MiRNA-199a-3p通过mTOR通路与阿霉素联合抑制子宫内膜癌细胞的增殖和促凋亡作用

目的:探讨阿霉素对转染miRNA-199a-3p的子宫内膜癌(EC)的作用及机制。方法:构建pSIREN-miRNA-199a-3p过表达质粒并稳定转染内膜癌细胞系Ishikawa、SPEC-2细胞。应用逆转录PCR(RT-PCR)检测miRNA-199a-3p的表达;MTT、克隆形成实验检测细胞增殖;流式细胞术检测细胞凋亡;Western blot检测mTOR信号通路相关蛋白表达。结果:上调miRNA-199a-3p可显著抑制子宫内膜癌细胞Ishikawa、SPEC-2的克隆形成能力(P<0.01,P<0.05);miRNA-199a-3p可增强阿霉素对Ishikawa、SPEC-2细胞的生长抑制(P均<0.05)和凋亡诱导作用(P均<0.05);Western blot证实,miRNA-199a-3p可显著下调mTOR及其效应蛋白p70S6K的磷酸化水平。结论:miRNA-199a-3p可能通过mTOR通路与阿霉素联合抑制子宫内膜癌细胞的增殖并促进其凋亡,为联合应用miRNA和阿霉素治疗EC提供了实验依据。

下肢动脉粥样硬化斑块内miRNA-199a-3p对外周血单核细胞的影响

目的探讨下肢动脉粥样硬化斑块内miRNA-199a-3p对外周血单核细胞的影响。方法选取37例下肢动脉粥样硬化闭塞症(AS)患者外周血为AS组。另外选取同期37名健康体检者外周血为对照组。新鲜血管组织取自1例下肢AS患者截肢远端血管为实验组,以其截肢近端血管为对照。实时荧光定量PCR检测新鲜血管组织,分离得到的外周血中单核细胞和微泡中miRNA-199a-3p表达水平。以人单核细胞TTHP-1为载体,miRNA-199a-3p mimics组和miRNA-199a-3p inhibitor组分别转染miRNA-199a-3p mimics和miRNA-199a-3p inhibitor,同时设置空白对照组。实时荧光定量PCR检测各组miRNA-199a-3p、趋化因子单核细胞趋化蛋白(MCP)-1、调解活化正常T细胞表达和分泌的趋化因子(RANTES)和Fractalkine表达水平。结果下肢动脉粥样硬化斑块内miRNA-199a-3p表达水平显著高于正常组织(P<0.05)。AS组外周血单核细胞和微泡中miRNA-199a-3p表达水平均显著高于对照组(P<0.05)。与空白对照组相比,miRNA-199a-3p mimics组miRNA-199a-3p表达水平显著上升(P<0.05),miRNA-199a-3p inhibitor组miRNA-199a-3p表达水平显著下降(P<0.05)。与空白对照组相比,miRNA-199a-3p mimics组MCP-1、RANTES和Fractalkine的mRNA表达水平显著降低(P<0.05),miRNA-199a-3p inhibitor组MCP-1、RANTES和Fractalkine的mRNA表达水平显著上升(P<0.05)。结论动脉粥样硬化斑块内巨噬细胞高表达miRNA-199a-3p,并以微泡形式分泌到外周血中,抑制单核细胞中MCP-1、RANTES和Fractalkine等趋化因子的表达,是一种动脉粥样硬化保护因素。

下肢动脉粥样硬化斑块内miRNA-199a-3p对外周血单核细胞的影响

目的分析miRNA-199a-3p对外周血单核细胞的影响。方法选取下肢动脉粥样硬化闭塞症患者(实验组)及健康体检者(对照组),各60例。取1例截肢患者截肢远端血管,以近端血管为对照,采用实时荧光定量聚合酶链式反应(PCR)检测,获得血管组织及人外周血中单核细胞和微泡(MV)中miRNA-199a-3p的表达水平,此外,于细胞对数生长期,分设miRNA-199a-3p inhibitor组、miRNA-199a-3p mimics组、空白对照组,各组设复孔6个,转染miRNA-199a-3p inhibitor、miRNA-199a-3p mimics、FuGENE,分析miRNA-199a-3p对外周血单核细胞的影响。结果动脉粥样硬化斑块内miRNA-199a-3p表达水平(8.49±3.05)高于正常组织的(3.64±1.20),差异有统计学意义(P<0.05)。实验组外周血单核细胞、MV中的miRNA-199a-3p表达水平高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。miRNA-199a-3p inhibitor组的外周血单核细胞中的miRNA-199a-3p表达水平低于空白对照组,miRNA-199a-3p mimics组的外周血单核细胞中miRNA-199a-3p表达水平高于空白对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。检测Fractalkine、T细胞表达和分泌因子(RANTES)、单核细胞趋化因子-1(MCP-1)的mRNA表达水平,miRNA-199a-3p inhibitor组高于空白对照组,miRNA-199a-3p mimics组低于空白对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论下肢动脉粥样硬化斑块内miRNA-199a-3p通过MV作用于单核细胞,抑制其Fractalkine、RANTES、MCP-1等趋化因子表达,而起到抗炎抗动脉粥样硬化的作用。

