫印迹法(Western Blot)检测CDKN1A、cleaved Caspase-3以及心肌肥大标志蛋白心钠肽(ANP)、脑钠肽(BNP)和β-肌球蛋白重链(β-MHC)的表达水平,双荧光素酶报告基因实验验证miR-499a-5p和CDKN1A的靶向作用关系。结果:与Con组比较,AngⅡ组H9c2细胞表面积、凋亡率、CDKN1A、Cleaved Caspase-3、ANP、BNP和β-MHC蛋白表达水平明显升高(P<0.05),而细胞活力和miR-499a-5p蛋白表达水平明显降低(P<0.05)。双荧光素酶报告基因实验证实,CDKN1A是miR-499a-5p的靶基因。与AngⅡ组和AngⅡ+miR-NC组比较,AngⅡ+miR-499a-5p组H9c2细胞的表面积、凋亡率、CDKN1A、Cleaved Caspase-3、ANP、BNP和β-MHC的蛋白表达水平明显降低(P<0.05),而细胞活力和miR-499a-5p的表达水平明显升高(P<0.05)。结论:AngⅡ诱导的H9c2细胞中miR-499a-5p的表达明显降低,过表达miR-499a-5p能够减轻AngⅡ诱导的心肌细胞肥大,其作用机制可能与其靶向调控CDKN1A基因的表达有关。

miR-499a联合PTX3检测在老年急性心肌梗死中的临床价值

目的 研究miR-499a联合五聚蛋白(PTX)3检测在老年急性心肌梗死(AMI)中病情及预后评估中的临床价值。方法 选择2020年1月至2022年1月诊治的72例老年AMI患者(AMI组)和50例无症状的冠状动脉粥样硬化患者(CON组)为研究对象,比较两组miR-499a、PTX3、心功能、心肌酶谱及Gensini评分的差异。Pearson相关性分析miR-499a、PTX3与心功能、心肌酶谱及Gensini评分的相关性。采用受试者工作特征(ROC)分析miR-499a联合PTX3预测老年AMI患者1个月预后不良的效能。多因素Logistic回归分析老年AMI患者1个月死亡的危险因素。结果 AMI组miR-499a、PTX3、LVEDD、Tei指数、CK-MB、hs-cTnI、NT-proBNP及Gensini评分明显高于CON组,LVEF明显低于CON组(均P<0.05)。AMI组miR-499a、PTX与LVEDD、Tei指数、CK-MB、hs-cTnI、NT-proBNP及Gensini评分均呈正相关(均P<0.05),与LVEF呈负相关(P<0.05)。miR-499a联合PTX3预测老年AMI患者1个月预后不良的敏感度、特异度、AUC均明显高于miR-499a、PTX3、LVEDD、LVEF、Tei指数、CK-MB、hs-cTnI、NT-proBNP及Gensini评分。miR-499a≥3.3、PTX3≥11.8μg/ml、LVEDD≥69.3 mm、LVEF<41.8%、Tei指数≥0.7、CK-MB≥94.5 ng/ml、hs-cTnI≥987.1 ng/L、NT-proBNP≥638.4 pg/ml、Gensini评分≥51.8分为老年AMI患者1个月死亡的独立危险因素(P<0.05)。结论 老年AMI患者miR-499a及PTX3显著升高,与心功能、心肌损伤及预后相关,可作为老年AMI病情及预后评估的标志物,miR-499a联合PTX3检测可显著提高预测老年AMI预后不良及死亡的敏感度及特异度。

