miRNA-106a在人淋巴瘤Jurkat细胞中的表达及作用机制

目的探讨miRNA-106a在人淋巴瘤Jurkat细胞中的表达及作用机制。方法取对数生长期人淋巴瘤Jurkat细胞,分别向培养基中加入5 ml生理盐水配制的浓度为0、0.5、1.0、1.5μg/ml的多柔比星,取健康体检者(对照组)的单个核细胞。采用定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)检测miRNA-106a以及视网膜母细胞瘤1(RB1)、E2F转录因子1(E2F1)、胱天蛋白酶3(caspase 3)mRNA的表达水平,采用噻唑蓝(MTT)法检测细胞增殖能力,流式细胞术检测细胞凋亡能力,采用蛋白质印迹法(Western blot)检测RB1、E2F1、caspase 3蛋白的表达水平。结果0μg/ml多柔比星干预人淋巴瘤Jurkat细胞miRNA-106a的表达水平明显高于对照组单个核细胞(P﹤0.01)。随多柔比星浓度升高、作用时间延长,miRNA-106a表达水平逐渐降低,光密度(OD)值逐渐降低,细胞增殖抑制率(IR)和凋亡率均逐渐升高,RB1、caspase 3 mRNA及其蛋白的表达水平均逐渐升高,E2F1 mRNA及其蛋白的表达水平均逐渐降低,差异均有统计学意义(P﹤0.05)。相关性分析结果显示,miRNA-106a与RB1、caspase 3的表达均呈负相关(P﹤0.01),与E2F1的表达呈正相关(P﹤0.01)。结论miRNA-106a在人淋巴瘤Jurkat细胞中高表达,其可能通过调控RB/E2F1通路相关蛋白的表达来调节淋巴瘤进展。

血清miRNA-199a-5p、α-1-B-糖蛋白反义RNA1水平与脑胶质瘤患者术后复发的关系

目的检测脑胶质瘤患者的血清微小RNA(miRNA)-199a-5p、α-1-B-糖蛋白反义RNA1(A1BG-AS1)水平,并分析其与患者术后复发的关系。方法选取94例接受手术治疗的脑胶质瘤患者和84例健康体检者,分别作为研究组和对照组。术后所有脑胶质瘤患者均随访2年,依据是否复发分为复发组(n=71)和非复发组(n=23)。采用聚合酶链反应(PCR)检测血清miRNA-199a-5p、A1BG-AS1水平,比较研究组和对照组、复发组和非复发组的血清miRNA-199a-5p、A1BG-AS1水平。采用Spearman相关分析法分析血清miRNA-199a-5p、A1BG-AS1水平与脑胶质瘤患者术后复发的相关性。绘制受试者工作特征(ROC)曲线,计算曲线下面积(AUC),分析血清miRNA-199a-5p、A1BG-AS1单独及联合检测对脑胶质瘤患者术后复发的评估价值。结果研究组患者血清miRNA-199a-5p水平明显低于对照组,血清A1BG-AS1水平明显高于对照组,差异均有统计学意义(P﹤0.01)。复发组患者血清miRNA-199a-5p水平低于非复发组,血清A1BG-AS1水平高于非复发组,差异均有统计学意义(P﹤0.05)。血清miRNA-199a-5p水平与脑胶质瘤患者术后复发呈负相关(r=-0.382,P﹤0.05),血清A1BG-AS1水平与脑胶质瘤患者术后复发呈正相关(r=0.423,P﹤0.05)。ROC曲线显示,血清miRNA-199a-5p、A1BG-AS1联合检测评估脑胶质瘤患者术后复发的AUC和灵敏度均高于二者单独检测。结论脑胶质瘤患者血清miRNA-199a-5p水平降低,血清A1BG-AS1水平升高,且其表达水平与脑胶质瘤患者术后复发有关,联合检测对术后复发具有较好的评估价值。

