BMAL1和miR-552在胃癌中的表达及其临床价值

目的探讨胃癌中芳香烃受体核转运体样蛋白1(BMAL1)和miR-552的表达及其临床价值。方法选择2018年1月至2019年1月在绍兴文理学院附属医院诊治的92例胃癌患者设为胃癌组,40例胃良性疾病患者设为对照组。收集胃癌组的胃癌组织和癌旁组织、对照组的胃病灶组织。另选取正常胃黏膜上皮细胞RGM-1和胃癌细胞(AGS、Hs746T、MGC-803及SGC-7901)。采用实时荧光定量PCR法检测各种组织和细胞中BMAL1和miR-552表达水平。分析胃癌组织中BMAL1和miR-552表达与患者临床病理特征的关系。采用ROC曲线分析胃癌组织中BMAL1和miR-552表达对患者死亡的预测效能。采用Kaplan-Meier生存曲线分析BMAL1和miR-552表达与胃癌患者生存期的关系。采用多因素logistic回归分析探讨胃癌患者预后的危险因素。结果胃癌组织中BMAL1和miR-552表达水平均显著高于癌旁组织和对照组胃病灶组织(P均<0.05),各种胃癌细胞中BMAL1和miR-552表达水平均显著高于正常胃黏膜上皮细胞(P均<0.05)。低分化、肿瘤最大径≥5 cm、T3~T4、有淋巴结转移及TNM分期Ⅲ~Ⅳ期患者的BMAL1和miR-552表达水平分别显著高于中~高分化、肿瘤最大径<5 cm、T1~T2、无淋巴结转移及TNM分期Ⅰ~Ⅱ期患者。BMAL1预测胃癌患者死亡的截断值为2.0,敏感度为81.2%,特异度为93.6%(P<0.05);miR-552预测胃癌患者死亡的截断值为1.0,敏感度为97.6%,特异度为74.2%(P<0.05)。低分化、肿瘤最大径≥5cm、T3~T4、有淋巴结转移、TNM分期Ⅲ~Ⅳ期、BMAL1表达≥2.0、miR-552表达≥1.0均为胃癌患者预后的危险因素(P均<0.05)。胃癌组织中BMAL1表达≥2.0且miR-552表达≥1.0的患者的中位生存期显著短于BMAL1表达<2.0或miR-552表达<1.0的患者[中位生存期(25.3±5.2)个月比(31.4±6.6)个月,Log-rank=14.677,P<0.05]。结论胃癌组织中BMAL1和miR-552表达水平均显著升高,其与患者的组织学分级、肿瘤最大径、T分期、淋巴结转移、TNM分期及生存期均有相关性。BMAL1表达≥2.0、miR-552表达≥1.0均为胃癌患者预后的危险因素,两者有潜力作为胃癌患者病情及预后评估的标志物。

circCDYL靶向miR-552-5p抑制胃癌AGS细胞的增殖和转移

目的 探讨环状RNA Y染色域样(circCDYL)对微小RNA-552-5p(miR-552-5p)及胃癌AGS细胞增殖和转移的影响。方法 实时荧光定量PCR分析胃癌组织、癌旁正常组织样本中circCDYL和miR-552-5p表达水平。运用CCK-8法、集落形成、划痕愈合实验和Transwell实验分析circCDYL和miR-552-5p表达对AGS细胞增殖、迁移和侵袭的影响。Western blotting分析E-cadherin、N-cadherin蛋白表达。双荧光素酶报告实验分析circCDYL和miR-552-5p靶向关系。结果 与癌旁正常组织比较,胃癌组织中circCDYL表达显著降低(P<0.05),而miR-552-5p表达显著升高(P<0.05)。过表达circCDYL或干扰miR-552-5p后AGS细胞增殖、集落形成数、划痕愈合率、侵袭细胞数均显著降低(P<0.05)。circCDYL直接与miR-552-5p结合,上调miR-552-5p能够逆转过表达circCDYL对AGS细胞增殖、迁移和侵袭的抑制作用(P<0.05)。结论 circCDYL通过靶向miR-552-5p抑制胃癌AGS细胞增殖、迁移和侵袭。

