血清miRNA-21-5p、miRNA-5189-5p表达水平对行根治性前列腺切除术老年前列腺癌患者预后的评估价值

目的分析血清微小RNA(miRNA)-21-5p、miRNA-5189-5p表达水平对行腹腔镜根治性前列腺切除术(LRP)的老年前列腺癌患者预后的评估价值。方法选取2014年1月至2018年9月该院收治的行LRP治疗的213例老年前列腺癌患者作为研究对象,根据5年随访结局将患者分为预后优良组(87例)和预后不良组(126例)。收集患者术前临床基线资料及血清miRNA-21-5p、miRNA-5189-5p表达水平。采用Logistic回归分析筛选影响患者预后的因素,并以独立危险因素构建预后预测模型,绘制受试者工作特征(ROC)曲线分析其预测价值。结果多因素Logistic回归分析结果显示,患者血清前列腺特异性抗原(PSA)水平、切缘阳性、血清miRNA-21-5p与miRNA-5189-5p表达水平均为行LRP的老年前列腺癌患者预后的独立危险因素(P<0.05),以独立危险因素构建联合预测模型,各因素单独预测行LRP的老年前列腺癌患者预后的曲线下面积均小于4项联合(P<0.05)。结论血清miRNA-21-5p、miRNA-5189-5p表达水平对行LRP的老年前列腺癌患者预后的预测具有较高价值。

肺部超声评分及血浆miRNA-21-5p对脓毒症患者肺损伤程度及预后预判价值

目的分析外周血miRNA-21-5p水平与肺部超声评分(LUS)对脓毒症患者并发急性肺损伤(ALI)的病情及预后的预测价值。方法选择我院就诊的90例ALI患者作为研究对象,根据ALI患者病情严重程度分为3组:低危组(38例,APACHEⅡ评分≤10分)、中危组(32例,APACHEⅡ评分10-20分)及重危组(20例,APACHEⅡ评分≥20分)。检测比较3组血浆miRNA-21-5p、B型脑钠肽(BNP)、D二聚体(D-dimer)、氧合指数(OI)、血管外肺水指数(EVLWI)以及LUS评分。采用Pearson直线分析评估血浆miRNA-21-5p水平及LUS评分和APACHEⅡ评分相关程度。依据患者预后结局分为存活组(71例)和死亡组(19例),比较上述临床指标的差异。应用多元Logistic回归分析上述指标与患者预后结局的危险程度。应用受试者工作特征曲线(ROC)分析血浆miRNA-21-5p水平与LUS评分对ALI患者预后的诊断价值。结果中危组血浆miRNA-21-5p、BNP、EVLWI及LUS评分均低于重危组(P<0.05),但均高于轻危组(P<0.05);而中危组OI高于重危组(P<0.05),但低于轻危组(P<0.05)。三组D-dimer均无统计学差异(P>0.05)。血浆miRNA-21-5p水平及LUS评分和APACHEⅡ评分均呈正相关(r=0.857,P=0.026;r=0.795,P=0.036)。死亡组的血浆miRNA-21-5p、BNP、EVLWI及LUS评分显著高于存活组(P<0.05),但OI则显著低于存活组(P<0.05)。血浆miRNA-21-5p水平与LUS评分是ALI患者预后结局的危险因素(OR=3.656,P=0.013;OR=2.913,P=0.029)。血浆miRNA-21-5p切点3.25与LUS评分切点17.50对预测ALI患者短期预后的曲线下面积为0.856,灵敏度为84.2%和特异度为81.7%(P=0.018)。结论血浆miRNA-21-5p与LUS评分能有效评估ALI患者病情严重程度,对短期预后结局预测有较好价值。

恒温扩增检测miRNA-21-5p系统的构建和初步评价

目的建立一种基于滚环扩增和CRISPR-Cas9系统的荧光检测miRNA-21-5p方法,并对检测性能进行初步评价。方法设计一种特异性的锁式探针识别靶标miRNA-21-5p,在大肠杆菌DNA连接酶和Phi29 DNA聚合酶的作用下,进行滚环扩增,扩增形成一条长重复单链。在Cas9酶的辅助下进行特异性识别,并形成双链DNA,然后通过加SYBR GreenⅠ荧光染料与形成双链DNA产物结合,产生荧光信号的荧光强度与双链DNA产物浓度成正比,并对该系统进行特异性和灵敏度进行分析。用构建的方法对胃癌患者血清和健康人血清进行miRNA检测,是否成功检测miRNA,同时检测两组血清中胃蛋白酶原Ⅰ/胃蛋白酶原Ⅱ(PGⅠ/Ⅱ)水平,绘制受试者工作特征(ROC)曲线,根据曲线下面积(AUC)分析miRNA-21-5p、胃蛋白酶原对胃癌的诊断价值。结果构建的扩增系统能检测到血清中miRNA,胃癌血清中miRNA-21-5p荧光强度高于健康对照组,差异有统计学意义(P<0.05);ROC曲线结果显示,miRNA-21-5p、PGⅠ/Ⅱ单独诊断胃癌的AUC分别为0.72、0.80,两者联合检测诊断的AUC为0.85,高于任意单个指标诊断。结论用该方法直接检测miR-21-5p操作方便快捷,不需要复杂热循环仪器,适用范围广。

