装载miRNA-451a的外泌体对肝癌细胞株增殖的影响研究

目的探讨装载miRNA451a的外泌体对肝癌细胞株HepG2和SMMC-7721增殖的影响。方法正常肝组织上皮细胞株HL-7702来源的外泌体,通过与胆固醇基修饰的miRNA-451a模拟物直接孵育构建外泌体451a复合体。将构建的exo-miRNA-451a复合体、等量miRNA-451a模拟物、等量PBS分别接种于96孔板中处于对数生长期的HPG2和SMMC-7721细胞,作为实验组、对照组和空白对照组。采用激光共聚焦显微镜观察exo-miRNA-451a复合体进入细胞内的情况;CCK8法检测HPG2和SMMC-7721细胞增殖。结果构建的外泌体miRNA-451a复合体分别与HepG2和SMMC-7721细胞,共培养3h时,在共聚焦显微镜下,有PKH67标记的外泌体和Cy3标记的miRNA-451a在HepG2和SMMC-7721细胞中共定位,并且在随后的6h、12h观察时逐渐增多。CCK-8实验提示当外泌体451a复合体和miR-451a模拟物分别与肝癌细胞株共孵育6h,OD值差异不明显;共孵育12h实验组OD值低于对照组,共培养48h实验组OD值显著低于对照组。结论装载miRNA-451a的外泌体可抑制肝癌细胞株的增殖。

LncRNA SNHG15通过调控miRNA-451a促进乳腺癌细胞的上皮间质转化研究

目的:研究长链非编码RNA小核仁RNA宿主基因15(LncRNA SNHG15)与miRNA-451a对乳腺癌细胞的生物学活性的影响。方法:qRT-PCR法检测SNHG15、miRNA-451a及趋化因子受体4(CXCR4)在乳腺癌耐药细胞SKBR3-PR中的表达情况;细胞划痕实验检测干扰SNHG15及miRNA-451a抑制剂对SKBR3-PR的细胞迁移能力的影响;流式细胞术检测对细胞凋亡情况的影响;Western blotting实验检测CXCR4、上皮间质转化(EMT)相关蛋白Vimentin、Snail水平表达。结果:相比于亲本细胞,乳腺癌耐药细胞株中SNHG15表达量上调,但差异无统计学意义(P>0.05),miRNA-451a表达量下降(P<0.05),CXCR4表达量上调(P<0.01);划痕实验结果显示SNHG15促进细胞的迁移(P<0.01),miRNA-451a可抑制细胞迁移(P<0.01);细胞凋亡实验结果表明SNHG15抑制细胞凋亡(P<0.01),miRNA-451a促进细胞凋亡(P<0.01);Western blotting表明干扰SNHG15后,EMT相关蛋白Snail和CXCR4表达水平下降,miRNA-451a抑制剂组Snail和CXCR4表达水平上升(P<0.01),Vimentin表达水平无统计学意义(P>0.05)。结论:LncRNA SNHG15可能通过调控miRNA-451a促进乳腺癌细胞的迁移、凋亡,并且潜在调控CXCR4诱导乳腺癌细胞的EMT。