miR-552-3p对非小细胞肺癌细胞增殖、迁移及侵袭的影响及其调控Wnt信号通路的机制

目的探讨miR-552-3p对非小细胞肺癌细胞增殖、迁移及侵袭的影响及其调控Wnt信号通路的机制。方法分别将mi-NC、miR-552-3p转染至NSCLC A549细胞内,根据转染物的不同将其分为NC组和mimic组,设置正常NSCLC A549细胞为对照组。转染6、12、24、48、72 h后,采用CCK-8法检测三组细胞的增殖能力;转染48 h后,采用Transwell小室实验检测三组细胞的迁移、侵袭能力,采用Western blot检测三组细胞Wnt、β-catenin、c-Myc蛋白的相对表达量。结果mimic组转染12、24、48、72 h后NSCLC A549细胞增殖率均低于对照组和NC组,差异具有统计学意义(P<0.05)。mimic组的相对细胞迁移率、细胞侵袭率明显低于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05)。mimic组的Wnt、β-catenin、c-Myc蛋白相对表达量明显低于对照组和NC组,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论miR-552-3p能够抑制NSCLC A549细胞增殖、迁移及侵袭,其可能通过靶向调控Wnt信号通路发挥此作用。

miR-552靶向调控Wnt抑制因子-1促进MG-63骨肉瘤细胞增殖、侵袭、迁移的实验研究

目的 探讨miR-552对Wnt抑制因子-1(WIF1)的靶向调控作用以及对人骨肉瘤MG-63细胞增殖、侵袭和迁移活性的影响。方法 体外培养人骨肉瘤细胞MG-63和人成骨细胞hFOB1.19,采用实时荧光定量PCR(QPCR)检测miR-552的表达水平。分别采用miR-552 inhibitor和shWIF1转染MG-63细胞,实验分为空白对照组、anti-阴性对照(anti-NC)组、anti-552组、miR-552 inhibitor+pcDNA3.1vector共转染阴性对照(anti-552-NC)组、miR-552 inhibitor+pcDNA3.1-shWIF1(共转染)组。采用MTT法、Transwell法检测细胞增殖、侵袭和迁移活性的变化。采用双荧光素酶报告实验验证WIF1与miR-552的靶向关系。采用Western blotting检测各组β-catenin、CyclinD1、APC的表达水平。结果 MG-63细胞中miR-552的表达水平为1.48±0.21,明显高于hFOB1.19细胞的1.00±0.07(P<0.05)。anti-552组miR-552的表达水平为0.51±0.12,低于空白对照组(P<0.05);WIF1表达水平为1.45±0.23,高于空白对照组(P<0.05)。共转染组WIF1表达水平为0.68±0.13,低于空白对照组和anti-552组(P<0.05)。培养24、48、72和96h后,anti-552组MG-63细胞增殖率分别为(83.14±4.25)%、(67.58±3.26)%、(53.41±3.25)%和(48.29±2.86)%,低于anti-NC组(P<0.05)。anti-552组MG-63侵袭、迁移细胞数分别为264±32和489±44,均少于空白对照组和anti-NC组(P<0.05)。双荧光素酶报告实验证实WIF1是miR-552的下游靶基因。anti-552组β-catenin、Cyclin D1、APC蛋白表达量分别为0.84±0.15、0.83±0.16和0.59±0.12,均低于空白对照组和anti-NC组(P<0.05)。而共转染组β-catenin、CyclinD1、APC蛋白表达量分别为2.86±0.45、1.93±0.34和1.40±0.28,明显高于anti-552组(P<0.05)。结论 miR-552在骨肉瘤中表达上调,可通过靶向抑制WIF1的表达,异常激活Wnt/β-catenin信号,进而促使骨肉瘤细胞的增殖、侵袭和迁移。

血清miR-552-5p、HE4及CA125在上皮性卵巢癌中的表达及其临床价值

目的:探讨miR-552-5p、血清人附睾蛋白4(HE4)及糖类抗原125(CA125)在上皮性卵巢癌(EOC)中的表达及其诊断价值。方法:选取127例EOC患者,90例卵巢良性肿瘤者(良性组)和50例正常对照组作为研究对象,采用实时定量PCR法检测miR-552-5p表达水平,化学发光法测定血清HE4及CA125水平。应用受试者工作特征(ROC)曲线分析miR-552-5p、HE4及CA125诊断EOC的价值。Pearson相关分析EOC患者miR-552-5p表达水平与HE4及CA125的相关性。结果:EOC组血清miR-552-5p(4.25±1.70 vs 1.90±0.83,1.61±0.74)、HE4(350.35±60.12 vs 52.93±11.72,46.80±9.25,pmol/L)及CA125(319.50±96.14 vs 27.14±12.15,20.36±8.95,U/m L)水平均明显高于良性组和对照组(P<0.001)。EOC患者血清miR-552-5p、HE4及CA125表达与临床分期、分化程度及淋巴结转移有关(P<0.05)。ROC曲线显示,miR-552-5p、HE4及CA125三项联合诊断EOC的曲线下面积(0.954,95%CI:0.895~0.998)最大,其敏感度为97.8%,特异度为87.6%。相关分析显示,EOC患者血清miR-552-5p表达水平与HE4及CA125均呈正相关(r=0.872,r=0.805,P<0.001)。结论:血清miR-552-5p、HE4及CA125水平在EOC患者中明显升高,三项联合检测对EOC诊断具有较好的价值。