miRNA-21-5p对光诱导的人视网膜色素上皮细胞氧化应激损伤的影响

目的研究miRNA-21-5p对光诱导的人视网膜色素上皮细胞氧化应激损伤的影响。方法将体外培养的人视网膜色素上皮细胞系ARPE-19细胞随机分为对照组(TransIntro EL Transfection Reagent转染液培养)、损伤组(TransIntro EL Transfection Reagent转染液+光损伤)、过表达组(TransIntro EL Transfection Reagent转染液+miRNA-21-5p mimics+光损伤)、阴性组(TransIntro EL Transfection Reagent转染液+miRNA-21-5p mimics NC+光损伤)、PI3K/Akt阻断剂组(TransIntro EL Transfection Reagent转染液+miRNA-21-5p mimics+LY294002+光损伤)。使用光照强度为(16500±200)lx的LED冷光灯建立ARPE-19细胞光损伤模型,利用TransIntro EL Transfection Reagent转染液行细胞转染。采用qRT-PCR法检测各组ARPE-19细胞miRNA-21-5p表达水平,采用CCK-8法检测各组ARPE-19细胞活力,流式细胞仪检测各组ARPE-19细胞活性氧(ROS)含量变化,ELISA法检测各组ARPE-19细胞超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)含量。结果与对照组相比,损伤组ARPE-19细胞miRNA-21-5p表达明显下降,细胞存活率明显下降,ROS含量显著升高,SOD活性明显降低,MDA含量明显增加(均为P<0.001);与损伤组相比,过表达组ARPE-19细胞miRNA-21-5p表达明显升高,细胞存活率明显上升,ROS含量明显降低,SOD活性升高,MDA含量减少(均为P<0.001),而阴性组ARPE-19细胞miRNA-21-5p表达、细胞存活率、ROS含量、SOD活性、MDA含量均无明显差异(均为P>0.05);与过表达组相比,PI3K/Akt阻断剂组ARPE-19细胞miRNA-21-5p表达明显降低,细胞存活率明显下降,ROS含量明显升高,SOD活性明显降低,MDA含量明显增加(均为P<0.01)。结论miRNA-21-5p能显著降低光诱导的ARPE-19细胞氧化应激水平,提高光诱导的ARPE-19细胞抗氧化能力。

左炔诺孕酮联合miRNA-21-5p抑制剂对子宫内膜癌细胞增殖、转移的作用及机制

目的利用左炔诺孕酮(LNG)和miRNA-21-5p抑制剂(inhibitor)联合靶向多发性肿瘤抑制基因磷酸酶基因(PTEN)评估对子宫内膜癌细胞增殖、转移的作用。方法将实验用人子宫内膜癌细胞分为Control组、LNG处理组、LNG处理+miR-21 NC组和LNG处理+miR-21 inhibitor组;免疫组化检测LNG治疗前后子宫内膜癌患者内膜组织中PTEN表达;CCK8和流式细胞仪筛选LNG最佳作用浓度和时间;实时荧光定量(qRT)-聚合酶链反应(PCR)法检测miR-21-5p inhibitor处理后miR-21-5p mRNA表达水平;LNG联合miR-21-5p inhibitor处理后CCK8检测增殖,流式检测凋亡,Transwell检测侵袭,划线检测迁移,Western印迹检测细胞中PTEN、磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)、p-PI3K、丝氨酸/苏氨酸激酶(AKT)和p-AKT蛋白表达水平。结果与治疗前比,LNG治疗后子宫内膜组织中PTEN表达水平显著升高(P=0.000)。筛选出LNG最佳浓度为100μmol/L,时间为24 h。miR-21-5p inhibitor处理后miR-21-5p表达显著降低(P<0.05)。与Control组相比,LNG组处理后细胞凋亡及PTEN表达显著升高,细胞迁移、侵袭能力及细胞活力显著下降(P<0.05),miR-21-5p、p-AKT/AKT、p-PI3K/PI3K表达也明显下降(P<0.05);与LNG组相比,LNG+miR-21-5p inhibitor组细胞活力、细胞凋亡、迁移、侵袭能力、miR-21-5p表达、p-AKT/AKT、p-PI3K/PI3K明显下降,PTEN表达则明显升高(P<0.05)。结论LNG联合miR-21-5p inhibitor具有协同抑制子宫内膜癌细胞增殖、转移的作用,此过程与靶向上调PTEN并抑制PI3K/AKT通路活化相关。

