老年心力衰竭患者血miRNA-423-5p、miRNA-532-3p、miRNA-29b-5p水平与其心功能的关系

目的分析老年心力衰竭患者血微RNA(miRNA)-423-5p、miRNA-532-3p、miRNA-29b-5p水平与其心功能的关系。方法回顾性选取2022年1月至2023年11月三亚中心医院收治的老年心力衰竭患者68例作为观察组,选择同期收治的非心力衰竭老年患者20例作为对照组。对比两组临床资料[性别、年龄、体重指数、左心房内径(LAD)、左心室内径(LVD)、右心房内径(RAD)、右心室内径(RVD)、室间隔厚度(IVS)、左室射血分数(LVEF)、B型脑钠肽(BNP)、肌钙蛋白I(cTnI)、总胆固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白(LDL)、高密度脂蛋白(HDL)、白细胞计数(WBC)、血小板计数(PLT)、丙氨酸转氨酶(ALT)等]。经荧光聚合酶链反应定量分析法检测两组血miRNA-423-5p、miRNA-532-3p、miRNA-29b-5p水平;分析观察组中不同心功能分级患者血miRNA-423-5p、miRNA-532-3p、miRNA-29b-5p水平差异;Spearman相关分析法分析血miRNA-423-5p、miRNA-532-3p、miRNA-29b-5p水平与心功能分级的相关性;绘制受试者操作特征(ROC)曲线分析各参数预测老年心力衰竭患者心功能分级Ⅲ~Ⅳ级的价值。结果两组的性别构成比、年龄、体重指数、RVD、总胆固醇、甘油三酯、LDL、HDL、WBC比较,差异均无统计学意义(P>0.05);观察组的LAD、LVD、RAD、IVS、BNP、cTnI、ALT均高于对照组,而LVEF、PLT均低于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。观察组血miRNA-423-5p水平为1.08±0.12,高于对照组(0.54±0.06),而miRNA-532-3p、miRNA-29b-5p水平分别为1.14±0.13、1.08±0.11,均低于对照组(1.26±0.15、1.15±0.13),差异均有统计学意义(P<0.05)。随老年心力衰竭患者心功能分级升高,其血miRNA-423-5p水平升高,而miRNA-532-3p、miRNA-29b-5p水平降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。老年心力衰竭患者miRNA-423-5p与心功能分级呈正相关(P<0.05),miRNA-532-3p、miRNA-29b-5p与心功能分级呈负相关(P<0.05)。ROC曲线显示,血miRNA-423-5p、miRNA-532-3p、miRNA-29b-5p联合预测老年心力衰竭心功能分级Ⅲ~Ⅳ级的敏感度、特异度、曲线下面积分别为82.43%、81.85%、0.864,高于单独预测结果。结论老年心力衰竭患者血miRNA-423-5p、miRNA-532-3p、miRNA-29b-5p呈异常表达,且与患者心功能分级有密切关系,联合检测三者对判断心功能分级有较高预测价值。

