miRNA-432-5p在脂多糖诱导的肺泡上皮细胞损伤中的作用及可能机制研究

目的探讨miRNA-432-5p在脂多糖(LPS)诱导的肺泡上皮细胞损伤中的作用及可能机制。方法人肺泡上皮细胞A549随机分为对照组、LPS组、miRNA-432-5p mimics组及miRNA-432-5p siRNA组。利用CCK-8实验检测细胞的活性;利用ELISA法检测细胞培养液中炎性因子肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)、白细胞介素1β(IL-1β)的含量;利用RT-qPCR检测细胞中miRNA-432-5p mRNA的表达;利用Hoechst染色检测细胞的凋亡情况;利用Western blot检测细胞中NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)、半胱氨酸蛋白酶1(Caspase1)、白细胞介素1β(IL-1β)蛋白的表达。结果LPS组细胞的活性OD值(6 h:0.809±0.09;12 h:0.601±0.09;24 h:0.485±0.43)明显低于对照组的1.000±0.00,差异均具有统计学意义(P<0.05);LPS组细胞中miRNA-432-5p mRNA表达水平为1.563±0.10,明显高于对照组的1.000±0.00,细胞凋亡率为(41.52±1.83)%,明显高于对照组的(0.000±0.00)%,差异均有统计学意义(P<0.05);LPS组培养液中的TNF-α、IL-6和IL-1β含量分别为(36.32±6.07)pg/mL、(45.08±3.75)pg/mL、(40.87±6.65)pg/mL,明显高于对照组的(5.27±0.84)pg/mL、(5.57±0.65)pg/mL、(3.26±0.85)pg/mL,差异均具有统计学意义(P<0.05),LPS组细胞中的NLRP3、Caspase1和IL-1β蛋白表达水平分别为0.734±0.08、0.305±0.06、0.430±0.05,明显高于对照组的0.163±0.03、0.025±0.01、0.032±0.01,差异均具有统计学意义(P<0.05)。miRNA-432-5p mimics组细胞凋亡率为(24.23±3.09)%,明显低于LPS组的(41.52±1.83)%,细胞活性为0.639±0.09,明显高于LPS组的0.468±0.07,差异均有统计学意义(P<0.05);miRNA-432-5p mimics组培养液中的TNF-α、IL-6和IL-1β含量分别为(22.85±4.01)pg/mL、(29.15±5.22)pg/mL、(20.63±3.89)pg/mL,明显低于LPS组的(36.32±6.07)pg/mL、(45.08±3.75)pg/mL、(40.87±6.65)pg/mL,差异均具有统计学意义(P<0.05);miRNA-432-5p mimics组细胞中的NLRP3、Caspase1和IL-1β蛋白表达水平分别为0.473±0.04、0.121±0.02、0.279±0.04,明显低于LPS组的0.734±0.08、0.305±0.06、0.430±0.05,差异均有统计学意义(P<0.05)。miRNA-432-5p siRNA组细胞凋亡率为(56.44±3.25)%,明显高于LPS组的(41.52±1.83)%,细胞活性为0.348±0.06,明显低于LPS组的0.468±0.07,差异均有统计学意义(P<0.05);miRNA-432-5p siRNA组培养液中的TNF-α、IL-6和IL-1β含量分别为(51.08±4.12)pg/mL、(53.61±4.83)pg/mL、(59.97±3.62)pg/mL,明显高于LPS组的(36.32±6.07)pg/mL、(45.08±3.75)pg/mL、(40.87±6.65)pg/mL,差异均有统计学意义(P<0.05);miRNA-432-5p siRNA组细胞中的NLRP3、Caspase1和IL-1β蛋白表达水平分别为0.969±0.12、0.430±0.09、0.575±0.07,明显高于LPS组的0.734±0.08、0.305±0.06、0.430±0.05,差异均具有统计学意义(P<0.05)。结论miRNA-432-5p可通过抑制NLRP3炎性小体通路的激活,对受损细胞发挥保护作用。