miRNA-378a过表达巨噬细胞株复合胶原蛋白海绵:抗炎及促进组织修复

背景:巨噬细胞M1/M2极化方向的调节在组织工程应用中尤为关键,及时调控可最大程度地减少促炎、促进抗炎或组织愈合反应。目的:将慢病毒介导的miRNA-378a过表达巨噬细胞株复合胶原蛋白海绵回植入动物模型,据此检测免疫调节在体内环境中的相关表达水平等组织修复相关的指标,进一步阐明在体内环境中miRNA-378a是否促进巨噬细胞M2极化及其对免疫调节和组织修复的作用。方法:将慢病毒介导的miRNA-378a过表达巨噬细胞株、阴性对照病毒巨噬细胞株扩增、筛选,复苏培养巨噬细胞株后与胶原蛋白海绵共培养以此构成复合体,具体分组如下:①阳性组:过表达miRNA-378a巨噬细胞-胶原蛋白海绵复合体;②阴性组:阴性对照病毒介导的miRNA-378a巨噬细胞-胶原蛋白海绵复合体;③对照组:巨噬细胞-胶原蛋白海绵;④空白对照组:胶原蛋白海绵。通过免疫荧光及扫描电镜观察各组细胞密度、表型、黏附情况,后回植入小鼠背部皮下模型,分别于造模后4,7 d处死小鼠,通过大体观察、苏木精-伊红染色、Masson染色、免疫组化分析慢病毒介导的miRNA-378a过表达巨噬细胞胶原蛋白海绵复合体中巨噬细胞极化的方向及其对机体免疫调控、组织修复的作用。结果与结论:①免疫荧光镜下观察各组巨噬细胞株确实与胶原蛋白海绵形成复合体;②扫描电镜下慢病毒介导的miRNA-378a巨噬细胞(阳性组)较其他分组细胞密度增加,细胞出现球形、椭圆形及多边形分化,具有更多的伪足;③大体观察下总体7 d愈合好于4 d,慢病毒介导的miRNA-378a过表达巨噬细胞(阳性组)无论4,7 d愈合均好于其他分组;④苏木精-伊红染色、Masson染色下,慢病毒介导的miRNA-378a过表达巨噬细胞(阳性组)具有较多量的纤维细胞、毛细血管、成纤维细胞以及胶原纤维增生;⑤免疫组化显示,慢病毒介导的miRNA-378a过表达巨噬细胞(阳性组)无论4,7 d M2极化细胞阳性率均大于其他分组;对照组及阴性组巨噬细胞无论4,7 d M2极化细胞阳性率均大于空白对照组,而对照组及阴性组之间无统计学差异;阳性组、阴性组、对照组无论4,7 d染色细胞数量均大于空白对照组,且阳性组>阴性组≈对照组>空白对照组;⑥提示在体内环境中miRNA-378a过表达巨噬细胞具有较多量的纤维细胞、毛细血管、成纤维细胞以及胶原纤维增生,对组织修复起到了正向作用,并且能促进巨噬细胞向M2型极化并抑制M1型极化,从而有助于减少机体炎症反应。

miRNA-99b、LL-37、IP-10在耐多药肺结核患者中表达及早期疗效预测价值

目的 分析微小RNA-99b(miRNA-99b)、抗菌肽LL-37、干扰素-γ诱导蛋白10(IP-10)在耐多药肺结核(MDR-PTB)患者中表达及早期疗效预测价值。方法 研究纳入医院2022年11月-2024年2月临床收治MDR-PTB患者108例为MDR-PTB组,Bandim TBscore评分法将其划分为轻度组(n=71)与中-重度组(n=37);纳入同期非耐药肺结核患者(DS-PTB)87例为DS-PTB组,健康体检志愿者90例为健康对照组,检测、评估组间miRNA-99b、LL-37、IP-10表达水平及治疗8周后临床疗效,采用Pearson评估miRNA-99b、LL-37、IP-10表达水平与MDR-PTB患者临床疗效相关性,指标预测价值行多因素Logistic回归,作ROC曲线分析模型预测价值。结果 MDR-PTB组miRNA-99b、LL-37、IP-10均高于DS-PTB组与健康对照组(P<0.05),且DS-PTB组miRNA-99b、LL-37、IP-10高于健康对照组(P<0.05);MDR-PTB组内,中-重度组miRNA-99b、LL-37、IP-10表达水平均高于轻度组(P<0.05);治疗4周、治疗8周后,MDR-PTB患者miRNA-99b、LL-37、IP-10均低于治疗前(P<0.05);108例MDR-PTB患者经8周治疗后临床有效率为88.89%;miRNA-99b、LL-37、IP-10均与有效率呈负相关关系(r=-0.693、-0.706、-0.497,P<0.05);miRNA-99b、LL-37、IP-10高水平表达为MDR-PTB发生发展独立危险因素,有统计学意义(P<0.05),ROC曲线分析显示,miRNA-99b、LL-37、IP-10联合检测AUC为0.937(95%CI:0.863~0.974)高于单一检测结果(Z=7.691、7.069、8.068,P均<0.001);且联合检测敏感度(96.91%)与特异度(96.34%)均最高。结论 miRNA-99b、LL-37、IP-10高水平表达参与MDR-PTB发生与发展,三项联合在MDR-PTB患者早期疗效预测中应用价值高。