基于miRNA-29c/白血病抑制因子轴探讨针刺调节脾虚大鼠肠道炎症机制研究

目的观察针刺调节miRNA-29c/白血病抑制因子(leukemia inhibitory factor,LIF)轴改善脾虚大鼠结肠炎症机制,探讨“健脾益气”针刺疗法改善脾虚便溏症状现代作用机理。方法将60只SD雄性大鼠以随机数字表法分为正常组、模型组、非经非穴组、针刺组,每组15只。除正常组外,其余3组采用劳倦过度和不规律饮食复合方法建立脾虚证大鼠模型。造模成功后,针刺组电针“足三里”穴及“脾俞”穴干预治疗,非经非穴组给予电针尾尖作为对照干预,每日1次/20 min,共治疗14 d。治疗结束后,取大鼠结肠组织及全血。qPCR检测大鼠结肠组织miRNA-29/LIF轴相关基因的表达;Western blot检测大鼠白介素-6(interleukin6,IL-6)、肿瘤坏死因子α(tumornecrosisfactor-α,TNF-α)的表达;ELISA检测结肠组织中白介素-1β(interleukin1β,IL-1β)、白介素-18(interleukin18,IL-18)的含量;HE染色法观察大鼠结肠组织病理形态变化;TUNEL染色观察各组结肠组织凋亡情况;流式细胞术观察外周血单个核细胞(PBMC)凋亡状况。结果与正常组相比,模型组大鼠结肠组织LIF的表达水平明显下降(P<0.05),miRNA-29、IL-1β、IL-6、白介素-8(interleukin18,IL-8)、TNF-αmRNA表达以及IL-6、TNF-α蛋白表达水平有所升高(P<0.05);与模型组相比,针刺组大鼠结肠组织LIF表达水平明显升高(P<0.05),miRNA-29c、IL-1β、IL-6、IL-8、TNF-αmRNA表达以及IL-6、TNF-α蛋白表达水平有所降低(P<0.05),非经非穴组差异无统计学意义(P>0.05);与正常组相比,模型组大鼠结肠组织中促炎因子IL-1β、IL-18表达水平明显升高(P<0.05),与模型组相比,针刺组大鼠结肠组织中促炎因子IL-1β、IL-18的表达水平有所降低(P<0.05)。另外HE染色结果显示,针刺治疗可有效减轻结肠黏膜组织中炎症细胞浸润和杯状细胞的损失;TUNEL染色结果显示,针刺可以抑制miRNA-29c/LIF轴,改善脾虚大鼠结肠炎症,抑制结肠黏膜细胞凋亡;流式细胞术结果显示与正常组相比,模型组、非经非穴组大鼠PBMC凋亡率明显升高(P<0.05),与模型组相比,针刺组大鼠PBMC细胞凋亡率有所降低(P<0.05)。结论电针“足三里”“脾俞”穴可以调节miRNA-29c/LIF轴,抑制肠道炎症和促炎症介质的表达,进而抑制血液、结肠黏膜细胞凋亡,提高机体免疫力,从而改善脾虚便溏症状。

血浆miRNA-21和miRNA-29c水平对非小细胞肺癌的诊断意义

目的:探讨血浆miRNA-21、miRNA-29c水平对非小细胞肺癌(NSCLC)的诊断意义。方法:采用实时荧光定量PCR法检测56例NSCLC患者和47例良性肺病患者血浆miRNA-21和miRNA-29c的相对表达水平。建立受试者工作特征(ROC)曲线,根据ROC曲线下面积判断它们诊断NSCLC的效能。依据ROC曲线分析设定的临界值计算血浆miRNA-21和miRNA-29c诊断NSCLC的敏感性、特异性、阳性预测值、阴性预测值和准确性。并将这些结果与NSCLC患者血清癌胚抗原检测结果进行比较。结果:NSCLC患者血浆miRNA-21水平显著高于良性肺病患者(P<0.001),而血浆miRNA-29c水平明显低于良性肺病患者(P<0.001)。NSCLC患者血浆miRNA-21和miRNA-29c水平与肿瘤的临床(TNM)分期显著相关(P=0.008和P=0.011),血浆miRNA-21水平与肿瘤的分化程度也明显相关(P=0.001)。根据ROC曲线分析取miRNA-21和miRNA-29c诊断NSCLC的临界值分别为4.026和0.985,血浆miRNA-21诊断NSCLC的敏感性和特异性分别为76.8%和76.6%,血浆miRNA-29c诊断NSCLC的敏感性和特异性分别为78.6%和72.3%。血清癌胚抗原诊断NSCLC的敏感性明显低于miRNA-21和miRNA-29c,特异性相似。结论:血浆miRNA-21和miRNA-29c诊断肺癌的效能优于血清癌胚抗原,有可能成为诊断NSCLC的血液标志物。

腺病毒介导miRNA-29a过表达抑制人胃癌细胞的增殖

目的:利用重组人5型复制缺陷型腺病毒载体介导miRNA-29a(miR-29a)过表达,观察miR-29a对人胃癌细胞系SGC-7901及AGS的增殖抑制作用。方法:构建含pre-miR-29a的重组腺病毒Ad-miR29a及含LacZ基因的对照腺病毒Ad-LacZ,分别感染人胃癌SGC-7901及AGS细胞,采用real-time PCR法检测SGC-7901及AGS细胞中miR-29a的表达,CCK-8法检测miR-29a对SGC-7901及AGS细胞增殖的抑制作用,流式细胞术检测SGC-7901及AGS细胞的细胞周期,Transwell法检测miR-29a对SGC-7901及AGS细胞迁移能力的影响。结果:与Ad-LacZ对照组相比,Ad-miR29a组感染后胃癌SGC-7901及AGS细胞中miR-29a的表达均显著增加[(17.35±0.71)vs(1.12±0.09),(26.50±1.09)vs(0.95±0.04);均P<0.01];且胃癌SGC-7901及AGS细胞增殖明显受到抑制,感染6 d后D值均显著降低[(0.54±0.03)vs(0.77±0.04),(0.70±0.03)vs(0.88±0.04);均P<0.01)],而Ad-LacZ感染组与未感染组相比则无明显变化(P>0.05);与Ad-LacZ对照组相比,Ad-miR29a组SGC-7901及AGS细胞中G0/G1期细胞比例均显著增加[(63.10±4.91)%vs(47.60±5.31)%,(69.80±3.15)%vs(54.60±4.22)%;均P<0.05],但胃癌SGC-7901及AGS细胞的迁移能力并没有明显差异。结论:miR-29a过表达可有效抑制胃癌SGC-7901及AGS细胞的增殖,miR-29a有望成为治疗胃癌的新靶标。

