miR-92b-5p对高糖诱导的足细胞凋亡的影响及其机制

目的探讨miR-92b-5p在高糖诱导的足细胞损伤或凋亡过程中可能发挥的作用,并揭示其对线粒体功能的作用机制。方法①体外培养足细胞,分为对照组(NG组)和高糖组(HG组),通过高通量测序技术筛选差异表达的miRNA。②为了观察miR-92b-5p对足细胞线粒体功能和足细胞凋亡的影响,将正常血糖条件下培养的足细胞分为NC mimics、miR-92b-5p mimics、NC inhibitor、miR-92b-5p inhibitor组。为了观察抑制miR-92b-5p表达能否通过改善线粒体功能减轻高糖诱导的足细胞凋亡,将足细胞分为NG组、HG组、HG+NC inhibitor组、HG+miR-92b-5p inhibitor组。采用实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)测定miR-92b-5p的表达,流式细胞术测定足细胞凋亡率,CCK-8法测定足细胞活力,Western blot测定凋亡相关蛋白和线粒体相关蛋白的表达。结果①通过高通量测序技术,筛选出16个差异表达的miRNA,其中,HG组miR-92b-5p的表达明显升高(P<0.05)。②与NC mimics组相比,miR-92b-5p mimics组miR-92b-5p表达升高(P<0.05),足细胞活力降低(P<0.05),足细胞凋亡率增加(P<0.05),Bcl-2、Mfn1表达降低(P<0.05),Bax、Fis1表达增加(P<0.05)。与NC inhibitor组相比,miR-92b-5p inhibitor组miR-92b-5p表达降低(P<0.05),足细胞活力升高(P<0.05),足细胞凋亡率降低(P<0.05),Bcl-2、Mfn1表达升高(P<0.05),Bax、Fis1表达降低(P<0.05)。③与NG组相比,HG组miR-92b-5p表达升高(P<0.05),足细胞活力降低(P<0.05),足细胞凋亡率增加(P<0.05),Bcl-2、Mfn1表达降低(P<0.05),Bax、Fis1表达增加(P<0.05)。与HG+NC inhibitor相比,HG+miR-92b-5p inhibitor组miR-92b-5p表达降低(P<0.05),足细胞活力升高(P<0.05),足细胞凋亡率减少(P<0.05),Bcl-2、Mfn1表达升高(P<0.05),Bax、Fis1表达降低(P<0.05)。结论在高糖条件下,miR-92b-5p的表达水平增加,而抑制miR-92b-5p的表达能够通过改善线粒体功能减轻高糖诱导的足细胞凋亡,从而延缓糖尿病肾病的进展。

能谱增强CT联合血清miR-92b-3p、AFF3在胃癌淋巴结转移及预后中的预测价值

目的探究能谱增强CT联合血清miR-92b3p、AFF3在胃癌患者淋巴结转移及预后中的预测价值。方法选取2021年4月至2022年4月来我院治疗的120例确诊的胃癌患者为研究对象,根据是否发生淋巴结转移分为转移组(48例)和未转移组(72例),根据预后生存情况分为死亡组(43例)和生存组(77例)。受试者工作特征(ROC)曲线分析血清miR92b-3p、AFF3水平对胃癌患者发生淋巴结转移及预后的预测价值;四格表法分析能谱增强CT联合血清miR-92b-3p、AFF3水平对胃癌患者发生淋巴结转移及预后的预测价值。结果转移组血清miR92b-3p显著高于未转移组(P<0.05),AFF3水平显著低于未转移组(P<0.05);死亡组血清miR-92b-3p显著高于生存组(P<0.05),AFF3水平显著低于生存组(P<0.05);三者联合预测胃癌患者发生淋巴结转移的敏感性为95.83%,特异性为70.83%,准确率为80.83%。三者联合预测的敏感性显著高于三者单独预测(P<0.05),特异性显著低于miR-92b-3p单独预测(P<0.05),准确率显著高于能谱增强CT单独预测(P<0.05);三者联合预测胃癌患者发生死亡的敏感性为69.77%,特异性为88.31%,准确率为81.67%。三者联合预测的敏感性显著低于能谱增强CT单独预测(P<0.05),特异性显著高于miR-92b3p、AFF3、能谱增强CT单独预测(P<0.05),准确率显著高于miR-92b-3p、AFF3单独预测(P<0.05)。结论胃癌淋巴结转移及死亡患者血清miR-92b-3p水平上调,AFF3水平下调,能谱增强CT联合血清miR92b-3p,AFF3对胃癌患者发生淋巴结转移及预后有较高的预测效能。

