miR-155-5p通过调节SOX1的表达促进乳腺癌细胞系MCF-7的侵袭与迁移

目的研究肿瘤相关微小RNA(microRNA,miRNA)miR-155-5p在乳腺癌细胞系MCF-7中调控性别决定区Y框蛋白1(sex determining region Y-box 1,SOX1)蛋白表达的机制,探讨其对MCF-7侵袭转移能力的影响。方法在乳腺癌细胞系MCF-7中上调或下调miR-155-5p的表达,采用小室迁移实验(Transwell)检测细胞的迁移、侵袭能力的改变;realtime PCR及Western blot法分别检测SOX1mRNA及蛋白表达水平;免疫荧光检测SOX1蛋白的分布及表达水平;双荧光素酶报告实验检测miR-155-5p与SOX1mRNA的3'-UTR结合情况。结果上调miR-155-5p,MCF-7细胞的侵袭与迁移能力增强,SOX1mRNA及蛋白表达水平下降(均P<0.05);反之,抑制miR-155-5p,细胞的侵袭与迁移能力减弱,SOX1表达上升(均P<0.05)。随后的双荧光素酶报告实验表明,miR-155-5p可与SOX1mRNA 3′-UTR端的特定序列结合,调控SOX1表达转录后水平。结论 miR-155-5p通过抑制SOX1的表达来促进乳腺癌细胞系MCF-7的侵袭与迁移。

miR⁃7及SP⁃1与非小细胞肺癌患者放疗敏感性的相关性研究

目的探讨miR⁃7及其下游靶点特异性蛋白1(specific protein 1,SP⁃1)与非小细胞肺癌(non⁃small cell lung cancer,NSCLC)患者放疗敏感性的相关性。方法收集湖南师范大学附属第一医院2018年7月—2020年9月收治的116例原发性NSCLC患者癌组织及其相应癌旁组织,并采集外周血。采用实时荧光定量PCR法测定组织和外周血血清中miR⁃7的表达水平,免疫组化检测SP⁃1蛋白表达水平,Logistic回归模型分析影响NSCLC患者放射敏感性的因素。结果NSCLC患者癌组织中miR⁃7表达水平低于癌旁组织(P<0.001),SP⁃1阳性表达率高于癌旁组织(P<0.001)。Pearson相关分析显示,血清miR⁃7与癌组织中的miR⁃7表达呈正相关(r=0.492,P<0.001),SP⁃1表达阳性患者血清中的miR⁃7相对表达量低于阴性表达患者(P=0.005)。T3~4分期、TNM分期ⅢA~B期、有吸烟史、发生放射性肺损伤者血清和癌组织中的miR⁃7表达水平降低(均P<0.05);癌组织中SP⁃1阳性表达率升高(均P<0.05)。与放射敏感组比较,放射抵抗组血清和癌组织中miR⁃7相对表达量降低(均P<0.001),SP⁃1阳性表达率升高(P<0.001)。受试者工作特征曲线显示,血清miR⁃7预测NSCLC患者发生放射抵抗的曲线下面积为0.822(95%CI:0.746~0.897)。血清miR⁃7表达水平降低是放疗敏感性的危险因素(P=0.009)。结论血清miR⁃7在预测放疗抵抗中具有良好的效能,miR⁃7及其下游靶分子SP⁃1可能是潜在的放疗增敏靶点。

靶向EGFR的miR-7-5p对人乳腺癌细胞增殖和侵袭的影响

目的验证靶向表皮生长因子(epidermal growth factor receptor,EGFR)的微RNA-7-5p(microRNA-7-5p,miR-7-5p)对人乳腺癌细胞MDA-MB-231的增殖和侵袭能力的影响。方法应用双荧光素酶检测试剂验证EGFR为miR-7-5p的下游靶基因;在人乳腺癌细胞MDA-MB-231中转染miR-7-5p阴性对照质粒和pMIR-report-3′UTR/3′UTRm质粒,观察细胞中EGFR的mRNA水平和蛋白水平的表达变化;通过CCK-8实验,观察转染pMIR-report-3′UTR/3′UTRm质粒后细胞增殖能力的变化;利用流式细胞术检测转染pMIR-report-3′UTR/3′UTRm质粒后MDA-MB-231细胞周期的改变。结果与对照组相比,miR-7-5p可显著降低非突变载体的相对荧光素酶活性,χ2=32.6,P<0.01。miR-7-5p靶向EGFR可使其mRNA表达水平比空白对照下调81.2%,χ2=136.1,P<0.05;比阴性对照下调79.1%,χ2=130.6,P<0.05。其蛋白水平则比空白对照下调71.0%,χ2=110.1,P<0.05;比阴性对照下调70.0%,χ2=107.7,P<0.05。过表达miR-7-5p第3天后,MDA-MB-231细胞的增殖能力比空白对照组降低29.3%,χ2=33.9,P<0.05;比阴性对照组降低27.5%,χ2=32.2,P<0.05。而细胞周期则表现为G0/G1期阻滞。相比空白对照组,实验组细胞的转移能力降低了约48.9%,χ2=64.9,P<0.05;相比阴性对照组则降低了50.9%,χ2=68.5,P<0.05。侵袭能力相比空白对照组降低了约45.7%,χ2=59.8,P<0.05;相比阴性对照组则降低了43.7%,χ2=56.4,P<0.05。结论靶向EGFR的miR-7-5p可抑制人乳腺癌细胞的增殖能力和侵袭能力。

miR-7-5p对氢醌诱导TK6细胞损伤作用

目的通过慢病毒技术构建miR-7-5p稳定过表达的人淋巴母细胞TK6细胞株,探讨miR-7-5p对氢醌诱导TK6细胞损伤的作用机制。方法 (1)构建miR-7-5p过表达慢病毒载体,转染TK6细胞,经嘌呤霉素筛选获得miR-7-5p稳定过表达TK6细胞株(TK6-miR-7-5p细胞)和阴性空载体对照TK6细胞(TK6-NC细胞),采用实时荧光定量聚合酶链式反应鉴定构建效果。(2)以终浓度为0和40μmol/L的氢醌分别处理TK6细胞、TK6-NC细胞和TK6-miR-7-5p细胞48 h后,采用CCK-8法检测细胞存活率,采用流式细胞术检测细胞早期凋亡率;采用免疫印迹法检测以终浓度为40μmol/L的氢醌处理的3种细胞中PARP-1和BRCA1蛋白的相对表达水平。结果 (1)成功筛选出稳定过表达miR-7-5p的TK6细胞株;与正常TK6细胞比较,TK6-miR-7-5p细胞中miR-7-5p的相对表达水平升高约17倍(P<0.01),但细胞形态未出现明显改变。(2)予浓度为40μmol/L氢醌处理3种细胞后,与正常TK6细胞和TK6-NC细胞比较,TK6-miR-7-5p细胞存活率下降(P<0.01),细胞早期凋亡率增加(P<0.01),PARP-1和BRCA1蛋白相对表达水平均下降(P<0.05)。结论 miR-7-5p可能通过抑制PARP-1和BRCA1的DNA损伤修复能力而导致氢醌诱导TK6细胞早期凋亡增加。