miRNA-21-5p通过pdcd4靶向调控胃癌细胞对顺铂敏感性的机制研究

目的:探究微小RNA-21-5p(miRNA-21-5p)通过下调pdcd4基因表达调控胃癌耐药细胞系SGC-7901/DDP对顺铂敏感性机制的研究。方法:采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测不同浓度的顺铂(0、1、2、4、8、16、32μmol/L)对胃癌细胞系SGC7901及胃癌耐药细胞系SGC7901/DDP增殖抑制的影响。通过实时荧光定量PCR检测SGC7901/DDP细胞中瞬时转染miRNA-21-5p inhibitors后miRNA-21-5p相对表达量的变化。采用Western blot及实时荧光定量PCR检测转染组、无关序列转染组(NC组)及空白转染组(CON组)分别转染miRNA-21-5p inhibitors及无关序列后对靶基因pdcd4蛋白及mRNA表达量的影响。结果:MTT实验结果显示耐药细胞SGC7901/DDP相对于亲本细胞SGC7901对顺铂不敏感(P<0.05)。实时荧光定量PCR结果表明,转染组miRNA-21-5p表达量均明显低于NC组和CON组(P<0.01),转染组pdcd4 mRNA表达量均明显高于NC组和CON组(P<0.01)。Western blot检测结果示,转染组pdcd4蛋白表达量均明显高于NC组和CON组(P<0.01)。结论:miRNA-21-5p表达水平的升高在一定程度上有利于胃癌细胞增殖,并通过下调pdcd4的表达,降低胃癌细胞对顺铂的敏感性。

血清miRNA-21-5p、miRNA-122-5p表达水平对绝经后骨质疏松性髋部骨折的诊断价值评价

目的分析miRNA-21-5p、miRNA-122-5p表达水平对绝经后骨质疏松性髋部骨折的诊断价值。方法选取本院于2020年1~12月收治的60例患者分为四组进行研究。分析miRNA-21-5p、miRNA-122-5p水平变化并分析其对疾病的反映情况。结果四组的miRNA-21-5p、miRNA-122-5p并无明显差异(P>0.05);骨质疏松性髋部骨折组水平明显高于正常组;且其对疾病的诊断准确率明显更高。结论miRNA-21-5p、miRNA-122-5p能够对骨质疏松等疾病进行预测及诊断,可作为骨质疏松性髋骨骨折的诊断指标。

miRNA-21-5p调节IL-1β诱导大鼠滑膜细胞凋亡作用机制研究

目的:探讨miRNA-21-5p在由IL-1β所诱导的大鼠滑膜细胞凋亡中的作用机制。方法:将大鼠滑膜细胞进行体外培养,采用甲苯胺蓝染色法对Ⅱ型胶原及蛋白多糖进行鉴定;将滑膜细胞分为正常对照组(NC组),对照组(Control组),空白质粒转染组(BL组)以及转染组(miRNA组)4组。Control、BL和miRNA 3组细胞均经IL-1β诱导处理后采用MTT检测细胞增殖率,同时采用RT-PCR和Westem blot检测Bax和Bcl-2表达。结果:所有细胞均能分泌蛋白多糖和Ⅱ型胶原。MTT检测发现,经IL-1β处理后,miRNA组细胞增殖率显著低于Control组[(31.6±2.9)%vs(54.7±3.5)%],差异具有统计学意义(P<0.05);与Control组相比,miRNA组Bax mRNA及蛋白表达水平显著增高(1.00±0.31 vs 0.75±0.15,P<0.05),miRNA组Bcl-2 mRNA及蛋白表达水平显著降低(2.24±1.02 vs 1.00±0.64,P<0.05)。结论:miRNA-21-5p可通过促进Bax以及抑制Bcl-2表达,对由IL-1β所诱导的滑膜细胞异常增生起到保护的作用,为治疗类风湿性关节炎提供了新的思路。

miRNA-21-5p在乳腺癌组织中的表达及与超声征象的相关性

目的探讨乳腺癌组织中miRNA-21-5p的表达及与超声声像图特征间的相关性。方法选择2016年4月—2019年6月本院普外科接诊治的92例乳腺癌患者作为研究对象。通过qRT-PCR法检测92例乳腺癌患者癌组织中miRNA-21-5p的表达情况,分析其在不同分期乳腺癌中的表达特点及与相应的乳腺癌超声声像图特征之间的关系。结果乳腺癌组织中miRNA-21-5p的表达水平明显高于癌旁正常组织(t=0.316,P<0.05)。随着肿瘤分期的升高,癌组织中miRNA-21-5p的表达水平逐渐升高,Ⅰ+Ⅱ期与Ⅲ+Ⅳ期比较差异有统计学意义(t=-2.132,P<0.05)。乳腺癌组织中miRNA-21-5p表达水平升高与超声所见肿瘤直径>2 cm、微小钙化、富血供及淋巴结转移有关(P<0.05),而与肿块形态、毛刺征及肿块后方超声回声有否衰减无关(P>0.05)。结论乳腺癌组织中miRNA-21-5p表达升高;miRNA-21-5p在乳腺癌组织中的表达与某些超声征象有一定的相关性,超声联合miRNA-21-5p检测,有助于为乳腺癌的诊断、治疗及预后评估等提供更多的参考依据。

