乙型肝炎病毒感染相关肝病外周血单核细胞中miRNA139的表达变化及临床意义

目的：探讨乙型肝炎病毒感染相关肝病中miRNA139的表达情况及其临床意义。方法：应用实时荧光定量PCR方法检测慢性乙型肝炎（CHB）患者（20例）、慢性乙肝肝硬化（LC）患者（20例）、原发性肝癌（HCC）患者（20例）及正常对照（NC）（20例）组外周血单核细胞中miRNA139的表达水平，结合临床指标进行分析。结果：与NC组比较，CHB组和LC组患者外周血中miRNA139的表达水平下调不明显，没有显著差异（P〉0.05）；与NC组、LC组和CHB组比较，HCC组患者外周血中miRNA139的表达水平明显下调，差异具有统计学意义（P＜0.01）。HCC患者外周血中miRNA139的表达与AFP呈负相关。结论：HCC组患者外周血中miRNA139的表达水平明显下降，提示miRNA139的下调可能与HCC的发生有关。

复制状态下EB病毒对宿主细胞中ZEB1基因表达的影响

目的:探究EB病毒(EBV)在潜伏感染和裂解复制状态下对ZEB1、ZEB2、ZEB1-AS1基因表达的影响。方法:将EBV相关癌细胞系Raji、SNU-719、AGS分为实验组(TPA及Na B诱导EBV)和对照组(加入等体积DMSO),将稳定表达p LVshRNA-EGFP-EBVsponge的SNU-719细胞系设为sponge组,未经转染RNA sponge的SNU-719细胞系设为control组(2组细胞均使用TPA及Na B进行诱导),TPA及Na B处理48 h后提取细胞总RNA进行RT-PCR,从mRNA水平检测ZEB1、ZEB2及ZEB1-AS1基因的表达。结果:与对照组相比,EBV复制期间,在Raji、SNU-719、AGS细胞中ZEB1 mRNA表达量显著升高(P<0.05),ZEB1-AS1 mRNA的表达量仅在AGS细胞中显著降低(P<0.05),在SNU-719和AGS细胞中未检测到ZEB2的表达;稳定表达p LVshRNA-EGFPEBVsponge的SNU-719细胞比未转染RNA sponge的SNU-719细胞,ZEB1表达量明显降低(P<0.05)。结论:EBV依靠自身编码的miRNA在复制期间促进ZEB1的表达,同时也对ZEB1-AS1有抑制作用。

27nt-miRNA通过靶向哺乳动物雷帕霉素靶蛋白调控血管平滑肌细胞凋亡及其分子机制研究

目的:探讨来源于一氧化氮合酶基因第四内含子的27碱基重复序列微小RNA(27nt-miRNA)对哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)介导的主动脉血管平滑肌细胞(VSMC)凋亡调控作用及潜在分子机制。方法:将大鼠主动脉VSMC分为空白对照组、雷帕霉素组、27nt-miRNA组、27nt-miRNA反义序列(anti-27ntmiRNA)组、阴性对照组。27nt-miRNA组:转染27nt-miRNA正义链慢病毒载体;anti-27nt-miRNA组:转染27ntmiRNA反义链慢病毒载体;阴性对照组:转染随机阴性序列慢病毒载体。除空白对照组外,雷帕霉素组与各转染组细胞给予100 ng/ml雷帕霉素诱导培养2 h诱导凋亡。荧光定量逆转录PCR(qRT-PCR)验证27nt-miRNA慢病毒稳转细胞株构建情况;CCK-8法、流式细胞术、qRT-PCR法与蛋白免疫印迹(Western blot)法分别检测各组细胞增殖能力、细胞凋亡率与周期分布以及mTOR、磷酸化-mTOR(p-mTOR)、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(caspase-3)的信使RNA(mRNA)和(或)蛋白表达水平。结果:慢病毒转染VSMC后,27nt-miRNA稳转细胞株构建成功,雷帕霉素可抑制VSMC的mTOR mRNA与p-mTOR蛋白表达水平。与阴性对照组相比,27nt-miRNA组细胞的活力与增殖能力显著增强,且细胞凋亡率显著降低(P均<0.05),细胞周期G1期向S期分裂进程阻滞减弱(P<0.05);Bax和caspase-3蛋白表达量显著减少,Bcl-2蛋白表达量显著增加(P均<0.05);mTOR基因转录水平与p-mTOR蛋白表达水平均下降(P<0.05)。结论:27nt-miRNA通过负调控m TOR基因转录水平与蛋白磷酸化水平抑制VSMC凋亡,其机制可能与上调Bcl-2蛋白表达,下调Bax和caspase-3蛋白表达有关。

miR-200c通过激活Wnt/β-连环蛋白信号通路诱导膀胱癌细胞阿霉素耐药

目的:探讨miR-200c表达与膀胱癌细胞阿霉素(DOX)耐药的关系。方法:过表达或抑制miR-200c表达后,检测DOX对膀胱癌细胞(RT4、RT112、T24和TCCSUP)生长抑制作用的变化。Western blot检测miR-200c对Wnt/β-连环蛋白信号通路的影响,检测Wnt/β-连环蛋白信号激活剂Wnt3a干预对miR-200c诱导膀胱癌DOX耐药作用的影响。结果:抗miR-200c转染后,T24和RT4细胞DOX的耐药性显著下降。DOX干预后,与对照组细胞相比,抗miR-200c转染组膀胱癌细胞凋亡和S期积累明显增加。此外,抗miR-200c转染组膀胱癌细胞中Dkk1,Kremen2和s FRP2等Wnt/β-连环蛋白信号的负调控蛋白表达明显升高,Wnt/β-连环蛋白信号通路活性明显下降。Wnt3a干预能够拮抗抗miR-200c转染的膀胱癌细胞生长抑制作用。结论:miR-200c表达与膀胱癌细胞DOX耐药密切相关,且Wnt/β-连环蛋白信号通路激活介导了miR-200c诱导的膀胱癌细胞DOX耐药性。