过表达miRNA-424-5p靶向AKT3对奶牛子宫内膜上皮细胞凋亡的影响

[目的]本试验通过过表达miRNA-424-5p,明确miRNA-424-5p与其靶基因丝氨酸/苏氨酸激酶3(AKT serine/threonine kinase 3,AKT3)对奶牛子宫内膜上皮细胞凋亡影响的机制,为阐明miRNA-424-5p在奶牛胎盘分离过程中的作用机制提供试验基础和理论依据。[方法]试验分为3组:空白对照组(Control)、阴性对照组(miRNA-424-5p mimics NC)和过表达组(miRNA-424-5p mimics)。采用茎环法实时荧光定量PCR检测转染miRNA-424-5p mimics后奶牛子宫内膜上皮细胞miRNA-424-5p的表达变化;采用Western blotting及实时荧光定量PCR检测过表达后AKT3和凋亡相关因子的表达变化,采用Annexin V-FITC/PI法检测奶牛子宫内膜上皮细胞凋亡情况。[结果]与空白对照及阴性对照组相比,转染miRNA-424-5p mimics后子宫内膜上皮细胞miRNA-424-5p mRNA的表达量极显著升高(P<0.01),B淋巴细胞瘤-2(B-cell lymphoma-2,Bcl-2)相关X蛋白(Bax)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(cysteinyl aspartate specific proteinase 3,Caspase3)和Caspase9的mRNA表达量极显著升高(P<0.01),AKT3和Bcl-2的mRNA表达量极显著降低(P<0.01);Bax和Caspase3蛋白表达量极显著升高(P<0.01),Caspase9蛋白表达量显著升高(P<0.05),AKT3和Bcl-2蛋白表达量极显著降低(P<0.01);细胞凋亡率极显著升高(P<0.01)。[结论]过表达miRNA-424-5p可通过靶向调控AKT3使奶牛子宫内膜上皮细胞凋亡因子Bax、Caspase3和Caspase9的表达量增加,使Bcl-2的表达量降低,进而促进细胞凋亡。

椎间盘退变程度与髓核中miRNA-142-3p、混合谱系激酶3及白细胞介素1β的相关性

背景:研究表明,miRNA水平与椎间盘细胞的凋亡和增殖、细胞外基质代谢和炎症反应密切相关,而miR-142-3p在椎间盘退变中的具体作用尚不清楚。目的:探讨人腰椎间盘髓核组织中miRNA-142-3p、混合谱系激酶3、白细胞介素1β表达与椎间盘退变程度的相关性。方法:选择2020年1月至2022年3月在苏州市第九人民医院因腰椎间盘退行性疾病而行手术的患者82例,术前均行MRI检查,根据Videman分级标准将患者分为轻度退变组(n=36)、中度退变组(n=26)和重度退变组(n=20),获取82份髓核组织标本,检测各组髓核组织中miRNA-142-3p、混合谱系激酶3、白细胞介素1β、Ⅰ型胶原和Ⅱ型胶原的基因表达,以及混合谱系激酶3、白细胞介素1β、Ⅰ型胶原和Ⅱ型胶原的蛋白表达,采用Spearman相关系数法评估miRNA-142-3p、混合谱系激酶3、白细胞介素β表达与腰椎间盘退变程度的相关性。采用随机数字表法将30只成年SD大鼠分为假手术组(仅穿刺皮肤与肌肉后处死)、轻度退变组(穿刺Co7/8椎间盘1周后处死)与重度退变组(穿刺Co7/8椎间盘2周后处死),每组10只,检测各组髓核组织中混合谱系激酶3、白细胞介素1β的蛋白表达,以及miRNA-142-3p、混合谱系激酶3、白细胞介素1β的基因表达。结果与结论:①人髓核组织:miRNA-142-3p的表达由高到低的顺序为轻度退变组>中度退变组>重度退变组(P<0.05),混合谱系激酶3、白细胞介素1β基因与蛋白表达由低到高的顺序为:轻度退变组<中度退变组<重度退变组(P<0.05),Ⅰ型胶原基因与蛋白表达由低到高的顺序为:轻度退变组<中度退变组<重度退变组(P<0.05),Ⅱ型胶原基因与蛋白表达由高到低的顺序为:轻度退变组>中度退变组>重度退变组的趋势(P<0.05);Spearman相关分析显示,椎间盘退变程度与miRNA-142-3p表达呈负相关(P<0.05),与混合谱系激酶3、白细胞介素1β表达呈正相关(P<0.05);②大鼠髓核组织:与假手术组比较,轻度退变组髓核组织中混合谱系激酶3、白细胞介素1β基因与蛋白表达升高(P<0.05),miRNA-142-3p表达降低(P<0.05);与轻度退变组比较,重度退变组髓核组织中混合谱系激酶3、白细胞介素1β基因与蛋白表达升高(P<0.05),miRNA-142-3p表达降低(P<0.05);③结果表明,人腰椎间盘退变程度与髓核组织中miRNA-142-3p表达呈负相关,与混合谱系激酶3和白细胞介素1β表达呈正相关。