miRNA-15a/16调控Bmi-1蛋白在卵巢癌顺铂化疗耐药中的作用

目的探讨miRNA-15a和miRNA-16在逆转卵巢癌顺铂化疗耐药过程中的作用机制。方法使用miRNA-15a和miRNA-16模拟物转染人卵巢癌顺铂耐药细胞株CoC1/DDP,予顺铂处理,qRT-PCR检测正常培养CoC1/DDP细胞组、顺铂处理组、阴性对照组、转染miRNA-15a组、转染miRNA-16组和过表达的Bmi-1质粒的转染miRNA-15a和miRNA-16组的miRNA-15a、miRNA-16的表达水平,同时应用Western blot检测各组细胞中Bmi-1的表达水平,CCK-8法、Annexin V/PI法检测每组细胞的存活及凋亡情况、γ-H2AX免疫荧光检测细胞凋亡情况。结果卵巢癌顺铂耐药细胞株CoC1/DDP中miRNA-15a和miRNA-16低表达,Bmi-1蛋白高表达。过表达miRNA-15a、miRNA-16水平,Bmi-1蛋白下降(P<0.05),细胞存活率下降(P<0.05),DNA凋亡明显增加(P<0.05),DNA损伤程度更严重(P<0.05)。过表达Bmi-1质粒可提高细胞活度(P<0.05),降低细胞凋亡率(P<0.05)。结论Bmi-1蛋白可能是miRNA-15a和miRNA-16的调节蛋白靶点,高表达miRNA-15a和miRNA-16可以通过降低Bmi-1蛋白来提高顺铂对卵巢癌细胞的敏感性。通过对卵巢癌顺铂化疗耐药性分子标记的预测和对卵巢癌肿耐药性目标的攻克提供了新的思路。

慢性心衰大鼠心肌miRNA-1、miRNA-133/Caspases表达差异研究

目的探讨慢性心衰大鼠心肌miRNA-1、miRNA-133/Caspases表达差异。方法 30只SD大鼠随机分为正常组10只,模型组20只。正常组等容量生理盐水腹腔注射,模型组予阿霉素腹腔注射造模;采用心脏彩超检测心功能,采用生理记录仪记录血流动力学,心脏切片行Tunel染色检测细胞凋亡,采用Real-time PCR法检测miRNA-1、miRNA-133、Caspase-3mRNA、Caspase-9mRNA表达;采用Western blot及免疫组化法检测心肌组织Caspase-3、Caspase-9蛋白表达水平。结果与正常组比,模型组大鼠左室舒张期内径(LVIDd)、左室收缩末期内径(LVESD)、左心室终末舒张压(LVEDP)明显增大(P<0.05),而左心室短轴缩短率(LVFS)、左室射血分数(LVEF)、心输出量(CO)、左心室平均压(LVAP)、左心室内压最大上升速率(dp/dtmax)及左心室内压最大下降速率(-dp/dtmax)下降(P<0.01),Tunel染色示心肌凋亡明显。miRNA-1、Caspase-3mRNA、Caspase-9mRNA、Caspase-3蛋白、Caspase-9蛋白表达增加(P<0.01),miRNA-133表达下降(P<0.01)。结论 miRNA-1、Caspase-3、Caspase-9在心肌凋亡中表达增加,miRNA-133表达下降。

利用质粒介导的miRNA-1-2抑制H9C2中Hand2蛋白的表达

目的构建人miRNA-1-2的真核表达载体,并检测其对大鼠成肌细胞H9C2中Hand2蛋白表达的抑制作用。方法用PCR法体外合成miRNA-1-2前体序列的DNA模板,并定向插入到发夹RNA(hairpin RNA)表达载体pSilencer-4.1-neo上。用脂质体法将构建正确的重组质粒pSilencer-4.1/miRNA-1-2瞬时转染H9C2细胞,检测miRNA-1-2前体转录本(pre-miRNA-1-2)和miRNA-1靶基因Hand2(heart and neural crest derivatives expressed transcript 2)的表达。结果DNA测序表明重组质粒pSilencer-4.1/miRNA-1-2构建正确。pSilencer-4.1/miRNA-1-2转染的H9C2细胞中,pre-miRNA-1-2被有效表达,Hand2 mRNA表达无变化,Hand2蛋白表达被抑制。结论成功构建了miRNA-1-2的真核表达载体,由表达载体介导的miRNA-1能有效抑制Hand2蛋白的表达。

