lncRNA-TNFRSF13C调控miR-1246对牙周细胞低氧诱导因子1α的作用

背景:LncRNA-TNFRSF13C是B细胞发育和功能中的一个重要因子,在牙周炎患者牙周组织中高表达,但具体机制还不清楚。目的:探讨lncRNA-TNFRSF13C调控miR-1246对牙周细胞低氧诱导因子1α的作用机制。方法:人牙周膜细胞经过脂多糖处理后分为7组:A组(无转染的人牙周膜细胞株)、B组(人牙周膜细胞株转染TNFRSF13C NC-siRNA)、C组(人牙周膜细胞株转染TNFRSF13C-siRNA)、D组(人牙周膜细胞株转染miR-1246 mimics)、E组(人牙周膜细胞株转染miR-1246 siRNA)、F组(人牙周膜细胞株转染TNFRSF13C-siRNA+miR-1246 mimics)及G组(人牙周膜细胞株转染TNFRSF13C-siRNA+miR-1246 siRNA)。采用qRT-PCR检测各组细胞lncRNA-TNFRSF13C、miR-1246相对表达;CCK-8检测细胞活性;流式细胞仪检测细胞凋亡率;免疫印迹检测细胞中低氧诱导因子1α、血管内皮生长因子蛋白的表达;Pearson分析lncRNA-TNFRSF13C与miR-1246相关性,双荧光素酶分析靶向关系。结果与结论:①A、B两组人牙周膜细胞活性、凋亡率及蛋白指标比较差异均无显著性意义(P>0.05),与B组相比,C组细胞活性升高、凋亡率及低氧诱导因子1α、血管内皮生长因子蛋白降低(P<0.05),与C组相比,D组细胞活性降低,凋亡率及低氧诱导因子1α、血管内皮生长因子蛋白均升高(P<0.05),D组相比,E组细胞活性升高(P<0.05),F组细胞活性低于E组,E、F组细胞凋亡率降低(P<0.05),与F组相比,G组细胞活性升高、凋亡率及低氧诱导因子1α、血管内皮生长因子蛋白降低(P<0.05)。②lncRNA-TNFRSF13C与miR-1246呈现正相关(P<0.05)。③TNFRSF13C-siRNA组与TNFRSF13C-NC组在miR-1246-wt荧光活性降低(P<0.05);与miR-1246-NC组相比,miR-1246 mimics组低氧诱导因子1α-wt、血管内皮生长因子-wt荧光活性升高(P<0.05)。④结果说明,下调lncRNA-TNFRSF13C对脂多糖处理的牙周细胞具有促进活性、降低凋亡的作用,同时也可抑制低氧诱导因子1α、血管内皮生长因子的表达,其机制与调控miR-1246活性相关。

miR-595、miR-1246在溃疡性结肠炎血清中的表达及其与肠道菌群相关性研究

目的:探讨miR-595、miR-1246在溃疡性结肠炎血清中的表达及其与肠道菌群相关性。方法:选取溃疡性结肠炎病人160例作为观察组,并根据疾病活动性分为活动期(aUC组)和缓解期(rUC组),各80例。同期选取健康体检者158名作为对照组。采用实时荧光定量PCR法检测各组血清中miR-595、miR-1246表达水平;采用ELISA法检测各组血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素(IL)-6、IL-22水平;采集各组新鲜粪便,使用梯度稀释法对菌群进行培养。结果:aUC组和rUC组病人miR-595、miR-1246表达和TNF-α、IL-6、IL-22水平均高于对照组(P<0.05),aUC组亦均高于rUC组(P<0.05)。aUC组和rUC组乳酸杆菌、双歧杆菌数量均低于对照组(P<0.05),aUC组亦均低于rUC组(P<0.05);aUC组肠球菌、大肠埃希菌数量均明显高于对照组和rUC组(P<0.05)。Pearson相关分析显示,miR-595、miR-1246表达水平和TNF-α、IL-6、IL-22水平与乳酸杆菌、双歧杆菌数目均呈负相关关系(P<0.05),而以上指标与肠球菌、大肠埃希菌数目均呈正相关关系(P<0.05)。结论:溃疡性结肠炎病人血清中miR-595、miR-1246表达上调,且与肠道菌群数量存在相关关系。