内皮祖细胞外泌体中miRNA-222-3p对糖尿病小鼠皮肤伤口愈合的影响

目的了解内皮祖细胞外泌体(EPCs-Exo)中的miRNA-222-3p对糖尿病小鼠皮肤伤口愈合的影响。方法采用荧光染色法对C57BL/6小鼠骨髓来源内皮祖细胞(EPCs)进行鉴定。对从EPCs培养基中分离出的EPCs-Exo进行鉴定以及miRNA高通量测序。建立糖尿病小鼠皮肤损伤模型,随机分为5组:PBS组、EPCs-Exo组、空白组、agomiR-222-3p组、antagomiR-222-3p组。根据不同分组,连续处理14 d,观察创面愈合率,免疫荧光方法了解治疗前后创缘组织中活性氧(ROS)、血管内皮生长因子(VEGF)、CD31表达水平变化。结果EPCs-Exo促进糖尿病小鼠皮肤伤口愈合,降低创缘组织中ROS表达水平,增加VEGF、CD31表达水平(P<0.05)。高通量测序提示miRNA-222-3p在EPCs-Exo中高度表达。创缘组织局部皮下注射miRNA-222-3p可显著促进糖尿病小鼠皮肤伤口愈合,降低创缘组织中ROS表达水平,增加VEGF、CD31表达水平(P<0.05)。结论miRNA-222-3p促进糖尿病小鼠伤口愈合,在EPCs-Exo促进创面愈合过程中发挥重要作用。

lncRNA MALAT1通过海绵吸附miRNA-141-3p调控Wnt/β-catenin促进卵巢癌的生长及转移

目的 研究长链非编码RNA MALAT1(lncRNA MALAT1)在卵巢癌中的作用及调控机制。方法 实时荧光定量聚合酶链反应(real-time quantitative polymerase chain reaction, RT-qPCR)检测MALAT1在人正常卵巢上皮细胞系IOSE80及人卵巢癌细胞系SKOV3、OVCA429和HO-8910PM中的表达,选取SKOV3及HO-8910PM细胞进行后续研究。利用siRNA干扰SKOV3和HO-8910PM细胞中MALAT1表达,CCK-8法检测细胞增殖,划痕及Transwell小室检测细胞迁移及侵袭能力,并通过Western blot法检测上皮-间充质转化(epithelial-mesenchymal transformation, EMT)相关指标E-cadherin、N-cadherin的表达。利用生物信息学分析MALAT1与miRNA-141-3p的靶向关系,并利用双荧光素报告基因验证。MALAT1敲低及miRNA-141-3p抑制剂共同作用细胞,检测其对SKOV3及HO-8910PM细胞增殖、侵袭及迁移的影响,并通过Western blot法分析其对Wnt/β-catenin信号通路相关蛋白的表达调控。结果 与人正常卵巢上皮细胞系IOSE80比较,卵巢癌细胞系内MALAT1表达明显上调(P<0.05);而在SKOV3及HO-8910PM中下调MALAT1表达,细胞增殖、侵袭迁移及EMT均受到抑制,同时miRNA-141-3p表达上调(P<0.05)。双荧光素酶报告基因结果证明MALAT1和miRNA-141-3p具有靶向关系。而在下调MALAT1表达的同时使用miRNA-141-3p抑制剂,则可逆转下调MALAT1的所产生的抑制效应(P<0.05)。进一步的研究发现,MALAT1/miRNA-141-3p轴可能通过调控Wnt/β-catenin信号通路影响卵巢癌进展。结论 MALAT1可能通过海绵吸附miRNA-141-3从而调控Wnt/β-catenin影响卵巢癌的发生和发展。

在抑郁症大鼠模型中MiRNA-103-3p调控Rab10促进神经细胞自噬

目的探讨与神经保护相关的基因Rab10在抑郁症体内外模型中发挥的功能和作用机制。方法选取36只大鼠作为慢性应激模型组(CUMS组),每只大鼠单笼饲养,进行6周慢性不可预测温和应激,另选取12只作为对照组。CUMS组大鼠完成6周CUMS刺激后,根据旷场实验数据和体质量分成3组(12只/组):CUMS+生理盐水组、CUMS+AAV载体组和CUMS+AAV过表达Rab10组,CUMS+saline组大鼠侧脑室注射生理盐水;CUMS+AAV组大鼠侧脑室注射AAV空病毒载体;CUMS+AAV-oe-Rab10组大鼠侧脑室注射AAV过表达Rab10载体实现Rab10基因过表达,CUMS刺激在整个实验期间持续进行。对照组大鼠始终不进行任何刺激。利用大鼠行为学指标的变化评价大鼠抑郁状态。构建CORT诱导的PC12细胞模型,CCK-8法检测细胞活力。通过TargetScan数据库预测与Rab10相互作用的miRNA及miRNA结合位点,并结合双荧光素酶和RIP实验探究miRNA-103-3p与Rab10的相互作用。在CORT刺激的PC12细胞中过表达Rab10,或在转染miRNA-103-3p inhibitor基础上沉默Rab10,qRT-PCR法检测miRNA-103-3p和Rab10的表达水平;Western blotting检测细胞中Rab10、BDNF、CREB、p62、Beclin-1、Wnt3a、Gsk3β、磷酸化(p)-Gsk3β和β-catenin的蛋白含量。结果病毒过表达Rab10后明显改善CUMS大鼠行为学指标(P<0.05)。qRT-PCR和Western blotting证实Rab10基因在CUMS大鼠海马与CORT诱导的PC12细胞中表达下调(P<0.05)。生物信息学结合双荧光素酶和RIP实验证实miRNA-103-3p靶向Rab10(P<0.05)。过表达Rab10或沉默miRNA-103-3p激活了Wnt/β-catenin信号通路,上调BDNF、CREB和Beclin-1的含量,下调p62蛋白的表达(P<0.05);下调miRNA-103-3p的基础上沉默Rab10逆转了miRNA-103-3p的作用(P<0.05)。结论miRNA103-3p靶向Rab10激活Wnt/β-catenin信号通路,改善神经细胞的可塑性,促进细胞自噬,从而对抗CORT诱导的PC12细胞损伤。