miR-552和miR-592在胃癌组织中的表达及其与临床病理特征的关系

目的探讨miR-552和miR-592在胃癌组织和癌旁正常组织中的表达情况,分析其与临床病理特征的关系及其诊断价值。方法收集60例胃癌患者的胃癌组织及癌旁正常组织。采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测miR-552和miR-592在癌组织及癌旁正常组织中的表达水平,分析其与临床病理特征的关系,并进行ROC分析。结果miR-552、miR-592在胃癌组织中的相对表达量分别为4.73±1.75和5.65±2.11,显著高于癌旁正常组织中两者相对表达量,分别为0.98±0.55和1.22±0.79,差异有统计学意义(P<0.001)。胃癌组织中miR-552、miR-592的表达水平均与TNM分期、浸润深度、分化程度、淋巴结转移有关(P<0.05)。胃癌组织中miR-552相对表达量与miR-592相对表达量呈正相关(r=0.528,P<0.001)。miR-552:AUC=0.949,95%CI:0.909~0.988,miR-592:AUC=0.932,95%CI:0.885~0.979。结论miR-552、miR-592在胃癌组织中表达均显著上调,对胃癌的发生、发展、侵袭起着重要的作用。miR-552、miR-592对胃癌的诊断价值高,可作为潜在的胃癌诊断标志物和治疗靶点。

miR-552-3p通过抑制DACH1促进肝细胞性肝癌细胞增殖、迁移和侵袭

目的:探讨miR-552-3p在肝细胞性肝癌(hepatocellular carcinoma,HCC)中的表达及其促进细胞增殖和迁移、侵袭的机制。方法:qRT-PCR检测HCC细胞系及人正常肝细胞系中miR-552-3p的表达情况;下载TCGA数据库中HCC样本的微阵列数据,分析miR-552-3p在HCC癌组织及癌旁组织中是否存在表达差异;miR-552-3p mimics以及miR-552-3p inhibitor转染HCC细胞,荧光素酶报告基因验证miR-552-3p与DACH1是否存在靶向关系,CCK-8及Transwell实验检测miR-552-3p及其与DACH1相互作用对于HCC细胞增殖、迁移、侵袭的影响。结果:TCGA数据库中HCC样本的分析结果表明,miR-552-3p在HCC中高表达,同时qRT-PCR显示miR-552-3p在HCC细胞系中的表达水平显著高于人肝细胞系L02;miR-552-3p的高表达促进HCC细胞的增殖、迁移和侵袭,而抑制miR-552-3p表达后则相反;荧光素酶报告实验证实miR-552-3p靶向作用于DACH1的3′-UTR,上调miR-552-3p可抑制DACH1的表达,而下调miR-552-3p则增加DACH1表达;DACH1的过表达可抑制HCC细胞增殖、迁移和侵袭,但同时过表达miR-552-3p后DACH1对于HCC细胞相关功能的抑制即可解除;miR-552-3p正向调控Wnt/β-catenin信号通路的激活。结论:miR-552-3p靶向作用于DACH1促进HCC细胞增殖、迁移和侵袭,并参与调控Wnt/β-catenin信号。可能为HCC的诊疗策略提供潜在靶点。

miR-552通过PTEN/AKT信号通路促进非小细胞肺癌A549细胞的恶性生物学行为

目的探讨miR-552通过调控PTEN/AKT信号通路促进人非小细胞肺癌A549细胞的恶性生物学行为及其相关机制。方法通过qRT-PCR检测人肺癌组织样本和人非小细胞肺癌A549细胞系中miR-552、PTEN mRNA的表达情况;通过Western blotting检测PTEN、AKT、p-AKT蛋白的表达情况;通过CCK-8检测miR-552表达对A549细胞增殖能力的影响;通过Transwell小室检测miR-552表达对A549细胞迁移和侵袭能力的影响;通过流式细胞术检测miR-552表达对A549细胞凋亡能力的影响。结果miR-552在肺癌组织和A549细胞中的表达显著上调。过表达miR-552可显著促进A549细胞的增殖、迁移和侵袭,并抑制细胞凋亡,而抑制其表达则结果相反。与癌旁组织相比,肺癌组织中PTEN表达显著下调。过表达miR-552可下调PTEN蛋白表达,上调p-AKT蛋白表达,对AKT蛋白无影响,而抑制其表达则结果相反。结论miR-552可能通过PTEN/AKT信号通路促进人非小细胞肺癌A549细胞的恶性生物学行为。