miRNA-1对大鼠心肌细胞凋亡的影响

目的探讨微小RNA(miRNA)-1对大鼠心肌细胞凋亡的影响。方法应用转染的方法使培养的大鼠H9c2心肌细胞高表达miRNA-1(miRNA-1组),real-time PCR方法检测miRNA-1表达水平以确定转染成功后,MTT法检测细胞活力,流式细胞术测定细胞凋亡情况,分别采用real-time PCR和Western Blot方法检测凋亡抑制基因Bcl-2的mRNA和蛋白表达情况,并与常规条件下培养的H9c2细胞(空白对照组)和转染随机合成的miRNA阴性对照片段(阴性对照组)比较。结果与空白对照组和阴性对照组相比,转染miRNA-1 mimics后,H9c2大鼠心肌细胞miRNA-1表达水平明显升高,细胞凋亡率显著增加,细胞生存率、Bcl-2的mRNA和蛋白表达水平显著降低。结论转染的miRNA-1 mimics能够上调细胞内的miRNA-1表达水平,抑制心肌细胞增殖,促进细胞凋亡。

miRNA-1介导的c-Met与宫颈癌进展的相关性研究

目的:分析c-Met、miRNA-1在宫颈癌组织中的表达水平变化,以及其与癌组织病理特征之间的相关性,探究miRNA-1和c-Met与宫颈癌生物学行为的关系。方法:收集内蒙古自治区人民医院2015年3月至2017年3月收治的50例宫颈癌患者的肿瘤组织及癌旁组织,采用免疫组织化学法检测癌组织及癌旁组织中c-Met表达;采用RT-PCR检测癌组织及癌旁组织中miRNA-1的相对表达量;采用配对t检验对比分析癌组织与癌旁组织中c-Met、miRNA-1表达;应用Spearson线性相关检验分析c-Met、miRNA-1表达水平与宫颈癌患者临床病理特征间的相关性;应用Kaplan-Meier和Log-rank检验统计分析c-Met、miRNA-1表达对宫颈癌患者生存情况的影响。结果:宫颈癌组织中c-Met表达高于癌旁组织,24个月随访结果显示,c-Met表达越低,宫颈癌患者生存率越高。癌组织中miRNA-1表达水平显著低于癌旁组织,为癌旁组织的(0.41±0.07)倍,差异有统计学意义(P<0.01);miRNA-1表达水平越低,患者生存率越低。结论:在宫颈癌组织中miRNA-1表达下调,c-Met表达上调,其表达与宫颈癌发生发展、预后有关,提示miRNA-1和c-Met可作为宫颈癌诊断和预后的重要生物学指标。