lncRNA KCNQ1OT1通过miR-499a-5p/TXNIP调控缺氧心肌细胞活性和凋亡的机制

目的探讨长链非编RNA(lncRNA)、KCNQ1重叠转录物(KCNQ1OT)1对缺氧心肌细胞活性和凋亡的影响及分子机制。方法将心肌细胞随机分为对照(NC)组、缺氧预处理(HPC)组、si-NC+HPC组、si-lncRNA KCNQ1OT1+HPC组、miR-NC+HPC组、miR-499a-5p+HPC组、si-硫氧还蛋白相互作用蛋白(TXNIP)+HPC组、pcDNA-NC+si-lncRNA KCNQ1OT1+HPC组、pcDNA-TXNIP+si-lncRNA KCNQ1OT1+HPC组;用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测lncRNA KCNQ1OT1、miR-499a-5p和TXNIP mRNA的表达水平;Western印迹法检测蛋白表达;四甲基偶氮唑盐比色法(MTT)检测细胞活性;流式细胞术检测细胞凋亡;丙二醛(MDA)和超氧化物歧化酶(SOD)试剂盒分别检测MDA含量和细胞SOD活性;双荧光素酶报告实验检测lncRNA KCNQ1OT1、miR-499a-5p、TXNIP之间的靶向关系。结果心肌梗死患者血清及缺氧诱导的心肌细胞中lncRNA KCNQ1OT1表达水平显著升高(P<0.05)。下调lncRNA KCNQ1OT1、下调TXNIP或上调miR-499a-5p后,心肌细胞H9C2中CyclinD1表达、细胞活性、SOD活性显著升高,Cleaved-caspase-3表达、细胞凋亡率、MDA含量显著降低(P<0.05)。lncRNA KCNQ1OT1通过靶向miR-499a-5p调控TXNIP表达。过表达TXNIP可以逆转lncRNA KCNQ1OT1下调对缺氧诱导的心肌细胞H9C2的影响。结论下调lncRNA KCNQ1OT1可能通过miR-499a-5p/TXNIP轴抑制缺氧诱导心肌细胞凋亡和氧化应激,促进细胞存活。

miR-499对缺氧/复氧诱导的心肌细胞凋亡的影响

目的:探讨miR-499对缺氧/复氧诱导的原代心肌细胞凋亡的影响,探讨其与磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt)通路的关系。方法:通过对原代培养新生大鼠心肌细胞行缺氧3 h/复氧4 h,模拟大鼠心肌缺血再灌注损伤;将细胞分为4组:正常对照组、缺氧/复氧组(A/R组)、缺氧/复氧+miR-499激动剂agomir预处理组(Agomir组)、缺氧/复氧+miR-499激动剂agomir+PI3K特异性阻断剂LY294002组(Agomir+LY294002组)。采用MTT方法检测各组心肌细胞活力,分别采用荧光定量PCR方法和Western blot法检测各组心肌细胞中miR-499、PI3K mRNA及Caspase-3、p-PI3K和p-Akt蛋白表达水平的变化。结果:与正常对照组相比,A/R组心肌细胞活力下降,miR-499及PI3K mRNA表达量减少,p-PI3K及p-Akt蛋白表达量减少,Caspase-3蛋白表达量增加(P<0.05);但经Agomir处理后,心肌细胞活力增加,miR-499及PI3K mRNA表达量增加;p-PI3K及p-Akt蛋白表达量增加;与A/R组相比,Caspase-3蛋白表达量减少(P<0.05);而agomir的作用可被LY294002即PI3K阻断剂抑制。结论:miR-499可以减少缺氧/复氧所诱导的心肌细胞的凋亡,这可能与其活化PI3K/Akt信号通路有关。

心肌缺血再灌注损伤对mir-499水平表达及免疫学的影响

目的:探讨心肌缺血再灌注损伤对mir-499水平表达及免疫学的影响。方法:选择2016年12月～2018年2月在我院进行实验的SD大鼠60只,随机选取20只设为空白对照组。剩余40只SD大鼠建立心肌缺血再灌注损伤模型,建模成功后随机分为缺血后处理组(n=20)和心肌缺血再灌注损伤组(n=20)。心肌缺血再灌注损伤组建模后不采取任何措施处理干预;缺血后处理组建模成功后给予有效措施处理,连续干预15 d。采用经胸超声心动图对三组大鼠心脏功能进行评估;采用RT-PCR方法检测三组大鼠mir-499水平;采用流式细胞仪测定三组CD3^+、CD4^+、CD8^+和CD4^+/CD8^+水平;采用SPSS Pearson相关性分析软件对心肌缺血再灌注损伤大鼠mir-499水平与T淋巴细胞水平进行相关性分析。结果:缺血后处理组灌注后LVESV水平低于心肌缺血再灌注组(P<0. 05);缺血后处理组灌注后LVEF及LVFS水平均高于心肌缺血再灌注组(P<0. 05)。缺血后处理组mir-499水平高于心肌缺血再灌注损伤组和空白对照组(P<0. 05);心肌缺血再灌注损伤组mir-499水平,低于空白对照组(P<0. 05)。缺血后处理组CD3^+、CD4^+、CD4^+/CD8^+水平均低于心肌缺血再灌注损伤组(P<0. 05);缺血后处理组CD8^+水平,均低于心肌缺血再灌注损伤组(P<0. 05)。SPSS Pearson相关性分析结果表明:心肌缺血再灌注损伤mir-499水平与CD3^+、CD4^+、CD4^+/CD8^+水平呈负相关性(P<0. 05),与CD8^+水平呈正相关性(P<0. 05)。结论:心肌缺血再灌注损伤会引起mir-499水平降低,经缺血后处理mir-499水平得到提高,有助于改善大鼠心脏功能,且与免疫水平具有一定的相关性。