miR-92b、miR-320a表达水平与非小细胞肺癌患者临床病理及术后3年生存率的关系

目的:探讨miR-92b、miR-320a表达水平与非小细胞肺癌(NSCLC)患者临床病理及术后3年生存率的关系。方法:回顾我院肿瘤外科2017年10月—2019年5月收治的86例NSCLC患者资料,比较患者肿瘤组织及癌周组织的miR-92b、miR-320a表达水平,比较不同miR-92b、miR-320a表达水平患者的预后,并进行生存分析。结果:肿瘤组织的miR-92b表达水平高于癌周组织,miR-320a表达水平低于癌周组织,差异有统计学意义(P<0.05);不同miR-92b、miR-320a表达水平患者肿瘤分期、淋巴结转移比较差异有统计学意义(P<0.05);miR-92b低表达组术后3年累积生存率、平均生存时间优于miR-92b高表达组,miR-320a高表达组术后3年生存率、平均生存时间优于miR-320a低表达组,差异有统计学意义(P<0.05);肿瘤分期、淋巴结转移、miR-92b、miR-320a表达水平为影响NSCLC患者预后独立影响因素(P<0.05)。结论:miR-92b、miR-320a表达水平与NSCLC患者临床病理及术后3年生存率相关,可作为预后预测指标。

miR-92b-3p抑制物在阿尔兹海默病并发癫痫动物模型中的抗癫痫效应

目的:评估miR-92b-3p抑制物在阿尔兹海默病(AD)并发癫痫动物模型中的抗癫痫效应。方法:通过生物信息学方法和双荧光素酶实验筛选解整合素金属蛋白酶10(ADAM10)的调控分子,采用实时定量聚合酶链反应和Western Blot评估miR-92b-3p和ADAM10在神经元细胞和AD并发癫痫动物模型中的表达水平,经鼻腔给药方法给予miR-92b-3p的抑制物,评估其在AD并发癫痫动物模型中的抗癫痫效应。结果:通过生物信息学方法,双荧光素酶实验,Western Blot条带及其灰度分析,确认miR-92b-3p可转录后调控ADAM10,且在神经元细胞中对ADAM10调控作用较强。与AD动物模型组相比,miR-92b-3p在AD并发癫痫动物模型(AD+EP)组中显著上调。与AD+EP组相比,经鼻腔给予miR-92b-3p抑制物的治疗组癫痫发生率,Racine 4级以上发生率均显著减少。Racine 4级以上发作的潜伏期显著延长。结论:本研究初步证实miR-92b-3p抑制物在AD并发癫痫动物模型中具有抗癫痫效应。