miRNA-199a-3p调控MAP3K4在胃癌中的表达

目的探讨胃癌中MIRNA-199A-3P调控候选基因MAP3K4的表达。方法收集35例胃癌及癌旁组织标本,采用茎环逆转录-聚合酶链式反应法检测胃癌组织及癌旁组织中MIR-199A-3P的表达水平,WESTERN BLOT法检测MAP3K4表达;细胞转染法检测MIR-199A-3P调控MAP3K4表达,双荧光素酶报告基因检测系统验证MIR-199A-3P结合MAP3K4的3’UTR的靶位点。结果与癌旁组织相比,胃癌组织MIR-199A-3P高表达,且其候选基因MAP3K4低表达;MIR-199A-3P MIMICS转染抑制MAP3K4表达;MAP3K4是MIR-199A-3P作用的靶基因。结论 MIR-199A-3P是胃癌的一个癌基因,MAP3K4是受其调控的靶基因。

系统性红斑狼疮患者外周血单个核细胞miRNA-199a-3p表达及调控机制

目的探究系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus,SLE)患者外周血单个核细胞miRNA-199a-3p的表达及对PI3K/Akt/mTOR信号通路调控机制。方法选取本院就诊的SLE患者50例,包括缓解期患者20例(缓解期组)、活动期患者30例(活动期组),同时选择25例健康志愿者作为对照组。采用RT-PCR检测入选者外周血单个核细胞miRNA-199a-3p表达情况;应用Pearson相关性分析方法了解miRNA-199a-3p表达水平与SLE疾病活动程度,并进一步分析miRNA-199a-3p表达水平与脏器受累的相关性;利用流式细胞仪检测miRNA-199a-3p对细胞凋亡的影响。通过生物信息软件和荧光素酶报告实验验证miRNA-199a-3p的靶基因。上调miRNA-199a-3p后采用Western Blot检测PI3K/Akt/mTOR信号通路相关蛋白表达情况。结果缓解期SLE患者外周血单个核细胞miRNA-199a-3p相对表达水平(1. 25±0. 19)显著低于健康志愿者(2. 38±0. 24),但显著高于活动期患者(0. 34±0. 07)(P <0. 05)。Pearson相关性分析表明miRNA-199a-3p相对表达水平与系统性红斑狼疮疾病活动度指数(systemic lupus erythematosus disease activity index,SLEDAI)评分呈负相关性(R=-0. 704,P <0. 05),浆膜炎、血尿、血管炎、脱发和光过敏患者miRNA-199a-3p水平与无以上临床表现患者相近(P> 0. 05);皮疹、白细胞降低和肾炎患者miRNA-199a-3p水平显著高于无以上临床表现患者(P <0. 05)。凋亡检测发现上调miRNA-199a-3p能够显著提高单个核细胞凋亡率(P <0. 05)。生物信息学及荧光素酶报告实验表明miRNA-199a-3p的靶基因为mTOR mRNA 3'UTR。WB检测表明外周血单个核细胞转染miRNA-199a-3p mimics后,能够显著下调mTOR、PI3K、p AKt和Bcl-2表达水平(P <0. 05),同时能够显著上调Bax与caspase-3表达水平(P <0. 05)。结论 SLE患者外周血单个核细胞miRNA-199a-3p低表达,且其能够影响PI3K/Akt/mTOR信号通路分子的表达。

