LncRNA NEAT1靶向miR-520b调控口腔鳞癌细胞增殖、凋亡及自噬的分子机制

目的研究长链非编码RNA(LncRNA)核富集的转录物(NEAT)1对人口腔鳞癌细胞Tca8113增殖、凋亡和自噬的影响,并探讨其机制。方法运用qRT-PCR检测人口腔鳞癌细胞Tca8113、人正常口腔上皮细胞HOEC中NEAT1、短链非编码RNA(miR)-520b的表达;将si-NC组(转染si-NC)、si-NEAT1组(转染si-NEAT1)、miR-520b组(转染miR-520b mimics)、miR-NC组(转染miR-NC)、si-NEAT1+anti-miR-NC组(si-NEAT1和anti-miR-NC共转染)、si-NEAT1+anti-miR-520b组(si-NEAT1和anti-miR-520b共转染),用脂质体法转染至Tca8113细胞;MTT法检测各组细胞的增殖;流式细胞术检测各组细胞的凋亡;Western印迹检测各组细胞中LC3Ⅱ/Ⅰ的蛋白表达;双荧光素酶报告基因检测实验检测各组细胞的荧光活性。结果与HOEC相比,Tca8113中NEAT1表达显著升高,miR-520b表达显著降低(P<0.05);抑制NEAT1、过表达miR-520b均可抑制Tca8113细胞增殖,促进凋亡和自噬。抑制miR-520b可逆转抑制NEAT1对Tca8113细胞的增殖抑制和凋亡、自噬促进作用。结论抑制NEAT1可抑制口腔鳞癌细胞增殖、促进凋亡和自噬,其机制可能与靶向miR-520b有关,将可为口腔鳞癌的靶向治疗提供依据。

动脉粥样硬化患者血清miR-520b表达水平及相关机制

目的探讨动脉粥样硬化患者血清miR-520b表达水平及相关作用机制。方法选取该院收治的动脉粥样硬化患者42例,收集同期42名健康老年人为对照。qRT-PCR检测外周血清miR-520b表达水平。经targetscan和miRanda数据库预测importin 8(IPO8)为miR-520b的可能靶基因,通过双荧光素酶报告基因检测证实;体外细胞实验采用Western印迹检测miR-520b对人血管内皮细胞IPO8表达的影响;CCK-8法和Tranwells实验检测miR-520b对人血管平滑肌细胞增殖、迁移能力的影响。结果动脉粥样硬化患者血清miR-520b相对表达量低于健康老年人(P<0.05)。双荧光素酶报告基因检测证实IPO8是miR-520b的直接作用靶基因;转染miR-520b类似物人血管内皮细胞IPO8蛋白相对表达量低于类似物阴性对照组(P<0.05);转染特异性miR-520b抑制物后,血管内皮细胞中IPO8蛋白相对表达量高于抑制物对照组(P<0.05)。提升miR-520b表达后人血管平滑肌细胞增殖和迁徙能力均低于相应阴性对照(P<0.05);抑制miR-520b表达后人血管平滑肌细胞增殖和迁徙能力均高于相应阴性对照,差异有统计学意义(P<0.05)。结论动脉粥样硬化患者血清miR-520b表达水平明显降低;miR-520b可通过阻断NF-κB信号通路及抑制血管平滑肌细胞增殖、迁徙来发挥抗动脉粥样硬化的作用。

miR-124和miR-520b下调Eps8表达并抑制HeLa细胞增殖

Eps8是一个多功能的信号分子,参与肌动蛋白重排、受体内吞和肿瘤的发生发展.为了寻找靶向Eps8的microRNAs(miRNAs)并研究其在宫颈癌中的调控作用,本文采用软件预测获得4个可能调控Eps8表达的miRNAs.利用双荧光素酶报告系统和Western印迹研究发现,miR-124和miR-520b结合到人EPS8 mRNA的3'非翻译区(untranslated region,UTR)并有效抑制Eps8蛋白的表达.进一步细胞存活检测、MTT法和克隆形成实验分析显示,miR-124和miR-520b过表达显著抑制HeLa细胞的生长和增殖.而且,miRNA调节的Eps8下调能提高HeLa细胞对化疗药物顺铂的敏感性.同时证明,miR-124和miR-520b激活肿瘤抑制基因p53与下游基因p21报告基因转录活性,也相应地上调了p53与p21的蛋白表达.这些结果提示,miR-124和miR-520b下调癌基因EPS8表达,从而抑制HeLa细胞增殖,负调控宫颈癌细胞生长.