食管癌miR-552表达与CT征象相关性分析

目的分析食管癌miR-552表达与CT征象的相关性。方法收集2018年1月至2021年4月在漯河市中医院接受治疗的61例食管癌患者的临床资料、外科液氮冻存的食管癌组织和癌旁正常组织,qRT-PCR检测食管癌组织和癌旁正常组织miR-552表达水平,分析食管癌miR-552表达与CT征像的相关性。结果癌组织miR-552表达水平明显高于癌旁组织,淋巴结转移、中低分化、T_(3~4)期的患者的miR-552水平明显高于无淋巴结转移、高分化、T_(1~2)期患者的表达水平(P<0.05)。miR-552水平在有无微小钙化点、不同肿块形态、有无淋巴结转移方面差异有统计学意义(P<0.05)。CT征像联合miR-552诊断食管癌的敏感性和特异性明显高于单一诊断(P<0.05)。结论食管癌miR-552表达与CT征像存在一定的相关性,将miR-552表达与CT征像相结合,可更为准确地判断食管癌的恶性程度。

miR-552-3p通过PTEN/AKT途径促进子宫内膜癌细胞体外增殖和转移

[目的]探讨miR-552-3p与PTEN/AKT信号通路对子宫内膜癌细胞生物活性的作用机制。[方法]将RL95-2细胞分为两组:inhibitor NC组(NC组)和miR-552-3p inhibitor组(inhibitor组);或Si NC组和Si PTEN组。通过MTT检测细胞活性,流式细胞术检测细胞凋亡率,Transwell小室检测细胞侵袭数目,划痕实验检测细胞迁移距离,免疫印迹检测细胞相关蛋白水平。[结果]与hEEC细胞比较,miR-552-3p在肿瘤细胞表达异常升高(0.62±0.03 vs 1.56±0.07);和转染inhibitor NC相比,转染miR-552-3p inhibitor后,RL95-2细胞的活性降低,RL95-2细胞的迁移和侵袭能力显著降低(25.29%±2.89%vs 11.27%±1.23%;65.33±3.12 vs 40.27±8.03),PTEN蛋白表达降低(0.93±0.12 vs 0.67±0.03),CCS-3和Bax的表达增加(0.97±0.11 vs 1.72±0.09,1.01±0.10 vs3.03±0.09)。和转染Si NC相比,转染Si PTEN后,RL95-2细胞的活性被明显抑制,细胞凋亡明显增加(11.02%±0.35%vs 30.89%±1.23%),CCS-3和Bax的表达增加(0.23±0.21 vs 1.09±0.08,0.21±0.31 vs 0.82±0.05)。双荧光素酶报告基因实验表明,相较于inhibitor NC组细胞,miR-552-3p innhibitor组细胞PTEN-WT报告基因的荧光素酶活性显著降低(0.93±0.09 vs 0.59±0.05)。[结论]抑制miR-552-3p能够抑制子宫内膜癌细胞的生物活性,这一过程与miR-552-3p调控PTEN/AKT通路有关。

miR-552在结直肠癌组织中表达及其与临床病理特征关系

目的:探讨miR-552在结直肠癌组织中表达及其与临床病理特征的关系。方法:选取2020年1月―2022年12月在我院检查的147例结直肠癌患者为研究对象,比较结直肠癌患者肿瘤组织、癌旁组织miR-552水平。根据miR-552表达情况将受试者分为高表达组(miR-552表达量≥1.28)及低表达组(miR-552表达量<1.28),分析影响miR-552表达的危险因素,进一步探讨miR-552与病理特征相关性。结果:结直肠癌患者肿瘤组织miR-552水平为(9.86±1.22),高于癌旁组织的(3.11±0.24),差异有统计学意义;miR-552高表达组TNM分期处于Ⅲ~Ⅳ、肿瘤病灶直径≥5 cm、浸润深度为浆膜层、发生淋巴结转移的比例均高于miR-552低表达组,差异有统计学意义;经Logistic回归分析发现TNM分期Ⅲ~Ⅳ期、肿瘤病灶直径≥5 cm、浸润浆膜层、淋巴结转移是导致miR-552呈现高表达的危险因素;TNM分期、肿瘤病灶直径、浸润深度、淋巴结转移与miR-552表达呈现正相关。结论:结直肠癌组织中miR-552表达水平高于癌旁组织,且TNM分期、肿瘤病灶直径、浸润浆膜层及淋巴结转移为miR-552表达水平的影响因素,并与miR-552表达水平具有显著相关性。

