小檗碱对大鼠高血压左室肥厚心肌表达miRNA-29b的影响及抑制心肌纤维化的作用机制

目的探讨小檗碱(BBR)对大鼠高血压左室肥厚心肌表达miRNA-29b的影响及抑制心肌纤维化的作用机制。方法将25只雄性SD大鼠随机分成假手术组(Sham组,n=7),模型组(Model组,n=9)和模型给药组(Model+BBR组,n=9)。腹主动脉缩窄法制备大鼠高血压心肌肥厚模型,术后8周测定各组超声心动图、心脏肥大指数,Masson染色检测心肌组织纤维化,RT-PCR检测心肌组织miRNA-29b及其靶基因col1α1和col3α1 mRNA表达。结果Model组的舒张末期室间隔厚度(IVSd)、舒张末期左室后壁厚度(LVPWd)均厚于Sham组,左室长轴缩短分数(FS)、射血分数(EF)均低于Sham组,差异有统计学意义(P<0.05);Model+BBR组的IVSd、LVPWd均薄于Model组,FS、EF均高于Model组,差异有统计学意义(P<0.05)。Model组的心脏重量显著重于Sham组,心脏/体重比显著高于Sham组(P<0.01);Model+BBR组的心脏重量轻于Model组,心脏/体重比低于Model组(P<0.05)。Model组的心肌胶原蛋白体积分数显著高于Sham组(P<0.01);Model+BBR组的心肌胶原蛋白体积分数低于Model组(P<0.05)。Model组的Col1α1 mRNA和Col3α1 mRNA水平均高于Sham组,miRNA-29b水平低于Sham组(P<0.05或P<0.01);Model+BBR组的Col1α1 mRNA和Col3α1 mRNA水平均低于Model组,miRNA-29b水平高于Model组(P<0.05)。结论BBR可能通过下调miRNA-29b水平及上调其靶基因表达水平,抑制高血压心肌肥厚模型心肌肥厚和心肌纤维化。

利用CRISPR/Cas9技术构建miRNA-29b1基因敲除小鼠

目的应用CRISPR/Cas9技术构建miRNA-29b1基因敲除小鼠。方法针对miRNA-29b1基因设计一段sgRNA,sgRNA和Cas9体外转录后显微注射至C57BL/6小鼠受精卵细胞。小鼠出生后取其基因组DNA进行测序以鉴定基因型,同时取小鼠心、肝、脾、肺、肾等脏器研磨后提取总RNA,通过real-time PCR分析miRNA-29b1在这些脏器中的表达。结果设计了20 bp的miRNA-29b1sgRNA并与Cas9一起进行了体外转录,显微注射小鼠受精卵细胞后获得miRNA-29b1基因突变小鼠。测序结果表明突变小鼠有两种基因型,一种为10 bp的缺失突变;另一种为22 bp的缺失突变,同时伴有3 bp的插入突变。与野生型小鼠相比,基因突变小鼠心、肝、脾、肺、肾等组织中miRNA-29b1表达量下降明显。结论应用CRISPR/Cas9技术成功构建miRNA-29b1基因敲除小鼠。

miRNA-29b在特发性肺间质纤维化中的抗纤维化作用

目的:探讨miRNA-29b(简称miR-29b)在特发性肺间质纤维化(IPF)上皮间充质转分化(EMT)过程中的抗纤维化作用。方法:将体外培养的IMR-90细胞随机分为空白对照组、TGF-β1诱导组(诱导48 h)、miR-29b转染组(TGF-β1+miR-29b)和miR-29b阴性对照组(TGF-β1+无意义序列);应用倒置相差显微镜观察细胞形态改变;运用实时荧光定量PCR技术和Western bolt技术分别检测TGF-β/Smad信号通路Smad3和p-Smad3、上皮标志物E-钙黏蛋白(E-cad)、间质标志物平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和下游靶基因Ⅰ型胶原蛋白(COL1A1)的表达。结果:与空白对照组比较,TGF-β1诱导组IMR-90细胞中E-cad表达显著下降,p-Smad3、α-SMA和COL1A1的表达显著升高(P均<0.05);与TGF-β1诱导组比较,miR-29b转染组E-cad表达升高,p-Smad3、α-SMA和COL1A1的表达降低(P均<0.01)。结论:上调miR-29b表达可抑制TGF-β/Smad信号通路介导的肺泡上皮细胞EMT。