miR-520b靶向DAD1调控肾癌细胞增殖、迁移和侵袭的作用机制

目的:探讨miR-520b和抗细胞凋亡因子(DAD1)对肾癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响及分子机制。方法:qRT-PCR和Western blot实验检测A498人肾癌细胞中miR-520b和DAD1表达。将miR-520b mimics或DAD1 siRNA转染至A498细胞,MTT和Transwell实验检测细胞活力、迁移和侵袭。Targetscan在线预测、双荧光素酶报告基因和Western blot实验验证miR-520b和DAD1的靶向关系。将miR-520b mimics和pcDNA-DAD1共转染至A498细胞,检测细胞活力、迁移和侵袭。结果:在A498细胞中,miR-520b表达下调而DAD1表达上调。在A498细胞中过表达miR-520b或敲减DAD1,细胞活力下降,迁移和侵袭细胞数减少。Targetscan在线预测、双荧光素酶报告基因和Western blot实验结果表明,miR-520b可负调控DAD1蛋白表达。过表达DAD1可逆转miR-520b对A498细胞增殖、迁移和侵袭的抑制作用。结论:miR-520b能够通过靶向调节DAD1表达抑制A498细胞增殖、迁移和侵袭。

MiR-520b调控Wnt/β-catenin信号通路促进舌鳞状细胞癌侵袭转移

目的研究miR-520b在舌鳞状细胞癌(TSCC)中的表达,探讨其在TSCC侵袭转移过程中的作用及分子机制。方法实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测TSCC组织及细胞系中miR-520b的表达;沉默或过表达TSCC细胞株SCC-9和UM1中miR-520b的表达后,实时荧光定量PCR检测细胞上皮-间质转化(EMT)相关基因表达;Transwell小室验证细胞侵袭转移能力改变;TOP/FO双荧光素酶报告基因系统、实时荧光定量PCR、Western blot等检测miR-520b表达对Wnt/β-catenin信号通路的影响;生物信息学、Western blot及双荧光素酶实验验证miR-520b调控Wnt/β-catenin信号通路的潜在靶基因Dickkopf 1(DKK1)。使用SPSS 21.0软件进行统计学分析,样本均数间比较采用Student′st检验。结果与正常相邻组织(2.59±1.43)相比,miR-520b相对表达量在TSCC组织中显著上调(5.28±1.63),差异有统计学意义(t=16.04,P=0.0005),并且与患者中更具侵袭性的TSCC表型正相关(5.81±0.74 vs.3.08±0.89,t=12.11,P=0.0011);过表达miR-520b促进TSCC细胞侵袭转移(SCC-9:110.8±17.8 vs.74.7±9.8,t SCC-9=32.58,PSCC-9=0.0011;UM1:178.8±39.7 vs.90.3±22.5,t UM1=99.67,PUM1=0.0002),低表达则相反(SCC-9:74.7±9.8 vs.30.9±7.8,t SCC-9=-31.47,PSCC-9=0.0024;UM1:90.3±22.5 vs.35.7±10.6,t UM1=-37.89,PUM1=0.0019);此外,过表达miR-520b可靶向抑制DKK1,进而激活Wnt/β-catenin信号通路,促进TSCC细胞上皮-间质转化。结论MiR-520b在TSCC中高表达,可能通过抑制DKK1增强Wnt/β-catenin信号通路,促进TSCC侵袭转移。