miRNA-299-3p对胃癌AGS细胞增殖、凋亡、迁移的影响及其机制

目的探索miRNA-299-3p对胃癌AGS细胞增殖、凋亡、细胞周期及迁移的影响,并进一步探索其机制。方法体外培养胃癌AGS细胞,并将其分为空白对照组、阴性对照组及实验组。利用qPCR检测miRNA-299-3p的表达,将空载体质粒和miRNA-299-3p质粒分别转染入AGS细胞;利用CCK-8法检测细胞增殖情况;流式细胞术检测细胞凋亡、细胞周期及活性氧水平变化情况;Transwell法检测细胞迁移和侵袭情况;Western blot检测相关蛋白表达量变化情况。结果CCK-8实验表明,miRNA-299-3p的高表达抑制AGS细胞增殖(P<0.05);流式细胞术及Western blot结果显示,miRNA-299-3p的高表达能够诱导AGS细胞凋亡,caspase-3和Bax表达量升高,Bcl-2蛋白表达量降低(P<0.05);同时,miRNA-299-3p过表达后,能够下调CDK1/2和Cyclin B1蛋白的表达量,将AGS细胞周期阻滞在G_(2)/M期;Transwell小室及Western blot实验结果表明,miRNA-299-3p过表达使N-cadherin蛋白表达量降低,E-cadherin蛋白表达量升高从而抑制AGS细胞迁移;另外,miRNA-299-3p过表达能够上调AGS细胞中活性氧水平。结论过表达miRNA-299-3能够通过上调细胞内活性氧水平,抑制AGS细胞的增殖、诱导AGS细胞发生凋亡、将细胞周期阻滞在G_(2)/M期、抑制迁移,为miRNA-299-3p在胃癌研究中提供一定的理论基础。

miRNA-451表达质粒的构建及对人A549肺癌细胞侵袭转移及凋亡的影响

目的:探讨miRNA-451对人A549肺癌细胞侵袭转移及凋亡的影响。方法:Hsa-miRNA-451序列通过miRBase数据库查找,根据此序列设计出2条寡核苷酸片段,将目的基因经过退火处理后克隆至真核表达载体pGenesil-1.1质粒中,从而构建成为miRNA-451真核表达载体(pGenesil-1.1-miRNA-451质粒)。将pGenesil-1.1-miRNA-451及pGenesil-1.1-control质粒分别转染人A549肺癌细胞,经过G418的筛选,建立pGenesil-1.1-miRNA-451及pGenesil-1.1-control稳定表达的细胞株。流式细胞术分析检测细胞凋亡的情况;Transwell小室检测miRNA-451对细胞侵袭能力的影响;细胞划痕实验检测细胞的迁移情况。结果:经测序证实miRNA-451真核表达质粒构建成功,与未处理的人A549肺癌细胞和稳定表达pGenesil-1.1-control的细胞相比,稳定表达了pGenesil-1-miRNA-451的人A549肺癌细胞的侵袭和迁移能力均明显受到抑制影响,而细胞凋亡无明显变化(P>0.05)。结论:miRNA-451对人A549肺癌细胞侵袭转移具有显著的抑制作用,但对细胞凋亡作用不明显。