miR-92b通过调控EZH2基因的表达抑制食管癌细胞Eca109的增殖和侵袭

目的:探讨食管癌(esophageal carcinoma,EC)细胞中miR-92b对组蛋白甲基转移酶zeste同源物增强子2(enhancer of zeste homolog 2,EZH2)基因表达的调控作用,以及对EC细胞增殖和侵袭能力的影响。方法:选取河北医科大学第四医院科研中心保存的2016年1月至2017年1月15例EC患者手术癌组织标本,通过生物信息学软件预测分析对EZH2可能调控的miRNAs,将预测的miRNAs mimic分别转染人EC细胞Eca109后,采用实时荧光定量PCR、Western blotting和双荧光素酶报告基因实验验证miRNAs对EZH2基因的靶向调控作用。同时将EZH2过表达质粒共转染至Eca109,然后采用CCK-8法、流式细胞术和Transwell细胞侵袭及迁移实验分别检测miRNAs和EZH2表达变化对EC细胞增殖、凋亡、侵袭和迁移的影响。结果:转染miR-92b的Eca109细胞中EZH2 mRNA与mimic-NC相比明显降低(P<0.01),转染miR-92b的Eca109细胞中EZH2蛋白表达水平明显低于转染mimic-NC组(0.525±0.052 vs 0.689±0.026,P<0.01)。生物信息学软件分析显示,miR-92b、let-7a及miR-25可与EZH2基因3’端非翻译区的结合位点相结合,但仅有miR-92b可以调控EZH2基因的表达,且miR-92b表达与EZH2 mRNA表达成负相关(P<0.01)。miR-92b mimic转染后EZH2 mRNA、蛋白及荧光素酶报告基因活性均明显下调(均P<0.01),对Eca109细胞凋亡无明显影响(P>0.05);miR-92b mimic转染能抑制ECa109细胞的增殖和侵袭及迁移能力(P<0.01)。而EC细胞转染EZH2过表达质粒后,miR-92b mimic对ECa109细胞增殖和侵袭及迁移能力的抑制作用明显减弱(P<0.01)。结论:miR-92b可抑制ECa109细胞的增殖和侵袭及迁移能力,其作用机制可能与靶向调控抑癌基因EZH2的表达有关。

miR-92b-3p在禽流感病毒感染与非感染鸭中的表达差异

采用荧光定量PCR方法检测miR-92b-3p在感染与非感染H5N1亚型禽流感病毒状态下SPF鸭不同组织中的相对表达情况。以筛选到在SPF鸭非感染和感染H5N1亚型禽流感病毒状态下差异microRNA的miR-92b-3p。结果表明:miR-92b-3p在感染与非感染鸭的不同组织中均能检测到表达。在非感染鸭的脾脏中相对表达量最高,感染禽流感病毒后在肺脏中的相对表达量最高;感染禽流感病毒后的SPF鸭与对照组SPF鸭相同组织间的相对比较分析显示,miR-92b-3p在感染病毒鸭的肾脏、气管、肺脏、肝脏和心脏中的表达量均高于SPF鸭的相同组织中的表达量。探明在病毒感染状态下miR-92b-3p对水禽的作用机制,为进一步研究miR-92b-3p预防禽流感病毒感染宿主中的作用提供参考。

Sp1和miR-92b在口腔癌组织中的表达及与其临床病理特征的关系

目的探究Sp1和miR-92b在口腔癌组织中的表达与临床病理特征的关系。方法选取行手术切除的口腔癌组织60例作为研究组;另选取癌旁正常口腔组织60例作为对照组。采用免疫组织化学染色检测两组Sp1和miR-92b在组织中的表达差异,并比较不同淋巴结转移情况、分化程度及临床分期组织Sp1和miR-92b表达水平;采用Logistic回归分析口腔癌组织中Sp1和miR-92b表达水平与临床病理特征的关系。结果 Sp1和miR-92b在研究组中的阳性表达率分别为80. 00%(48/60)、73. 33%(44/60)明显高于对照组中的阳性表达率分别为8. 33%(5/60)、11. 67%(7/60),差异有统计学意义(P <0. 05);口腔癌组织中肿瘤分化类型中~高分化与低~未分化Sp1和miR-92b表达均无统计学意义(P> 0. 05);有36例出现淋巴结转移,其中91. 67%Sp1表达阳性,86. 11%miR-92b表达阳性。40例临床分期Ⅲ+Ⅳ期,其中90. 00%Sp1表达阳性,85. 00%miR-92b表达阳性,差异具有统计学意义(P <0. 05);采用Logistic回归分析口腔癌组织中Sp1和miR-92b表达差异与临床病理特征淋巴结转移及临床分期密切相关(P <0. 05)。结论 Sp1和miR-92b在口腔癌组织中的阳性表达率高,其表达水平与肿瘤分期及淋巴结转移密切相关,检测Sp1和miR-92b对口腔癌预后的评估具有重要意义。