外泌体miR-552的表达对胃癌生物学行为的影响及临床意义

目的探讨外泌体miR-552的表达对胃癌生物学行为的影响及临床意义。方法选择商丘市第一人民医院2019年1月至2020年5月收治的胃癌患者作为研究对象,共168例;同时选择该院接受体检的健康者作为对照组,共30例;收集两组患者的血清,提取血清外泌体中的RNA,逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法检测血清外泌体介导的miR-552的表达情况;进行细胞转染,RT-PCR法检测转染效率;进行细胞增殖试验,MTT法比较细胞的增殖能力;比较外泌体介导的miR-552表达水平和胃癌患者临床病理特征之间的关系。结果胃癌患者血清外泌体介导的miR-552表达水平与对照组相比显著上调(P<0.05);转染48 h、72 h和96 h后,转染miR-552 inhibitor后BGC823的吸光度值与Control和miR-552 NC组相比显著下降(P<0.05);胃癌患者血清外泌体介导的miR-552高表达和TNM分期、分化程度、肿瘤大小等临床病理特征有关(P<0.05)。结论胃癌患者血清外泌体介导的miR-552表达水平与健康者比较明显升高,且miR-552高表达能够促进胃癌细胞的增殖且和多种不良的临床病理因素如肿瘤TNM分期、肿瘤分化程度和肿瘤大小相关。

人结肠癌细胞系 SP 细胞 microRNA 表达谱的初步分析

目的:探讨结肠癌侧群(SP)细胞在结肠癌多药耐药性中的作用及其microRNA生物标志。方法:结肠癌SP细胞的分选采用流式细胞术,细胞活力的测定采用MTT法,microRNA表达谱的检测采用microRNA芯片,microRNA表达的验证采用实时荧光定量PCR。结果:(1)HCT-15、HT-29及LoVo结肠癌细胞系中SP细胞的比例分别为16.75%、13.02%及9.52%。(2)化疗药(5-氟尿嘧啶、草酸铂及阿霉素)对3种结肠癌细胞系SP细胞的IC_(50)均明显高于对非SP细胞的IC_(50)(P<0.05)。(3)microRNA芯片检测表明miR-5000-3p、miR-5009-3p及miR-552在3种结肠癌细胞系的SP细胞中表达均上调,实时荧光定量PCR亦证实此结果。结论:miR-5000-3p、miR-5009-3p及miR-552在结肠癌细胞系的SP细胞中表达上调,有可能成为结肠癌SP细胞的潜在microRNA生物标志。

微RNA-552、微RNA-592在结直肠肿瘤中的表达及其与临床病理特征及预后的相关性

目的分析微RNA-552(miR-552)、微RNA-592(miR-592)的表达与结直肠肿瘤患者临床病理特征及预后的相关性。方法抽取2017年3月至2020年4月河南科技大学第一附属医院收治的结直肠肿瘤患者67例,检测并比较不同组织的miR-552、miR-592表达情况,比较不同病理特征(TNM分期、分化程度、肿瘤长径、淋巴结转移)、不同预后患者的miR-552、miR-592表达情况,分析其相关性。结果与癌旁正常组织相比,肿瘤组织中miR-552、miR-592表达水平较高,差异有统计学意义(P<0.05)。不同TNM分期、肿瘤长径、分化程度和有无淋巴结转移患者的miR-552、miR-592表达均不同,差异有统计学意义(P<0.05);TNM分期高、分化程度低、肿瘤长径长、淋巴结转移患者的miR-552、miR-592表达水平更高,差异有统计学意义(P<0.05)。与3年内无病生存者相比,3年内复发或死亡者的miR-552、miR-592表达水平较高,差异有统计学意义(P<0.05)。Logistic回归分析结果显示,TNM分期Ⅳ期、肿瘤长径≥5 cm、低分化程度、淋巴结转移、3年内复发或死亡是miR-552、miR-592表达水平升高的危险因素(P<0.05);Pearson分析结果显示,miR-552、miR-592表达和TNM分期(r=0.715)、肿瘤长径(r=0.649)、淋巴结转移(r=0.675)、预后(r=0.709)呈正相关,和分化程度(r=-0.693)呈负相关(P<0.05)。结论结直肠肿瘤组织中miR-552、miR-592的表达高于癌旁正常组织,TNM分期高、分化程度低,肿瘤长径长、淋巴结转移、3年内复发或死亡是miR-552、miR-592表达水平升高的危险因素,并与miR-552、miR-592表达具有显著相关性。