miR-1246对人宫颈癌SiHa细胞增殖、侵袭、迁移能力的影响及其靶基因的初步研究

目的探讨miR-1246对人宫颈癌SiHa细胞增殖、侵袭、迁移能力的影响。方法将SiHa细胞分成3组,分别转染miR-1246mimics(模拟物)、miR-1246inhibitor(抑制物)、空白质粒,并测定转染效率。采用MTT法对比转染后SiHa细胞增殖能力的区别;Transwell小室、划痕实验对比转染后SiHa细胞侵袭、迁移能力的区别;Western blot对比转染后SiHa细胞表达THBS2(血小板反应蛋白2)的区别。构建THBS2的3UTR双荧光素酶质粒,与miR-1246共转染入SiHa细胞,检测荧光素酶的相对活性。结果转染miR-1246mimics的SiHa细胞,MTT试验显示其增殖能力较另外两组强;划痕实验显示细胞的迁移能力较另两组强;迁移、侵袭实验显示该组细胞穿膜数量较另外两组多(P<0.01);WB实验显示其THBS2蛋白低表达(灰度值6.28±10.22,与空白对照组相比P=0.013)。转染miR-1246inhibitor的SiHa细胞,MTT试验显示其生长速度较另外两组慢;划痕实验显示细胞的迁移能力较另两组弱;迁移、侵袭实验显示该组细胞穿膜数量较另外两组少(P<0.01);WB实验显示其THBS2蛋白表达稍高(灰度值12.90±19.81,与空白对照组相比P=0.037)。共转染miR-1246mimics和包含THBS2的3UTR端双萤光素酶质粒后,SiHa细胞荧光素酶表达降低。结论 miR-1246对人宫颈癌SiHa细胞的增殖、侵袭、迁移能力有促进作用,THBS2是其靶基因,降调靶蛋白THBS2的表达,可能是miR-1246促进宫颈癌发生发展的其中一个机制。

miR-1246通过靶向GSK3β促进食管癌转移的机制

目的:探讨miRNA-1246(miR-1246)促进食管癌细胞转移的作用及其机制。方法:Realtime-PCR法检测miR-1246在癌旁组织、食管癌组织、正常食管上皮和食管癌细胞系中的表达差异。Transwell侵袭实验观察转染miR-1246 mimics或inhibitors对食管癌细胞EC109转移能力的影响;裸鼠尾静脉转移实验观察稳定表达miR-1246对食管癌转移能力的影响;生物信息学分析miR-1246的候选靶基因为GSK3β,荧光素酶报告基因实验检测过表达miR-1246后EC109细胞中野生型和突变型GSK3β的荧光素酶活性。Western blot检测miR-1246对GSK3β蛋白表达的影响。结果:食管癌组织中的miR-1246表达显著高于癌旁组织(P<0.05);多个食管癌细胞中miR-1246的表达比正常食管上皮细胞Het-1A明显增高(P<0.05)。与阴性对照相比,miR-1246 mimics显著促进EC109细胞的侵袭能力(P<0.05)。反之,miR-1246 inhibitors明显抑制EC109细胞的侵袭能力(P<0.05);体内实验发现稳定过表达miR-1246明显升高EC109细胞的肺转移能力。荧光素酶报告基因结果证实miR-1246能够抑制GSK3β的3'-UTR区荧光素酶活性;转染miR-1246后,EC109细胞中的GSK3β蛋白水平明显低于对照组;miR-1246过表达显著抑制GSK3β-wt,而不能抑制GSK3β-mut的蛋白表达。结论:miR-1246能够通过靶向GSK3β促进食管癌转移,抑制miR-1246的表达或增加GSK3β的表达可能是抑制食管癌转移的有效手段。

哈巴苷通过抑制miR-1246表达对LPS诱导的人牙周膜细胞损伤的影响

目的:探讨哈巴苷对LPS诱导的人牙周膜细胞(hPDLCs)损伤的影响及分子机制。方法:hPDLCs分为Con组、LPS组、哈巴苷低、中、高浓度组(LPS+HG-L、M、H)、LPS+anti-miR-NC组、LPS+anti-miR-1246组、LPS+HG+miR-NC组、LPS+HG+miR-1246组。ELISA检测TNF-α、IL-1β水平;流式细胞术检测细胞凋亡;Western blot法检测蛋白表达;实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测miR-1246表达水平。结果:LPS诱导的hPDLCs中TNF-α、IL-1β水平升高,细胞凋亡率升高,Bcl-2表达水平降低,Bax表达水平升高,miR-1246表达水平升高(P<0.05)。哈巴苷低、中、高浓度处理后,LPS诱导的hPDLCs中TNF-α、IL-1β水平降低,细胞凋亡率降低,Bcl-2表达水平升高,Bax表达水平降低,miR-1246表达水平降低,且呈浓度依赖性(P<0.05)。抑制miR-1246表达后,LPS诱导的hPDLCs中TNF-α、IL-1β水平降低,细胞凋亡率降低,Bcl-2表达水平升高,Bax表达水平降低(P<0.05)。miR-1246过表达逆转了哈巴苷对LPS诱导的hPDLCs损伤的作用。结论:哈巴苷通过抑制miR-1246表达保护hPDLCs免受LPS诱导的损伤。

