EBV miR-BARTs在鼻咽癌中的研究及应用进展

BART miRNA是EBV编码的miRNA前体经选择剪切的产物,能够通过影响病毒自身或宿主基因表达,发挥癌基因或抑癌基因作用,参与肿瘤细胞的增殖、生长、凋亡及转移的调控,或是影响肿瘤放化疗的效果,以及影响筛查和预后。miR-BARTs在所有潜伏类型的EBV中均有表达,但在NPC细胞系中表达最显著,表明miR-BARTs与NPC的发生发展有关。阐明miR-BART在NPC中的作用机制对于NPC的筛查、诊断以及治疗等方面的临床实践均具有指导意义。

鼻咽癌中MAP3K5和Epstein-Barr病毒编码的miR-BART22表达的关系及意义

目的研究鼻咽癌中MAP3K5和Epstein-Barr病毒编码的miR-BART22的表达及其相关性。方法收集53例鼻咽癌石蜡档案标本和30例鼻咽黏膜慢性炎标本,分别行EBER和miR-BART22原位杂交及MAP3K5免疫组化检测;另分别选取10例鼻咽癌和鼻咽黏膜新鲜标本提取蛋白行MAP3K5的Western blot检测。结果 53例鼻咽癌EBER均阳性,49例miR-BART22阳性;30例鼻咽黏膜慢性炎EBER和miR-BART22均阴性。MAP3K5在53例鼻咽癌组织中50例为阴性,癌巢周围粘膜组织呈阳性表达,3例弱阳性(+)表达。30例鼻咽粘膜慢性炎中,25例强阳性表达(++～+++),3例弱阳性(+)表达,2例阴性;鼻咽癌和鼻咽黏膜慢性炎MAP3K5差异具有统计学意义(P<0.001);Westernblot检测结果黏膜慢性炎MAP3K5蛋白表达值高于鼻咽癌(P=0.029)。MAP3K5和miR-BART22表达呈负相关(P<0.001)。结论 MAP3K5在鼻咽癌组织中表达水平低于黏膜上皮组织。MiR-BART22与之相反,在鼻咽癌中高表达,而黏膜慢性炎中缺乏。MAP3K5和miR-BART22在鼻咽癌中表达呈负相关。根据以上实验和相关文献,我们推测MAP3K5可能是EB病毒miR-BART22靶标基因,EB病毒miR-BART22通过抑制MAP3K5的表达,使相应磷酸化MAP3K5蛋白减少,进而下调MAPK通路下游基因蛋白的磷酸化,并行使对NPC细胞抑制凋亡、阻止分化并促进免疫逃逸等作用。

EB病毒编码miR-BART5作用于PUMA基因抑制肺癌细胞凋亡

目的探讨肺癌组织中EB病毒(EBV)感染情况、EBV编码miR-BART5在肺癌组织中表达及对肺癌细胞凋亡的影响。方法采用实时荧光定量PCR技术检测非小细胞肺癌组织和肺良性病变组织中EBV DNA载量及EBV编码miR-BART5的表达情况;在宣威肺腺癌细胞系中构建PUMA基因和miR-BART5表达载体,利用荧光素酶报告系统验证PUMA与miR-BART5关系。使用噻唑蓝比色法(MTT)分析转染后不同时间段细胞增殖情况。通过caspase3/7、9活性检测研究miR-BART5、PUMA基因在肺癌细胞凋亡中的作用。结果 30例肺癌组织中EBV DNA阳性11例(36.67%),30例肺良性病变组织中均阴性。miRNA-BART5在EBV阳性肺癌组织中表达量(3.46±0.54)明显高于EBV阴性肺癌组织(1.98±0.46)和EBV阴性肺良性病变组织(1.12±0.32),差异有统计学意义(P均<0.05);EBV阴性肺癌组织与EBV阴性肺良性病变组织中miRNA-BART5表达差异无统计学意义(P>0.05)。荧光素酶报告基因分析显示,miR-BART5能够作用于PUMA基因3'UTR端。MTT结果显示,转染0、24、48、72 h后,miR-BART5组吸光度(A)值分别为0.8、0.93、1.18、1.2,细胞正常增殖;无意义序列(scrambled siRNA)转染组A值分别为0.71、0.80、0.90、0.99,生长未受到明显抑制;miR-BART5过表达(Over-miR-BART5)载体转染组A值为0.90、0.99、1.57、2.20,与miR-BART5组相比均增加;miR-BART5抑制表达(In-miR-BART5)载体转染组A值为0.70、0.67、0.56、0.48,与miR-BART5组相比,在转染24 h后出现明显抑制,且随时间的推移,抑制程度越明显;miR-BART5过表达载体转染组中caspase3/7、9活性(3 646±334、5 533±112)相对于miR-BART5抑制表达载体转染组中caspase3/7、9活性(10 145±398、10 576±915)显著降低。结论肺癌组织中EBV呈现较高的感染率;在EBV DNA阳性肺癌细胞中,miR-BART5可能通过抑制PUMA基因的表达进而抑制肺癌细胞凋亡。

EBV相关性胃癌患者血浆miRNAs表达谱的研究

目的探讨EBV相关性胃癌(EBV-associated gastric carcinomas,EBVaGCs)患者血浆中EBV-miRNAs表达水平及其临床意义。方法收集226例胃癌患者和56例非EBV感染相关的肿瘤患者外周血,采用RT-PCR检测EBV-DNA,荧光定量Real-time RTPCR分析EBV-miRNAs表达谱,结合组织病理和影像学检查结果分析这些miRNAs的临床意义。结果在胃癌患者中,有177例EBV阴性胃癌和49例EBVaGCs患者。在EBVaGCs中,EBV-miR-BART5的表达水平是RNU6B的3.5倍,而EBV-miR-BART1、miRBART1-2、miR-BART7及miR-BART10分别为2.4、2.0、3.1、2.9倍。EBV-miRNAs在低分化胃癌中均高表达,EBV-miR-BART5和miR-BART7在中高分化胃癌表达差异具有统计学意义(P<0.05),但EBV-miR-BART1、miR-BART1-2和miR-BART10表达差异无统计学意义(P>0.05)。85.7%(42/49)EBVaGCs患者二程化疗后症状缓解,12.2%(6/49)局部侵袭,2.0%(1/49)淋巴结转移;而64.4%(114/177)EBV阴性胃癌患者二程化疗症状缓解,20.3%(36/177)局部侵袭,10.7%(19/177)淋巴结转移,4.5%(8/177)远处转移。结论 EBV-miR-BART5和miR-BART7可作为EBVaGCs无创诊断、治疗和预后的生物标志物;EBVaGCs患者预后比EBV阴性胃癌好。

EB病毒mir-BART-5促鼠成纤维细胞恶性表征机制研究

目的探讨EB病毒mir-BART5可促进鼠成纤维细胞恶性表征的作用机制。方法生物信息学分析显示miR-BART5与miR-18序列相近,miR-18的靶基因表达的结缔组织生长因子(CTGF)可促进细胞增殖。在鼠成纤维细胞NIH/3T3中瞬时转染mir-BART5-mimics使其表达上调,采用Western blot检测对照组与转染组细胞的CTGF表达,采用体外软琼脂集落生成试验观察两组细胞生长的恶性表征。结果转染组细胞在软琼脂上呈恶性表征。CTGF在转染组中表达上调(P<0.05),导致NIH/3T3细胞增殖能力增强。结论 EBV病毒miR-BART5通过调控miR-18途径上调CTGF的表达,从而促进细胞的恶性表征。