miRNA-21-5p对食管癌的诊断价值及其与STAT3的相关性研究

目的分析微小RNA(miRNA)-21-5p在食管癌中的潜在诊断价值,并探索其可能的作用机制。方法选取2016年1月-2018年6月在浙江大学医学院附属邵逸夫医院下沙院区治疗的食管癌患者78例(病例组)以及体检健康者69名(对照组)。采集患者治疗前血液及术中癌组织、癌旁组织,通过实时聚合酶链反应(PCR)检测血清中miRNA-21-5p的表达,通过picTar、TagetScan、Tarbase 3个数据库分别预测miRNA-21-5p的靶基因;利用Draw venn diagram选取3个数据库预测靶基因交集;采用实时PCR检测食管癌患者癌组织和癌旁组织中信号传导和转录激活子3(STAT3)mRNA的表达情况。结果实时PCR结果显示,miRNA-21-5p在食管癌患者血清中高表达,且显著高于对照组(P<0.01);STAT3 mRNA在食管癌患者癌组织中高表达,显著高于癌旁组织(P<0.01);Spearman相关性分析发现两者呈正相关。结论在食管癌患者血清中miRNA-21-5p呈高表达,同时在癌组织中miRNA-21-5p的预测靶基因STAT3 mRNA也呈高表达,并且两者呈正相关。

血清miRNA-21-5p和miRNA-574-5p在良恶性肺结节鉴别诊断中的价值

目的探究血清miRNA-21-5p和miRNA-574-5p在良恶性肺结节鉴别诊断中的价值。方法本院收治肺结节患者的57例,据病理结果分为良性结节组(n=12)和恶性结节组(n=45)。收集临床资料,RT-PCR检测血清miRNA-21-5p和miRNA-574-5p水平。结果两组在性别、年龄、不同直径、肿瘤家族史、不同密度结节、吸烟史等方面无差异(P>0.05);两组在分布上有显著性差异(P<0.05),其中恶性结节组在右肺上叶的发生率最高(48.89%)。两组miRNA-21-5p和miRNA-574-5p水平比较,P<0.05,其中恶性结节组更高。据ROC曲线分析,miRNA-21-5p和miRNA-574-5p诊断恶性肺结节的AUC分别为0.690和0.711,联合AUC为0.819。结论血清miRNA-21-5p和miRNA-574-5p在良恶性肺结节鉴别中诊断,具有较高的价值,有成为潜在的血清生物标志物的可能性。

miRNA-21-5P在食管鳞癌患者中的鉴别诊断价值

目的检测食管癌患者血清miRNA-21-5P的表达水平,探讨miRNA-21-5P对食管癌患者的鉴别诊断价值。方法选取2019年12月至2020年3月于朝阳市中心医院就诊的食管鳞癌患者50名(疾病组)及食管炎患者20名(相关疾病对照组),采集食管炎患者血清样本及组织样本,以及食管鳞癌患者治疗前血清样本、术中食管鳞癌组织及癌旁组织。通过实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测2组血清及组织样本中miRNA-21-5P的表达水平,分析miRNA-21-5P表达水平与食管鳞癌患者临床病理参数的关系,采用ROC曲线评估其对食管鳞癌的鉴别诊断价值。结果食管鳞癌患者血清miRNA-21-5P的表达水平(3.60±0.09)显著高于食管炎患者(1.01±0.05),差异有统计学意义(t=24.43,P<0.05);食管鳞癌患者癌组织中miRNA-21-5P的表达水平(4.36±0.29)显著高于癌旁组织(1.31±0.16),差异亦具有统计学意义(t=20.10,P<0.05);而食管癌患者组织中miRNA-21-5P的表达水平显著高于食管炎患者组织(t=20.100,P<0.05)。ROC曲线分析结果显示,组织中miRNA-21-5P筛查食管鳞癌的ROC曲线下面积(AUC^(ROC))为0.767(95%CI:0.650,0.859),当cut-off值为0.39时,其敏感性88%,特异性为75%。血清miRNA-21-5P筛查食管鳞癌的AUC^(ROC)为0.671(95%CI:0.549,0.779),当cut-off值为0.63时,其敏感性为80%,特异性为66%。结论miRNA-21-5P在食管鳞癌血清中的诊断价值与组织相当,或可用于对食管鳞癌的鉴别诊断。