miR-1246在疾病上的研究进展

miRNAs是一类具有转录调控功能的小分子非编码RNA,参与了组织代谢和细胞增殖、分化、凋亡及基因表达,在许多生理和病理过程中扮演着重要的角色。目前,研发有效的miRNA激活剂或抑制剂来挽救和诊断病理状态,已成为医学研究领域的新方向和切入点。最新发现的miR-1246受P53调控,并与产生疾病的分子机制息息相关。综述了miR-1246序列结构特点及分子作用机制,对近年来miR-1246在癌症、埃博拉病毒传染病、唐氏综合症等疾病上的应用潜能进行了总结,并对该领域今后的发展前景作了展望,旨为医学研究提供理论参考。

miR-1246和miR-1261在模拟失重48 h后人肺微血管内皮细胞中的表达及生物信息学分析

目的:检测模拟失重48 h人肺微血管内皮细胞(HMVEC-L)miR-1246和miR-1261表达的改变,利用生物信息学方法分析预测其靶基因。方法:以回转器行模拟失重效应48 h的HMVEC-L为模拟失重组,同时设正常重力对照组,比较两组细胞miRNA表达谱的变化,应用Real-time PCR检测HMVEC-L细胞miR-1246和miR-1261的表达,通过Target Scan、miRDB和miRanda对miR-1246和miR-1261的靶基因进行预测以及功能注释和通路富集分析。结果:与正常重力对照组比较,模拟失重48 h可引起HMVEC-L细胞中29种miRNA呈现显著差异性表达,miR-1246和miR-1261显著降低,差异有统计学意义(P<0.05);生物信息学分析显示miR-1246和miR-1261的靶基因涉及生物过程、分子功能及细胞组成等多种功能,主要参与了磷酸化通路、凋亡相关通路和细胞骨架等相关分子的调控。结论:模拟失重48 h后可引起HMVEC-L细胞miR-1246和miR-1261的表达降低,提示其可能参与了模拟失重后内皮细胞功能异常的调控。

慢性牙周炎患者唾液中miR-1246的表达及其临床意义

目的探讨慢性牙周炎(CP)患者唾液中miR-1246的表达及其临床意义。方法选取2017年1月~2019年5月保定市第二中心医院收治的94例CP患者作为CP组和50例体检正常者作为对照组。CP患者分为轻度牙周炎组(n=23),中度牙周炎组(n=37)和重度牙周炎组(n=35),检测各组唾液中miR-1246的表达水平。对CP患者进行牙周基础治疗,分别检测治疗前和治疗6周后患者唾液中miR-1246的表达水平,并检查牙周探诊深度(PD),附着丧失(AL),菌斑指数(PLI)和出血指数(BI)各项牙周临床指标。采用Pearson相关分析CP患者miR-1246表达水平与PD,AL,PLI及BI的相关性。结果CP组唾液中miR-1246表达水平明显高于对照组(7.28±2.56 vs 3.52±1.14),差异有统计学意义(t=16.294,均P<0.01)。重度组唾液中miR-1246表达水平均明显高于中度组和轻度组(10.47±3.38 vs 7.38±2.70,4.24±1.30),差异有统计学意义(t=13.516,21.482,P<0.01)。CP患者治疗后唾液中miR-1246表达水平明显低于治疗前(4.75±1.61 vs 7.28±2.56),差异有统计学意义(t=10.490,P<0.01)。CP患者治疗后PD(2.84±0.72mm vs 5.16±1.30 mm),AL(3.08±0.64mm vs 5.62±1.15 mm),PLI(1.13±0.28 vs 2.62±0.41)及BI(2.95±0.58 vs 1.64±0.47)均明显低于治疗前,差异均有统计学意义(t=8.742~10.873,均P<0.01)。相关分析显示,治疗前后CP患者miR-1246表达水平与PD,AL,PLI及BI均呈正相关(r=0.592~0.874,均P<0.01)。结论CP患者唾液中miR-1246表达水平明显升高,治疗后明显下降,其表达水平与CP严重程度和牙周炎临床指标密切相关,有望为CP的防治提供新的思路。