利用CRISPR/Cas9技术构建miRNA-29b1基因敲除小鼠

目的应用CRISPR/Cas9技术构建miRNA-29b1基因敲除小鼠。方法针对miRNA-29b1基因设计一段sgRNA,sgRNA和Cas9体外转录后显微注射至C57BL/6小鼠受精卵细胞。小鼠出生后取其基因组DNA进行测序以鉴定基因型,同时取小鼠心、肝、脾、肺、肾等脏器研磨后提取总RNA,通过real-time PCR分析miRNA-29b1在这些脏器中的表达。结果设计了20 bp的miRNA-29b1sgRNA并与Cas9一起进行了体外转录,显微注射小鼠受精卵细胞后获得miRNA-29b1基因突变小鼠。测序结果表明突变小鼠有两种基因型,一种为10 bp的缺失突变;另一种为22 bp的缺失突变,同时伴有3 bp的插入突变。与野生型小鼠相比,基因突变小鼠心、肝、脾、肺、肾等组织中miRNA-29b1表达量下降明显。结论应用CRISPR/Cas9技术成功构建miRNA-29b1基因敲除小鼠。

小檗碱对大鼠高血压左室肥厚心肌表达miRNA-29b的影响及抑制心肌纤维化的作用机制

目的探讨小檗碱(BBR)对大鼠高血压左室肥厚心肌表达miRNA-29b的影响及抑制心肌纤维化的作用机制。方法将25只雄性SD大鼠随机分成假手术组(Sham组,n=7),模型组(Model组,n=9)和模型给药组(Model+BBR组,n=9)。腹主动脉缩窄法制备大鼠高血压心肌肥厚模型,术后8周测定各组超声心动图、心脏肥大指数,Masson染色检测心肌组织纤维化,RT-PCR检测心肌组织miRNA-29b及其靶基因col1α1和col3α1 mRNA表达。结果Model组的舒张末期室间隔厚度(IVSd)、舒张末期左室后壁厚度(LVPWd)均厚于Sham组,左室长轴缩短分数(FS)、射血分数(EF)均低于Sham组,差异有统计学意义(P<0.05);Model+BBR组的IVSd、LVPWd均薄于Model组,FS、EF均高于Model组,差异有统计学意义(P<0.05)。Model组的心脏重量显著重于Sham组,心脏/体重比显著高于Sham组(P<0.01);Model+BBR组的心脏重量轻于Model组,心脏/体重比低于Model组(P<0.05)。Model组的心肌胶原蛋白体积分数显著高于Sham组(P<0.01);Model+BBR组的心肌胶原蛋白体积分数低于Model组(P<0.05)。Model组的Col1α1 mRNA和Col3α1 mRNA水平均高于Sham组,miRNA-29b水平低于Sham组(P<0.05或P<0.01);Model+BBR组的Col1α1 mRNA和Col3α1 mRNA水平均低于Model组,miRNA-29b水平高于Model组(P<0.05)。结论BBR可能通过下调miRNA-29b水平及上调其靶基因表达水平,抑制高血压心肌肥厚模型心肌肥厚和心肌纤维化。