miRNA-186靶向Twist-1促胃癌侵袭、迁移的机制研究

目的检测miRNA-186在胃癌中的表达情况,观察miRNA-186表达改变对人胃癌细胞株侵袭、迁移能力的影响并分析可能的分子机制。方法 RT-PCR法检测40例胃癌患者胃癌及配对的正常胃黏膜组织中miRNA-186的表达水平,同时检测miRNA-186在胃癌细胞株和正常胃黏膜上皮细胞中的表达水平。在胃癌细胞中分别转染miRNA-186模拟物(mimic)、抑制物(inhibitor)以上调、下调miRNA-186的表达,应用Transwell试验观察其对胃癌细胞侵袭、迁移能力的影响。应用生物信息学软件预测miRNA-186可能的靶基因,并经双荧光素酶试验及Western blot试验验证靶基因,分析其促转移的分子机制。结果胃癌组织相较于正常胃黏膜组织、胃癌细胞株相较于正常胃黏膜上皮细胞株的miRNA-186表达水平均降低(均P<0.05)。在胃癌细胞中,分别上调、下调miRNA-186的表达水平,能够抑制、促进胃癌细胞的侵袭、迁移能力。miRNA-186与Twist-1之间存在反向调控的关系,Twist-1是miRNA-186的靶基因。同时发现,下调miRNA-186的表达时,Twist-1和N-cadherin表达上调,E-cadherin表达下调,而当上调miRNA-186的表达时,Twist-1和N-cadherin表达下调,E-cadherin表达上调。结论在胃癌组织中miRNA-186的表达水平降低,可能通过靶向调控Twist-1的表达,改变E-cadherin和N-cadherin的表达水平,导致胃癌细胞上皮间质转化,进而促进胃癌细胞的侵袭、迁移。

TGM2、NEAT1、miRNA-17-5p在胃癌组织中的表达及与疾病演进的相关性

目的研究转谷氨酰胺酶2(transglutaminase,TGM2)、核富集转录本1(nuclear paraspeckle assembly transcript1,NEAT1)、miRNA-17-5p在胃癌(gastric cancer,GC)组织中的表达及与疾病演进的相关性。方法选取病理科保存的GC组织标本74例,为研究组,另选取同一时间段病理科保存的正常胃黏膜(距离癌组织>5 cm)74例,为对照组,检测TGM2、NEAT1、miRNA-17-5p表达水平,统计研究对象一般资料及GC患者与疾病演进的相关性。结果与对照组比较,研究组TGM2、NEAT1阳性表达率较高,miRNA-17-5p阳性表达率较低,差异有统计学意义(P<0.05)。与无淋巴转移比较,有淋巴转移患者TGM2、NEAT1阳性表达率较高,miRNA-17-5p阳性表达率较低;与临床Ⅲ~Ⅳ期比较,Ⅰ~Ⅱ期患者TGM2、NEAT1阳性表达率较高,miRNA-17-5p阳性表达率较低;与黏膜下层比较,TGM2、NEAT1阳性表达率较高,miRNA-17-5p阳性表达率较低,差异有统计学意义(P<0.05)。Logistic回归分析TGM2、NEAT1、miRNA-17-5p阳性表达率升高与发生GC独立相关(P<0.05)。受试者工作特征曲线(ROC)分析TGM2、NEAT1、miRNA-17-5p预测发生GC曲线下面积(AUC)分别为0.662、0.716、0.754。结论GC患者组织中TGM2、NEAT1阳性表达率增高,miRNA-17-5p阳性表达率降低,其阳性表达的高低与患者淋巴转移、临床分期、病灶深度显著相关,在临床诊断中具有重要意义。

miRNA-132通过靶向调控Bmi-1表达影响鼻咽癌细胞对放射治疗敏感性

目的研究miRNA-132对鼻咽癌细胞放射治疗敏感性的影响。方法使用miRNA芯片技术,对比5-8F(亲代细胞)和5-8F/R(放射治疗抵抗细胞)中miRNA表达水平差异,从中挑选差异最为明显的miRNA-132作后续研究。使用流式细胞仪检测miRNA-132对细胞凋亡的影响。使用双荧光报告素酶、蛋白免疫印迹法等方式验证miRNA-132的下游靶基因。结果 miRNA-132可以促进鼻咽癌5-8F/R细胞的凋亡,提高其对放射治疗的敏感性,还可以抑制其体内的生长能力。miRNA-132可以抑制Bmi-1信使RNA和蛋白质表达水平。结论 miRNA-132可通过抑制下游靶基因Bmi-1来发挥其放射治疗增敏功能。