红细胞miRNA-451表达与慢性高原病相关性研究

目的:了解红细胞miRNA-451表达水平与慢性高原病之间的相关性。方法:以28例移居和12例世居慢性高原病患者及24例移居和22例世居正常人为研究对象。取外周血,提取红细胞总RNA,以RT-PCR方法检测miRNA-451的表达,结合患者的临床资料进行统计学分析。结果:移居高原病组红细胞miRNA-451表达高于移居对照组(P<0.05);世居高原病组红细胞miRNA-451表达高于世居对照组(P<0.05);移居对照组和世居对照组红细胞miRNA-451表达无统计学差异(P>0.05);慢性高原病组血红蛋白水平与miRNA-451表达水平呈正相关(r=0.701)。结论:正常人红细胞内存在一定水平的miRNA-451表达,慢性高原病患者miRNA-451高于健康人群,提示miRNA-451可能在慢性高原病的发病过程中起到重要的作用。

miRNA-451在膀胱癌组织中的表达及其临床意义

目的探讨miRNA-451在膀胱癌组织及膀胱癌细胞株中的表达水平及其与膀胱癌临床病理特征的关系。方法采用RT-qPCR检测miRNA-451在30例膀胱癌、18例癌旁组织、15例正常膀胱组织及3个不同转移潜能的膀胱癌细胞株中的表达水平,分析其表达与膀胱癌临床病理特征的关系。结果 miRNA-451在癌组织及癌旁组织中的表达水平明显低于正常组织,且其表达水平和膀胱癌临床分期及病理分级相关,P<0.01。miRNA-451在低度转移潜能的癌细胞株中的表达水平高于具有高转移潜能的细胞株,P<0.01。结论 miRNA-451在癌组织及高转移潜能细胞株中呈低表达,且其表达水平与膀胱癌临床病理特征及癌细胞转移潜能密切相关,可能是膀胱癌潜在的调控基因。

miRNA-451逆转非小细胞肺癌A549/DDP细胞对顺铂的耐药性及其机制研究

目的:探讨microRNA-451(miR-451)逆转非小细胞肺癌A549/DDP细胞对顺铂的耐药性及其可能的作用机制。方法:应用实时荧光定量PCR法(real-time fluorescent quantitative PCR,qRT-PCR)检测耐DDP细胞株A549/DDP及其亲本细胞株A549中miR-451的表达差异,同时检测A549/DDP细胞转染miR-451 mimic后miR-451表达的变化;分别应用MTT法、克隆形成实验、流式细胞术检测转染后A549/DDP细胞对DDP药物敏感度,细胞增殖能力,联合DDP处理后细胞凋亡变化;Western印迹法检测转染后A549/DDP细胞Akt、p-Akt(Ser473)、bcl-2和bax的表达变化。结果:miR-451在耐DDP细胞株A549/DDP中的表达量显著低于敏感细胞株A549(P<0.05),A549/DDP细胞转染miR-451 mimic 24 h后,细胞中miR-451的表达水平较对照组明显提高(P<0.05)。在A549/DDP细胞中过表达miR-451可产生以下效应:相较于对照组,DDP对A549/DDP/miR-451细胞的半数抑制浓度(half inhibition concentration,IC50)减低(P<0.05),A549/DDP/miR-451细胞的增殖能力减弱,A549/DDP/miR-451经过DDP处理后细胞凋亡增多(P<0.05)。Western印迹法结果显示,与对照组比较,转染miR-451 mimic的A549/DDP细胞p-Akt(Ser473)、bcl-2表达水平降低;bax表达水平升高。结论:miR-451可能通过诱导细胞凋亡,抑制细胞增殖,上调bax蛋白及下调p-Akt(Ser473)、bcl-2蛋白表达而逆转A549/DDP细胞对DDP的耐药性。