miR-92b-3p促进人脐带间充质干细胞的成骨分化

目的探究miR-92b-3p在人脐带间充质干细胞(h UCMSCs)成骨分化过程中的作用及其作用机制。方法通过转染h UCMSCs过表达或抑制miR-92b-3p,qRT-PCR检测各组成骨相关基因OCN、RUNX2、OSTERIX mRNA表达以明确miR-92b-3p对h UCMSCs成骨分化的体外调控作用,用茜素红染色比较各处理组的骨化能力。通过生物信息学分析miR-92b-3p可能的靶基因,并通过双荧光素酶基因报告系统以及Western blot验证。结果 miR-92b-3p在h UCMSCs成骨过程中表达量较对照组明显升高(P<0.05);过表达miR-92b-3p能促进h UCMSCs体外成骨分化及体内的异位成骨能力(P<0.05);而抑制miR-92b-3p则能降低h UCMSCs体外成骨分化(P<0.05)。过表达miR-92b-3p能显著降低DKK1的表达量(P<0.05),抑制则能明显提高DKK1的表达(P<0.05)。结论 miR-92b-3p可通过抑制DKK1表达,促进h UCMSCs成骨分化。

MiR-92b-3p通过靶向RAD21增强非小细胞肺癌对顺铂的化学敏感性

目的检测miR-92b-3p在非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)细胞株A549及其顺铂耐药株A549/DDP中的表达,探讨其在顺铂耐药中的作用机制。方法应用实时定量反转录聚合酶联反应(qPCR)检测miR-92b-3p在A549/DDP及A549中的表达;CCK8法分别检测各细胞株转染miR-92b-3p mimics或inhibitor后对DDP敏感度的改变;生物信息学预测及双荧光素酶报告基因验证miR-92b-3p和靶基因的关系。qPCR和Western Blot检测RAD21基因及蛋白的表达。结果 miR-92b-3p在A549/DDP细胞株中呈现低表达(P <0.05),miR-92b-3p mimics转染A549/DDP细胞株后,DDP对转染细胞株的半数抑制浓度(half inhibition concentration,IC50)显著低于阴性对照组(P <0.05);同时该细胞株的RAD21的mRNA及蛋白表达水平明显低于阴性对照组(P <0.05)。反之,在A549细胞株中转染miR-92b-3p inhibitor后,得出相反的结论。结论 miR-92b-3p在A549/DDP细胞株低表达,其通过调控RAD21 mRNA及蛋白的表达而逆转A549/DDP细胞对DDP的耐药。

miR-92b对胃癌细胞周期和凋亡的影响

目的观察miR-92b对胃癌细胞周期和凋亡的影响。方法在胃癌SGC-7901细胞中瞬时转染化学修饰的microRNA抑制物,抑制miR-92b的表达。采用流式细胞术检测细胞周期和凋亡变化,并在荧光显微镜下观察细胞形态,western blot检测Bcl-2和p53的变化。结果抑制miR-92b表达后,细胞周期延缓,凋亡细胞比率增加,细胞核皱缩,Bcl-2和p53表达下调。结论 miR-92b在胃癌发展过程中推动细胞通过周期限制点,加速细胞生长,并可能通过抑制线粒体凋亡途径促进胃癌细胞增殖。