miR-373-3p低表达慢病毒载体构建及其对子宫内膜癌细胞增殖迁移的抑制作用

目的构建人miR-373-3p低表达慢病毒载体,探讨miR-373-3p低表达对子宫内膜癌HEC-1A细胞增殖和迁移能力的影响。方法利用PCR扩增包含miR-373-3p前体序列的目的基因,经酶切后克隆入慢病毒载体GV280中构建GV280-pre-miR-373-3p inhibitor表达载体,通过与包装质粒共转染293T细胞,进行慢病毒的包装和滴度测定。分别用空载慢病毒(空载病毒组)及重组慢病毒miR-373-3p(miR-373-3p组)感染HEC-1A细胞,并设立空白对照组。采用RT-PCR法检测细胞miR-373-3p mRNA的相对表达水平,CCK-8法检测培养24、48、72、96 h时细胞增殖活力,细胞划痕和Transwell小室试验检测培养24、48 h时细胞迁移能力。结果成功构建了人miR-373-3p低表达慢病毒载体。与空白对照组和空载病毒组比较,miR-373-3p组miR-373-3p相对表达量低,培养48、72、96h HEC-1A细胞增殖活力均降低(P均<0.05),24、48 h HEC-1A细胞划痕面积迁移率低,24 h穿膜细胞数少(P均<0.05)。空载病毒组及空白对照组各指标比较,P均>0.05。结论成功构建了人miR-373-3p低表达慢病毒载体,miR-373-3p低表达可抑制人子宫内膜癌细胞HEC-1A的增殖、迁移能力。

血清miRNA-155-5p和miRNA-133a-3p表达对脓毒症心肌损伤的诊断价值

目的利用受试者工作特征曲线(ROC)评价血清miRNA-155-5p及miRNA-133a-3p表达对脓毒症心肌损伤的诊断价值.方法前瞻性收集江苏大学附属医院收治的脓毒症患者,根据心脏超声分为对照组(n=48例)和心肌损伤组(n=40例).检测88例脓毒症患者血清miRNA-155-5p及miRNA-133a-3p的表达量,采用ROC曲线评价血清miRNA-155-5p及miRNA-133a-3p对脓毒症心肌损伤的诊断价值.结果与对照组比较,脓毒症心肌损伤组患者的miRNA-155-5p[(2.02-±0.45)vs.(2.89-±0.37)]和miRNA-133a-3p[(1.93±0.37)vs.(2.42±0.22)]表达量均明显增高(P<0.05).ROC曲线分析提示,miRNA-155-5p(AUC=0.92,95%CI 0.86~0.97,P=0.028,敏感度97.50%,特异度72.92%)和miRNA-133a-3p(AUC=0.87,95%CI0.80~0.95,P=0.040,敏感度95.00%,特异度70.00%)对脓毒症患者心肌损伤有较高的诊断价值.结论血清miRNA-155-5p及miRNA-133a-3p的表达有助于诊断脓毒症心肌损伤.

