miR200家族在乳腺癌患者血浆中表达水平的检测及其临床意义

目的:检测microRNA200 (miR200)家族在乳腺癌患者和正常人血浆中表达水平,评价其对乳腺癌筛查、进展和预后评估的潜在价值。方法:收集82例乳腺癌患者(乳腺癌组)和30名健康女性(对照组)的血浆标本,提取血浆中的微小RNAs (miRNAs),逆转录后采用实时荧光定量PCR法检测2组受试对象血浆中miR200家族(miR200a、miR200b、miR200c、miR141和miR429)的表达水平;采用受试者工作特征(ROC)曲线评价血浆中miRNAs的诊断价值,分析乳腺癌患者血浆miRNAs表达水平与临床病理参数的关系;采用Cox风险比例模型进行生存分析。结果:乳腺癌组患者血浆中miR141表达水平低于对照组(P<0.01),ROC曲线下面积(AUC)为0.717 (P<0.01);miR200b表达水平低于对照组(P=0.006),AUC为0.685(P=0.003);但miR200a、miR200c和miR429表达水平与对照组比较差异无统计学意义(P=0.268,P=0.075,P=0.872)。联用miR141和miR200b时,AUC为0.735,比单用miR141稍有提升。miR200家族的表达水平与乳腺癌临床病理特征和术后总生存期无关联(P>0.05)。结论:miR200b和miR141有可能作为乳腺癌诊断的分子生物学指标。

miR⁃429靶向调控SIAH1基因对结直肠癌细胞LOVO增殖的影响

目的探讨miR⁃429靶向SIAH1基因对结直肠癌细胞系LOVO细胞增殖的影响。方法采用qRT⁃PCR检测正常结肠黏膜上皮细胞系NCM460和结直肠癌细胞系SW480、LOVO、HT⁃29中miR⁃429的表达。将miR⁃429 mimic和miR⁃429阴性对照序列(NC)转染至LOVO细胞,同时设置Control组。预测miR⁃429的靶基因并用双荧光素酶报告基因实验验证靶向关系。采用Western blot检测SIAH1蛋白的表达水平,MTT法检测细胞增殖情况,流式细胞术检测细胞周期分布情况。结果qRT⁃PCR检测结果显示,相对于NCM460细胞,miR⁃429在各结直肠癌细胞系中的表达均降低(均P<0.001)。双荧光素酶报告基因实验证实了SIAH1与miR⁃429的靶向关系。与NC组相比,过表达miR⁃429能抑制LOVO细胞中SIAH1蛋白的表达(P<0.001),细胞被阻滞在G0G1期,细胞增殖能力降低(P<0.001)。结论miR⁃429通过靶向SIAH1基因表达抑制LOVO细胞增殖。

miR-429对头颈部鳞状细胞癌增殖的影响

目的:研究micro RNA-429(mi R-429)对人头颈部鳞癌细胞增殖的影响。方法:通过q RT-PCR分析19例头颈部鳞状细胞癌患者肿瘤组织与癌旁正常组织标本中mi R-429的表达。通过mi R-429 mimics或mi R-429 ASO上调或抑制人喉癌细胞株(Hep-2)和人舌鳞状细胞癌株(SCC-9)细胞中mi R-429的水平。用MTT实验分析上调或抑制mi R-429的表达水平对Hep-2和SCC-9细胞增殖的影响,并利用生物信息学方法预测mi R-429的靶基因。结果 :q RT-PCR结果表明头颈部鳞状细胞癌组织中mi R-429表达水平较低;上调mi R-429表达能抑制Hep-2和SCC-9细胞的增殖,而抑制mi R-429表达能促进Hep-2和SCC-9细胞的增殖。生物信息学方法预测mi R-429的靶基因为ZEB1基因。结论:mi R-429可能通过ZEB1基因抑制头颈部鳞状细胞癌的增殖。

胃癌中微小RNA表达谱及miR-429表达水平的研究

目的检测胃癌组织及胃癌细胞中微小RNA（miRNA）表达谱，并测定胃癌组织及胃癌细胞中miR-429的表达水平。方法采用基因芯片技术检测胃癌组织、癌旁正常胃组织标本及胃癌细胞株（SGC-7901）、正常人胃上皮细胞（GES-1）中miRNAs的表达。挑选基因芯片结果中胃癌组织表达显著下调的miR-429，并采用实时定量聚合酶链反应（qRT-PCR）检测7例正常胃组织、52例胃癌组织、胃癌细胞SGC-7901、GES-1中miR-429的表达。结果基因芯片结果表明，胃癌组织中有23个miRNA上调，如miR-21、miR-30b等，31个下调如miR-429、miR-200等。qRT—PCR检测显示，miR-429在胃癌组织中下降约63．4％（P〈0．01），在胃癌细胞株SGC7901中下降约76．2％（P〈0．01）。结论miR-429在胃癌组织中表达显著下调，可能作为胃癌特异性miRNA，在胃癌的发生发展过程中有重要作用。