miRNA-451表达与甲状腺乳头状癌患者淋巴结转移、外侵的关系

目的:检测miRNA-451在甲状腺乳头状癌(papillary thyroid carcinoma,PTC)中的表达及与有无淋巴结转移、外侵的关系。方法:收集150例PTC患者的临床资料及石蜡组织,用miRNA芯片技术分析比较miR-451在有无淋巴结转移间,转移淋巴结数≥3个与<3个间,癌组织有无外侵间的表达差异。结果:相对于无淋巴结转移,伴有淋巴结转移的PTC中miR-451的表达显著降低(P<0.05)。在颈部转移淋巴结≥3个PTC中较<3个表达下调更显著(P<0.05)。相对于无外侵,miR-451在有外侵的PTC中的表达显著降低(P<0.05)。结论:miRNA-451在PTC中表达显著下调,在伴有淋巴结转移的PTC中下降更加显著,可能有助于诊断PTC及淋巴结转移情况。

miRNA-451通过MRP靶向调控胃癌细胞对5-Fu耐药性的机制研究

目的探讨miR-451通过下调耐药基因MRP表达,调控胃癌对5-Fu耐药的相关机制。方法采用实时荧光定量PCR检测20对人胃癌组织及癌旁组织和胃癌细胞系中miR-451的相对表达量,根据患者对药物的反应进行分组并检测耐药组以及非耐药组miR-451的表达水平。构建plent-miR-451稳定过表达胃癌细胞系,通过荧光实时定量PCR检测胃癌细胞系miR-451过表达效率,CCK8法检测不同浓度5-Fu对细胞增殖活力的影响。生物信息学方法分析miR-451的靶基因,并通过荧光素酶实验验证。实时定量PCR以及Western blot检测miR-451对靶基因MRP mRNA和蛋白水平的影响。结果miR-451在正常组织中表达量高于胃癌组织,在非耐药胃癌组织中高于耐药胃癌组织。过表达miR-451降低了胃癌细胞对5-Fu的耐受能力(P=0.0006)。生物信息学分析显示MRP为miR-451的靶基因,荧光素酶实验同时也证实MRP为miR-451的潜在靶基因。过表达miR-451可导致耐药基因MRP mRNA以及蛋白水平均显著降低(P=0.00069)。结论过表达miR-451可下调耐药基因MRP表达,使肿瘤细胞对5-Fu耐药性降低。

miRNA-451和钙结合蛋白39在非小细胞肺癌患者中的表达及临床意义

目的探讨微小RNA(miRNA)-451和钙结合蛋白39(CAB39)在非小细胞肺癌(NSCLC)患者中的表达及临床意义。方法收集180例NSCLC患者的NSCLC组织和对应的癌旁组织,采用实时荧光定量聚合酶链反应检测miRNA-451相对表达量,采用免疫组织化学染色法检测CAB39表达情况。采用多因素Logistic回归模型分析NSCLC患者NSCLC组织中miRNA-451和CAB39表达情况的影响因素。比较不同miRNA-451、CAB39表达情况NSCLC患者的预后。结果NSCLC组织中miRNA-451相对表达量和CAB39阳性表达率均明显低于癌旁组织,差异均有统计学意义(P<0.01)。肿瘤直径>3 cm、有淋巴结转移、临床分期为Ⅲ~Ⅳ的NSCLC患者NSCLC组织中miRNA-451高表达率和CAB39阳性表达率均低于肿瘤直径≤3 cm、无淋巴结转移、临床分期为Ⅰ~Ⅱ期的患者,差异均有统计学意义(P<0.05)。多因素Logistic回归分析结果显示,淋巴结转移情况、临床分期均是NSCLC患者NSCLC组织中miRNA-451和CAB39表达情况的独立影响因素(P<0.05)。miRNA-451低表达患者的中位生存时间短于miRNA-451高表达患者,CAB39阴性表达患者的中位生存时间短于CAB39阳性表达患者,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论NSCLC组织中miRNA-451和CAB39表达水平均明显低于癌旁组织,miRNA-451低表达和CAB39阴性表达可能会促进肿瘤生长、淋巴结转移,有望成为NSCLC患者治疗效果及预后的评估指标。