miRNA-223-3p调控JAK2/STAT3信号通路对胃癌细胞增殖、凋亡、迁移的影响

目的:探讨miRNA-223-3p对胃癌细胞增殖、凋亡、迁移及JAK2/STAT3信号通路表达的影响。方法:RT-PCR检测40例胃癌组织及相应癌旁组织中miRNA-223-3p表达。培养人胃癌细胞株MKN-28,分别将miRNA-223-3p对照和miRNA-223-3p抑制物转染到细胞中,RT-PCR检测2组细胞中miRNA-223-3p的表达;CCK8法检测转染24、48、72 h后细胞的增殖情况;流式细胞仪检测转染48 h后细胞凋亡率;Transwell小室法检测转染48 h后细胞的迁移数;Western blot法检测Bcl-2、Bax、Cleaved-Caspase3、JAK2、STAT3、p-STAT3蛋白的表达情况。结果:miRNA-223-3p在胃癌组织中的表达高于癌旁组织(P=0.001);转染miRNA-223-3p抑制物后miRNA-223-3p表达明显低于miRNA-223-3p对照组(P<0.001);miRNA-223-3p抑制组与miRNA-223-3p对照组比较,细胞增殖受到抑制,细胞凋亡率升高,细胞迁移数降低,Bax、Cleaved-Caspase3蛋白表达升高,JAK2、STAT3、p-STAT3、Bcl-2蛋白表达降低(P <0. 05)。结论:miRNA-223-3p在胃癌组织中高表达,下调miRNA-223-3p表达能抑制细胞增殖和迁移,促进细胞凋亡,其作用机制与JAK2/STAT3信号通路的调节有关。

miRNA-223-3p在不明原因复发性流产患者绒毛组织中表达以及在血管生成中的作用

目的探讨miRNA-223-3p在不明原因复发性流产患者绒毛组织中表达以及在血管生成中的作用及可能机制。方法选取57例不明原因复发性流产患者,其中,流产2~3次36例,≥4次21例,同期,选取正常早孕行人工流产术患者42例作为对照组,利用实时荧光定量PCR技术检测绒毛组织中miRNA-223-3p、Rps6kb1、缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)和血管内皮生长因子(VEGF)表达,免疫组化法检测绒毛组织中微血管密度(MVD)。结果不明原因复发性流产患者绒毛组织中miRNA-223-3p表达量高于对照组,而Rps6kb1 mRNA、HIF-1αmRNA和VEGF mRNA表达量均低于对照组,≥4次不明原因复发性流产患者miRNA-223-3p表达量高于2~3次和对照组,而Rps6kb1 mRNA、HIF-1αmRNA和VEGF mRNA表达量低于2~3次和对照组,均差异有统计学意义(P<0.05);免疫组化结果显示,不明原因复发性流产患者绒毛组织中MVD为(23.3±6.1)个,远低于对照组的(41.6±5.3)个,≥4次不明原因复发性流产患者绒毛组织中MVD低于2~3次,均差异有统计学意义(P<0.05);Pearson相关分析显示,不明原因复发性流产患者绒毛组织中miRNA-223-3p表达量与HIF-1αmRNA和VEGF mRNA表达量及MVD均呈负相关(r=-0.496、-0.638和-0.597,P<0.001),HIF-1αmRNA表达量与VEGF mRNA表达量和MVD均呈正相关(r=0.584、0.439,P<0.001);VEGF mRNA表达量与MVD呈正相关(r=0.600,P<0.001)。结论 miRNA-223-3p在不明原因复发性流产患者绒毛组织中表达上调,可能与Rps6kb1/HIF-1α信号通路有关。

miRNA-490-3p调控Smad2/TGF-β影响结直肠癌SW480细胞的奥沙利铂敏感性

目的:探讨miRNA-490-3p调控Smad2/TGF-β对结直肠癌奥沙利铂化疗敏感性的影响。方法:选取100例结直肠癌(colorectal cancer,CRC)根治性手术后奥沙利铂(oxaliplatin,OXA)同种联合化疗患者作为研究对象,根据化疗情况分为耐药组(n=40)和非耐药组(n=60),用q PCR检测两组外周血miRNA-490-3p水平;选取人CRC细胞株SW480和CRC奥沙利铂(OXA)耐药型细胞株OXA-SW480进行研究,先用q PCR检测两种细胞株中miRNA-490-3p表达水平;后将miRNA-490-3p过表达载体转染OXA-SW480(过表达组),并设立空载体组(空载体转染OXA-SW480)和空白对照组(OXA-SW480未经任何处理)。用CCK-8检测各组细胞增殖能力,同时用不同浓度OXA处理各组细胞,计算其半数抑制浓度(IC50);用Annexin-V-FITC/PI染色流式细胞术检测各组细胞凋亡率;用WB检测各组Smad2和TGF-β蛋白表达水平。结果:在CRC患者中,耐药组外周血miR-490-3p水平显著低于非耐药组,在CRC细胞株中,OXA-SW480耐药株细胞miR-490-3p水平显著低于正常株SW480细胞(P<0.05)。与空载体组和空白对照组相比,过表达组miR-490-3p水平显著降低(均P<0.05),增殖抑制率显著升高(均P<0.05),细胞凋亡率显著升高(均P<0.01),Smad2蛋白水平显著降低(均P<0.05),TGF-β蛋白水平显著升高(均P<0.05)。经OXA处理后,过表达组的IC50显著低于空载体组和空白对照组(均P<0.05)。经Pearson相关法分析,miR-490-3p与Smad2的表达呈负相关(r=–0.943,P<0.01),miR-490-3p与TGF-β的表达呈正相关(r=0.961,P<0.01)。结论:过表达miRNA-490-3p可增加CRC SW480细胞的OXA敏感性,此作用Smad2/TGF-β信号通路有关。