心房颤动患者血浆miRNA-1和miRNA-155检测在复律后复发预测的应用研究

目的探讨血浆miRNA-1和miRNA-155检测在心房颤动患者复律后复发预测中的临床应用价值。方法收集2015年10月~2017年11月于西安市第八医院和咸阳市中心医院心内科住院治疗的110例房颤患者的血液及临床资料(复律组110例,复发组30例,未复发组80例),比较分析三组患者血浆miRNA-1和miRNA-155表达水平的变化与房颤复发的关系。两标志物的表达采用实时逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术检测。应用心动超声仪评价患者的左房内径及左心室射血分数。采用罗氏MODULARP800全自动生化分析仪检测患者的空腹血糖及总胆固醇水平。建立受试者工作特征曲线(ROC曲线)评价miRNA-1和miRNA-155在房颤复发中的临床意义。结果血浆miRNA-1和miRNA-155在未复发组、复律组和复发组的水平分别为0.38±0.09,0.39±0.08,0.82±0.15和0.87±0.17,0.85±0.18,0.21±0.05。它们在复发组的表达与未复发组和复律组分别比较明显上调、下调(t=21.37,20.57,均P<0.01;t=18.77,11.71,均P<0.01),而在未复发组与复律组的表达比较差异无统计学意义(t=0.67,0.54,均P>0.05)。房颤患者的收缩压、血清总胆固醇水平(TC)、左房内径、空腹血糖水平(FBG)和左室射血分数(EF)分别在未复发组、复律组和复发组的检测结果为(133±7mmHg,3.87±0.73mmol/L,44.97±6.82mm,4.13±0.57mmol/L,61.20%±7.38%),(134±6mmHg,3.98±0.70mmol/L,45.50±6.72mm,4.17±0.46mmol/L,61.07%±7.19%),(145±7mmHg,4.03±0.71mmol/L,58.97±7.33mm,4.20±0.50mmol/L,60.30%±7.21%)。复发组的左心房内径和收缩压分别与复律组和未复发组比较显著增高(t=6.69,10.23,P<0.01;t=8.42,15.53,P<0.01);而复律组的两项指标分别与未复发组比较差异均无统计学意义(t=0.73,0.27,均P>0.05);各组间的TC,FBG和EF比较,差异均无统计学意义(t=0.58,0.61,0.52,均P>0.05;t=0.65,0.58,0.41,均P>0.05;t=0.61,0.41,0.52,均P>0.05)。在复发组中,miRNA-1和miRNA-155表达具有负相关(r=-0.673,P<0.01),且它们分别与左心房内径、收缩压也具有相关性(r=0.528,-0.537),均P<0.01。ROC曲线的分析中,复发组分别以复律组和未复发组为参照,血浆miRNA-1的AUC分别为0.743(95%CI:0.627~0.839),P<0.01;0.730(95%CI:0.21~0.826),P<0.01,血浆miRNA-155的AUC分别为0.703(95%CI:0.628~0.837),P<0.01;0.685(95%CI:0.603~0.813),P<0.01。结论血浆miRNA-1和miRNA-155检测可应用于房颤患者复律后复发的预测,并成为房颤复发有效的预警标志物和干预靶点。

miRNA-1和急性心肌梗死后心肌缺血程度的相关性研究

目的研究循环miRNA-1和急性心肌梗死后心肌缺血程度的相关性。方法入选经冠状动脉造影确诊为非急性心肌梗死的冠状动脉粥样硬化性心脏病患者为对照组;符合2012年全球统一心肌梗死定义的急性ST段抬高心肌梗死患者为实验组;对两组病例采集血液标本,采用qPCR技术检测miRNA-1表达水平;同时对实验组进行ACC/AHA冠脉造影评分,比较两组间miRNA-1表达水平差异,并进一步分析实验组miRNA-1表达水平和ACC/AHA冠脉造影评分的相关性。结果入选42例病例,对照组21例,实验组21例。两组病例的micRNA-1相对表达量差异有统计学意义(P<0.05);并且实验组各病例的micRNA-1相对表达量和ACC/AHA冠脉评分存在显著相关性差异有统计学意义湘关系数:R=0.6385,P<0.05)。结论循环miRNA-1和心肌梗死后心肌缺血程度存在显著相关性,miRNA-1有望成为新的检测心肌梗死和临床风险评估的分子标志物。