不同类型肠易激综合征患者血清miRNA-144、miRNA-29a和miRNA-200a水平的临床意义

目的探讨不同类型肠易激综合征(IBS)患者血清微小RNA(miRNA)-144、miRNA-29a和miRNA-200a表达水平的相关性及临床意义,为IBS的病因学研究提供理论依据。方法采用病例抽样的方法选取2015年10月至2018年6月该院IBS患者110例,选取同期110例体检健康者为健康对照组。受试者采样前12 h低蛋白饮食,每位受试者取10 mL静脉血样本,静脉血3000 r/min离心后取上清。采用实时荧光定量反转录PCR测定受试者miRNA-144、miRNA-29a和miRNA-200a表达水平。结果混合型IBS的miRNA-144、miRNA-29a和miRNA-200a表达水平均显著高于其他3种亚型(P<0.05),不确定型IBS的miRNA-144、miRNA-29a和miRNA-200a表达水平均显著高于便秘型IBS及腹泻型IBS(P<0.05)。混合型、不确定型IBS患者的miRNA-144、miRNA-29a、miRNA-200a的表达水平两两之间均存在相关性且有统计学意义(P<0.05),但对于单纯腹泻或者便秘型IBS患者来说,仅miRNA-29a与miRNA-200a的表达水平存在统计学相关性(P<0.05)。结论混合型、不确定型IBS患者血清miRNA-144、miRNA-29a和miRNA-200a表达水平较其他2种亚型高,且血清miRNA-144、miRNA-29a和miRNA-200a表达两两之间具有显著相关性。

miRNA-29c在鼻咽癌患者中的表达水平及其临床意义

目的:探讨miRNA-29c在鼻咽癌患者血清中的表达及其临床意义。方法:选取50例鼻咽癌患者及50例健康对照组,检测血清中miRNA-29c的表达量并分析其与临床病理资料及复发转移的相关性。结果:与健康人对比,鼻咽癌患者血清中miRNA-29c的表达量更低(P<0.05)。淋巴结转移的病例表达量明显降低,Ⅳ期病例较Ⅱ-Ⅲ期病例表达量降低,EB病毒阳性患者较阴性表达量降低(P<0.05)。与高分化鳞癌相比,低分化和中分化鳞癌组织中miRNA-29c的表达水平均明显下降(P<0.05)。2年内复发转移患者的miRNA-29c表达量更低(P<0.05)。结论:miRNA-29c低表达可能与鼻咽癌的发生、发展、侵袭转移相关。

miRNA-29b在特发性肺间质纤维化中的抗纤维化作用

目的:探讨miRNA-29b(简称miR-29b)在特发性肺间质纤维化(IPF)上皮间充质转分化(EMT)过程中的抗纤维化作用。方法:将体外培养的IMR-90细胞随机分为空白对照组、TGF-β1诱导组(诱导48 h)、miR-29b转染组(TGF-β1+miR-29b)和miR-29b阴性对照组(TGF-β1+无意义序列);应用倒置相差显微镜观察细胞形态改变;运用实时荧光定量PCR技术和Western bolt技术分别检测TGF-β/Smad信号通路Smad3和p-Smad3、上皮标志物E-钙黏蛋白(E-cad)、间质标志物平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和下游靶基因Ⅰ型胶原蛋白(COL1A1)的表达。结果:与空白对照组比较,TGF-β1诱导组IMR-90细胞中E-cad表达显著下降,p-Smad3、α-SMA和COL1A1的表达显著升高(P均<0.05);与TGF-β1诱导组比较,miR-29b转染组E-cad表达升高,p-Smad3、α-SMA和COL1A1的表达降低(P均<0.01)。结论:上调miR-29b表达可抑制TGF-β/Smad信号通路介导的肺泡上皮细胞EMT。