下调miRNA-199a-5p靶向HIF1α激活JAK/STAT3通路促进乳腺癌细胞增殖与恶性转移

目的:探讨miRNA-199a-5p在乳腺癌MCF-7细胞中的表达及其对细胞增殖与恶性转移的影响。方法:利用RT-qPCR检测miR-199a-5p在乳腺癌细胞(MCF-7细胞)和人正常乳腺上皮细胞(MCF-10A细胞)中的差异表达。过表达或下调miR-199a-5p表达,通过MTT试剂盒检测MCF-7细胞增殖能力,Transwell检测MCF-7细胞的侵袭能力,Western blot检测过表达及下调miR-199a-5p对MCF-7细胞EMT的影响。TargetScan分析miR-199a-5p的作用靶点,双荧光素酶报告基因实验检测miR-199a-5p和HIF1α之间的关系。RT-qPCR检测HIF1α在MCF-7细胞和MCF-10A细胞中的差异表达。HIF1α siRNA质粒转染细胞后,检测下调HIF1α对MCF-7细胞增殖、侵袭和EMT的影响。过表达HIF1α后,Western blot检测细胞内JAK、p-JAK、STAT3和p-STAT3蛋白的表达量。将AG490作用MCF-7细胞后再转染pcDNA-HIF1α质粒,检测MCF-7细胞增殖、侵袭和EMT能力。结果:与MCF-10A细胞相比,MCF-7细胞中miR-199a-5p表达明显降低(P<0.01),HIF1α表达明显上升(P<0.01)。过表达miR-199a-5p抑制了MCF-7细胞增殖、侵袭与EMT,下调miR-199a-5p促进了MCF-7细胞的增殖、侵袭与EMT;miR-199a-5p靶向HIF1α,且负调控HIF1α表达;siRNA下调HIF1α表达后明显抑制了MCF-7细胞增殖、侵袭和EMT;上调HIF1α表达后,激活MCF-7细胞内JAK/STAT3通路,AG490作用MCF-7细胞能明显抑制HIF1α对MCF-7细胞增殖、侵袭和EMT的促进作用。结论:下调miRNA-199a-5p靶向HIF1α激活JAK/STAT3通路促进乳腺癌细胞增殖与恶性转移。

槐角黄酮调控miR-199a-3p/p38MAPK/NF-κB对乳腺癌细胞增殖、迁移、侵袭和炎症因子分泌的影响

目的 探讨槐角黄酮对乳腺癌细胞增殖、迁移、侵袭和炎症因子分泌的影响。方法 将乳腺癌细胞BT549分为正常对照(NC)组、低剂量组、中剂量组、高剂量组、miR-NC组、miR-199a-3p组、高剂量+anti-miR-NC组、高剂量+anti-miR-199a-3p组。采用CCK-8、克隆形成实验评估细胞增殖;采用Transwell法评估细胞迁移和侵袭。采用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测miR-199a-3p表达。采用酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测细胞培养液上清中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)以及白细胞介素-1β(IL-1β)水平。采用蛋白免疫印迹(Western blot)检测p-p38MAPK和p-p65蛋白表达。结果 与NC组比较,低、中、高剂量组BT549细胞活力、克隆形成数、迁移数、侵袭数降低,miR-199a-3p表达升高,细胞培养液上清中TNF-α、IL-6以及IL-1β水平降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。与miR-NC组比较,miR-199a-3p组BT549细胞活力、克隆形成数、迁移数、侵袭数降低,细胞培养液上清中TNF-α、IL-6以及IL-1β水平降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。与高剂量+anti-miR-NC组比较,高剂量+anti-miR-199a-3p组BT549细胞活力、克隆形成数、迁移数、侵袭数升高,细胞培养液上清中TNF-α、IL-6以及IL-1β水平升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。与NC组比较,高剂量组BT549细胞p-p38MAPK和p-p65蛋白表达降低,差异有统计学意义(P<0.05)。与高剂量+anti-miR-NC组比较,高剂量+anti-miR-199a-3p组BT549细胞p-p38MAPK和p-p65蛋白表达升高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 槐角黄酮可抑制乳腺癌细胞增殖、迁移、侵袭和炎症反应,其机制可能是通过上调miR-199a-3p表达、抑制p38MAPK/NF-κB通路实现的。