MiRNA-21-5p靶向调节SATB1参与妊娠滋养层细胞的增殖和迁移作用的研究

目的探究miRNA-21-5p对妊娠滋养层细胞增殖和迁移的作用及机制。方法RT-qPCR检测mi RNA-21-5p和核基质结合区结合蛋白1(special AT-rich binding protein 1,SATB1)在子痫前期(preeclampsia,PE)患者和正常孕妇的胎盘组织中的表达。CCK-8和EDU实验检测滋养细胞活力和增殖;Transwell检测细胞迁移;RT-qPCR和western blot检测MMP2、MMP9表达;Targetscan数据库和双荧光素酶实验预测并验证miRNA-21-5p与SATB1的结合。结果与对照组比较,PE患者胎盘组织中miRNA-21-5p表达显著增加,SATB1表达显著下降(P<0.05)。干扰miRNA-21-5p可增加细胞活力和增殖(P<0.001);增加细胞迁移和MMP2、MMP9表达(P<0.001)。MiRNA-21-5p靶向SATB1并负调控其表达(P<0.001)。干扰SATB1降低了干扰miRNA-21-5p对细胞增殖和迁移的促进作用(P<0.05)。结论miRNA-21-5p通过靶向上调SATB1促进妊娠滋养层细胞增殖和迁移,从而参与PE的发生发展。

外泌体源性miRNA-21-5p/Smad7在石英粉尘致大鼠肺纤维化中的作用

[背景]石英粉尘在肺部无法降解,职业生产过程中吸入大量石英粉尘会导致肺纤维化的发生,进而发展为矽肺病。近年来,研究发现外泌体可能通过携带微小核糖核酸(miRNA)参与纤维化疾病的发病过程,但其在矽肺进程中的作用机制仍然有待研究。[目的]研究外泌体源miRNA-21-5p/抗生物皮肤生长因子母体同源蛋白7(Smad7)在石英粉尘致大鼠肺纤维化的中作用。[方法]24只健康雄性SD大鼠被随机分为4组(每组6只):对照4周组、对照16周组和石英4周组、石英16周组。在实验开始时,采用一次性非暴露式气管内染尘的方式分别向石英组和对照组大鼠气管内注入1 mL石英悬液(50 mg·mL^(-1))和1 mL生理盐水。染尘后第4周、16周行肺泡灌洗术获取肺泡灌洗液,采用聚乙二醇(PEG)沉淀法提取灌洗液内的外泌体,透射电子显微镜(TEM)进行形态学的鉴定,纳米追踪分析(NTA)检测外泌体的粒径,免疫印迹法(WB)检测外泌体的标志蛋白CD9和CD63。采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法测定外泌体内miRNA-21-5p的表达水平;采用苏木精-伊红染色法(HE)染色及马松染色法(Masson)观察大鼠肺组织损伤及纤维化病变程度;采用羟脯氨酸(HYP)法检测肺组织胶原含量;采用WB检测肺组织Smad7蛋白的表达。[结果]病理染色结果显示,与对照组相比,染尘4周后大鼠肺组织炎细胞浸润,肺泡壁增厚,胶原蛋白增多,染尘16周后出现胶原蛋白沉积和矽结节;与对照组相比,染尘4周、16周时石英组大鼠肺组织中HYP的表达水平均增高(P<0.05);透射电镜下可见外泌体呈经典的茶托样结构,NTA分析显示其平均粒径为95.8 nm,WB检测到外泌体标志蛋白CD9、CD81表达阳性;染尘4周、16周时,与对照组相比,石英组大鼠肺泡灌洗液内外泌体源性miRNA-21-5p表达均增高(P<0.05),肺组织Smad7蛋白表达量均降低(P<0.05)。[结论]外泌体源性miRNA-21-5p和Smad7可能参与了石英粉尘致大鼠肺纤维化的作用机制。