高级别浆液性卵巢癌患者血清miR-1246和miR-2278检测水平的临床诊断价值

目的研究高级别浆液性卵巢癌(high-grade serous ovarian cancer,HGSOC)患者血清miR-1246和miR-2278检测水平的临床诊断价值。方法选取西安高新医院妇科收治的55例HGSOC患者为试验组,另选取同期51例体检健康者为对照组,采用实时荧光定量PCR(rt-qPCR)检测血清中miR-1246和miR-2278的水平,用受试者工作特征曲线(Receiver operating characteristic curve,ROC)分析血清中糖类抗原125(carbohydrate antigen 125,CA125),miR-1246和miR-2278单独和联合检测的诊断效能。结果试验组患者的CA125,miR-1246和miR-2278水平均显著高于对照组,差异具有统计学意义(t=7.39~9.35,均P<0.05)。ROC曲线分析显示,CA125,miR-1246和miR-2278联合检测的敏感度和特异度分别为98.7%和79.5%,高于单一检测指标。血清miR-1246和miR-2278上调在FIGO分期、有无淋巴结转移和有无复发比较差异无统计学意义(χ^(2)=1.07~1.97,均P>0.05),血清miR-1246和miR-2278上调在远处转移患者中的比例显著高于无远处转移患者,差异具有统计学意义(χ^(2)=12.31,P=0.00)。结论血清miR-1246和miR-2278联合CA125水平检测对诊断HGSOC有潜在的应用价值。

血清miRNA-1246检测在早期乳腺癌诊断中的应用价值

目的探讨血清miRNA-1246检测在早期乳腺癌诊断中的应用价值。方法回顾性分析112例早期乳腺癌患者和104例乳腺良性病变患者的临床资料,应用荧光定量聚合酶链反应(qPCR)检测血清miRNA-1246的相对表达量,应用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清糖类抗原15-3(CA15-3)、癌胚抗原(CEA)、糖类抗原125(CA125)、糖类抗原19-9(CA19-9)水平。应用Spearman法分析早期乳腺癌患者血清miRNA-1246与血清CA15-3、CEA、CA125、CA19-9表达水平的相关性,应用受试者操作特征(ROC)曲线分析miRNA-1246对早期乳腺癌的诊断价值。结果 qPCR检测结果显示,早期乳腺癌患者的血清miRNA-1246相对表达量为(1.75±0.32),明显高于乳腺良性病变患者的(1.18±0.30),差异有统计学意义(P﹤0.01)。Spearman相关分析结果显示,早期乳腺癌患者的血清miRNA-1246水平与血清CA15-3、CEA、CA125和CA19-9表达水平均呈明显正相关(r=0.646、0.573、0.721、0.597,P﹤0.01)。ROC曲线分析结果显示,miRNA-1246诊断早期乳腺癌的的ROC曲线下面积为0.783(95%CI:0.670～0.914),当血清miRNA-1246相对表达量为1.34时,约登指数最大,此时灵敏度为90.9%,特异度为70.2%。结论 miRNA-1246在早期乳腺癌患者的血清中表达水平较高,是诊断早期乳腺癌的潜在生物标志物。

宫颈鳞癌患者血清miR-1246的表达及其临床意义

目的探讨miR-1246在宫颈鳞癌患者血清中的表达并分析其在宫颈鳞癌诊断、术后恢复及复发监测中的价值。方法采用RT-qPCR法检测宫颈鳞癌、鳞状上皮内病变(CIN)患者以及健康体检妇女血清miR-1246的表达,分析其与肿瘤临床病理特征的相关性。随访60例手术治疗的宫颈鳞癌患者及8例复发患者(复发组)血清miR-1246含量,评估其作为术后恢复、术后复发监测的肿瘤标志物的意义。结果宫颈鳞癌患者血清中miR-1246含量明显高于CIN患者与健康体检妇女(P<0.001)。miR-1246的高表达与宫颈鳞癌患者的FIGO分期、肿瘤大小、淋巴结转移、脉管浸润密切相关(均P<0.05)。宫颈鳞癌患者血清中miR-1246的表达水平,从术后1周(0.60±0.46)到术后1月(0.42±0.28)逐渐下降(P<0.001),并于术后1月恢复到健康妇女水平;8例宫颈鳞癌术后复发患者,血清中miR-1246的表达水平较健康体检妇女明显升高(P<0.05)。结论血清miR-1246有助于宫颈鳞癌早期诊断和术后恢复监测,并可作为宫颈鳞癌术后复发的辅助判断指标。