T2DM患者血清miR-199a-3p水平与DR的相关性研究

目的探讨2型糖尿病(T2DM)患者血清miR-199a-3p水平与糖尿病视网膜病变(DR)的相关性。方法纳入2021年9月—2022年8月在中国中医科学院眼科医院诊断为T2DM的患者81例(162只眼),根据是否发生DR分为DR组51例(102只眼)和非DR组30例(60只眼),选择同期来院体检的健康者30例(60只眼)作为对照组。分别采集对照组体检时,DR组、非DR组患者入院后的静脉血5 mL。采用实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)方法检测3组血清miR-199a-3p相对表达量,并检测血清生化指标。分析血清miR-199a-3p水平与DR发生的相关性,并评估对DR发生的影响价值。结果(1)生化指标:3组空腹血浆葡萄糖(FPG)、糖化血红蛋白(HbA1c)、谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、甘油三酯(TG)水平比较,差异均有统计学意义(F_(FPG)=88.218、F_(HbA1c)=92.815、F_(ALT)=28.522、F_(AST)=19.647、F_(TG)=27.680,均P=0.000)。非DR组FPG、HbAlc、ALT水平均高于对照组,差异均有统计学意义(t_(FPG)=10.302、t_(HbA1c)=9.977,均P=0.000;tALT=2.924,P=0.015);AST、TG水平与对照组比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。DR组所有生化指标水平均高于对照组和非DR组,差异均有统计学意义(对照组:t_(FPG)=15.123、t_(HbAlc)=15.275、t_(ALT)=7.357、t_(AST)=6.649、t_(TG)=7.898,均P=0.000;非DR组:t_(FPG)=3.929、t_(HbAlc)=3.772,均P=0.001;t_(AST)=3.591,P=0.002;tALT=4.410、t_(TG)=4.210,均P=0.000)。(2)血清miR-199a-3p水平:3组间血清miR-199a-3p水平比较,差异有统计学意义(F=25.100,P=0.000);非DR组、DR组血清miR-199a-3p水平均高于对照组,差异均有统计学意义(t^(T2DM)=2.147,P=0.035;t_(DR)=6.517,P=0.000);DR组血清miR-199a-3p水平高于非DR组,差异有统计学意义(t=4.606,P=0.000)。(3)DR分期对指标的影响:PDR期与NPDR期患者血清miR-199a-3p水平比较,PDR期低于NPDR期,差异有统计学意义(t=7.272,P=0.000)。PDR期与NPDR期患者生化指标比较,PDR期FPG、HbAlc、ALT、AST、TG水平均高于NPDR期,差异均有统计学意义(t_(FPG)=4.444、t_(HbAlc)=4.074、t_(ALT)=3.818,均P=0.000;t_(AST)=2.172,P=0.035;t_(TG)=3.587,P=0.001)。(4)相关性分析:DR患者血清miR-199a-3p水平与T2DM病程、FPG、HbAlc、ALT、AST、TG均呈负相关(r_(T2DM)病程=-0.368,P=0.008;r_(HbA1c)=-0.456,P=0.001;r_(AST)=-0.416,P=0.002;r_(ALT)=-0.405,P=0.003;r_(FPG)=-0.472、r_(TG)=-0.488,均P=0.000)。T2DM患者血清miR-199a-3p水平预测发生DR时,ROC曲线下面积为0.783,有统计学意义(P=0.000),血清miR-199a-3p水平对诊断DR有一定的预测性能,ROC曲线最佳临界点的约登指数为0.475,灵敏度为0.867,特异度为0.608。结论T2DM患者血清miR-199a-3p的表达与DR的发生密切相关,且与DR的病程、血糖变化和脂质代谢指标相关,可能成为T2DM患者发生DR的潜在生物学标志。

血清微小RNA-199a-3p、E盒结合锌指蛋白1水平对急性冠状动脉综合征患者经皮冠状动脉介入术后预后的预测价值

目的探讨微小RNA-199a-3p(miR-199a-3p)、E盒结合锌指蛋白1(ZEB1)对急性冠状动脉综合征(ACS)患者经皮冠状动脉介入(PCI)术后预后的预测价值。方法选取2021年5月至2022年5月秦皇岛市第二医院接收的行PCI术治疗的113例ACS患者为观察组,根据观察组患者PCI术后1年内是否发生主要不良心血管事件(MACE),分为MACE组26例和非MACE组87例,同期健康体检者106例为对照组。检测血清miR-199a-3p、ZEB1水平,比较MACE组和非MACE组临床资料,Pearson分析患者血清miR-199a-3p和ZEB1水平相关性,多因素Logistic分析影响ACS患者PCI术后发生MACE的影响因素,ROC曲线分析血清miR-199a-3p、ZEB1对ACS患者PCI术后发生MACE的预测价值。结果与对照组相比,观察组血清miR-199a-3p水平较低,ZEB1水平较高(t=13.709、25.641,P<0.05);在ACS患者中miR-199a-3p与ZEB1呈负相关(r=-0.421,P<0.05);ACS患者PCI术后较PCI术前血清miR-199a-3p水平高,ZEB1水平低(t=4.820、6.040,P<0.05);MACE组与非MACE组高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、左心室射血分数、miR-199a-3p、ZEB1比较,差异有统计学意义(t=3.310、2.717、3.947、7.068、6.544,P<0.05);LDL-C、ZEB1水平是ACS患者PCI术后MACE的危险因素,左心室射血分数、HDL-C、miR-199a-3p水平是ACS患者PCI术后MACE的保护因素;miR-199a-3p、ZEB1联合预测ACS患者PCI术后MACE的曲线下面积为0.947,优于单独预测(Z=1.970、2.791,P<0.05)。结论ACS患者血清中miR-199a-3p、ZEB1水平呈负相关,两者均对ACS患者PCI术后MACE有预测价值,两者联合的预测价值更高。