枸杞多糖通过miRNA-21-5p靶向PTEN调控PI3K/Akt/mTOR通路抗人视网膜色素上皮细胞光损伤机制

目的:研究枸杞多糖(LBP)对光诱导人视网膜色素上皮(RPE)细胞凋亡作用的影响及其保护机制。方法:将体外培养的人视网膜色素上皮细胞(ARPE-19)随机分为空白对照组,模型组,枸杞多糖低、中、高剂量组,建立人RPE细胞光损伤模型,于光照24h后进行相应指标检测。采用CCK-8法检测细胞存活率;流式细胞术检测细胞凋亡率;qRT-PCR法检测miRNA-21-5p、PTENmRNA表达水平;WesternBlot法检测PTEN、磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)、p-PI3K、蛋白激酶B(Akt)、p-Akt、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)、P-mTOR蛋白表达量。结果:与空白对照组比较,模型组细胞存活率显著降低,细胞凋亡率显著升高,miRNA-21-5p表达显著下降,PTENmRNA表达显著升高,PI3K、Akt、mTOR磷酸化水平显著降低,PTEN蛋白表达量显著升高(P<0.01);与模型组比较,枸杞多糖低、中、高剂量组细胞存活率显著升高,细胞凋亡率显著下降,miRNA-21-5p表达显著升高,PTENmRNA表达均显著降低,PI3K、Akt、mTOR磷酸化水平均显著升高,PTEN蛋白表达量显著降低(P<0.05,P<0.01);与LBP低剂量组比较,中、高剂量组细胞存活率显著升高,细胞凋亡率显著降低,miRNA-21-5p表达显著升高,PTENmRNA表达显著降低,PI3K、Akt、mTOR磷酸化水平均显著增高,PTEN蛋白表达量显著降低(P<0.05,P<0.01);LBP高剂量组与LBP中剂量组相比细胞存活率显著上升,细胞凋亡率显著降低,miRNA-21-5p表达显著上升,PTENmRNA表达显著下降,mTOR、PI3K、Akt磷酸化水平均显著升高,PTEN蛋白表达量显著降低(P<0.05,P<0.01)。结论:枸杞多糖可抑制光诱导下ARPE-19细胞凋亡,其机制可能是通过上调miRNA-21-5p、下调PTENmRNA表达,从而激活PI3K/Akt/mTOR信号通路来增强保护RPE细胞对抗光损伤作用,且呈浓度依赖性。

基于miRNA21-5p调控TGF-β1/Smads信号通路探讨苓桂气化方抗射血分数保留心力衰竭心肌纤维化的机制

目的基于miRNA21-5p调控转化生长因子-β1(transforming growth factor beta 1,TGF-β1)/Smads信号通路探讨苓桂气化方抗射血分数保留心力衰竭(heart failure with preserved ejection fraction,HFpEF)心肌纤维化的机制。方法40只4周龄自发性高血压大鼠(spontaneously hypertensive rats,SHR)平均分为HFpEF组、沙库巴曲缬沙坦组(LCZ696,0.018 g·kg^(-1))、苓桂气化方低剂量组(LGQH-L,3.87 g·kg^(-1))和苓桂气化方高剂量组(LGQH-H,7.74 g·kg^(-1)),给予高脂、高盐及高糖饮食16周及腹腔注射链脲霉素溶液8周建立HFpEF大鼠模型。10只威斯塔京都(Wistar Kyoto,WKY)大鼠和10只SHR大鼠作为对照组,以普通饲料喂养至实验结束。造模成功后,WKY、SHR和HFpEF组给予等剂量生理盐水,其他3组按照预先规定的干预措施,每天灌胃1次,持续6周。干预结束后,行超声心动图测量左心室(left ventricle,LV)前壁厚度(LV end-diastolic anterior wall thickness,LVAWd)、LV后壁厚度(LV end-diastolic posterior wall thickness,LVPWd)、LV舒张末内径(LV end-diastolic internal diameter,LVIDd)、LV射血分数(LV ejection fraction,LVEF)、LV舒张早期二尖瓣流入峰值速度(E)、舒张晚期二尖瓣流入峰值速度(A)和LV舒张早期二尖瓣环运动速度(e'),并计算E/A和E/e';酶联免疫吸附试验检测血清心房钠尿肽(atrial natriuretic peptide,ANP)、B型利钠肽(B-type brain natriuretic peptide,BNP)及半乳糖凝集素3(Galectin-3,Gal-3);病理切片进行苏木精伊红及马松染色观察心肌肥厚及纤维化,并计算LV室壁厚度(LV wall thickness,LVWT)、胶原体积分数(collagen volume fraction,CVF)及血管周围纤维化比率(perivascular fibrosis ratio,PFR);实时定量聚合酶链反应检测LV心肌miRNA21-5p及TGF-β1/Smads信号通路相关mRNA表达;蛋白印迹检测LV心肌TGF-β1/Smads信号通路相关蛋白表达。结果与对照组比较,HFpEF组的LVAWd、LVPWd、LVIDd、E/A、E/e'、ANP、BNP、Gal-3、LVWT、CVF和PFR显著升高(P<0.05或P<0.01);LV心肌miR-NA21-5,α-SMA、CollⅠ、CollⅢ、TGF-β1、Smad2、Smad3 mRNA表达和α-SMA、CollⅠ、CollⅢ、TGF-β1、P-Smad2/3蛋白表达显著上调(P<0.05或P<0.01);Smad7 mRNA及蛋白表达显著下调(P<0.05或P<0.01)。与HFpEF组比较,苓桂气化方呈剂量依赖性减少LVAWd、LVPWd、LVIDd、E/A、E/e'、ANP、BNP、Gal-3、LVWT、CVF和PFR(P<0.05或P<0.01);下调miRNA21-5p,α-SMA、CollⅠ、CollⅢ、TGF-β1、Smad2、Smad3 mRNA表达和α-SMA、CollⅠ、GF-β1、P-Smad2/3蛋白表达(P<0.05或P<0.01);上调Smad7 mRNA及蛋白表达(P<0.05或P<0.01)。结论苓桂气化方可能通过靶向miRNA21-5p调控TGF-β1/Smads信号通路抑制心肌纤维化,从而减轻HFpEF大鼠LV重塑和舒张功能障碍,是治疗HFpEF的有效中药复方。