老年慢性心力衰竭患者血浆miR-423-5p、miR-499-5p、miR-210-3p水平与其营养状况和睡眠质量的相关性

目的探究老年慢性心力衰竭(CHF)患者血浆miR-423-5p、miR-499-5p及miR-210-3p水平与其营养状况和睡眠质量的相关性。方法采用微型营养评价量表(MNA)与匹兹堡睡眠质量指数量表(PSQI)评估106例CHF患者营养状况及睡眠质量;将患者按不同MNA、PSQI和心功能分组,比较各组血浆miR-423-5p、miR-499-5p及miR-210-3p水平,并分析其相关性。结果随着心功能分级的增加,miR-423-5p、miR-499-5p及miR-210-3p水平逐渐增加,MNA评分逐渐减少,PSQI评分逐渐增加。miR-423-5p、miR-499-5p及miR-210-3p水平互呈正相关;miR-423-5p、miR-499-5p及miR-210-3p水平与营养状况呈负相关;miR-423-5p、miR-499-5p与睡眠质量呈正相关(P<0.05)。结论血浆miR-423-5p、miR-499-5p及miR-210-3p水平与CHF患者心力衰竭程度、营养状况和睡眠质量密切相关。

miR-499、miR-146a在急性冠脉综合征患者中的表达水平以及与冠脉病变程度的相关性

目的探讨急性冠脉综合征(ACS)患者血小板miR-499、miR-146a表达水平变化以及与冠脉病变程度的相关性。方法选取2016年5月~2017年12月于四川省科学城医院心内科进行冠状动脉造影术(CAG)并住院接受治疗的ACS患者139例。另外选择CAG结果正常的42例受试者作为对照组。比较ACS患者与对照组受试者之间以及ACS不同亚组患者之间血小板miR-499、miR-146a相对表达量的差异,并探讨血小板miR-499、miR-146a表达水平与Gensini评分的相关性。结果 ACS患者血小板miR-499、miR-146a相对表达量和Gensini评分明显高于对照组患者(P<0.05),急性心肌梗死(AMI)患者血小板miR-499、miR-146a相对表达量和Gensini评分明显高于不稳定型心绞痛(UA)患者(P<0.05)。三支病变的ACS患者血小板miR-499、miR-146a相对表达量和Gensini评分明显高于单支病变和双支病变患者(P<0.05)。重度冠脉病变的ACS患者血小板miR-499、miR-146a相对表达量和Gensin评分明显高于中度和轻度病变的ACS患者(P<0.05)。经Pearson相关性分析,ACS患者Gensini评分与血小板miR-499、miR-146a表达呈正相关性(r分别为0.785,0.806,P均<0.05)。结论血小板miR-499、miR-146a表达水平与冠状动脉狭窄病变程度密切相关,可作为诊断或预后的潜在靶点。

miR-486、miR-499在肺癌患者血浆中的表达及临床价值

目的：探讨miR-486和miR-499在肺癌患者血浆中的表达及临床意义，分析其在非小细胞肺癌（NSCLC）和小细胞肺癌（SCLC）中表达的差异。方法收集35例肺癌患者（其中NSCLC组21例，SCLC组14例）及30例健康者（对照组）血样标本，运用qPCR的方法测定各组血浆miR-486、miR-499的表达量，分析NSCLC和SCLC患者血浆中miR-486和miR-499的表达量与各临床特征的关系。对所有入组者血浆miRNA的相对表达量进行ROC曲线分析，计算曲线下面积（AUC）、最佳临界值及其敏感度和特异度。结果 NSCLC和SCLC组中血浆miR-486、miR-499的相对表达量均低于对照组（P＜0.05）。NSCLC组血浆miR-486在不同临床特征患者间表达差异均无统计学意义；而TNM分期越晚、分化程度越低，miR-499表达越低（P＜0.05）。SCLC组分期越晚，miR-486表达越低；而miR-499在不同临床特征患者间表达差异均无统计学意义。miR-486诊断肺癌的AUC为0.83（95%CI为0.73-0.93），敏感度和特异度分别为90.0%和68.6%，最佳诊断界值为1.02；miR-499诊断肺癌的AUC为0.75（95%CI为0.62-0.88），敏感度和特异度分别为60.0%和94.3%，对肺癌的最佳诊断界值为0.32。结论血浆miR-486、miR-499在肺癌患者中表达下调，可能预示预后不良，有望作为肺癌潜在筛查及预后的指标。