赖氨大黄酸通过升高miRNA-451抑制肺癌A549细胞迁移

目的研究赖氨大黄酸(rhein lysinate,RHL)对肺癌细胞株(A549)迁移的影响及miRNA-451在其中的作用。方法选取处于对数生长期的A549细胞株,并分为对照组、不同剂量(0、10、20、40、80、160μmol/L)的RHL组。采用MTT法检测各组细胞48 h增殖情况;细胞划痕实验和Transwell实验检测各组细胞48 h迁移情况;Real-time PCR检测各组细胞48 h miRNA-451和基质金属蛋白酶-9(matrix metalloproteinases-9,MMP-9)的转录水平;Western blot检测各组细胞48 h MMP-9蛋白水平变化。结果细胞培养48 h后,RHL处理组A549细胞增殖活性呈现明显剂量依赖性抑制。细胞划痕实验和Transwell实验均发现80μmol/L RHL能够抑制A549细胞迁移。同时80μmol/L以上剂量的RHL能够显著升高miR-451水平,降低MMP-9的转录水平(P<0.05)。Western blot检测结果也证实了80μmol/L以上剂量的RHL能够显著抑制MMP-9蛋白表达水平(P<0.05)。结论 RHL通过诱导miR-451的表达、抑制MMP-9的表达,从而抑制A549细胞迁移。

miRNA-223、miRNA-21及miRNA-27a与冠心病冠脉病变的关系

目的 探讨miRNA-223、miRNA-21及miRNA-27a与冠心病冠脉病变的关系。方法 选取2021年1月至2022年12月商丘市第一人民医院收治的CHD患者86例为观察组,选取70名同期院内健康体检者作为对照组。对比两组血清miRNA-223、miRNA-21、miRNA-27a水平;分析影响CHD冠脉病变的单因素,采用Logistic回归分析影响CHD冠脉病变的单因素、多因素;对比不同CHD冠脉病变类型的血清miRNA-223、miRNA-21、miRNA-27a水平;对比不同CHD冠脉病变支数的血清miRNA-223、miRNA-21、miRNA-27a水平。结果 观察组miRNA-223、miRNA-21、miRNA-27a表达水平比对照组高,差异有统计学意义(P<0.05);Logistic多因素分析显示,患有高血压、糖尿病以及miRNA-223>1.5、miRNA-21>6.0、miRNA-27a>5.5均是影响CHD冠脉病变的独立危险因素(P<0.05);miRNA-223、miRNA-21、miRNA-27a表达水平:急性心肌梗死>不稳定型心绞痛>稳定型心绞痛,差异有统计学意义(P<0.05);miRNA-223、miRNA-21、miRNA-27a表达水平:三支>双支>单支,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 不同冠脉病变CHD患者miRNA-223、miRNA-21、miRNA-27a表达水平不同,提示以上指标对判断CHD患者冠脉病变类型具有一定的临床价值。

miRNA-451在非小细胞肺癌中表达及临床意义

目的分析miRNA-451在非小细胞肺癌(Non-small cell lung cancer,NSCLC)中的表达和对临床预后的影响。方法从2008年11月至2011年在我院外科行肺癌切除手术的NSCLC患者中按纳入标准收集125例NSCLC患者的临床随访资料,提取并检测miRNA-451在肺癌组中的表达,根据miRNA-451的中位数分为低表达组和高表达组两组,采用K-M法和Cox回定性和定量分析miRNA-451与NSCLC患者临床预后的关系。结果 miRNA-451的表达与年龄、性别、吸烟史、组织类型和肿瘤大小不相关(P> 0. 05);与临床分期(P=0. 039)和淋巴结转移(P=0. 035)有关。K-M分析结果显示miRNA-451高表达和低表达生存曲线有明显差异(P=0. 001,图1);多因素Cox回归分析显示,淋巴结转移和miRNA-451低表达仍是NSCLC患者不良预后的独立预测因子(HR=1. 81,95%CI:1. 46-3. 44,P=0. 023; HR=2. 39,95%CI:1. 25-4. 55,P=0. 008)。结论 miRNA-451低表达是NSCLC病人不良预后的独立预测因子,可能是其治疗的新的靶点。