miRNA-432-5p在脂多糖诱导的肺泡上皮细胞损伤中的作用及可能机制研究

目的探讨miRNA-432-5p在脂多糖(LPS)诱导的肺泡上皮细胞损伤中的作用及可能机制。方法人肺泡上皮细胞A549随机分为对照组、LPS组、miRNA-432-5p mimics组及miRNA-432-5p siRNA组。利用CCK-8实验检测细胞的活性;利用ELISA法检测细胞培养液中炎性因子肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)、白细胞介素1β(IL-1β)的含量;利用RT-qPCR检测细胞中miRNA-432-5p mRNA的表达;利用Hoechst染色检测细胞的凋亡情况;利用Western blot检测细胞中NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)、半胱氨酸蛋白酶1(Caspase1)、白细胞介素1β(IL-1β)蛋白的表达。结果LPS组细胞的活性OD值(6 h:0.809±0.09;12 h:0.601±0.09;24 h:0.485±0.43)明显低于对照组的1.000±0.00,差异均具有统计学意义(P<0.05);LPS组细胞中miRNA-432-5p mRNA表达水平为1.563±0.10,明显高于对照组的1.000±0.00,细胞凋亡率为(41.52±1.83)%,明显高于对照组的(0.000±0.00)%,差异均有统计学意义(P<0.05);LPS组培养液中的TNF-α、IL-6和IL-1β含量分别为(36.32±6.07)pg/mL、(45.08±3.75)pg/mL、(40.87±6.65)pg/mL,明显高于对照组的(5.27±0.84)pg/mL、(5.57±0.65)pg/mL、(3.26±0.85)pg/mL,差异均具有统计学意义(P<0.05),LPS组细胞中的NLRP3、Caspase1和IL-1β蛋白表达水平分别为0.734±0.08、0.305±0.06、0.430±0.05,明显高于对照组的0.163±0.03、0.025±0.01、0.032±0.01,差异均具有统计学意义(P<0.05)。miRNA-432-5p mimics组细胞凋亡率为(24.23±3.09)%,明显低于LPS组的(41.52±1.83)%,细胞活性为0.639±0.09,明显高于LPS组的0.468±0.07,差异均有统计学意义(P<0.05);miRNA-432-5p mimics组培养液中的TNF-α、IL-6和IL-1β含量分别为(22.85±4.01)pg/mL、(29.15±5.22)pg/mL、(20.63±3.89)pg/mL,明显低于LPS组的(36.32±6.07)pg/mL、(45.08±3.75)pg/mL、(40.87±6.65)pg/mL,差异均具有统计学意义(P<0.05);miRNA-432-5p mimics组细胞中的NLRP3、Caspase1和IL-1β蛋白表达水平分别为0.473±0.04、0.121±0.02、0.279±0.04,明显低于LPS组的0.734±0.08、0.305±0.06、0.430±0.05,差异均有统计学意义(P<0.05)。miRNA-432-5p siRNA组细胞凋亡率为(56.44±3.25)%,明显高于LPS组的(41.52±1.83)%,细胞活性为0.348±0.06,明显低于LPS组的0.468±0.07,差异均有统计学意义(P<0.05);miRNA-432-5p siRNA组培养液中的TNF-α、IL-6和IL-1β含量分别为(51.08±4.12)pg/mL、(53.61±4.83)pg/mL、(59.97±3.62)pg/mL,明显高于LPS组的(36.32±6.07)pg/mL、(45.08±3.75)pg/mL、(40.87±6.65)pg/mL,差异均有统计学意义(P<0.05);miRNA-432-5p siRNA组细胞中的NLRP3、Caspase1和IL-1β蛋白表达水平分别为0.969±0.12、0.430±0.09、0.575±0.07,明显高于LPS组的0.734±0.08、0.305±0.06、0.430±0.05,差异均具有统计学意义(P<0.05)。结论miRNA-432-5p可通过抑制NLRP3炎性小体通路的激活,对受损细胞发挥保护作用。