miRNA-29b、MMP-2在大鼠颅内动脉瘤中的相关性及药物干预

目的观察miRNA-29b与MMP-2在颅内动脉瘤壁组织中的变化,探讨其在动脉瘤中的相关性及不同药物干预的影响。方法将40只雄性SD大鼠(6周龄)采用随机数字表法分为模型组、多西环素组、丙戊酸钠组和对照组,每组各10只。模型组、多西环素组、丙戊酸钠组大鼠均采用颈外动脉结扎制造颅内动脉瘤模型,对照组大鼠不做造模处理。前三组于造模成功后分别注射生理盐水0.1 mL/(kg·d)、多西环素15 mg/(kg·d)、丙戊酸钠15 mg/(kg·d),对照组大鼠注射生理盐水0.1 mL/(kg·d)。2个月后取各组动脉组织,采用实时荧光定量PCR检测miRNA-29b的表达,采用免疫组化检测MMP-2的表达。结果模型组、多西环素组、丙戊酸钠组和对照组中miRNA-29b的相对表达量分别为(0.27±0.04),(0.68±0.03),(0.47±0.15),(0.95±0.12),差异均有显著统计学意义(F=10.235,P<0.01);miRNA-29b表达量经两两比较,模型组明显低于对照组,丙戊酸钠组明显高于模型组,而多西环素组明显高于丙戊酸钠组,差异均有统计学意义(P<0.05);模型组、多西环素组、丙戊酸钠组和对照组中MMP-2阳性细胞数分别为(21.10±3.36),(10.27±1.20),(15.24±2.13),(4.50±0.44),差异均有显著统计学意义(F=6.013,P<0.01);MMP-2阳性细胞数经两两比较,模型组明显高于对照组,丙戊酸钠组明显低于模型组,而多西环素组则明显低于丙戊酸钠组,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 miRNA-29b、MMP-2的表达水平与颅内动脉瘤的发生相关,多西环素对MMP-2的抑制作用明显强于丙戊酸钠。

肺痨康对耐异烟肼肺结核小鼠miRNA-29b和caspase-3的影响

目的:观察肺痨康对耐异烟肼肺结核小鼠肺组织中mi RNA-29b和caspase-3表达的影响,揭示肺痨康治疗耐异烟肼肺结核的作用机制。方法:将小鼠随机分为空白对照组、模型组、肺痨康组、异烟肼组,小鼠尾静脉注射耐异烟肼肺结核分枝杆菌菌悬液造模,空白对照组小鼠、模型组小鼠每天灌胃生理盐水;肺痨康组小鼠每天灌胃6 g(生药)/kg;异烟肼组小鼠每天灌胃异烟肼液6 g/kg,连续灌胃56 d。采用免疫组化方法检测小鼠肺组织中caspase-3的表达水平,采用RT-q PCR(实时荧光定量聚合酶链反应)技术检测各组小鼠肺组织中mi RNA-29b的表达水平。结果:与空白组比较,模型组肺组织caspase-3和mi RNA-29b明显升高,差异均有统计学意义(P<0.01),肺痨康干预后,肺痨康组肺组织caspase-3和mi RNA-29b明显降低,差异均有统计学意义(P<0.01)。结论:肺痨康治疗耐异烟肼肺结核,可能与caspase-3引起的细胞凋亡有关,可能通过mi RNA-29b的降低而发挥作用。