长链非编码RNA M通过作为miRNA-1的中心诱导血管平滑肌细胞增殖和迁移

目的:探究LncRNA M是否可以通过作为miRNA-1的中心来诱导血管平滑肌细胞(VSMC)增殖及迁移。方法:将体外培养的VSMC按照各检测指标需要进行转染,通过生物信息学找到可以与LncRNA M结合的miRNA-1;通过双荧光素酶报告基因检测各组的荧光素酶活性;RT-PCR检测LncRNA M与miRNA-1之间的调控关系,并用流式细胞仪检测细胞周期变化,从而找出LncRNA M及miRNA-1对细胞增殖的影响;通过MTT实验和Transwell实验分别检测细胞的增殖、迁移情况。结果:通过生物信息学及双荧光素酶报告基因检测得出LncRNA M可能是miRNA-1的一个靶向调控基因,并且miRNA-1能够和LncRNA M结合从而调控其在VSMC中的表达;RT-PCR和流式细胞术研究发现,敲低LncRNA M可能通过上调miRNA-1的表达来促进VSMC细胞的增殖。通过MTT实验和Transwell实验发现,与对照组相比miRNA-1 mimics组、miRNA-1 mimics+pmirGLO组的细胞活力和迁移率明显上升(P<0.05),过表达LncRNA M后其细胞活力和细胞迁移率明显下降(P<0.05)。结论:LncRNA M可能通过作为miRNA-1的中心上调miRNA-1的表达诱导VSMC的增殖和迁移。

miRNA-1和miRNA-133过表达对诱导性多能干细胞心肌分化的影响

目的探讨miRNA-1和miRNA-133过表达对诱导性多能干细胞(iPSC)心肌分化的影响。方法取2周龄美国国家癌症研究所(ICR)孕鼠的胚胎,0.5 g/L胰酶消化接种,传至3代后采用丝裂霉素进行处理,37℃孵育培养小鼠诱导性多能干细胞(miPSC),将生长于胚胎成纤维细胞上的miPSC消化传代;更换培养基,加入对照miRNA (U6)(10 nmol/L,记为对照组),miRNA-1 (10 nmol/L,记为miRNA-1组)、miRNA-133 (10 nmol/L,记为miRNA-133组)、miRNA-1和miRNA-133(分别为10 nmol/L,记为miRNA-1+133组)转染24 h后PBS洗涤,加入miPSC分化培养基,观察每日变化并计算细胞搏动率以表示分化效率。RT-PCR检测miRNA-1、miRNA-133及心肌肌钙蛋白T(cTnT)的表达。结果未分化的miPSC中较少表达cTnT,与分化0 d时比较,分化5 d后miRNA-1组及miRNA-133组内cTnT的表达水平明显升高(P <0.05),分化10 d时升高更明显(P <0.01)。分化10 d时,miRNA-1+133组cTnT表达水平较miRNA-1组及miRNA-133组更高(P <0.01)。与对照组比较,miRNA-1组及miRNA-133组细胞搏动率无变化(P> 0.05),但miRNA-1+133组搏动率显著提升(P <0.01)。结论单独应用miRNA-1或miRNA-133对心肌的分化无促进作用,共表达miRNA-1、miRNA-133可显著提高miPSC向心肌细胞定向分化的效率。

miRNA-1真核表达载体的构建及转染骨髓间充质干细胞绿色荧光蛋白的表达

目的 构建大鼠miRNA-1真核表达载体,为研究miRNA-1功能提供实验基础.方法 应用技术体外合成miRNA-1前体对应的基因组片段,定向克隆到pSD11-U6/Neo/绿色荧光蛋白载体上.阳性克隆进行及DNA测序鉴定,将构建成功的重组质粒pSD11-U6/Neo/绿色荧光蛋白/miRNA-1借助脂质体转染大鼠骨髓间充质干细胞,荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白表达.结果 PCR鉴定及DNA测序表明真核表达载体pSD11-U6/Neo/绿色荧光蛋白/miRNA-1构建成功.转染大鼠骨髓间充质干细胞后,荧光显微镜下观察到绿色荧光蛋白表达.结论 大鼠miRNA-1真核表达载体构建成功.