转化生长因子-β_2(TGF-β_2)诱导人视网膜色素上皮层细胞上皮-间质转分化中miRNA-29b的表达及意义

目的探究转化生长因子-β2(transforming growth factor-β2,TGF-β2)诱导人视网膜色素上皮(retinal pigment epithelial,RPE)层细胞上皮-间质转分化中miRNA-29b的表达变化及意义。方法使用不同浓度TGF-β2刺激RPE细胞上皮-间质转分化后,倒置相差显微镜观察细胞形态变化,Western blot、RT-PCR检测成纤维化相关分子纤维连接蛋白(fibronection,FN)、神经钙粘连蛋白(nerve calcium adhesion protein,N-Cadherin)的表达。采用RT-PCR检测不同浓度TGF-β2及不同时间TGF-β2(5μg·L^(-1))刺激RPE细胞后miRNA-29b的表达。结果 TGF-β2刺激后的RPE细胞形态呈纤维化改变。在一定浓度范围内(1μg·L^(-1)、5μg·L^(-1)、10μg·L^(-1)),随着TGF-β2浓度的增加FN、N-Cadherin及相应mRNA随之增加,1μg·L^(-1)、5μg·L^(-1)、10μg·L^(-1)组与对照组(0μg·L^(-1))相比,差异均有统计学意义(均为P<0.01)。TGF-β2在一定浓度范围内(0μg·L^(-1)、1μg·L^(-1)、5μg·L^(-1))以剂量依赖的方式诱导RPE细胞miRNA-29b表达的降低,1μg·L^(-1)、5μg·L^(-1)、10μg·L^(-1)组与对照组(0μg·L^(-1))相比,差异均有统计学意义(均为P<0.01),在TGF-β2浓度为5μg·L^(-1)时miRNA-29b表达量最低。TGF-β2在一定时间范围内(0 h、3 h、6 h、12 h)以时间依赖的方式诱导RPE细胞miRNA-29b表达的降低,3 h、6 h、12 h、24 h、48 h组与0 h相比差异均有统计学意义(均为P<0.05)。结论一定范围内TGF-β2以剂量和时间依赖的方式诱导RPE细胞miRNA-29b的表达,为进一步研究miRNA-29b与TGF-β2在RPE细胞上皮-间质转分化过程中的相互作用提供理论基础。

miRNA-29b、MMP-2在大鼠颅内动脉瘤中的相关性及药物干预

目的观察miRNA-29b与MMP-2在颅内动脉瘤壁组织中的变化,探讨其在动脉瘤中的相关性及不同药物干预的影响。方法将40只雄性SD大鼠(6周龄)采用随机数字表法分为模型组、多西环素组、丙戊酸钠组和对照组,每组各10只。模型组、多西环素组、丙戊酸钠组大鼠均采用颈外动脉结扎制造颅内动脉瘤模型,对照组大鼠不做造模处理。前三组于造模成功后分别注射生理盐水0.1 mL/(kg·d)、多西环素15 mg/(kg·d)、丙戊酸钠15 mg/(kg·d),对照组大鼠注射生理盐水0.1 mL/(kg·d)。2个月后取各组动脉组织,采用实时荧光定量PCR检测miRNA-29b的表达,采用免疫组化检测MMP-2的表达。结果模型组、多西环素组、丙戊酸钠组和对照组中miRNA-29b的相对表达量分别为(0.27±0.04),(0.68±0.03),(0.47±0.15),(0.95±0.12),差异均有显著统计学意义(F=10.235,P<0.01);miRNA-29b表达量经两两比较,模型组明显低于对照组,丙戊酸钠组明显高于模型组,而多西环素组明显高于丙戊酸钠组,差异均有统计学意义(P<0.05);模型组、多西环素组、丙戊酸钠组和对照组中MMP-2阳性细胞数分别为(21.10±3.36),(10.27±1.20),(15.24±2.13),(4.50±0.44),差异均有显著统计学意义(F=6.013,P<0.01);MMP-2阳性细胞数经两两比较,模型组明显高于对照组,丙戊酸钠组明显低于模型组,而多西环素组则明显低于丙戊酸钠组,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 miRNA-29b、MMP-2的表达水平与颅内动脉瘤的发生相关,多西环素对MMP-2的抑制作用明显强于丙戊酸钠。

miRNA-29a调控H3K4甲基化在前列腺癌病理机理中的作用

目的探讨在前列腺癌中miR-29a与H3K4特异性去甲基化酶—KDM5B之间的关系,验证miR-29a通过调控KDM5B的表达来抑制前列腺癌细胞的增殖并诱导其凋亡。方法将miR-29a模拟物(miR-29a mimic)片段和含野生型KDM5B基因3'-非翻译区的荧光素酶报告载体(KDM5B-wt)共转染至前列腺癌PC3和Lncap细胞后,进行荧光素酶活性检测。采用脂质体转染法将miR-29a mimics转染入人前列腺癌PC3和Lncap细胞中,MTT实验检测细胞增殖情况;流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡;Real-Time PCR和Western印迹法检测KDM5B表达水平。结果转染miR-29a mimics后,KDM5B的表达被明显抑制(P<0.01),蛋白表达水平也明显低于NC组。与NC组相比,转染miR-29a mimics组细胞增殖能力显著降低(P<0.01),细胞生长被阻滞在S/G2期,细胞凋亡率较NC组增加(P<0.01)。结论 miR-29a可以通过调控H3K4特异性去甲基化酶-KDM5B的表达而抑制前列腺癌PC3和Lncap细胞的增殖。miR-29a有希望成为诊断和治疗前列腺癌新的分子标记和靶点。