黄连素与miRNA-29b-3p对结直肠癌细胞增殖和凋亡的影响

目的探讨黄连素对结直肠癌HCT-116细胞增殖、凋亡的影响,并探讨其作用机制。方法采用0、25、50、100、150和200μmol/L的黄连素处理HCT-116细胞24、48 h后,实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(qRTPCR)检测人正常结肠上皮细胞株NCM460和人结直肠癌细胞株HCT-116、Caco-2细胞中miRNA-29b-3p相对表达量及黄连素干预后HCT-116细胞中miRNA-29b-3p表达水平变化。噻唑蓝(MTT)法检测HCT-116细胞存活情况;流式细胞仪检测150μmol/L黄连素处理48 h后的HCT-116细胞凋亡情况;流式细胞仪检测miRNA-29b-3p过表达和低表达对HCT-116细胞存活和凋亡的影响。结果 qRT-PCR法检测发现,HCT-116细胞中miRNA-29b-3p的相对表达量,低于Caco-2细胞和NCM460细胞,黄连素干预后HCT-116细胞中miRNA-29b-3p的相对表达量明显上调(P﹤0.01)。150μmol/L黄连素处理48 h后,HCT-116细胞存活率明显降低(P﹤0.01),凋亡率明显升高(P﹤0.01)。miRNA-29b-3p过表达可抑制HCT-116细胞的增殖并诱导其凋亡;miRNA-29b-3p低表达可逆转黄连素对HCT-116细胞的抑增殖和促凋亡作用。结论黄连素可能通过促进miRNA-29b-3p表达来抑制结直肠癌HCT-116细胞增殖并诱导其凋亡。

miRNA-34a和miRNA-29b在非小细胞肺癌中的表达及意义

目的探讨非小细胞肺癌(NSCLC)患者肺癌组织标本中miRNA-34a和miRNA-29b基因的表达与临床特征及化疗疗效的相关性。方法将已确诊的80例NSCLC患者肿瘤肺组织作为试验组(并按病理类型及TNM分期分组),同期随机选择肺部为良性疾病肺组织100例作为对照组,通过实时荧光聚合酶链反应(RT-PCR)法检测miRNA-34a和miRNA-29b基因表达水平,并回顾性分析miRNA-34a和miRNA-29b基因表达与化疗疗效情况。结果miRNA-34a在试验组的组织表达水平高于对照组(P<0.05);miRNA-29b在试验组的组织表达水平低于对照组(P<0.05);miRNA-34a在腺癌组与鳞癌组均明显高于其他型肺癌组(P<0.05),在腺癌组组中的表达高于鳞癌组(P<0.05),miRNA-29b在腺癌组与鳞癌组均明显低于其他型肺癌组,在腺癌组中的表达低于鳞癌组(P<0.05),miRNA-34a和miRNA-29b在肺癌组织分级、TNM分期及淋巴结转移呈密切相关性(P<0.05)。miRNA-34a高表达组患者化疗有效率显著低于低表达组患者(P<0.05);miRNA-29b低表达组患者化疗有效率显著低于高表达组患者(P<0.05)。NSCLC组织中miRNA-34a的表达和miRNA-29b的表达之间呈负相关(r=-0.79,P<0.01)。结论 miRNA-34a的基因表达在NSCLC中高表达,miRNA-29b的基因表达在NSCLC中低表达,它们表达水平有助于临床分期组、织学分级和淋巴结转移的判断,并且miRNA-34a低表达或者miRNA-29b高表达的患者化疗有效率高,是化疗受益的指标之一。

