慢病毒介导的ebv-miR-BART7稳定过表达鼻咽癌细胞株CNE1的建立

目的构建ebv-miR-BART7慢病毒表达载体,建立其稳定表达的鼻咽癌细胞株CNE1-pLVTHM/BART7。方法构建慢病毒表达质粒pLVTHM/BART7。用293FT细胞包装后产生的成熟慢病毒颗粒感染CNE1细胞。经流式细胞仪筛选后,建立稳定表达ebv-miR-BART7鼻咽癌细胞株。最后用荧光定量PCR检测其表达水平。结果 PCR和测序验证pLVTHM/BART7重组质粒构建成功;经293FT细胞病毒包装,感染CNE1细胞后,与阴性对照组和未感染组相比,其表达水平明显升高。结论成功构建了pLVTHM/BART7慢病毒重组质粒,建立了稳定表达ebv-miR-BART7的鼻咽癌细胞株CNE1-pLVTHM/BART7,为研究ebv-miR-BART7在鼻咽癌发生发展过程中的基因调控和相应的作用机制提供了有用的细胞模型。

鼻咽癌患者血浆EBV-miR-BART7-3p与EBV-miR-BART17-5p的表达及其临床意义

目的检测鼻咽癌患者血浆中BART-miRNAs的表达情况,评价它们对鼻咽癌诊治的临床应用价值。方法采用反转录PCR检测111例首诊鼻咽癌患者、42例治疗后复发/转移鼻咽癌患者、22例非鼻咽癌患者及24名健康体检者血浆中BART-miRNAs,统计分析其与鼻咽癌患者临床特点的关系,以及治疗前后的变化,绘制ROC曲线,计算AUC,评估其作为鼻咽癌诊断工具的性能。结果鼻咽癌患者血浆中EBV-miR-BART7-3p与EBV-miR-BART17-5p相对表达水平显著高于非鼻咽癌患者与健康体检者(P<0.05),均与患者N分期和临床分期相关(P<0.05),且在治疗后显著下降(P<0.05),而治疗后转移患者相对表达水平显著升高。单独检测诊断鼻咽癌的AUC为0.829和0.833,联合检测诊断鼻咽癌的AUC为0.860。结论检测血浆中EBV-miR-BART7-3p与EBV-miR-BART17-5p,可为鼻咽癌诊疗以及分期等进一步研究提供有效依据。

EBV相关性胃癌患者血浆miRNAs表达谱的研究

目的探讨EBV相关性胃癌(EBV-associated gastric carcinomas,EBVaGCs)患者血浆中EBV-miRNAs表达水平及其临床意义。方法收集226例胃癌患者和56例非EBV感染相关的肿瘤患者外周血,采用RT-PCR检测EBV-DNA,荧光定量Real-time RTPCR分析EBV-miRNAs表达谱,结合组织病理和影像学检查结果分析这些miRNAs的临床意义。结果在胃癌患者中,有177例EBV阴性胃癌和49例EBVaGCs患者。在EBVaGCs中,EBV-miR-BART5的表达水平是RNU6B的3.5倍,而EBV-miR-BART1、miRBART1-2、miR-BART7及miR-BART10分别为2.4、2.0、3.1、2.9倍。EBV-miRNAs在低分化胃癌中均高表达,EBV-miR-BART5和miR-BART7在中高分化胃癌表达差异具有统计学意义(P<0.05),但EBV-miR-BART1、miR-BART1-2和miR-BART10表达差异无统计学意义(P>0.05)。85.7%(42/49)EBVaGCs患者二程化疗后症状缓解,12.2%(6/49)局部侵袭,2.0%(1/49)淋巴结转移;而64.4%(114/177)EBV阴性胃癌患者二程化疗症状缓解,20.3%(36/177)局部侵袭,10.7%(19/177)淋巴结转移,4.5%(8/177)远处转移。结论 EBV-miR-BART5和miR-BART7可作为EBVaGCs无创诊断、治疗和预后的生物标志物;EBVaGCs患者预后比EBV阴性胃癌好。