肺痨康对耐异烟肼肺结核小鼠miRNA-29b和caspase-3的影响

目的:观察肺痨康对耐异烟肼肺结核小鼠肺组织中mi RNA-29b和caspase-3表达的影响,揭示肺痨康治疗耐异烟肼肺结核的作用机制。方法:将小鼠随机分为空白对照组、模型组、肺痨康组、异烟肼组,小鼠尾静脉注射耐异烟肼肺结核分枝杆菌菌悬液造模,空白对照组小鼠、模型组小鼠每天灌胃生理盐水;肺痨康组小鼠每天灌胃6 g(生药)/kg;异烟肼组小鼠每天灌胃异烟肼液6 g/kg,连续灌胃56 d。采用免疫组化方法检测小鼠肺组织中caspase-3的表达水平,采用RT-q PCR(实时荧光定量聚合酶链反应)技术检测各组小鼠肺组织中mi RNA-29b的表达水平。结果:与空白组比较,模型组肺组织caspase-3和mi RNA-29b明显升高,差异均有统计学意义(P<0.01),肺痨康干预后,肺痨康组肺组织caspase-3和mi RNA-29b明显降低,差异均有统计学意义(P<0.01)。结论:肺痨康治疗耐异烟肼肺结核,可能与caspase-3引起的细胞凋亡有关,可能通过mi RNA-29b的降低而发挥作用。

黄连素与miRNA-29b-3p对结直肠癌细胞增殖和凋亡的影响

目的探讨黄连素对结直肠癌HCT-116细胞增殖、凋亡的影响,并探讨其作用机制。方法采用0、25、50、100、150和200μmol/L的黄连素处理HCT-116细胞24、48 h后,实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(qRTPCR)检测人正常结肠上皮细胞株NCM460和人结直肠癌细胞株HCT-116、Caco-2细胞中miRNA-29b-3p相对表达量及黄连素干预后HCT-116细胞中miRNA-29b-3p表达水平变化。噻唑蓝(MTT)法检测HCT-116细胞存活情况;流式细胞仪检测150μmol/L黄连素处理48 h后的HCT-116细胞凋亡情况;流式细胞仪检测miRNA-29b-3p过表达和低表达对HCT-116细胞存活和凋亡的影响。结果 qRT-PCR法检测发现,HCT-116细胞中miRNA-29b-3p的相对表达量,低于Caco-2细胞和NCM460细胞,黄连素干预后HCT-116细胞中miRNA-29b-3p的相对表达量明显上调(P﹤0.01)。150μmol/L黄连素处理48 h后,HCT-116细胞存活率明显降低(P﹤0.01),凋亡率明显升高(P﹤0.01)。miRNA-29b-3p过表达可抑制HCT-116细胞的增殖并诱导其凋亡;miRNA-29b-3p低表达可逆转黄连素对HCT-116细胞的抑增殖和促凋亡作用。结论黄连素可能通过促进miRNA-29b-3p表达来抑制结直肠癌HCT-116细胞增殖并诱导其凋亡。

miRNA-29c在喉癌组织中的表达及对喉癌Hep-2细胞增殖、侵袭的影响

目的观察miRNA-29c在喉癌组织和喉癌Hep-2细胞株中的表达情况,研究其与肿瘤临床分期、淋巴转移及预后等临床病理参数的关系,并探讨miRNA-29c对喉癌Hep-2细胞增殖、侵袭的影响。方法选取2006年1月~2016年12月在我院确诊的86例喉癌患者的蜡块标本,利用实时荧光定量聚合酶链式反应检测喉癌组织和癌旁正常喉黏膜上皮组织中miRNA-29c的表达,并分析其与临床病理学特征的关系;通过Q-RT-PCR检测转染后每组细胞中miRNA-29c的表达;CCK-8检测细胞增殖能力变化情况;Transwell实验检测跨膜细胞数量的变化。结果miRNA-29c在喉癌组织中相对表达量明显低于癌旁组织(P<0.01),其表达量与不同临床分型、TNM分期、淋巴转移密切相关(P<0.05);转染miRNA-29c模拟物组细胞中的miRNA-29c表达水平显著高于无关序列组和空白对照组(P<0.01),并可抑制喉癌Hep-2细胞的增殖和侵袭力(P<0.01)。结论在喉癌中,miRNA-29c是一个抑制性miRNA,miRNA-29c低表达可能是影响喉癌预后的重要因素;过表达miRNA-29c可显著降低喉癌Hep-2细胞的增殖和侵袭能力,miRNA表达水平的下调可能参与了喉癌的发生发展及侵袭转移过程。