转化生长因子-β_2(TGF-β_2)诱导人视网膜色素上皮层细胞上皮-间质转分化中miRNA-29b的表达及意义

目的探究转化生长因子-β2(transforming growth factor-β2,TGF-β2)诱导人视网膜色素上皮(retinal pigment epithelial,RPE)层细胞上皮-间质转分化中miRNA-29b的表达变化及意义。方法使用不同浓度TGF-β2刺激RPE细胞上皮-间质转分化后,倒置相差显微镜观察细胞形态变化,Western blot、RT-PCR检测成纤维化相关分子纤维连接蛋白(fibronection,FN)、神经钙粘连蛋白(nerve calcium adhesion protein,N-Cadherin)的表达。采用RT-PCR检测不同浓度TGF-β2及不同时间TGF-β2(5μg·L^(-1))刺激RPE细胞后miRNA-29b的表达。结果 TGF-β2刺激后的RPE细胞形态呈纤维化改变。在一定浓度范围内(1μg·L^(-1)、5μg·L^(-1)、10μg·L^(-1)),随着TGF-β2浓度的增加FN、N-Cadherin及相应mRNA随之增加,1μg·L^(-1)、5μg·L^(-1)、10μg·L^(-1)组与对照组(0μg·L^(-1))相比,差异均有统计学意义(均为P<0.01)。TGF-β2在一定浓度范围内(0μg·L^(-1)、1μg·L^(-1)、5μg·L^(-1))以剂量依赖的方式诱导RPE细胞miRNA-29b表达的降低,1μg·L^(-1)、5μg·L^(-1)、10μg·L^(-1)组与对照组(0μg·L^(-1))相比,差异均有统计学意义(均为P<0.01),在TGF-β2浓度为5μg·L^(-1)时miRNA-29b表达量最低。TGF-β2在一定时间范围内(0 h、3 h、6 h、12 h)以时间依赖的方式诱导RPE细胞miRNA-29b表达的降低,3 h、6 h、12 h、24 h、48 h组与0 h相比差异均有统计学意义(均为P<0.05)。结论一定范围内TGF-β2以剂量和时间依赖的方式诱导RPE细胞miRNA-29b的表达,为进一步研究miRNA-29b与TGF-β2在RPE细胞上皮-间质转分化过程中的相互作用提供理论基础。

食管鳞状细胞癌组织中miRNA-29a、miRNA-29b、miRNA-29c、VEGF-A表达变化及其相关性

目的观察食管鳞状细胞癌(ESCC)癌组织及癌旁组织中miRNA-29家族(miRNA-29a、miRNA-29b、miRNA-29c)及血管内皮生长因子A(VEGF-A)的相对表达量变化,并探讨他们之间的关系。方法收集手术切除并经病理检查确诊的ESCC癌组织及癌旁组织,应用qRT-PCR及免疫组织化学染色技术分别检测miRNA-29a、miRNA-29b、miRNA-29c、VEGF-A的相对表达量,并分析其相关关系;进一步应用生物信息学方法和双荧光素酶报告基因系统推测和验证miRNA-29a、miRNA-29b、miRNA-29c共同调控同一靶基因VEGF-A的分子调节机制。结果与癌旁组织比较,ESCC癌组织中miRNA-29a、miRNA-29b、miRNA-29c呈低表达(P均<0.05);VEGF-A呈高表达(P<0.05),且其之间呈负相关关系(miRNA-29a:r=-0.955;miRNA-29b:r=-0.950;miRNA-29c:r=-0.893,P均<0.01)。生物信息学分析结果发现,VEGF-A能够与miRNA-29a、miRNA-29b、miRNA-29c进行特异性结合,可能为miRNA-29a、miRNA-29b、miRNA-29c共同的靶基因。双荧光素酶报告基因系统验证了VEGF-A是miRNA-29a、miRNA-29b、miRNA-29c共同的靶基因。结论 ESCC癌组织中miRNA-29a、miRNA-29b、miRNA-29c低表达,VEGFA高表达;且他们之间具有负相关关系。VEGF-A为miRNA-29a、miRNA-29b、miRNA-29c共同的靶向调节基因。