外周血miRNA-155在冠心病心力衰竭患者中的表达及与HE4、HO-1的相关性研究

目的探讨外周血miRNA-155在冠心病心力衰竭患者中的表达及与人附睾分泌蛋白4(HE4)、血红素加氧酶-1(HO-1)的相关性研究。方法选取2018年5月至2020年8月收治的冠心病心力衰竭患者64例为病例组,并随机选取接受健康体检的健康者64名作为对照组,对其进行彩色多普勒超声检查,以及血清HE4、HO-1及miRNA-155等指标的检测,分析外周血miRNA-155在冠心病心力衰竭患者中的表达及与HE4、HO-1的相关性。结果病例组HE4、HO-1及miRNA-155的水平均高于对照组(P<0.05),病例组LVEF低于对照组(P<0.05);病例组中心功能分级Ⅳ级患者的HE4、HO-1及miRNA-155水平均明显高于心功能分级Ⅲ级、Ⅱ级患者,LVEF低于心功能分级Ⅲ级、Ⅱ级患者(P<0.05),病例组中心功能分级Ⅲ级患者的HE4、HO-1及miRNA-155水平均高于心功能分级Ⅱ级患者(P<0.05),LVEF低于心功能分级Ⅱ级患者(P<0.05);LVEF与血清HE4、HO-1及miRNA-155水平呈负相关(P<0.05);血清HE4和HO-1水平与外周血miRNA-155水平呈正相关(P<0.05)。结论冠心病心力衰竭患者存在HE4、HO-1及miRNA-155水平明显升高情况,且其上升幅度随心功能分级升高而升高,HE4、HO-1及miRNA-155升高幅度与冠心病心力衰竭患者心功能损伤严重程度存在相关性。

人胚肾细胞HEK293中miRNA-128-1表达调控机制的初步研究

目的:初步研究人胚肾细胞HEK293中miRNA-128-1的表达调控机制,为进一步探讨miRNA-128-1在胶质瘤中的表达调控奠定基础。方法:通过软件UCSC预测miRNA-128-1的启动子区域;运用软件UCSC、CBIL预测可能与miRNA-128-1启动子区域结合的候选转录因子;构建相关质粒,包括pB-miRNA-128-1、pShNF1、pShc-Myc、pShTAF1、pShYY1、pShMAF、pShRELA2、pShRNUX1和pShNFkappaB。然后将pB-miRNA-128-1分别与上述质粒共转染人胚肾细胞HEK293,检测报告基因活性,确定候选转录因子的作用性质。结果:共转染pShc-Myc可显著抑制pB-miRNA-128-1启动子报告基因的活性;共转染pShNFkappaB可显著升高pB-miRNA-128-1启动子报告基因的活性;共转染pShNF1、pShTAF1、pSbYY1、pShMAF、pShRELA2或pShRNUX1对pB-miRNA-128-1启动子报告基因的活性未见明显影响。结论:在HEK293细胞miRNA-128-1的表达调控中,c-Myc可能发挥转录激活作用,而NFkappaB可能发挥转录抑制作用。