miR-1246对人宫颈癌上皮-间质转化及其增殖、侵袭和迁移能力影响的初步研究

目的探讨miR-1246水平变化对人宫颈癌SiHa细胞上皮-间质转化(EMT)及其增殖、侵袭和迁移能力的影响。方法体外向SiHa细胞分别转染miR-1246模拟物(miR-1246-mimics组)及阴性对照(mimics-NC组)、miR-1246抑制物(miR-1246-inhibitor组)及阴性对照(Inhibitor-NC组),以未作处理的SiHa细胞为空白对照组。通过流式细胞术和实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测转染效率。采用Western blotting检测转染后细胞E-钙黏蛋白(E-cadherin)、N-钙黏蛋白(N-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)及Twist-2蛋白的表达水平。通过CCK-8法、流式细胞术、Transwell小室实验和划痕实验检测转染后SiHa细胞的增殖、凋亡、侵袭和迁移能力。结果流式细胞术结果显示,各组细胞转染效率均在90%以上。qRT-PCR结果显示,与空白对照组和阴性对照组比较,miR-1246-mimics组miR-1246的相对表达量显著增高,而miR-1246-inhibitor组明显降低(P<0.05)。Western blotting结果显示,与阴性对照组比较,miR-1246-mimics组E-cadherin蛋白表达水平降低而N-cadherin、Vimentin和Twist-2蛋白表达水平显著增加(P<0.05),而miR-1246-inhibitor组E-cadherin蛋白表达水平增加而N-cadherin、Vimentin和Twist-2蛋白表达水平显著降低(P<0.05)。与阴性对照组比较,miR-1246-mimics组细胞增殖、侵袭和迁移能力均显著提高(P<0.05),而细胞凋亡率显著降低(P<0.05);与阴性对照组比较,miR-1246-inhibitor组细胞增殖、侵袭和迁移能力均显著降低(P<0.05),而细胞凋亡率显著提高(P<0.05)。结论过表达miR-1246可能通过EMT促进宫颈癌SiHa细胞的增殖、侵袭及迁移并诱导细胞凋亡。

乳腺癌患者血清中miRNA-21、miRNA-210、miRNA-1246的表达及临床意义

目的研究血清miRNA在乳腺癌(BC)患者及正常人群血清中的表达情况及临床诊断中的价值。方法收集BC患者及健康体检者血清,通过实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测各组miRNA-21、miRNA-210、miRNA-1246的表达情况。分析单个血清miRNA及多个血清miRNA联合检测对BC的诊断价值。结果与健康体检者比较,BC患者血清中miRNA-21、miRNA-210、miRNA-1246表达均增加(均P=0.000),且3者在BC III期患者或有淋巴结转移的患者中高表达(P<0.05)。血清miRN-A21、miRNA-210、miRNA-1246诊断BC患者的受试者工作特征曲线下面积(AUC)分别为0.936(95%CI:0.866,0.976)、0.980(95%CI:0.928,0.998)、0.737(95%CI:0.638,0.822),特异性为0.854(95%CI:0.722,0.939)、0.917(95%CI:0.857,0.995)、0.583(95%CI:0.432,0.724)。且miRNA-210和miRNA-1246联合检测,miRNA-21、miRNA-210和miRNA-1246联合检测的诊断效能并不优于miRNA-210单独检测。Fisher判别分析建立BC的最佳诊断模型,该模型排除非患者的能力较好,而发现患者的能力相对较弱(敏感性为62.5%;特异性为100.0%)。结论 miRNA-21、miRNA-210、miRNA-1246在BC患者血清中高表达,miRNA-210单独诊断效能较好,血清miR-210可能是一种理想的BC诊断标志物。

血清miR-1246、HE4、YKL-40对浆液性卵巢癌级别的诊断价值及与预后的关系

目的探讨血清miR-1246、人附睾蛋白4(HE4)、甲壳质酶蛋白-40(YKL-40)对浆液性卵巢癌级别的诊断价值及与预后的关系。方法将安徽省庐江县人民医院2019年1月至2020年7月收治的浆液性卵巢癌患者87例纳入研究。根据病理检查确定的浆液性卵巢癌级别,将纳入研究的患者分为低级别组(30例)与高级别组(57例),比较两组血清miR-1246、HE4、YKL-40水平,分析各血清指标与浆液性卵巢癌级别的关系及诊断价值。对纳入研究的患者进行2年随访,统计2年生存率,对比不同血清miR-1246、HE4、YKL-40水平患者2年生存率。结果高级别组血清miR-1246、HE4、YKL-40水平高于低级别组(P<0.05)。Spearman相关分析显示,血清miR-1246、HE4、YKL-40与浆液性卵巢癌级别呈正相关(r=0.625、0.714、0.703,P<0.001)。受试者工作特征(ROC)曲线分析显示,血清miR-1246、HE4、YKL-40联合诊断浆液性卵巢癌级别的曲线下面积(AUC)为0.938(95%CI:0.865~0.979),约登指数为0.775,灵敏度为84.21%,特异度为93.33%,优于三者单独诊断。2年随访过程中,有4例患者失访,剩余的83例浆液性卵巢癌患者2年生存率为67.46%(56/83)。以通过绘制ROC曲线获取的最佳截断值作为患者各指标高、低水平的判断标准,血清miR-1246、HE4、YKL-40高水平患者2年生存率分别低于各指标低水平患者(P<0.05)。结论血清miR-1246、HE4、YKL-40与浆液性卵巢癌级别呈正相关,3项指标联合诊断的价值最高,且与生存预后联系紧密,可为临床诊治提供参考。