颈动脉粥样硬化斑块中miR-499及HMGB1表达的变化及生物学意义

目的研究颈动脉粥样硬化斑块中微小RNA-499(miR-499)及高迁移率族蛋白1(HMGB1)表达的变化及生物学意义。方法选择2018年1月—2020年12月期间在河南省三门峡市中心医院诊断为颈动脉粥样硬化患者作为颈动脉粥样硬化组、体检健康者作为对照组,检测外周血miR-499表达水平及血清HMGB1含量。将载脂蛋白E(ApoE)基因敲除小鼠进行分组干预,通过高胆固醇饲料喂养建立颈动脉粥样硬化斑块模型,尾静脉注射miR-NC、miR-499、NC慢病毒(Lenti-NC)、HMGB1慢病毒(Lenti-HMGB1),检测颈动脉粥样硬化斑块的病理改变及miR-499、HMGB1的表达水平;培养人脐静脉内皮细胞(HUVEC),采用双荧光素酶报告基因验证miR-499靶向HMGB1。结果颈动脉粥样硬化组患者外周血miR-499表达水平低于对照组,血清HMGB1含量高于对照组且miR-499表达水平与血清HMGB1含量呈负相关(P<0.05)。模型组小鼠颈动脉粥样硬化斑块中miR-499表达水平低于对照组,HMGB1表达水平高于对照组;miR-499+模型组小鼠颈动脉粥样硬化斑块病理改变较miR-NC+模型组改善,miR-499表达水平高于miR-NC+模型组,HMGB1表达水平低于miR-NC+模型组(P<0.05);Lenti-HMGB1+miR-499+模型组小鼠颈动脉粥样硬化斑块病理改变较Lenti-NC+miR-499+模型组加重,HMGB1表达水平高于Lenti-NC+miR-499+模型组。miR-499组HUVEC细胞中野生型HMGB1报告基因的荧光值明显低于miR-NC组(P<0.05)。结论miR-499靶向HMGB1参与颈动脉粥样硬化斑块的形成。

miR-499a-5p通过靶向TLR2抑制缺氧/复氧诱导的心肌细胞氧化应激和凋亡

目的:探究miR-499a-5p与TLR2的靶向关系,及其对缺氧/复氧(A/R)诱导的心肌细胞氧化应激和凋亡的影响。方法:培养H9c2细胞并分为模型组和对照组,对照组在常氧条件下培养,模型组为缺氧/复氧模型,并进一步分为miR-NC组、miR-499a-5p组、anti-miR-NC组、anti-miR-499a-5p组、miR-499a-5p+pGL3-Basic组和miR-499a-5p+pGL3-Basic+TLR2组;流式细胞仪检测各组细胞的凋亡率;qRT-PCR检测miR-499a-5p和TLR2 mRNA的表达水平;免疫印迹(Western blot)检测TLR2、B淋巴细胞瘤因子2XL(Bcl-xL)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(Caspase-3)蛋白表达;酶联免疫吸附法(ELISA)检测活性氧(ROS)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)含量;双荧光素报告基因检测验证miR-499a-5p与TLR2的靶向关系。结果:与对照组相比,模型组中miR-499a-5p表达降低,TLR2表达升高(P<0.05);过表达miR-499a-5p可降低A/R模型心肌细胞凋亡和氧化应激作用,并靶向抑制TLR2;过表达TLR2逆转了miR-499a-5p对A/R模型心肌细胞抗凋亡及降低氧化应激的作用。结论:miR-499a-5p可能通过靶向抑制TLR2的激活,降低心肌细胞凋亡率及氧化应激反应,发挥保护心肌细胞的作用。