肺鳞癌组织miRNA-29b表达及预后相关性研究

目的探讨miRNA-29b在可手术的肺鳞癌组织中的表达及其与转移及预后的关系。方法回顾性分析2006年6月至2013年12月间武警总医院与中国医科大学附属第一医院62例肺鳞癌手术患者的临床资料,采用RT-PCR方法检测上述病例肺鳞癌组织标本中miRNA-29b的表达水平,根据miRNA-29b相对表达量进行实验分组。应用x^2检验分析miRNA-29b表达与肺鳞癌患者转移的关系,应用Kaplan-Meier方法分析miRNA-29b表达与生存的关系,应用Cox风险比例模型分析miRNA-29b表达与预后的关系,应用Western blot分析肺鳞癌组织标本中胰岛素样生长因子-1(IGF1),分析miRNA-29b与IGF1表达的相关性。结果肺鳞癌组织中miRNA-29b的表达量显著低于正常肺组织,与转移相关(P<0.05),低表达组生存期较高表达组明显缩短(P<0.01),miRNA-29b表达可作为肺鳞癌患者预后的独立影响因素。IGF1在肺鳞癌组织标本中的表达显著高于正常肺组织(P<0.01)。结论 miRNA-29b低表达与非小细胞肺癌转移及生存期相关,miRNA-29b表达与IGF1的表达呈显著负相关。

miRNA-29b在肺腺癌的表达及临床意义

目的研究微小RNA-29b(miRNA-29b)在肺腺癌中的表达及其临床意义。方法采用荧光定量RT-PCR法检测82例肺腺癌组织及其癌旁正常肺组织中miRNA-29b的表达,分析其与临床病理学特征的关系。结果肺腺癌组织中miRNA-29b表达高于癌旁正常肺组织(P<0.01)。肺腺癌组织中miRNA-29b表达与患者肿瘤组织分化程度、临床分期、淋巴结转移状态以及总生存期密切相关(P<0.01),而与性别、年龄和吸烟史无明显相关(P>0.05)。肿瘤的临床分期、淋巴结转移状态以及miRNA-29b表达水平均为判断肺腺癌患者预后的独立因素(P<0.01)。结论 miRNA-29b表达下调参与肺腺癌的发生、发展过程,有望成为临床肺腺癌患者早期诊断和预后评估的分子学标志物。

miRNA-29b参与上皮间质转化相关信号通路调控的研究进展

上皮间质转化(EMT)是上皮细胞转化为间质细胞的生物学过程,它赋予细胞转移和入侵的能力,与器官纤维化和肿瘤发生发展密切相关。miRNA-29b是一类与EMT过程密切相关的非编码小RNA,直接或间接调控TGF-β/Smad、PI3K/AKT、Wnt/β-catenin等多条信号通路,参与Ⅱ型和Ⅲ型EMT的发展过程,进而延缓器官纤维化进程,调控肿瘤的侵袭转移。针对miRNA-29b的靶向治疗,有望为临床诊断、治疗器官纤维化和肿瘤侵袭转移提供新视角。本文就miRNA-29b通过多条EMT相关信号通路调控器官纤维化和肿瘤侵袭转移过程的研究现状进行综述。

MicroRNA-29b表达改变对卵巢癌细胞增殖及侵袭的影响

目的:探讨microRNA-29b(miRNA-29b)在卵巢癌细胞中的表达差异及其对卵巢癌细胞增殖和侵袭能力的影响。方法:采用real-time PCR技术检测人卵巢癌上皮细胞系SKOV-3及正常人卵巢上皮细胞系IOSE80中miRNA-29b的表达水平;采用转染技术上调SKOV-3细胞中miRNA-29b的表达水平;采用CCK-8法检测SKOV-3细胞增殖能力;采用Transwell法检测SKOV-3细胞的侵袭能力;采用Western印迹法检测SKOV-3细胞中蛋白表达水平。结果:与IOSE80细胞相比,人卵巢癌上皮细胞系SKOV-3细胞miRNA-29b的表达下降(P<0.05)。转染miRNA-29bmimic后SKOV-3细胞中miRNA-29b的表达水平增加;从第4天开始,转染miRNA-29b的SKOV3细胞增殖能力下降(P<0.05)。转染miRNA-29b减少了通过聚碳酸酯膜的SKOV3细胞数量,抑制了SKOV3细胞的侵袭能力(P<0.05);转染miRNA-29bmimic后,卵巢癌细胞SKOV3中抑制凋亡蛋白Bcl-2和侵袭相关蛋白MMP-9的表达均降低,与阴性对照组相比差异有统计学意义(P<0.05)。结论:miRNA-29b可通过抑制凋亡相关蛋白Bcl-2和侵袭相关蛋白MMP-9的表达来抑制卵巢癌细胞的增殖和侵袭。