间质干细胞通过调控miR-92b修复顺铂诱导的急性肾损伤

目的探讨骨髓间质干细胞(BM-MSCs)修复顺铂诱导的急性肾损伤的分子机制。方法以6 mg/kg顺铂的剂量经腹腔注射大鼠体内,24 h后经尾静脉输注BM-MSCs(BM-MSCs组)或PBS(PBS组),以未注射顺铂者作为正常对照组;HE染色及免疫组织化学染色法检测BM-MSCs对肾损伤的修复情况;体外培养NRK-52E细胞并经顺铂作用6 h后,继续培养48 h(顺铂组)或与BM-MSCs共培养48 h(细胞组),未用顺铂处理的NRK-52E细胞作为对照组;qRT-PCR检测其miR-92b及其靶基因PTEN的表达水平,western blot检测其p-Akt蛋白的表达水平。结果 HE染色结果显示,BM-MSCs组的肾小管蛋白质管型明显少于PBS组,肾小管结构明显改善;免疫组织化学染色结果表明,BM-MSCs组的增殖细胞核抗原(PCNA)阳性细胞数[(131.0±14.4)个]明显高于PBS组[(42.2±6.1)个],差异有统计学意义(t=11.28,P<0.01);qRT-PCR结果表明,体内试验中,与正常对照组miR-92b和PTEN基因的表达水平(1.11±0.78,1.01±0.21)相比,PBS组分别为4.64±1.06和0.61±0.2,差异有统计学意义(P<0.05),BM-MSCs组分别为2.27±0.81和1.1±0.1,差异亦有统计学意义(P均<0.05);体外实验中,与阴性对照组miR-92b和PTEN基因的表达水平(1.12±0.77,1.02±0.13)相比,顺铂组分别为7.64±0.72和0.58±0.2,差异有统计学意义(P均<0.05),细胞组分别为4.38±0.50和1.15±0.23,差异亦有统计学意义(P均<0.05);western blot检测结果显示,与顺铂组p-Akt蛋白的表达水平(0.96±0.18)相比,细胞组p-Akt蛋白表达水平为2.11±0.11,差异有统计学意义(P<0.01)。结论 BM-MSCs能够修复顺铂诱导的急性肾损伤,可能通过下调miR-92b发挥作用。

Sp1和miR-92b在口腔癌组织中的表达及其意义

目的探讨核转录因子特异性蛋白1(Sp1)和miR-92b在口腔癌组织中的表达及其意义,为提高口腔癌的诊治水平提供依据。方法对我院2012年3月至2014年9月手术切除的73例口腔癌组织、48例癌旁正常口腔组织的临床病理特征进行回顾性分析,比较两组中Sp1和miR-92b的表达水平,并分析其与临床病理特征的相关性。结果口腔癌组织Sp1阳性表达率为80.82%,miR-92b阳性表达率为72.60%;癌旁正常口腔组织Sp1阳性表达率为8.33%,miR-92b阳性表达率为10.42%;两组Sp1、miR-92b阳性表达率比较差异显著(P<0.05)。27例淋巴结转移患者中,24例Sp1表达阳性,25例miR-92b表达阳性。口腔癌组织中Sp1、miR-92b表达与患者的性别、年龄、肿瘤分化类型无关(P>0.05),但与患者肿瘤分期及淋巴结转移密切相关(P<0.05);经多元Cox逐步回归分析:肿瘤分期晚(Ⅲ+Ⅳ期)、伴有淋巴结转移等因素为口腔癌患者预后不良的独立危险因素(P<0.05)。结论口腔癌组织中Sp1、miR-92b阳性表达率高,其表达水平与肿瘤分期及淋巴结转移密切相关,联合检测对评估口腔癌预后具有重要意义。

SHG-44神经胶质瘤干细胞分化为胶质瘤细胞前、后miR-92b基因的表达变化

目的观察SHG-44神经胶质瘤干细胞分化为胶质瘤细胞前、后miR-92b基因表达的变化。方法从人胶质瘤SHG-44细胞中筛选出肿瘤干细胞并进行荧光免疫鉴定;将肿瘤干细胞诱导分化为胶质瘤细胞;逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)法和实时荧光定量PCR法测定分化前、后miR-92b基因前体的转录水平。结果 RT-PCR产物的电泳结果显示,在干细胞及分化后的胶质瘤细胞中均出现miR-92b基因前体的目标条带。运用实时荧光定量PCR法对目的基因进行表达相对定量的2-ΔΔt法,以干细胞miR-92b前体基因为参照,分化后的胶质瘤细胞miR-92b基因前体表达量为2.95,约为干细胞表达量的3倍。结论 miR-92b基因可能在神经胶质瘤干细胞的分化过程中发挥了重要作用。