血清miR-1246、CXCL12和CXCR4水平预测非小细胞肺癌患者术后预后的效能

目的观察血清miR-1246、趋化因子基质细胞衍生因子-1(CXCL12)和CXC趋化因子受体4(CXCR4)在非小细胞肺癌(NSCLC)患者术后预后中的预测价值。方法选择2019年1月至2020年6月在该院手术治疗的98例NSCLC患者为NSCLC组。选择同期该院肺部良性疾病患者75例和健康体检者75例分别纳入肺良性疾病对照组和健康对照组。比较3组血清miR-1246、CXCL12和CXCR4水平,比较不同特征及不同预后NSCLC患者血清miR-1246、CXCL12和CXCR4水平,分析3项指标预测NSCLC术后两年内发生预后不良的效能。结果NSCLC组术前血清miR-1246水平明显低于肺良性疾病对照组和健康对照组,肺良性疾病对照组也明显低于健康对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。NSCLC组中,术后miR-1246水平较术前明显升高,差异有统计学意义(P<0.05)。NSCLC组术前血清CXCL12和CXCR4水平较肺良性疾病对照组和健康对照组明显升高,肺良性疾病对照组明显高于健康对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。NSCLC组中,术后血清CXCL12和CXCR4水平较术前明显降低,差异有统计学意义(P<0.05)。低分化、Ⅲ+Ⅳ期和有淋巴结转移的NSCLC患者血清miR-1246水平明显低于高中分化、Ⅰ+Ⅱ期和无淋巴结转移的NSCLC患者,差异有统计学意义(P<0.05);而低分化、Ⅲ+Ⅳ期和有淋巴结转移的NSCLC患者血清CXCL12和CXCR4水平明显高于高中分化、Ⅰ+Ⅱ期和无淋巴结转移的NSCLC患者,差异有统计学意义(P<0.05)。预后不良者血清miR-1246水平明显低于预后良好者,而预后不良者血清CXCL12和CXCR4水平明显高于预后良好者,差异有统计学意义(P<0.05)。3项指标联合检测的灵敏度为82.1%,特异度为84.7%,曲线下面积为0.910,其AUC明显高于miR-1246(Z=3.131,P=0.002)、CXCL12(Z=2.998,P=0.003)和CXCR4(Z=3.022,P=0.003)单独检测。结论miR-1246、CXCL12和CXCR4参与了NSCLC的发生、发展过程,联合检测miR-1246、CXCL12和CXCR4预测NSCLC术后两年内发生预后不良具有较高的效能。

M2巨噬细胞来源的外泌体miR-1246调控胃癌细胞的生长和侵袭

目的探讨M2巨噬细胞来源的外泌体miR-1246对胃癌AGS细胞增殖,凋亡和侵袭的影响。方法采用IL-4和IL-13诱导M2巨噬细胞后,分离其外泌体,并通过透射电镜和免疫印迹法进行鉴定。M2巨噬细胞分别转染NC inhibitor和miR-1246 inhibitor后,分离对应外泌体与AGS细胞共培养,并采用CCK-8,Annexin V-FITC/PI和Transwell分别检测AGS细胞增殖,凋亡和侵袭。TargetScan数据库预测miR-1246下游靶标,并通过双荧光素酶报告基因实验对miR-1246和GSK3B的靶向关系进行验证。结果M2巨噬细胞中分离的外泌体大小为50~150 nm,且表达ALIX,CD63和TSG101。M2巨噬细胞来源外泌体增加AGS细胞活力(P<0.05)和侵袭细胞数(P<0.01),并降低其凋亡比例(P<0.01)。敲低外泌体中miR-1246的表达,AGS细胞的表型变化得到回复(P<0.01)。外泌体miR-1246靶向GSK3B,并调控β-catenin和c-Myc的表达,M2巨噬细胞来源外泌体miR-1246靶向GSK3B促进胃癌细胞增殖和侵袭、并抑制其凋亡(P<0.001)。结论M2巨噬细胞来源外泌体miR-1246靶向GSK3B介导Wnt通路激活促进胃癌细胞增殖和侵袭,并抑制其凋亡。