MicroRNA-29b的研究现状

1 miRNA简介miRNA广泛存在于自然界中,是一种大小约为22 nt的内源性非编码的单链微小RNA[1],它的成熟过程需要经历以下几个步骤[2]：首先以内源性转录本为模板进行基因转录,形成发夹状的原始pri-miRNA,接着于细胞核内经过Drosha切割,被加工成具有茎环结构的70 nt左右的前体pre-miRNA,

白藜芦醇调节微小RNA-29b表达抑制高糖诱导的大鼠视网膜muller细胞凋亡

目的研究白藜芦醇(RSV)防护糖尿病早期视损伤的分子机制。方法通过建立视网膜muller细胞(RMCs)体外高糖模型,采用免疫荧光双标、qRT-PCR、western blot、Annexin V/PI流式细胞技术检测高糖和RSV对微小RNA-29b(miR-29b)、特异蛋白1(SP1)表达及RMCs凋亡的影响。结果高糖培养后,miR-29b和SP1表达明显改变,RMCs凋亡率明显增加,RSV干预可明显抑制高糖诱导的miR-29b和SP1异常表达和RMCs凋亡;通过预先在RMCs中转染miR-29b类似物和miR-29b抑制剂研究发现,RSV抑制凋亡作用受明显影响(P<0.05)。结论 RSV通过调节miR-29b表达发挥抗糖尿病早期视损伤作用。

MicroRNA-29b对肝纤维化及肝星状细胞增殖、凋亡的影响

目的探究microRNA-29b(miR-29b)在肝纤维化过程中的作用,以及对肝星状细胞增殖和凋亡的影响。方法将大鼠随机分为对照组和模型组,每组10只。模型组大鼠经腹部注射60%3 ml/kg CCl4复制肝纤维化模型;对照组注射等量生理盐水。分别观察两组大鼠肝纤维化情况,检测肝组织中miR-29b、TGF-β1、SAMD3基因及TGF-β1、SAMD3蛋白的表达。体外培养肝星状细胞HSC-T6、LX-2,转染miR-29b siRNA,检测miR-29b对HSC-T6、LX-2细胞增殖、凋亡的影响,以及对TGF-β1、SAMD3表达的影响。结果与对照组相比,模型组心肌纤维比例增加,随着时间延长,第6和12周心肌纤维比例逐渐升高(P <0.05)。与对照组相比,模型组miR-29b基因相对表达量降低,随着时间延长,模型组miR-29b基因相对表达量逐渐降低(P<0.05)。与对照组相比,模型组TGF-β1、SAMD3基因和蛋白相对表达量升高;随着时间延长,TGF-β1、SAMD3基因和蛋白相对表达量逐渐升高(P <0.05)。在HSC-T6、LX-2细胞中,miR-29b转染组G1期细胞比例高于空白对照组、阴性转染组,S期细胞比例低于空白对照组、阴性转染组(P<0.05)。miR-29b转染组HSC-T6、LX-2细胞凋亡率高于空白对照组、阴性转染组(P<0.05)。与空白对照组、阴性转染组相比,HSC-T6、LX-2细胞中TGF-β1、SAMD3基因和蛋白相对表达量升高,miR-29b基因相对表达量降低(P<0.05)。结论 miR-29b在肝纤维化过程中表达降低,miR-29b可抑制肝星状细胞增殖,诱导其凋亡。