miRNA-34a和miRNA-29b在非小细胞肺癌中的表达及意义

目的探讨非小细胞肺癌(NSCLC)患者肺癌组织标本中miRNA-34a和miRNA-29b基因的表达与临床特征及化疗疗效的相关性。方法将已确诊的80例NSCLC患者肿瘤肺组织作为试验组(并按病理类型及TNM分期分组),同期随机选择肺部为良性疾病肺组织100例作为对照组,通过实时荧光聚合酶链反应(RT-PCR)法检测miRNA-34a和miRNA-29b基因表达水平,并回顾性分析miRNA-34a和miRNA-29b基因表达与化疗疗效情况。结果miRNA-34a在试验组的组织表达水平高于对照组(P<0.05);miRNA-29b在试验组的组织表达水平低于对照组(P<0.05);miRNA-34a在腺癌组与鳞癌组均明显高于其他型肺癌组(P<0.05),在腺癌组组中的表达高于鳞癌组(P<0.05),miRNA-29b在腺癌组与鳞癌组均明显低于其他型肺癌组,在腺癌组中的表达低于鳞癌组(P<0.05),miRNA-34a和miRNA-29b在肺癌组织分级、TNM分期及淋巴结转移呈密切相关性(P<0.05)。miRNA-34a高表达组患者化疗有效率显著低于低表达组患者(P<0.05);miRNA-29b低表达组患者化疗有效率显著低于高表达组患者(P<0.05)。NSCLC组织中miRNA-34a的表达和miRNA-29b的表达之间呈负相关(r=-0.79,P<0.01)。结论 miRNA-34a的基因表达在NSCLC中高表达,miRNA-29b的基因表达在NSCLC中低表达,它们表达水平有助于临床分期组、织学分级和淋巴结转移的判断,并且miRNA-34a低表达或者miRNA-29b高表达的患者化疗有效率高,是化疗受益的指标之一。

10-姜酚对大鼠缺血性心律失常及其心肌组织miRNA-29表达的影响

目的探讨10-姜酚对大鼠缺血性心律失常及其心肌组织miRNA-29表达的影响。方法SPF级6周龄SD大鼠,按照体重随机分为对照组、模型组、阳性给药组(盐酸普萘洛尔2 mg·kg^(-1))、10-姜酚给药组(8、4、2 mg·kg^(-1))。除对照组之外,其余各组大鼠均尾静脉注射5μg·kg^(-1)的乌头碱生理盐水溶液,诱发大鼠缺血性心律失常模型。随后阳性给药组和10-姜酚组分别尾静脉给药,对照组和模型组尾静脉注射生理盐水,给药30 min内记录各组大鼠心电图变化,早搏早搏(VPB)次数以及首次出现时间,室速(VT)和室颤(VF)持续次数和时间。待实验结束后取大鼠心脏,测定心肌梗死面积,计算心肌梗死率。qRT-PCR检测各组大鼠心肌组织miRNA-29的表达。结果与对照组相比,乌头碱诱导模型组出现明显的缺血性心律失常,VPB、VT和VF频率明显增加(P<0.05),VPB首次出现时间显著缩短(P<0.05),VT和VF持续时间也显著增长(P<0.05),模型组大鼠心肌组织梗死面积明显增多(P<0.05),心肌组织miRNA-29表达降低(P<0.05);给药治疗后,与模型组相比,10-姜酚可以显著改善大鼠出现的缺血性心律失常,VPB、VT和VF频率明显降低(P<0.05);VPB首次出现时间推迟(P<0.05),VT和VF持续时间也显著降低(P<0.05),心肌组织梗死面积明显减少(P<0.05),心肌组织miRNA-29表达降低(P<0.05)。结论10-姜酚可以显著改善由乌头碱诱导大鼠缺血性心律失常,同时显著降低心肌组织中miRNA-29的表达水平。