miRNA-126-3p与先天性心脏病肺动脉高压发病机制相关性的临床研究

目的探讨miRNA-126-3p与肺动脉高压(以下简称肺高压)发病机制的相关性。方法选取25例先天性心脏病患者,其中,肺高压患者11例,对照组14例,采用qRT-PCR法检测其肺组织miRNA-126-3p的表达,并采用starBase进行靶基因预测,并从mRNA水平和蛋白水平进行验证。结果肺高压患者与对照组在年龄、性别、生化指标检查等方面比较差异无统计学意义(P>0.05);肺高压患者miRNA-126-3p表达水平与对照组比较差异有统计学意义(P<0.01);生物信息学预测发现miRNA-126-3p的生物学功能主要与结合蛋白、信号转导、细胞分化、调控细胞形态、调控MAPK和胰岛素受体信号通路等有关,其靶基因主要有VEGFA、SPRED1、PIK3R2等;肺高压组的VEGFA表达在mRNA水平和蛋白水平与对照组比较差异有统计学意义(P<0.01);miRNA-126-3p与VEGFA呈现正相关(P<0.01)。结论 miRNA-126-3p可能通过调控VEGFA参与先天性心脏病相关性肺动脉高压发病。

miRNA-210-3p对缺氧诱导海马神经细胞HT22凋亡的影响

目的:研究miRNA-210-3p对缺氧诱导海马神经细胞凋亡的影响及机制。方法:将海马神经元HT22细胞分成4组,分别为对照组、缺氧组、阴性对照+缺氧组、miRNA-210-3p+缺氧组,采用qRT-PCR方法检测HT22细胞中miRNA-210-3p的表达,Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡情况,Western blot检测细胞中活化型Caspase-3和Caspase-9蛋白表达水平,用硫代巴比妥酸法检测MDA含量,用二硫代二硝基苯甲酸法检测GSH-Px活性,用水溶性四唑盐法检测SOD活性。结果:转染miRNA-210-3p模拟物的HT22细胞经缺氧处理后,细胞中miRNA-210-3p表达水平升高(P <0. 05)。缺氧处理后的HT22细胞凋亡率升高,细胞中活化型Caspase-3和Caspase-9蛋白表达水平升高,GSH-Px、SOD活性降低,MDA含量升高(P <0. 05);上调miRNA-210-3p表达可拮抗缺氧诱导的HT22细胞凋亡和活化型Caspase-3、Caspase-9蛋白表达,提高细胞中GSH-Px、SOD活性,降低细胞中MDA含量(P <0. 05)。结论:上调miRNA-210-3p能够抑制缺氧诱导的海马神经细胞凋亡,其作用机制可能与降低氧化应激有关。

外周血miRNA-17-3p的检测在结肠癌诊断中的临床意义

目的:外周血microRNA(miRNA)-17-3p对结肠癌的诊断意义及其与临床病理特征的相关性.方法:2012-01/2014-04在北京天坛医院接受住院治疗的结肠癌患者67例(观察组)资料,另选取50例健康体检者作为对照组.采用逆转录实时荧光定量聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测miRNA-17-3p的表达量,分析两组外周血miRNA-17-3p、血癌胚抗原(carcinoembryonic antigen,CEA)水平差异;并分析miRNA-17-3p与年龄、性别、临床分期、分化程度、淋巴结转移等临床病理特征的关系.并分别对miRNA-17-3p、CEA水平对结肠癌的诊断意义行ROC曲线分析.结果:观察组患者血清中的miRNA-17-3p的相对表达量明显高于正常对照组(P<0.05).其表达与淋巴结转移、分化程度、TNM分期相关.受试者工作特征曲线(receiver operating characteristic curve,ROC曲线)分析显示,miRNA-17-3p以相对表达量2.50为临界点时对结肠癌的诊断敏感性为87%,特异性为62%,曲线下面积0.910,优于CEA对结肠癌的诊断.术后外周血miRNA-17-3p水平明显低于术前,差异有统计学意义(P<0.05).结论:外周血miRNA-17-3p在结肠癌患者中的表达明显上调,对结肠癌的诊断价值优于CEA.