血清miRNA-199a-5p、α-1-B-糖蛋白反义RNA1水平与脑胶质瘤患者术后复发的关系

目的检测脑胶质瘤患者的血清微小RNA(miRNA)-199a-5p、α-1-B-糖蛋白反义RNA1(A1BG-AS1)水平,并分析其与患者术后复发的关系。方法选取94例接受手术治疗的脑胶质瘤患者和84例健康体检者,分别作为研究组和对照组。术后所有脑胶质瘤患者均随访2年,依据是否复发分为复发组(n=71)和非复发组(n=23)。采用聚合酶链反应(PCR)检测血清miRNA-199a-5p、A1BG-AS1水平,比较研究组和对照组、复发组和非复发组的血清miRNA-199a-5p、A1BG-AS1水平。采用Spearman相关分析法分析血清miRNA-199a-5p、A1BG-AS1水平与脑胶质瘤患者术后复发的相关性。绘制受试者工作特征(ROC)曲线,计算曲线下面积(AUC),分析血清miRNA-199a-5p、A1BG-AS1单独及联合检测对脑胶质瘤患者术后复发的评估价值。结果研究组患者血清miRNA-199a-5p水平明显低于对照组,血清A1BG-AS1水平明显高于对照组,差异均有统计学意义(P﹤0.01)。复发组患者血清miRNA-199a-5p水平低于非复发组,血清A1BG-AS1水平高于非复发组,差异均有统计学意义(P﹤0.05)。血清miRNA-199a-5p水平与脑胶质瘤患者术后复发呈负相关(r=-0.382,P﹤0.05),血清A1BG-AS1水平与脑胶质瘤患者术后复发呈正相关(r=0.423,P﹤0.05)。ROC曲线显示,血清miRNA-199a-5p、A1BG-AS1联合检测评估脑胶质瘤患者术后复发的AUC和灵敏度均高于二者单独检测。结论脑胶质瘤患者血清miRNA-199a-5p水平降低,血清A1BG-AS1水平升高,且其表达水平与脑胶质瘤患者术后复发有关,联合检测对术后复发具有较好的评估价值。

血清miRNA-155-5p和miRNA-133a-3p表达对脓毒症心肌损伤的诊断价值

目的利用受试者工作特征曲线(ROC)评价血清miRNA-155-5p及miRNA-133a-3p表达对脓毒症心肌损伤的诊断价值.方法前瞻性收集江苏大学附属医院收治的脓毒症患者,根据心脏超声分为对照组(n=48例)和心肌损伤组(n=40例).检测88例脓毒症患者血清miRNA-155-5p及miRNA-133a-3p的表达量,采用ROC曲线评价血清miRNA-155-5p及miRNA-133a-3p对脓毒症心肌损伤的诊断价值.结果与对照组比较,脓毒症心肌损伤组患者的miRNA-155-5p[(2.02-±0.45)vs.(2.89-±0.37)]和miRNA-133a-3p[(1.93±0.37)vs.(2.42±0.22)]表达量均明显增高(P<0.05).ROC曲线分析提示,miRNA-155-5p(AUC=0.92,95%CI 0.86~0.97,P=0.028,敏感度97.50%,特异度72.92%)和miRNA-133a-3p(AUC=0.87,95%CI0.80~0.95,P=0.040,敏感度95.00%,特异度70.00%)对脓毒症患者心肌损伤有较高的诊断价值.结论血清miRNA-155-5p及miRNA-133a-3p的表达有助于诊断脓毒症心肌损伤.