MicroRNA-29b-3p重组腺相关病毒制备及在大鼠前额叶皮质中的表达研究

目的获得表达micro RNA-29b-3p的重组腺相关病毒(rAAV-mi R-29b-3p),并检测其在大鼠前额叶皮质中的感染效果和表达水平。方法将前体mi R-29b-3p基因片段置入AAV表达质粒中构建重组AAV质粒,将重组AAV质粒、包装质粒和辅助质粒通过脂质体Lipa Fiter TM共转染HEK293细胞包装r AAVmi R-29b-3p。从转染的HEK293细胞中收集并通过树脂柱纯化r AAV-mi R-29b-3p,通过实时荧光定量聚合酶链反应(q RT-PCR)测定r AAV-mi R-29b-3p滴度。通过脑立体定位仪注射r AAV-mi R-29b-3p至大鼠前额叶皮质,免疫荧光显微镜观察r AAV-mi R-29b-3p的感染效果,q RT-PCR检测r AAV-mi R-29b-3p表达水平。结果成功包装的r AAV-mi R-29b-3p经纯化后获得了高纯度的r AAV-mi R-29b-3p,q RT-PCR检测r AAV-mi R-29b-3p的病毒滴度达到1.0×1012 vg/ml,经感染21 d后,脑组织前额叶皮质荧光表达明显,mi R-29b-3p表达水平明显提高。结论构建的r AAV-mi R-29b-3p可使大鼠前脑皮层mi R-29b-3p高表达,为进一步研究mi R-29b-3p的生物学功能提供了有效工具。

脂肪间充质干细胞外泌体可减轻过氧化氢诱导PC12细胞的凋亡

背景:间充质干细胞外泌体在组织损伤修复中可能发挥关键作用,而miRNA是外泌体发挥治疗作用的重要成分,其中miR-29b-3p具有减少细胞凋亡、促进轴突再生和血管生成的作用。目的:研究脂肪间充质干细胞外泌体通过miR-29b-3p对过氧化氢诱导PC12细胞损伤模型的保护作用,并探讨相关机制。方法:①首先采用胶原酶消化法提取大鼠脂肪间充质干细胞,通过miR-29b-3p模拟物及抑制物转染脂肪间充质干细胞,采用超速离心法从培养上清中提取外泌体并进行鉴定,从而构建高表达和敲低miR-29b-3p的脂肪间充质干细胞外泌体;②通过过氧化氢诱导PC12细胞模拟神经细胞损伤模型,研究脂肪间充质干细胞外泌体通过miR-29b-3p对神经元细胞损伤模型发挥保护作用的相关机制。结果与结论:①脂肪间充质干细胞外泌体具有典型的杯状形态,直径分布在50-140 nm范围内,表达外泌体表面特异性标志膜蛋白Alix、CD63及TSG101,并可被PC12细胞成功摄取;②脂肪间充质干细胞外泌体预处理可减轻过氧化氢诱导PC12细胞的凋亡,并且这种保护作用随着外泌体中miR-29b-3p表达的增加而增强,随着外泌体中miR-29b-3p表达的降低而减弱,其发挥作用的机制与脂肪间充质干细胞外泌体通过miR-29b-3p促进抗凋亡蛋白Bcl-2的表达及抑制凋亡蛋白Bax的表达相关。

原发性高血压患者外周血miR-126、miR-29b、miR-18b变化及与血管内皮损伤的关系

目的 探究原发性高血压患者外周血miRNA-126(miR-126)、miRNA-29b(miR-29b)、miRNA-18b(miR-18b)变化及与血管内皮损伤的关系。方法 采取病例对照研究,选择2021年9月至2022年9月收治的原发性高血压病例87例(高血压组)和同期体检的健康对照人群80名(对照组)。入选者均采集外周血标本,采用实时荧光定量聚合酶链反应(polymerase chain reaction, PCR)技术测定外周血miR-126、miR-29b、miR-18b表达水平,采用硝酸还原酶法测定血清一氧化氮(notric oxide, NO)水平,采用酶联免疫吸附法测定血清内皮素1(endothelin 1, ET-1)、血管性血友病因子(von Willebrand factor,vWF)水平。分析高血压组与对照组的检测结果差异及不同高血压分级患者间的检测结果差异,采用Spearman相关分析法分析原发性高血压外周血miR-126、miR-29b、miR-18b水平与NO、ET-1、vWF的关系。结果 高血压组患者高血压家族史比例、收缩压和舒张压水平均高于对照组,差异有统计学意义(P <0.05);高血压组外周血miR-126相对表达量、血清NO水平低于对照组,而外周血miR-29b、miR-18b相对表达量和血清ET-1、vWF水平高于对照组,组间比较差异有统计学意义(P <0.05)。随着高血压分级增加,收缩压、舒张压、总胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇水平逐渐升高,两两比较差异有统计学意义(P <0.05);随着高血压分级增加,外周血miR-126相对表达量和血清NO水平逐渐降低,外周血miR-29b、miR-18b相对表达量和血清ET-1、vWF水平均逐渐升高,两两比较差异有统计学意义(P <0.05)。外周血miR-126相对表达量与血清NO水平呈正相关,与血清ET-1、vWF水平成负相关;miR-29b、miR-18b相对表达量均与NO水平呈负相关,与血清ET-1、vWF水平正相关(P <0.05)。结论 原发性高血压患者外周血miR-126相对表达量异常降低,而外周血miR-29b、miR-18b相对表达量均异常增加,且三者均与高血压分级、血管内皮损伤具有显著相关性。