miR-92b在神经胶质瘤裸鼠移植瘤模型中的作用

目的建立U251胶质瘤裸鼠皮下移植瘤模型,观察沉默miR-92b对U251神经胶质瘤裸鼠皮下移植瘤生长的影响。方法采用神经胶质瘤U251细胞株建立神经胶质瘤的裸鼠皮下移植瘤动物模型,将shRNA-miR-92b表达的质粒稳定转染U251细胞,筛选稳转细胞采取多点注射的方法注入裸鼠皮下,以阴性质粒和PBS为阴性对照组(shRNA-miR-92b NC组)和空白对照(PBS组);检测裸鼠成瘤体积和重量;real-time PCR检测移植瘤中miR-92b、胰岛素样生长因子结合蛋白-3(IGFBP-3)的表达水平;western blot检测移植瘤中的IGFBP-3、β-链蛋白(β-catenin)和钙黏蛋白(E-cadherin)蛋白水平;免疫组织化学技术检测移植瘤中IGFBP-3、β-catenin和E-cadherin表达水平。结果移植瘤形成过程中裸鼠未出现死亡,全部裸鼠均皮下成瘤,肿瘤体积检测后发现shRNA-miR-92b转入后显著抑制移植瘤的生长(P<0.05);转入shRNA-miR-92b后,移植瘤中的miR-92b表达水平降低,IGFBP-3的表达水平增加(P<0.05);western blot结果显示IGFBP-3和E-cadherin蛋白表达升高,β-catenin蛋白表达降低(P<0.05);免疫组化结果也显示IGFBP-3蛋白表达升高,β-catenin蛋白表达降低(P<0.05)。结论沉默miR-92b表达后可能通过上调IGFBP3、E-cadherin蛋白表达,下调β-catenin蛋白表达,从而抑制神经胶质瘤裸鼠皮下移植瘤的生长。

miR-92b对人胃癌细胞SGC7901迁移、粘附和侵袭的影响

目的探讨mi R-92b对胃癌细胞迁移、粘附和侵袭能力的影响及其相关的分子机制。方法在人胃癌SGC-7901细胞中瞬时转染mi R-92b inhibitor和mi R-92b mimics后,经划痕实验、细胞迁移实验、基质胶粘附实验和Transwell侵袭实验观察对细胞转移的影响;Western blot检测E-Cadherin、Vimentin、Akt和p-Akt蛋白的表达水平。结果 SGC-7901细胞转染mi R-92b inhibitors后,迁移、粘附和侵袭的细胞数量减少(P<0.05);Western blot结果显示E-Cadherin表达升高,Vimentin表达降低,Akt和p-Akt的表达升高。转染mi R-92b mimics后,迁移、粘附和侵袭的细胞数量增多(P<0.05);E-Cadherin表达降低,Vimentin表达升高,Akt和p-Akt表达降低。结论 mi R-92b介导SGC7901细胞发生上皮-间质转化,促进肿瘤细胞的粘附、迁移和侵袭,可能通过非PI3K/Akt途径促进肿瘤细胞的转移。