毛蕊异黄酮通过上调miRNA-1246表达对肾癌细胞增殖和迁移的抑制作用

目的通过观察毛蕊异黄酮对人肾癌769-P细胞增殖和迁移的影响,探究毛蕊异黄酮抗肾癌可能的作用机制。方法使用不同质量浓度的毛蕊异黄酮[0、12.5、25、50、100、200μmol/L,二甲基亚砜(DMSO)溶解]培养769-P细胞,CCK8法检测不同浓度的毛蕊异黄酮对769-P细胞活力的影响。以200μmol/L毛蕊异黄酮处理的769-P细胞作为毛蕊异黄酮组,以DMSO处理的769-P细胞作为对照组。细胞克隆形成实验、细胞划痕实验分别检测毛蕊异黄酮对769-P细胞增殖和迁移能力的影响。实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测毛蕊异黄酮对769-P细胞中miRNA-1246和趋化因子受体4(CXCR4)表达的影响。Western blotting法检测毛蕊异黄酮对769-P细胞中CXCR4和细胞外信号调节激酶(ERK)通路蛋白表达的影响。计量资料以均数±标准差(x±s)表示,多组间比较采用单因素方差分析,两组间比较采用t检验。结果采用0、12.5、25、50、100、200μmol/L毛蕊异黄酮培养后,肾癌769-P细胞吸光度值分别为0.99±0.06、0.74±0.07、0.60±0.03、0.55±0.05、0.40±0.06、0.21±0.04,与0μmol/L比较,毛蕊异黄酮能够降低769-P细胞的存活率(P<0.05)。对照组和毛蕊异黄酮组769-P细胞克隆数量分别为(109.80±13.19)个和(60.66±11.22)个,毛蕊异黄酮组769-P细胞克隆数量降低,差异具有统计学意义(t=5.67,P<0.01)。对照组和毛蕊异黄酮组769-P细胞相对迁移率分别为(43.13±3.82)%和(14.27±3.25)%,毛蕊异黄酮处理769-P细胞后,细胞迁移能力减弱,差异具有统计学意义(t=5.71,P<0.05)。对照组和毛蕊异黄酮组769-P细胞中miRNA-1246的相对表达量分别为1.03±0.12和6.99±1.84,CXCR4 mRNA的相对表达量分别为7.17±2.96和0.98±0.06,毛蕊异黄酮能够上调769-P细胞中miRNA-1246的表达(t=3.24,P<0.01),下调CXCR4 mRNA的表达(t=4.18,P<0.01)。与对照组相比,毛蕊异黄酮能够下调769-P细胞中CXCR4蛋白和ERK通路蛋白表达。结论毛蕊异黄酮能抑制肾癌769-P细胞增殖和迁移,其机制可能与上调miRNA-1246表达进而阻断CXCR4/ERK通路有关。

外周血miRNA-124对前列腺癌患者临床和病理特征的影响及对预后判断的价值

目的探讨外周血miRNA-1246对前列腺癌患者临床、病理特征的影响及对预后判断的价值。方法选取88例行手术治疗的前列腺癌患者作为前列腺癌组,同时选取62例单纯性前列腺增生患者及60例健康志愿者分别作为增生组和健康对照组,采用反转录实时荧光定量PCR检测外周血miR-1246的表达水平,并进行随访。统计分析miR-1246表达水平与患者临床、病理特征和生存期的影响。结果与增生组、健康对照组比较,前列腺癌组的外周血miR-1246表达水平较高,差异有统计学意义(P<0.05)。miR-1246表达水平对患者Gleason评分、T分期、N分期、M分期、危险因素分级有明显的不良影响(P<0.05)。miR-1246低表达水平与高表达水平患者的总体生存率比较,差异无统计学意义(P=0.232),但低表达组患者的无生化复发生存期显著高于高表达组(P<0.05),Cox多因素分析显示,miR-1246表达水平也是影响患者无生化复发生存期的独立性危险因素(P<0.05)。结论miR-1246的高表达对前列腺癌患者的临床病例特征有一定的不良影响,且与患者的生化复发密切相关。