糖尿病患者miRNA-29水平与胰岛素抵抗的相关性

目的探讨miRNA-29与糖尿病(DM)人群胰岛素抵抗(IR)的相关性。方法入组糖耐量正常(NGT)健康人群56例,DM前期(pre-DM)个体51例和初诊DM患者组(n-DM)58例,测定体重指数(BMI)、腰臀比、三酰甘油(TG)、总胆固醇(TC)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、空腹血糖(FPG)、空腹胰岛素(FINS)和糖化血红蛋白(HbA1c)等指标,以稳态模型评估胰岛素抵抗指数(HOMA-IR),并计算胰岛素敏感性指数(ISI)。结果 miRNA-29在3组中的相对表达逐渐增加,分别为NGT组(1.0±0.03)、pre-DM组(1.59±0.17)和n-DM组(2.99±0.28),组间两两比较差异有统计学意义(P<0.05);在DM人群中,血清miRNA-29水平与翼螺旋转录因子(FOXA2)、BMI、FINS、TG、FPG和HOMA-IR呈正相关(r=0.553,0.401,0.239,0.420,0.202,0.445,均P<0.05),与HDL-C和ISI呈负相关(r=-0.424,-0.354,均P<0.05),而与年龄和收缩压无相关性(均P>0.05);多元逐步回归分析结果显示,影响IR的独立危险因素为miRNA-29、FOXA2、BMI和TG(均P<0.05)。结论 miRNA-29和FOXA2均随着IR增加而表达上升,血清miRNA-29和FOXA2的水平可能用于IR程度的判断。

miRNA-29_(c)在前列腺癌中的表达及其临床意义

目的通过检测miRNA-29_(c)在前列腺癌患者中的表达量,探讨其对前列腺癌诊断的意义。方法收集40例前列腺癌患者血清及其癌和癌旁组织、30例前列腺增生患者血清、30例健康对照血清,采用实时荧光定量PCR法检测miRNA-29_(c)的表达水平。结果miRNA-29_(c)在前列腺癌、前列腺增生及健康对照血清中的表达量分别为(0.357±0.012)、(0.836±0.023)和(0.818±0.015),在前列腺癌患者血清中miRNA-29_(c)的表达量显著低于前列腺增生患者及健康对照组,差异有统计学意义(P<0.05),在前列腺增生和健康对照组中表达无统计学意义(P>0.05)。前列腺癌患者血清中miRNA-29_(c)的表达在不同Gleason评分、临床分期及有无远处转移上差异具有统计学意义(P<0.05),而不同血清前列腺抗原(PSA)水平的患者间差异无统计学意义(P>0.05);miRNA-29_(c)在前列腺癌组织中的表达量明显低于其癌旁组织,差异有统计学意义(P<0.05)。结论miRNA-29_(c)在前列腺癌中低表达,可能参与前列腺癌的发生、发展过程,可作为前列腺癌早期诊断和预后判断的指标。

miRNA-29s在非小细胞肺癌组织中的表达及临床意义

目的探讨非小细胞肺癌(NSCLC)组织中微小RNA-29s(miR-29s)的表达水平及临床意义。方法收集2012年1月至2015年12月收治的94例手术切除的NSCLC组织及71例癌旁正常组织,采用实时荧光定量PCR(QPCR)法检测上述组织中miR-29a、miR-29b和miR-29c的表达,比较NSCLC组织及癌旁正常组织中miR-29s的表达水平,Pearson相关分析NSCLC组织中miR-29a、miR-29b和miR-29c表达的相关性,分析NSCLC组织中miR-29s的表达与NSCLC临床病理特征(性别、年龄、TNM分期、组织学类型、分化程度、淋巴结转移及CEA水平)的关系,根据随访资料分析不同miR-29s表达水平与预后的关系。结果 QPCR结果显示,NSCLC组织中miR-29a、miR-29b和miR-29c的表达水平依次为0.413±0.025、0.609±0.039和0.161±0.013,均低于癌旁正常组织,差异有统计学意义(P<0.05);NSCLC组织中miR-29a与miR-29b呈正相关(r=0.637,P=0.000),miR-29a与miR-29c呈正相关(r=0.775,P=0.000),miR-29b与miR-29c呈正相关(r=0.586,P=0.000);NSCLC组织中miR-29s表达均与TNM分期有关,miR-29a与肿瘤大小及分化程度有关,miR-29b与分化程度有关,miR-29c与肿瘤大小有关。miR-29a(≥0.354)、miR-29b(≥0.586)和miR-29c(≥0.118)高水平者的中位总生存时间依次为16.4、16.4和16.7个月,均高于低水平者的11.5、9.8和10.5个月,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 miR-29s在NSCLC组织中表达降低,且均与TNM分期及预后有关,可能与NSCLC发生、发展有关,对NSCLC诊断及病情评估有一定价值。