miR-199a-3p在乳腺癌中的表达及其作用

背景与目的:多种微小RNA(micro RNA,mi RNA)在乳腺癌中异常表达,在乳腺癌的发生、发展中起重要作用。mi RNA可能是治疗乳腺癌的新靶点。该研究旨在探讨mi R-199a-3p在乳腺癌中的表达水平,及其对乳腺癌癌细胞增殖和凋亡的影响。方法:运用实时定量聚合酶链式反应(quantitative real-time polymerase chain reaction,QRT-PCR)检测乳腺癌患者癌组织、癌旁正常组织、人乳腺癌细胞和人乳腺细胞中mi RNA-199a-3p的表达水平,mi R-199a-3p mimic(或inhibitor)转染乳腺癌细胞MDA-MB-231过表达(或沉默)mi R-199a-3p的表达后,通过MTT法检测细胞增殖能力,Hoechst染色法和caspase-3活力测试检测细胞凋亡情况。结果:相对癌旁正常组织和人正常乳腺细胞,mi R-199a-3p在乳腺癌患者癌组织和人乳腺癌细胞中表达下调。在MDAMB-231中转染mi R-199a-3p mimic过表达mi R-199a-3p可抑制细胞增殖,促进其凋亡;在MDA-MB-231中转染mi R-199a-3p inhibitor沉默mi R-199a-3p可促进细胞增殖,抑制其凋亡。结论:mi R-199a-3p在乳腺癌中表达下调,并通过调节乳腺癌细胞增殖和凋亡发挥抑癌作用。

miR-199a-3p对前列腺癌细胞迁移及侵袭能力的影响

目的从miR-199a-3p在前列腺癌高、低转移潜能细胞中的表达差异出发,研究其在高转移前列腺癌细胞株1E8细胞运动转移中的作用及可能的分子机制。方法运用Realtime PCR法检测miR-199a-3p在前列腺癌高、低转移潜能配对细胞系中的表达差异。通过划痕实验及transwell实验观察1E8细胞及转染miR-199a-3p mimics及mimics NC后该细胞运动迁移能力的变化。结果 (1)RealtimePCR结果显示高转移潜能1E8细胞中miR-199a-3p表达水平明显低于低转移潜能2B4细胞。(2)上调miR-199a-3p会减弱1E8细胞的运动转移能力。结论 miR-199a-3p的上调可以抑制前列腺癌细胞的运动迁移能力。

miR-199a-3p靶基因预测及生物信息学分析

目的为深入研究miR-199a-3p在膀胱癌形成和发展中的作用提供理论依据。方法分析miR-199a-3p序列,预测其靶基因和转录因子,并对靶基因进行GO富集和KEGG Pathway分析;构建TF-miR-199a-3p-靶基因网络调控图。结果 miR-199a-3p序列在多物种间具有高度保守性;GO分析发现miR-199a-3p的靶基因参与细胞调节、代谢调节、细胞大分子生物合成等生物过程(P<0.01);KEGG Pathway分析发现miR-199a-3p的靶基因显著富集在上皮细胞的细菌入侵通路、ECM受体的相互作用通路、PI3K-Akt信号通路、MAPK信号通路、小细胞肺癌通路、癌症中的蛋白聚糖通路等;根据构建的TF-miR-199a-3p-靶基因网络调控图,挖掘出可能受miR-199a-3p调控的重要基因有MYC、SP1、mTOR、NFκB、NFκB1等。结论 miR-199a-3p可能通过直接靶向作用mTOR,调节PI3K-Akt-mTOR信号通路,从而参与膀胱癌的形成和发展。

miRNA-520a-3p调控MAP3K2表达对肺癌干细胞凋亡的影响

背景:有研究证实,miRNA-520a-3p在肺癌干细胞中有一定调节作用,但具体功能和作用机制尚不明确。目的:探索miRNA-520a-3p对肺癌干细胞凋亡的影响,并对其作用机制进行初步研究。方法:采用免疫磁珠法从肺腺癌细胞株A549中分离出CD133^+肺癌干细胞。实时荧光定量PCR检测miRNA-520a-3p在CD133^+肺癌干细胞中的表达。采用脂质体转染法增加CD133^+肺癌干细胞中miRNA-520a-3p表达水平,流式细胞术检测过表达miRNA-520a-3p对CD133^+肺癌干细胞凋亡的影响。双荧光素酶报告基因实验检测miRNA-520a-3p对MAP3K2基因的调控作用。Western Blotting检测过表达miRNA-520a-3p对CD133^+肺癌干细胞中MAP3K2,Bcl-2和Caspase-3蛋白表达的影响。结果与结论:(1)在CD133^+肺癌干细胞中,miRNA-520a-3p表达水平显著低于CD133-肺癌细胞(P<0.05);(2)过表达miRNA-520a-3p后,显著增加了CD133^+肺癌干细胞凋亡百分比(P<0.05);(3)抑制miRNA-520a-3p表达能够显著增强含有MAP3K2基因3’-非翻译区(3’-UTR)报告质粒的荧光素酶活性(P<0.05),增加miRNA-520a-3p表达能够显著降低含有MAP3K2基因3’-UTR报告质粒的荧光素酶活性(P<0.05);(4)过表达miRNA-520a-3p后,CD133^+肺癌干细胞中MAP3K2,Bcl-2蛋白表达降低(P均<0.05),而Caspase-3蛋白表达增加(P<0.05);(5)结果表明,在CD133^+肺癌干细胞中,miRNA-520a-3p呈低表达状态。miRNA-520a-3p可能通过调控MAP3K2基因表达,诱导CD133^+肺癌干细胞凋亡。