TGF-β_(1)通过miR-21d-5p调控BMP7表达诱导肾小管上皮细胞增殖及迁移

目的:探讨转化生长因子-β_(1)(TGF-β_(1))可能通过微小RNA-21d-5p(miR-21d-5p)对骨形态发生蛋白7(BMP7)的调控,从而对肾小管上皮细胞的增殖以及迁移的影响及可能机制。方法:观察TGF-β_(1)处理的肾小管上皮细胞HK-2并检测miR-21d-5p的表达,在HK-2细胞中分组转染miR-21d-5p或anti-miR-21d-5p,再使用TGF-β_(1)处理,观察过度表达或抑制表达miR-21d-5p对TGF-β_(1)诱导肾小管上皮细胞的细胞活性及迁移的影响。分析TGF-β_(1)、miR-21d-5p与BMP7的靶向关系。共转染miR-21d-5p和pcDNA3.1-BMP7,或anti-miR-21d-5p和si-BMP7,使用TGF-β_(1)处理,评估TGF-β_(1)、miR-21d-5p与BMP7的在肾小管上皮细胞的增殖以及迁移的相互关系。结果:TGF-β_(1)处理HK-2细胞后,miR-21d-5p表达和迁移细胞数量升高(P<0.05),P21和E-钙黏蛋白(E-cadherin)水平降低(P<0.05)。过度表达miR-21d-5p增加TGF-β_(1)诱导HK-2细胞增殖和迁移上调(P<0.05),降低P21和E-cadherin蛋白表达(P<0.05),过度表达BMP7可以逆转此过程。抑制miR-21d-5p降低TGF-β_(1)诱导HK-2细胞增殖和迁移细胞水平(P<0.05),显著升高P21和E-cadherin蛋白水平(P<0.05),被抑制表达的BMP7可以逆转此过程。结论:TGF-β_(1)可能通过miR-21d-5p靶向调控BMP7表达,从而诱导肾小管上皮细胞增殖及迁移,进一步影响肾脏纤维化进展。

MiR-21和miR-17-5p检测对慢性心力衰竭诊断效能的研究

目的探究miR-21和miR-17-5p检测对慢性心力衰竭(CHF)诊断效能。方法选择2022年1月至2023年11月于三亚中心医院收治的68例CHF患者(CHF组)的临床资料进行回顾性研究,另选取同期我院健康体检者20例作为对照组。比较两组患者miR-21、miR-17-5p、心功能指标[左心房(LA)、左心室(LV)、右心房(RA)、右心室(RV)、射血分数(EF)、室间隔(IVS)]、血清指标[总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、白蛋白(ALB)、尿素氮(BUN)、肌酐(CR)、尿酸(UA)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、白细胞(WBC)、血红蛋白(HGB)、血小板计数(PLT)]的差异,通过ROC曲线分析miR-21和miR-17-5p诊断慢性心力衰竭的价值。结果CHF组miR-21、miR-17-5p均高于对照组(P<0.05)。两组LA、LV、RA、RV、EF比较,差异均无统计学意义(P>0.05),但CHF组IVS高于对照组(P<0.05)。两组TC、TG、LDL-C、HDL-C、WBC、PLT、ALT、AST、ALB、BUN、CR、UA比较,差异均无统计学意义(P>0.05),CHF组HGB高于对照组(P<0.05)。Pearson相关性分析显示,miR-21和miR-17-5p呈正相关(P<0.05)。ROC曲线分析显示,miR-21、miR-17-5p诊断CHF的AUC分别为0.877、0.861;敏感度分别为77.1%、90.0%;特异度分别为70.8%、90.0%。将miR-21、mi R-17-5p纳入二元Logistic回归模型,联合数据诊断CHF的AUC为0.884;敏感度为79.2%;特异度为90.0%。结论Mi R-21、mi R-17-5p在CHF血清中高表达,可作为诊断的有效指标,且两者存在正相关。

尿液前列腺特异性抗原联合微小RNA-21-5p对前列腺癌的早期诊断价值

目的探讨尿液前列腺特异性抗原(PSA)联合微小RNA-21-5p(miR-21-5p)对前列腺癌(PCa)的早期诊断价值。方法选取2020年1月至2022年12月重庆市合川区人民医院收治的73例PCa患者为病例组,75例良性前列腺增生(BPH)患者为对照组。检测两组尿PSA、miR-21-5p水平,分析PSA和miR-21-5p对PCa早期诊断价值。结果病例组患者尿液PSA、miR-21-5p水平明显高于对照组(P<0.05)。随着Gleason分级、TNM分期的升高,PCa患者尿PSA、miR-21-5p水平逐渐升高(P<0.05);存在转移的PCa患者尿PSA、miR-21-5p水平高于未转移患者(P<0.05)。PSA、miR-21-5p及串联联合试验诊断PCa的受试者操作特征曲线下面积为0.841、0.878、0.947,其中联合诊断的特异度显著高于单独检测(P<0.05)。结论PCa患者尿PSA、miR-21-5p水平明显升高,PSA、miR-21-5p可作为PCa诊断和病理分级的参考指标,联合检测对PCa具有更高诊断效能。