微RNA-29b对胃癌腹膜高转移潜能细胞系侵袭和增殖能力的影响

目的 研究miRNA 29b在胃癌细胞株GC9811及胃癌腹膜高转移潜能细胞株GC9811 P中的表达及其对细胞侵袭、增殖及凋亡能力的影响.方法 通过实时荧光定量PCR测定miRNA 29b在GC9811和GC9811 P细胞中的相对表达量.将GC9811细胞分3组,miRNA-29b下调组转染慢病毒LV miRNA 29b抑制子,阴性对照组转染空载体,未转染细胞作为空白对照组.将GC9811P细胞分3组培养,miRNA-29b上调组转染慢病毒LV-miRNA 29b,阴性对照组转染空载体,未转染细胞作为空白对照组.Transwell小室实验检测细胞的侵袭能力,MTT实验检测细胞的增殖能力,平板克隆实验检测细胞的克隆形成能力,流式细胞术检测细胞的凋亡情况.实时荧光定量PCR检测胃癌细胞（GC9811-P、GC 9811、MKN28-M、MKN28-NM）中miRNA-29b与富含半胱氨酸的酸性分泌蛋白（SPARC）基因较正常胃黏膜细胞GES的相对表达水平并进行相关性分析.两样本均数之间的比较采用两独立样本的t检验和SNK-q检验,3组样本均数之间的比较采用单因素方差分析.结果 GC9811P细胞中miRNA-29b的相对表达量（0.21±0.04）明显低于GC9811细胞（1.00±0.03,t=28.140,P＜0.01）.GC9811细胞转染慢病毒LV-miRNA-29b抑制子后,细胞中miRNA-29b的表达（0.21±0.04）较阴性对照组（0.89±0.07）或空白对照组（1.00±0.04）明显降低（q=12.76、14.73,P均＜0.01）,跨膜细胞数（274.33±9.03）较阴性对照组显著增多（110.67±13.69,t=9.981,P＜0.01）,克隆形成能力明显增强（131.33±4.91比69.67±2.33,t=11.340,P＜0.01）,MTT实验亦显示其增殖能力显著增强.GC9811-P细胞转染慢病毒LV miRNA-29b后,细胞中miRNA-29b的表达（4.08±0.20）较阴性对照组（1.15±0.05）或空白对照组（1.00±0.10）明显升高（q=21.73、22.81,P均＜0.01）;跨膜细胞数（51.33±5.55）较阴性对照组（104.00±6.24）明显减少（t=6.305,P＜0.01）,MTT实验亦显示其增殖能力明显减弱.细胞凋亡实验证实miRNA-29b具有促进细胞凋亡的趋势,但差异无统计学意义（P＞0.05）;胃癌细胞中miRNA-29b和SPARC mRNA的表达呈负相关（r=-0.97,P=0.03）.结论 miRNA-29b在胃癌腹膜高转移潜能细胞系中低表达,对胃癌细胞的侵袭和增殖具有抑制作用,miRNA-29b可能成为抑制胃癌腹膜转移的一个新的靶点.