miR-92b-3p/USF2/DNA损伤轴调节葡萄膜黑色素瘤增殖和侵袭

目的探讨miR-92b-3p对葡萄膜黑色素瘤(UM)增殖和侵袭的影响。方法将UM细胞(OCM-1A和MUM-213)分成Vector组、USF2组、miR-NC组、miR-92b-3p组和miR-92b-3p+USF2组。生物信息学分析USF2和miR-92b-3p在UM细胞中的表达,USF2和miR-92b-3p差异表达与UM临床恶性表型的关系,并预测两者之间的靶向关系。RT-PCR检测miR-92b-3p在APRE-19、OCM-1A和MUM-213细胞中的表达。CCK-8检测细胞增殖能力。细胞侵袭实验检测细胞侵袭能力。乳酸脱氢酶(LDH)试剂盒检测细胞LDH活性。裸鼠移植瘤实验检测瘤体重量、体积。免疫组化染色检测肿瘤组织中USF2表达。Western blot实验检测USF2、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)和增殖相关抗原Ki67蛋白表达。双荧光素酶报告基因实验验证miR-92b-3p和USF2的靶标关系。结果USF2在UM细胞中低表达,miR-92b-3p在UM细胞中高表达,且均与UM临床恶性表型有关,USF2可能促进DNA损伤。USF2过表达抑制UM细胞增殖、侵袭,增加LDH活性,上调Bax蛋白表达,下调Ki67和Bcl-2蛋白表达。上调USF2表达抑制裸鼠移植瘤生长。数据库StarBase v2预测和双荧光素酶报告基因实验证实USF2是miR-92b-3p的作用靶点。不同浓度H_(2)O_(2)对MUM-213和OCM-1A细胞增殖具有抑制作用,与Vector组相比,H_(2)O_(2)组和H_(2)O_(2)+USF2组磷酸化组蛋白H2AX(γH2AX)蛋白表达增加,H_(2)O_(2)+USF2组γH2AX蛋白表达高于H_(2)O_(2)组(P<0.05)。不同浓度的司美替尼处理细胞后,UM细胞活性逐渐下降,USF2组细胞活性下降幅度大于Vector组(P<0.05)。miR-92b-3p靶向结合USF2抑制UM细胞增殖和侵袭。结论miR-92b-3p可能通过调控USF2/DNA损伤轴抑制UM细胞增殖和侵袭。

miR-92b在子痫前期患者中的表达和意义

目的探讨miR-92b在子痫前期患者中的表达及意义。方法选取2015-01~2017-12海口市妇幼保健院妇产科招募的60名子痫前期孕妇为研究组,60名健康孕妇志愿者作为对照组,real-time PCR检测两组血清miR-92b表达并进行比较。使用AnaeroPack系统构建JAR细胞缺氧模型并收集未经缺氧处理的JAR细胞,real-time PCR检测缺氧组JAR细胞和未经缺氧处理的对照组细胞miR-92b表达;在缺氧环境下,将miR-92b mimics及其相应对照转染入JAR细胞,分别记为miR-92b mimics组和control组,CCK-8实验检测两组细胞增殖情况,Western blot检测两组细胞cleaved caspase 3、Bcl2/Bax表达。结果与对照组相比,研究组血清miR-92b表达明显降低(P<0.05)。缺氧处理后JAR细胞miR-92b表达明显降低(P<0.05)。miR-92b mimics组的JAR细胞在缺氧环境中增殖能力较control组明显提高(P<0.05),miR-92b mimics组JAR细胞中cleaved caspase 3、Bax表达较control组明显降低,Bcl2表达较control组增加(P<0.05)。结论miR-92b可在PE过程中调控细胞增殖及凋亡影响PE的发展,上调miR-92b可能是阻碍PE发生发展的途径之一。