MicroRNA-199a-3p对人骨肉瘤细胞凋亡的影响

目的:探讨microRNA-199a-3p(miR-199a-3p)对人骨肉瘤细胞凋亡的影响。方法:用合成的成熟miR-199a-3p序列模拟物(miR-199a-3p mimics)转染人骨肉瘤细胞(U2-OS),以阴性对照物序列(NC mimics)转染细胞作为阴性对照。转染后应用实时定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)检测各组细胞miR-199a-3p的表达量,Western blot法检测各组细胞中髓样细胞白血病-1(MCL-1)蛋白的表达水平及多聚腺苷二磷酸核糖聚合酶(PARP)的剪切情况,利用流式细胞仪检测各组细胞的凋亡率,并对实验结果进行统计学分析。结果:与对照组相比,转染miR-199a-3p mimics的实验组细胞中,miR-199a-3p的表达量明显升高,MCL-1蛋白的表达降低,PARP蛋白的剪切水平增加,细胞的凋亡率增高,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:miR-199a-3p可以有效促进骨肉瘤细胞的凋亡。

MiR-199a-3p对大鼠肝细胞增殖的抑制作用

目的探讨miR-199a-3p对体外培养SD大鼠BRL-3A增殖的影响.方法人工合成miR-199a-3p模拟物、miR-199a-3p阻遏物及其各自阴性对照载体,分别转染BRL-3A肝细胞,转染后12 h、24 h、48 h和72h,应用定量PCR分析细胞中Cyclin D1和PCNA mRNA表达水平,免疫组化方法观测Cyclin D1和PCNA阳性细胞比率,流式细胞仪检测细胞各周期比例和CCK 8法检测细胞增殖.实验分4组:mimics组,mi-nc组,inhibitors组和in-nc组.结果转染后24 h、48 h、72 h,inhibitors组肝细胞Cyclin D1和PCNA mRNA表达水平较in-nc组显著增多(P<0.05),而mimics组肝细胞Cyclin D1和PCNA mRNA表达水平较mi-nc组显著降低(P<0.05).inhibitors组肝细胞Cyclin D1和PCNA阳性细胞比率均高于mi-nc组(P<0.05),而mimics组肝细胞Cyclin D1和PCNA阳性细胞比率均低于mi-nc组(P<0.05).inhibitorss组肝细胞G0/G1期细胞比例明显低于in-nc组(P<0.05),而mimics组肝细胞G0/G1期细胞比例明显高于mi-nc组(P<0.05).同时,inhibitors组肝细胞S期细胞比例明显低于mi-nc组(P<0.05)和in-nc组(P<0.05).inhibitors组肝细胞增殖能力明显高于in-nc组(P<0.05),mimics组肝细胞增殖能力明显低于mi-nc组(P<0.05).结论 miR-199a-3p能够延长大鼠BRL-3A肝细胞周期和抑制肝细胞增殖,其作用可能与抑制Cyclin D1和PCNA的表达有关.