血清HE4、TK1、miRNA-18a在预测中晚期宫颈癌放化疗敏感性中的价值

目的探究血清HE4、TK1、miRNA-18a表达水平在预测中晚期宫颈癌放化疗敏感性中的价值。方法选择2018年4月至2019年10月预接受放化疗治疗的66例中晚期宫颈癌患者作为研究对象,依据患者放化疗结果将其分为高敏感组和低敏感组。测定放化疗前两组的血清HE4、TK1、miRNA-18a含量,采用ROC曲线分析血清HE4、TK1、miRNA-18a在放化疗敏感性预测中的价值。结果放化疗低敏感者治疗前,血清HE4、TK1和miRNA-18a水平高于高敏感者(P<0.05)。血清HE4、TK1、miRNA-18a预测放化疗敏感性的AUC分别为0.832(95%CI:0.715~0.949)、0.860(95%CI:0.759~0.960)、0.937(95%CI:0.881~0.992),灵敏度为79.2%、75.0%、79.7%;特异度为83.3%、88.9%、94.4%。结论血清HE4、TK1、miRNA-18a表达水平与中晚期宫颈癌患者放化疗敏感性存在相关性,对患者放化疗敏感性均具有较好预测价值。

miRNA-185和DNA甲基转移酶1在妊娠合并系统性红斑狼疮患者T细胞中的表达及其意义

目的探讨miRNA-185和DNA甲基转移酶1(DNMT1)在妊娠合并系统性红斑狼疮(SLE)患者T细胞中的表达及在发病中的作用。方法采用实时荧光定量聚合酶链反应和蛋白质印迹检测DNMT1mRNA和蛋白的表达,核转染后72 h检测甲基化敏感性基因的水平。并与健康人群比较,分析其表达差异及意义。结果结果显示,miRNA-185在妊娠合并SLE患者的CD4^+T细胞中上调(P <0.05),其过表达与DNMT1 mRNA水平呈负相关。在健康人CD4^+T细胞中,miRNA-185的过表达会导致DNA低甲基化、CD11a和CD70基因编码的上调。抑制SLE患者的CD4^+T细胞中miRNA-185的表达,会起到DNA甲基化逆转作用。结论 miRNA-185能靶向作用于DNMT1,并导致系统性红斑狼疮患者妊娠期间CD4^+T细胞的DNA低甲基化。miRNA-185可能是SLE干预治疗的潜在治疗靶点。

miRNA-1与糖尿病心肌病心肌细胞肥大相关性的初步探讨

【目的】观察糖尿病大鼠动物模型心脏及大鼠离体心肌细胞在高糖诱导下miRNA-1的表达水平,测定心肌细胞的大小、蛋白含量以及ANP和BNP的表达,并探讨其相关性。【方法】STZ诱导建立糖尿病大鼠模型(模型组15只,对照组10只),在成模后8周进行心功能、心肌肥大相关基因ANP和BNP mRNA、miRNA-1的检测。并分离原代乳鼠心肌细胞进行培养,在24 h、48 h和72 h时间点动态观察正常糖浓度(5 mmol/L)和高糖浓度(30 mmol/L)心肌细胞miRNA-1表达的差异,并分析比较不同葡萄糖浓度培养下心肌细胞的直径、蛋白质含量以及心肌细胞肥大基因的表达,统计分析高糖浓度培养心肌细胞miRNA-1表达与心肌细胞肥大相关指标的相关性。【结果】糖尿病大鼠模型8周末显示心功能障碍,miRNA-1较对照组明显下降,ANP及BNP mRNA明显升高,组间差别均有统计学意义。高糖诱导大鼠离体心肌细胞miRNA-1的总量随时间呈先升后降趋势并有统计学意义(F=15.109,P=0.001);高糖刺激使心肌细胞直径、心肌细胞蛋白含量随培养的时间延长而逐步增高,并明显大于正常糖浓度培养下的心肌细胞;高糖刺激时心肌细胞ANP及BNP mRNA表达变化趋势与miRNA-1表达一致,ANPmRNA表达与miRNA-1存在线性相关(r=0.990,P=0.01)。【结论】糖尿病大鼠心肌组织及高糖培养诱导原代乳鼠心肌细胞miRNA-1发生明显改变,乳鼠心肌细胞miRNA-1表达与心肌细胞肥大变化相一致,与心肌细胞ANP的表达变化呈线性相关。