颈动脉粥样硬化斑块性质与患者血清miRNA-126,miRNA-155水平的相关性研究

目的探讨血清miRNA-126,miRNA-155检测在评价颈动脉粥样硬化(carotid athero sclerosis,CAS)斑块性质中的临床应用价值。方法选择2015年5月~2017年5月在咸阳市中心医院和石泉县中医医院就诊的CAS患者75例作为研究对象,依据颈部增强CT检测结果分为易损斑块组(35例)和稳定斑块组(40例)。同时选取39例同期体检健康者作为对照组。采用实时逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术检测各组血清miRNA-126,miRNA-155表达水平。采用颈部增强CT检测各组颈动脉最大斑块厚度(MAPT)及内中膜厚度(IMT)。结果颈动脉MAPT及IMT在易损斑块组的检测结果为3.27±1.01mm,1.93±0.51mm;在稳定斑块组的检测结果为2.50±0.79mm,1.60±0.26mm。易损斑块组的颈动脉MAPT及IMT高于稳定斑块组,差异均有统计学意义(t=9.76,7.86,P<0.01)。血清miRNA-126和miRNA-155在易损斑块组中的表达量为0.22±0.06和0.87±0.18;在稳定斑块组的表达量为0.50±0.12和0.47±0.10;在对照组的表达量为0.90±0.19和0.19±0.05。稳定斑块组和易损斑块组血清miRNA-155表达水平显著高于对照组,而miRNA-126表达水平显著低于对照组,差异均有统计学意义(F=119.3,102.9,均P<0.01)。易损斑块组miRNA-155表达水平显著高于稳定斑块组,而miRNA-126表达水平显著低于稳定斑块组,差异均有统计学意义(F=119.3,102.9,P<0.01)。易损斑块组miRNA-126与miRNA-155表达水平呈负相关性(r=-0.912,P<0.01);在该组中miRNA-126表达水平与MAPT及IMT呈负相关(r=-0.913,-0.893,P<0.01),而miRNA-155表达水平与颈动脉两项指标则呈正相关(r=0.899,0.907,P<0.01)。结论血清miRNA-126,miRNA-155检测可应用于颈动脉粥样硬化斑块破裂的预测,并可能成为缺血性脑卒中事件发生的有效预警标志物。

miR⁃455⁃3p调控Keap1/Nrf2信号对气道平滑肌细胞凋亡的机制研究

目的探讨miR⁃455⁃3p调控Keap1/Nrf2信号对气道平滑肌细胞凋亡的影响。方法收集2021年1月至2023年1月我院普胸外科收治的60例COPD患者,作为COPD组;另选取60例无COPD病史的肺部良性肿瘤患者正常肺组织作为健康对照组(Control组)。分离气道平滑肌细胞(ASMCs),将COPD患者气道平滑肌细胞随机分为miR⁃455⁃3p组、miR⁃NC组、miR⁃455⁃3p+si⁃Nrf2组。RT⁃PCR检测Control组和COPD组患者中miR⁃455⁃3p的表达,并检测转染过不同质粒的各组COPD患者气道平滑肌细胞中miR⁃455⁃3p的表达。分别采用CCK⁃8、Transwell小室法及流式细胞仪检测COPD患者气道平滑肌细胞增殖、侵袭和凋亡能力;采用ELISA检测COPD患者气道平滑肌细胞培养上清液中IL⁃6、TNF⁃α水平;蛋白质印迹检测细胞中Keap1和Nrf2蛋白表达。结果与Control组相比,COPD组患者ASMCs中miR⁃455⁃3p表达降低(P<0.05);与NC组相比,miR⁃455⁃3p组ASMCs中miR⁃455⁃3p表达增加(P<0.05);与miR⁃455⁃3p组相比,miR⁃455⁃3p+si⁃Nrf2组ASMCs中miR⁃455⁃3p表达明显降低(P<0.05)。NC组和miR⁃NC组ASMCs增殖、侵袭、凋亡能力及IL⁃6和TNF⁃α水平相比差异无统计学意义(P>0.05);与miR⁃NC组相比,miR⁃455⁃3p组ASMCs增殖、侵袭能力及细胞上清液中IL⁃6、TNF⁃α水平明显降低,凋亡能力明显增加(P<0.05);与miR⁃455⁃3p组相比,miR⁃455⁃3p+si⁃Nrf2组ASMCs增殖、侵袭能力及细胞上清液中IL⁃6、TNF⁃α水平明显增加,凋亡能力明显降低(P<0.05)。NC组和miR⁃NC组细胞中Keap⁃1、Nrf2蛋白表达相比差异无统计学意义(P>0.05);与miR⁃NC组相比,miR⁃455⁃3p组细胞中Keap⁃1蛋白表达明显降低,Nrf2蛋白表达明显升高(P<0.05);与miR⁃455⁃3p组相比,miR⁃455⁃3p+si⁃Nrf2组细胞中Keap⁃1蛋白表达明显增加,Nrf2蛋白表达明显降低(P<0.05)。结论过表达miR⁃455⁃3p可抑制COPD患者气道平滑肌细胞增殖和侵袭,诱导凋亡,其作用机制和激活Keap1/Nrf2信号通路有关。