LncRNA NORAD通过miR-199a-3p调控ZNF217对非小细胞肺癌细胞增殖、凋亡及化疗敏感性的影响

背景与目的针对非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)的治疗和诊断仍然是医学界的难题,而探究NSCLC发生发展的分子机制是当前研究的热点。长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)NORAD在多种癌细胞中高表达,可能是促进NSCLC发生的分子靶点。探讨LncRNA NORAD通过miR-199a-3p调控锌指蛋白217(zinc finger protein 217,ZNF217)对NSCLC细胞增殖、凋亡及化疗敏感性的影响。方法实时定量聚合酶链式反应(real-time quantitative polymerase chain reaction,qRT-PCR)法检测正常肺上皮细胞BEAS-2B、肺癌H460细胞和顺铂(Cisplatin,DDP)耐药细胞株H460/DDP细胞中NORAD、miR-199a-3p、ZNF217基因表达;将H460/DDP细胞分为control组、si-NC组、si-NORAD组、miR-NC组、miR-199a-3p mimic组、si-NORAD+inhibitor NC组、si-NORAD+miR-199a-3p inhibitor组。检测细胞增殖、细胞凋亡情况,各组细胞NORAD、miR-199a-3p、ZNF217基因表达,Ki-67、caspase-9、ZNF217蛋白表达量;验证miR-199a-3p与NORAD和ZNF217的关系。结果与BEAS-2B细胞相比,H460和H460/DDP细胞中NORAD、ZNF217 mRNA表达显著升高(P<0.05),miR-199a-3p表达显著降低(P<0.05)。与H460细胞相比,H460/DDP细胞中NORAD、ZNF217 mRNA表达显著升高(P<0.05),miR-199a-3p表达显著降低(P<0.05)。与control组和si-NC组相比,si-NORAD组H460/DDP细胞增殖率、NORAD、ZNF217 mRNA表达、Ki-67、ZNF217蛋白表达显著降低(P<0.05),凋亡率、miR-199a-3p表达、caspase-9表达显著升高(P<0.05)。与miR-NC组相比,miR-199a-3p mimic组H460/DDP细胞增殖率、NORAD、ZNF217 mRNA表达、Ki-67、ZNF217蛋白表达显著降低(P<0.05),凋亡率、miR-199a-3p、caspase-9表达显著升高(P<0.05)。与si-NORAD+inhibitor NC组相比,si-NORAD+miR-199a-3p inhibitor组H460/DDP细胞增殖率、ZNF217 mRNA表达、Ki-67、ZNF217蛋白表达显著升高,凋亡率、miR-199a-3p表达、caspase-9表达显著降低(P<0.05)。结论下调NORAD表达可增强miR-199a-3p表达并抑制ZNF217表达,进而抑制H460/DDP细胞增殖,促进其凋亡,增强其DDP化疗敏感性。

miR-199a-3p/Nme2在TGF-β1信号通路中的作用分析

通过microRNA芯片技术在小鼠GC-1 spg细胞中筛选发现microRNA-199a-3p(miR-199a-3p)受转化生长因子TGF-β1调节。为了进一步探讨二者的关系,通过基因克隆与载体构建技术、双荧光素酶报告基因检测及定量PCR实验,发现miR-199a-3p靶向识别肿瘤转移抑制基因2(Nme2)的3'非编码区(UTR)序列,且正向调控Nme2的表达。利用TGF-β1处理GC-1 spg细胞后,结果显示Nme2和miR-199a-3p在mRNA水平的表达均显著上调;进一步将miR-199a-3p和TGF-β1双重作用于GC-1 spg细胞后,结果表明Nme2的表达会明显增强,而且在TGF-β1通路中,miR-199a-3p被抑制的部分功能可能会被Nme2补偿。综上,miR-199a-3p对Nme2基因具有直接靶向识别和调控作用,且在参与TGF-β1信号通路的生物学效应中,二者在功能上相互关联。

miRNA-199a-5p对骨肉瘤细胞增殖及自噬的影响

目的探讨mi RNA-199a-5p对人骨肉瘤细胞株U2OS增殖及自噬的影响及其可能的作用机制。方法实时定量PCR法检测32例骨肉瘤患者的病理组织标本及配对癌旁正常组织中mi RNA-199a-5p的表达水平。将mi RNA-199a-5p mimics转染入U2OS细胞,使其过表达mi RNA-199a-5p,采用CCK-8法和流式细胞仪检测细胞增殖及周期的变化;Western blot检测周期相关蛋白(cyclin D1、P27、p Rb)及自噬相关蛋白(Beclin 1、LC3Ⅱ/Ⅰ)表达水平。结果 mi RNA-199a-5p在骨肉瘤组织及癌细胞U2OS中低表达,且表达水平与肿块大小、远距转移、Enneking临床分期及病理分级密切相关。过表达mi RNA-199a-5p后,U2OS细胞的增殖能力显著降低(P<0.05),同时cyclin D1、p Rb表达水平显著下降,而P27、LC3Ⅱ/Ⅰ、Beclin 1的表达水平显著增加(P<0.05)。结论 mi RNA-199a-5p能够抑制人骨肉瘤细胞株U2OS的增殖并激活细胞自噬;其作用机制可能与下调cyclin D1、上调P27、抑制p Rb蛋白的磷酸化、造成细胞周期G1/S阻滞有关。提示mi RNA-199a-5p可以作为骨肉瘤临床治疗的潜在作用位点。