miRNA-451在膀胱癌细胞中的表达及对其生物学功能的影响

目的:检测微小RNA(microRNA,miRNA)在膀胱癌细胞中的表达及探讨其对膀胱癌细胞迁移、侵袭、黏附及增殖能力的影响。方法:采用实时荧光定量PCR(quantitative Real-time PCR,qPCR)检测miR-451在不同转移潜能膀胱癌细胞株T24、5637、J82中的表达;使用Lipo-2000脂质体将miR-451拟似物(miR-451 mimics)转染入5637细胞,qPCR验证其转染效率,采用划痕愈伤实验、Transwell实验、细胞黏附及MTT增殖实验分别检测细胞二维迁移、侵袭、黏附及增殖能力的变化。结果:miR-451在T24、5637及J82中的相对表达量分别为0.06±0.001、0.13±0.024、1(将J82细胞中其表达量标准化为1),差异显著,具有统计学意义(P<0.01);miR-451过表达后,5637细胞的迁移、侵袭、黏附能力及增殖率显著降低,具有统计学意义(P<0.05)。结论:miR-451在不同膀胱癌细胞中差异表达,其表达异常可影响癌细胞生物学功能,这为膀胱癌靶向分子治疗提供了新的切入点。

抑制miRNA-376c-3p对肾透明细胞癌生长的影响

目的探究miRNA-376c-3对肾透明细胞癌(ccRCC)中肿瘤细胞生长的影响。方法以实时荧光定量PCR(RT-PCR)检测人ccRCC细胞系786-O、Caki-1、SN12-PM6、ACHN及正常人近段肾小管上皮细胞系HKC中miRNA-376c-3p的表达。体外培养786-O细胞,随机分为对照组、miR-376c-3p inhibitor组(转染miR-376c-3p inhibitor)、miR-376c-3p mimics组(转染miR-376c-3p mimics)、阴性对照组(转染miR-376c-3p阴性对照),分组转染后以RT-PCR检测4组细胞miRNA-376c-3p表达;以Ki67免疫荧光染色、集落生成实验检测4组786-O细胞增殖;以TUNEL染色检测4组786-O细胞凋亡;以免疫荧光染色检测4组786-O细胞凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2表达并比较其Bax/Bcl-2。于右腋窝皮下接种上述4组786-O细胞建立其裸鼠移植瘤模型,3周后测定其肿瘤体积与质量;以Ki67免疫荧光染色、TUNEL染色分别检测4组裸鼠肿瘤细胞增殖与凋亡。结果与HKC细胞比较,ccRCC细胞系786-O、Caki-1、SN12-PM6、ACHN中miR-376c-3p表达降低(P<0.05)。与对照组比较,miR-376c-3p inhibitor组细胞增殖率与集落形成率、肿瘤体积与质量、裸鼠肿瘤组织Ki67阳性比升高(P<0.05),细胞miR-376c-3p相对表达、Bax/Bcl-2与凋亡率、裸鼠肿瘤组织TUNEL阳性比降低(P<0.05);miR-376c-3p mimics组细胞增殖率与集落形成率、肿瘤体积与质量、裸鼠肿瘤组织Ki67阳性比降低(P<0.05),细胞miR-376c-3p相对表达、Bax/Bcl-2与凋亡率、裸鼠肿瘤组织TUNEL阳性比升高(P<0.05);阴性对照组各指标无明显变化(P>0.05)。结论抑制miRNA-376c-3p可削弱ccRCC细胞增殖及集落生成活性,促进其凋亡,并在裸鼠体内抑制其移植瘤生长。