miR-1246靶向StarD13对乳腺癌细胞影响的研究

目的探讨miR-1246促进乳腺癌细胞增殖、迁移与侵袭能力的分子机制.方法生物信息学分析miR-1246的表达及其与乳腺癌患者生存率的关系.实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-RCR)评估miR-1246在乳腺癌细胞和乳腺癌组织中的表达,Transwell小室检测细胞侵袭能力,EdU实验和克隆实验检测细胞增殖能力,划痕实验检测细胞迁移能力,生物信息学方法确定miR-1246的靶蛋白StarD13在乳腺癌中表达情况及生存率曲线,双荧光素酶报告基因检测miR-1246与StarD13的关系,蛋白质印迹法实验检测下调miR-1246后相关靶蛋白StarD13的表达情况.采用独立样本t检验分析两组之间的定量数据,采用单一因素方差分析进行多组之间的比较.结果miR-1246在乳腺癌组织和乳腺癌细胞MDA-MB-231中均高表达.Transwell实验结果显示,下调miR-1246后miR-1246 inhibitor组细胞较NC inhibitor组细胞侵袭能力降低,t=9.14,P<0.01.EdU实验结果显示,下调miR-1246后细胞增殖能力下降,t=6.81,P<0.01.克隆形成实验表明,下调miR-1246后细胞的增殖能力下降,t=5.41,P<0.01.划痕实验结果显示,miR-1246 inhibitor和NC inhibitor组的细胞迁移率分别为(0.21±0.02)%和(0.50±0.04)%,差异具有统计学意义,t=13.13,P<0.01.生物信息学预测miR-1246与StarD13之间存在互补序列;StarD13在乳腺癌组织中低表达,且低表达StarD13的乳腺癌患者预后较差,P<0.01.转染miR-1246抑制物时StarD13的表达量增加.双荧光素酶报告基因实验证实StarD13可作为miR-1246的靶基因.EdU实验结果显示,miR-1246 inhibitor+siStarD13组细胞[(55.89±1.95)%]比miR-1246 in-hibitor+NC组细胞[(25.24±6.17)%]EdU阳性率有提高,差异有统计学意义,t=8.21,P<0.01.Transwell实验表明,与miR-1246 inhibitor+NC组(127.67±23.46)比较,miR-1246 inhibitor+siStarD13组(385.67±11.59)穿过基底膜细胞数量明显增多,差异具有统计学意义,t=17.08,P<0.001.结论miR-1246可通过靶向调控StarD13促进乳腺癌细胞增殖、迁移与侵袭能力.

LncRNA-TNFRSF13C调控miR-1246对LPS诱导的牙髓细胞HIF-1α及生物活性的影响

目的:探讨LncRNA-TNFRSF13C调控miR-1246对脂多糖(lipopolysaccharides, LPS)诱导的牙髓细胞低氧诱导因子-1α(hypoxia-inducible factor 1α,HIF-1α)及生物活性的影响机制。方法:将人牙髓细胞(human dental pulp cells, HDPCs)经LPS处理后,分为HDPCs组、TNFRSF13C NC-siRNA组、TNFRSF13C-siRNA组、sno-TNFRSF13C组、miR-NC组、miR-1246 mimics组、miR-1246 siRNA组、TNFRSF13C-siRNA+miR-1246 siRNA组。qRT-PCR检测各组细胞LncRNA-TNFRSF13C、miR-1246相对表达;免疫印迹检测各组细胞HIF-1α蛋白表达;CCK-8检测各组细胞活性;流式细胞仪检测细胞凋亡率;茜素红染色观察细胞矿化情况。结果:与HDPCs组、TNFRSF13C NC-siRNA组相比,TNFRSF13C-siRNA组HIF-1α表达量、细胞凋亡率、LncRNA-TNFRSF13C表达降低,细胞增殖率升高(P<0.05)。与miR-NC组相比,miR-1246 siRNA组HIF-1α表达量、细胞凋亡率、miR-1246表达水平降低,细胞增殖率升高(P<0.05)。与TNFRSF13C-siRNA组、miR-1246 siRNA组相比,TNFRSF13C-siRNA+miR-1246 siRNA组HIF-1α表达量、细胞凋亡率降低,细胞增殖率升高(P<0.05)。TNFRSF13C-siRNA组、miR-1246 siRNA组存在更多的矿化结节及不透光致密影;TNFRSF13C-siRNA+miR-1246 siRNA组存在大量矿化结节,致密深染。结论:抑制LncRNA-TNFRSF13C对LPS处理的HDPCs具有促进活性,降低凋亡的作用,促进HDPCs矿化,同时也可抑制HIF-1α,研究机制与调控miR-1246活性相关。