血清miRNA-574-3p,AFP,IGF-2水平联合检测在肝癌早期诊断中的价值研究

目的 探讨血清miRNA-574-3p,甲胎蛋白(alpha-fetoprotein), AFP、胰岛素样生长因子-2(insulin-like growth factor 2, IGF-2)联合诊断早期肝癌的价值。方法 选取2019年4月~2020年11月南通大学附属医院确诊的85例早期肝癌患者和90例健康体检者为研究对象,实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(real-time fuorescent quantitative reverse transcription polymerase chain reaction,RT-PCR)测定血清中miRNA-574-3p水平,化学发光法检测血清AFP浓度,ELISA法检测IGF-2浓度,分析三者对早期肝癌的诊断价值。结果 早期肝癌组miRNA-574-3p,AFP和IGF-2分别为1.40±0.28 RQ,94.13±25.05 ng/ml和432.50±104.01 ng/ml,显著高于健康对照组(0.55±0.10 RQ,10.05±3.34ng/ml和189.40±52.36ng/ml),差异有统计学意义(t=5.368,12.401,18.514,均P <0.05)。miRNA-574-3p,AFP和IGF-2诊断早期肝癌的曲线下面积分别为0.801,0.787和0.762,其中miRNA-574-3p曲线下面积最大。AFP,IGF-2分别联合miRNA-574-3p诊断早期肝癌的曲线下面积为0.870,0.853,三者联合诊断价值最高,曲线下面积为0.917。结论 相比于AFP和IGF-2,miRNA-574-3p对早期肝癌诊断价值更高,临床上可通过miRNA-574-3p联合AFP,IGF-2共同诊断以提高诊断效能。

miRNA-330-3p/Ap2m1轴在过表达GATA-4骨髓间充质干细胞外泌体抗心肌细胞凋亡中的作用

目的探讨过表达GATA-4小鼠骨髓间充质干细胞(BMSC)分泌外泌体(BMSC^(GATA-4)exosome)通过miRNA-330-3p/Ap2m1轴减少心肌细胞凋亡,提高心肌梗死心功能。方法建立小鼠心梗模型,共分7组,分别经尾静脉注射BMSC^(miRNA-330-3p-mimic)-exosome、BMSC^(miRNA-330-3p-inhibitor)-exosome、BMSC^(空载体)-exosome、BMSCexosome 48 h,同时将心梗未处理组及正常小鼠作为对照组。采用心脏彩超检测各组心功能,RT-PCR检测心梗心肌细胞内miRNA-330-3p的表达,Tunel法检测各组心梗心肌细胞凋亡数量。miRNA-330-3p对应靶基因Ap2.m1、Cnot4蛋白采用Western blot法进行检测。结果BMSC^(miRNA-330-3p-mimic)-exosome组心梗心功能改善最为明显(P<0.05),其心肌细胞内miRNA-330-3p表达量最高(P<0.05)。BMSC^(miRNA-330-3p-mimic)-exosome组心肌细胞的凋亡率最低(P<0.05),BMSC^(miRNA-330-3p-mimic)-exosome组心梗心肌细胞内的Ap2.m1的表达最低(P<0.05)。结论过表达GATA-4小鼠骨髓间充质干细胞外泌体通过miRNA-330-3p/Ap2m1轴抗心肌细胞凋亡。

金芪灌洗液对慢性鼻-鼻窦炎模型白兔鼻黏膜组织miRNA-155-3p表达的影响

目的探讨中药金芪灌洗液对慢性鼻-鼻窦炎(CRS)模型白兔鼻黏膜组织miRNA-155-3p表达的影响。方法从慢性鼻-鼻窦炎患者的鼻腔分泌物中单独分离出金黄色葡萄球菌菌株,培养后收集菌落并稀释至1.0×1011 cfu/L混悬液,通过手术方式移植到白兔的鼻腔内,复制慢性鼻-鼻窦炎动物模型。将实验白兔随机分为空白组、模型组、庆大霉素组、金芪灌洗液组,每组6只。各组白兔给予相应干预,观察2周后处死取材。采用实时荧光定量聚合酶链反应检测miRNA-155-3p的表达,HE染色观察各组鼻黏膜炎症及结构的变化。结果模型组、庆大霉素组miRNA-155-3p相对表达量较空白组升高(P<0.05),金芪灌洗液组较空白组降低(P<0.05),金芪灌洗液组miRNA-155-3p相对表达量较模型组降低(P<0.05),庆大霉素组较模型组升高(P<0.05),金芪灌洗液组miRNA-155-3p相对表达量较庆大霉素组降低(P<0.05)。白兔鼻窦黏膜形态学改变显示金芪灌洗液组黏膜形态趋于正常。结论金芪灌洗液可抑制miRNA-155-3p的表达,起到抗炎作用并修复白兔损伤的鼻黏膜。