miR-375、miR-92b靶向NLK对非小细胞肺癌细胞生物学功能及上皮间质转化的影响

目的探讨miR-375、miR-92b靶向Nemo样激酶(Nemo-like kinase,NLK)对非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)细胞增殖、迁移、侵袭及上皮间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)的影响。方法以人NSCLC细胞A549为实验细胞,分为7组:正常对照组、miR-375阴性对照组、miR-92b阴性对照组、miR-375+miR92b阴性对照组、miR-375抑制组、miR-92b抑制组和miR-375+miR-92b抑制组。采用双荧光素酶报告法观察miR-375、miR-92b与NLK之间的靶向关系。培养72 h时采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测miR-375、miR-92b、NLK mRNA表达,CCK-8法检测细胞增殖(OD值),划痕实验法(wound healing)检测细胞迁移,Transwell实验法检测各组细胞侵袭,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测EMT标记蛋白(E-cadherin、vimentin)的表达差异。结果miR-375、miR-92b与NLK存在靶向结合位点且在A549细胞中存在靶向关系。细胞培养72 h,miR-375抑制组、miR-92b抑制组、miR-375+miR-92b抑制组与相应的阴性对照组和正常对照组比较,NLK mRNA表达、OD值、迁移距离、侵袭细胞数降低(均P<0.05)。miR-375阴性对照组、miR-92b阴性对照组、miR-375+miR-92b阴性对照组与正常对照组比较,E-cadherin、vimentin表达差异不具有统计学意义(P>0.05);与相应的阴性对照组和正常对照组比较,miR-375抑制组、miR-92b抑制组、miR-375+miR-92b抑制组E-cadherin蛋白表达均增高,vimentin蛋白表达均降低,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论miR-375、miR-92b靶向NLK对NSCLC的生物学功能和EMT具有抑制作用,NLK表达调控可能是NSCLC的预后生物标志物和治疗靶点。

miR-92b在非小细胞肺癌组织中的表达及临床意义

目的探讨miR-92b在非小细胞肺癌组织中的表达及临床意义。方法选取2012年4月至2014年4月在山东省立第三医院行手术切除的非小细胞肺癌患者103例,实时荧光定量PCR术检测非小细胞肺癌和癌旁组织中miR-92b表达,所有患者从术后第1d起随访至2019年4月30日,记录患者5年生存率及总生存时间,采用Kaplan-Meier法进行生存分析,采用Cox比例风险模型对影响预后的因素分析。结果miR-92b在非小细胞肺癌组织中表达量为(2.31±0.15),高于癌旁组织中的(1.01±0.10)(t=85.839,P<0.001);与TNM分期Ⅰ期和未发生淋巴结转移的患者相比,miR-92b在TNM分期Ⅱ~Ⅲ期和发生淋巴结转移患者组织中表达量升高(P<0.05);生存分析结果显示,低表达组5年累积生存率为57.69%,平均生存时间为(46.46±3.45)个月,均高于高表达组,分别为19.48%和(28.00±2.19)个月(χ^(2)=13.395,P<0.001);影响非小细胞肺癌患者预后的风险因素包括TNM分期、淋巴结转移和miR-92b表达[HR=2.409(95%CI:1.294~4.486)、3.055(95%CI:1.620~5.759)和2.069(95%CI:1.045~4.096),P<0.05]。结论miR-92b在非小细胞肺癌组织中表达量升高,是患者5年生存率和生存时间的独立风险因素。

miR-92b与PI3K/Akt在糖尿病肾病中相关性的初步研究

目的探讨miR-92b与信号通路PI3K/Akt在糖尿病肾病中的相关性。方法选取8周龄的C57BL/6雄性小鼠12只,随机分为正常对照组和糖尿病肾病组,利用枸橼酸钠建立糖尿病肾病小鼠模型;选取人肾小管上皮HK-2细胞12瓶,随机分为高糖组、低糖组和左旋葡萄糖组,用高糖刺激建立糖尿病肾病细胞模型。利用实时荧光定量PCR检测小鼠肾脏组织和细胞中miR-92b表达水平,Western blot检测小鼠肾脏组织和细胞中Akt和PAkt的表达水平。结果糖尿病肾病组和高糖组miR-92b表达水平明显低于对照组(P<0.05),而P-Akt/Akt表达水平明显高于对照组(P<0.05)。将信号通路PI3K/Akt抑制剂LY294002加入到高糖诱导的糖尿病肾病细胞模型中,信号通路PI3K/Akt被抑制的同时,miR-92b表达显著升高(P<0.05)。结论糖尿病肾病时,miR-92b与PI3K/Akt的表达呈负相关。