血清miR-423-5p、miR-499-5p和miR-210-3p在慢性心力衰竭大鼠中的表达及意义

目的探讨血清微小RNA-423-5p(miR-423-5p)、微小RNA-499-5p(miR-499-5p)、微小RNA-210-3p(miR-210-3p)在慢性心力衰竭(CHF)大鼠中的表达及意义。方法SD大鼠随机分为对照(NC)组(n=15)和CHF组(n=15),采用腹腔注射阿霉素建立CHF模型。建模6周后检测两组心功能指标[左心室舒张末期容积(LVEDV)、左心室收缩末期容积(LVESV)、左室射血分数(LVEF)]、血清miR-423-5p、miR-499-5p、miR-210-3p表达水平及氨基末端脑利钠肽前体(NTpro-BNP)、心肌肌钙蛋白I(cTnI)水平。采用Pearson法分析血清miR-423-5p、miR-499-5p、miR-210-3p与心功能指标、NTpro-BNP、cTnI相关性。结果与NC组比较,CHF组心功能指标LVEDV和LVESV升高(P<0.05),miR-423-5p、miR-499-5p和miR-210-3p表达水平升高(P<0.05),NTpro-BNP和cTnI水平升高(P<0.05),LVEF降低(P<0.05)。CHF大鼠血清miR-423-5p、miR-499-5p、miR-210-3p与LVEDV、LVESV、LVEF无明显相关性(P>0.05),而CHF大鼠血清miR-423-5p与NTpro-BNP、cTnI呈正相关(r=0.668,P=0.007;r=0.622,P=0.004),CHF大鼠血清miR-499-5p与NTpro-BNP、cTnI呈正相关(r=0.532,P=0.013;r=0.663,P=0.041),CHF大鼠血清miR-210-3p与NTpro-BNP、cTnI呈正相关(r=0.598,P=0.019;r=0.533,P=0.041)。结论CHF大鼠血清miR-423-5p、miR-499-5p、miR-210-3p表达水平升高,且与NTpro-BNP和cTnI密切相关。

miR-499、miR-16、肌红蛋白与常规心肌损伤标志物的关系及在急性心肌梗死早期诊断中的价值

目的探讨微小RNA-499(miR-499)、微小RNA-16(miR-16)、肌红蛋白(MYO)与常规心肌损伤标志物的关系及在急性心肌梗死(AMI)早期诊断中的价值。方法选取2017年2月至2019年12月本院收治的134例AMI患者(AMI组)及体检中心134例健康人群(对照组)。比较两组常规心肌损伤标志物[肌钙蛋白I(cTnI)肌酸激酶同工酶(CK-MB)]表达、miR-499 mRNA、miR-169 mRNA、MYO表达,采用Pearson分析miR-499、miR-16、MYO与cTnI、CK-MB相关性,采用接收者操作特征(ROC)曲线及ROC下面积(AUC)分析各指标在AMI早期诊断中的价值。结果发病2 h时,AMI组CK-MB组高于cTnI组,差异无统计学意义(P>0.05);发病6、12 h,AMI组cTnI、CK-MB均高于对照组(P<0.05);发病2、6、12 h时,AMI组miR-499 m RNA、miR-16 mRNA、MYO高于对照组(P<0.05);miR-499 m RNA与miR-16 mRNA、MYO呈正相关;miR-16 m RNA与MYO呈正相关(P<0.05);cTnI与miR-499、miR-16、MYO呈正相关(P<0.05);CK-MB与miR-499、miR-16、MYO呈正相关(P<0.05);诊断早期AMI的AUC:miR-499为0.751,截断值>1.37,miR-16的AUC为0.800,截断值>1.87,MYO的AUC为0.731,截断值>60.14μg/L(P<0.05)。结论 miR-499、miR-16、MYO在AMI发病早期即升高,各指标间呈正相关,并与cTnI、CK-MB呈正相关,可作为AMI早期诊断的标志物。

miR-499A>G基因多态性与汉族人群大肠癌发病及预后关联分析

目的了解miR-499A>G与广西壮族自治区汉族人群大肠癌发病及预后关系。方法TaqMan探针检测miR-499A>G基因型分布,Logistic回归模型及Cox风险回归模型分析其与大肠癌发病及预后关联。结果共收集病例对照394对,多因素Logistic回归分析显示,相加模型下miR-499A>G并未增加大肠癌发病风险(OR=1.22,95%CI:0.95~1.57)。携带AA、AG、GG基因型大肠癌患者中位生存时间分别为56、43和18个月,Log Rank检验其分布差异有统计学意义(F=11.24,P=0.004);COX风险回归模型分析miR-499A>G(HR=1.26,95%CI:1.02~1.57)与不良预后显著相关。结论 miR-499A>G与汉族人群大肠癌发病无关联但影响其预后。