miRNA-455-3p在乳腺癌组织中的表达及与紫杉醇耐药的关系

目的 探讨miRNA-455-3p在乳腺癌组织中的表达及与紫杉醇(PTX)耐药的关系。方法 选取80例乳腺癌患者,采用实时定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)检测乳腺癌组织和癌旁组织中miRNA-455-3p的相对表达量及PTX耐药和PTX敏感乳腺癌患者乳腺癌组织中miRNA-455-3p、自噬相关蛋白(ATG12)mRNA的相对表达量。将miRNA-NC、miRNA-455-3p mimics分别转染至乳腺癌耐药MCF-7/PTX细胞,分别作为miRNA-NC组、miRNA-455-3p组,采用蛋白质印迹法检测细胞凋亡情况以及P糖蛋白(P-gp)和谷胱甘肽S-转移酶-π(GST-π)蛋白的相对表达量。相关性分析采用Spearman相关分析。结果 乳腺癌组织中miRNA-455-3p的相对表达量明显高于癌旁组织,差异有统计学意义(P﹤0.01)。PTX敏感乳腺癌患者乳腺癌组织中miRNA-455-3p的相对表达量明显高于PTX耐药患者,ATG12 m RNA相对表达量明显低于PTX耐药患者,差异均有统计学意义(P﹤0.01)。miRNA-455-3p组细胞凋亡率明显高于miRNA-NC组,P-gp、GST-π蛋白相对表达量均明显低于miRNA-NC组,差异均有统计学意义(P﹤0.01)。Spearman相关分析结果显示,乳腺癌组织中miRNA-455-3p的表达与ATG12的表达呈负相关(r=-0.697,P﹤0.01)。结论 乳腺癌组织miRNA-455-3p的表达与ATG12的表达呈负相关,通过靶向抑制ATG12的表达降低耐药乳腺癌细胞的自噬活性,促进细胞凋亡,有助于改善乳腺癌细胞对PTX药物的敏感性。

miRNA-95-3p在人结肠癌中的表达及其对结肠癌细胞SW620增殖、迁移能力的影响

目的探讨miRNA-95-3p在结肠癌患者中的表达及其对结肠癌细胞SW620增殖、迁移能力的影响。方法收集10例结肠癌患者的结肠癌组织和对应的癌旁正常肠黏膜组织,实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测不同组织中miRNA-95-3p的表达情况,CCK-8实验检测转染后SW620细胞的增殖能力,划痕实验检测转染后SW620细胞的体外迁移能力,蛋白质印迹法(Western blot)检测转染后SW620细胞中p21蛋白的表达情况,双荧光素酶实验检测转染后SW620细胞的荧光素酶活性。结果 miRNA-95-3p在结肠癌组织中的相对表达量明显高于癌旁正常肠黏膜组织,差异有统计学意义(P<0.01);过表达组SW620细胞的增殖能力、划痕区域相对宽度均明显高于对照组(P<0.01);过表达组SW620细胞中p21蛋白的相对表达量低于对照组(P﹤0.05);4组SW620细胞的荧光素酶活性比较,差异有统计学意义(F=183.16,P<0.01)。结论 miRNA-95-3p在结肠癌组织中的高表达与结肠癌的发生、发展有关。miRNA-95-3p通过抑制p21蛋白的表达,促进结肠癌细胞SW620的增殖和迁移,有望成为结肠癌分子治疗的新靶点。

多囊卵巢综合征痰湿证miRNA-483-3p差异表达的临床意义

目的通过分析多囊卵巢综合征(PCOS)痰湿证患者血清、卵泡液、颗粒细胞miR-483-3p的差异表达、生殖内分泌特点、糖脂代谢及体外受精结局,探讨多囊卵巢综合征痰湿证的发病机制。方法总计纳入52例体外受精-胚胎移植不孕症患者,其中痰湿证PCOS患者17例(痰湿组),非痰湿证PCOS患者18例(非痰湿组),男性因素不孕患者17例(对照组)。实时荧光定量PCR检测miRNA-483-3p的表达。比较3组患者的临床特征、实验室指标及miRNA-483-3p的相对表达量。结果 (1)痰湿组体质量指数(BMI)、腰臂比(WHR)、睾酮(T)、空腹胰岛素(FINS)水平显著高于非痰湿组和对照组(P<0.05)。(2) 3组间血清、卵泡液、颗粒细胞中miRNA-483-3p的相对表达水平差异有统计学意义(P<0.05)。PCOS患者尤其是痰湿组的相对表达量显著低于对照组和非痰湿组(P<0.05)。(3)相关分析表明,血清miRNA-483-3p的相对表达水平与血清T、FINS水平密切相关。卵泡液、颗粒细胞miRNA-483-3p的相对表达水平与获卵率、卵母细胞成熟率、正常受精率、优质胚胎率显著相关(P<0.05)。结论多囊卵巢综合征患者血清、卵泡液、颗粒细胞中miR-483-3p呈现特异性低表达,可能与多囊卵巢综合征痰湿证的病因病机密切相关。