超声及血清CK-19、Galectin-3、miRNA-363联合诊断PTMC颈部淋巴结转移的临床价值

目的 研究超声及血清细胞角蛋白19(CK-19)、半乳糖凝集素3(Galectin-3)及微小核糖核酸-363(miRNA-363)联合诊断甲状腺微小乳头状癌(PTMC)颈部淋巴结转移(CLNM)的临床价值。方法 回顾性选取2021年7月至2023年6月在天津市环湖医院诊断的PTMC患者92例纳入研究组,选择同期本院收治的结节性微小甲状腺肿患者92例纳入对照组。观察两组病灶情况及超声特点;比较两组血清CK-19、Galectin-3、miRNA-363水平,研究组是否发生CLNM患者病灶超声特点及血清CK-19、Galectin-3、miRNA-363水平。分析PTMC~CLNM超声特点与血清CK-19、Galectin-3、miRNA-363水平的相关性。结果 研究组多枚病灶、病灶>0.5 mm、病灶纵横比≥1、病灶形态不规则、病灶边缘模糊、病灶微钙化、病灶低回声、淋巴结肿大占比分别为70.65%、71.74%、82.61%、61.96%、72.83%、80.43%、84.78%、70.65%,均大于对照组(31.52%、52.17%、27.17%、25.00%、19.57%、15.22%、66.30%、22.83%),差异均有统计学意义(P<0.05)。研究组血清CK-19、Galectin-3水平分别为(30.45±3.31)、(4.68±0.48)μg/L,均高于对照组[(7.05±0.73)、(1.72±0.19)μg/L],血清miRNA-363水平为(2.89±0.30) fmol/L,低于对照组[(4.30±0.46) fmol/L],差异均有统计学意义(P<0.05)。研究组发生CLNM患者多枚病灶、病灶形态不规则、病灶边缘模糊、病灶微钙化、淋巴结肿大占比分别为90.91%、86.36%、95.45%、100.00%、90.91%,均大于未发生CLNM患者(64.29%、54.29%、0、25.00%、64.29%),差异均有统计学意义(P<0.05)。研究组发生CLNM患者血清CK-19、Galectin-3水平(41.20±4.42)、(5.94±0.62)μg/L,均高于未发生CLNM患者[(24.36±2.71)、(3.25±0.34)μg/L],血清miRNA-363水平为(2.14±0.23) fmol/L,低于未发生CLNM患者[(3.46±0.36) fmol/L],差异均有统计学意义(P<0.05)。经Pearson相关分析,CLNM患者多枚病灶、病灶形态不规则、病灶边缘模糊、淋巴结肿大及血清CK-19、Galectin-3、miRNA-363水平均与CLNM呈正相关(P<0.05)。结论 超声及血清CK-19、Galectin-3、miRNA-363联合诊断PTMC~CLNM具有较高的临床价值。

miRNA-451在宫颈癌中的表达及对宫颈癌Hela细胞增殖与凋亡影响的作用机制研究

目的探讨miRNA-451在宫颈癌中的表达及对宫颈癌Hela细胞增殖与凋亡影响的作用机制。方法取60例宫颈癌患者的宫颈癌组织和相应的癌旁正常组织,定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)检测miRNA-451的相对表达量,分析其与宫颈癌患者临床特征的关系。将宫颈癌Hela细胞随机分为miRNA-451-mimics组、miRNA-451-mimics-NC组,分别转染miRNA-451模拟物(miRNA-451-mimics)、miRNA-451-mimics阴性对照,对照组未进行转染。采用CCK-8法检测3组宫颈癌Hela细胞的增殖能力,流式细胞仪检测细胞周期和凋亡情况,蛋白质印迹(Westernblot)法检测磷酸化蛋白激酶B(p-AKT)、B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)蛋白的相对表达量。结果癌旁正常组织中miRNA-451的相对表达量明显高于宫颈癌组织(P﹤0.01)。不同国际妇产科联盟(FIGO)分期、淋巴结转移情况、分化程度宫颈癌患者宫颈癌组织中miRNA-451相对表达量比较,差异均有统计学意义(P﹤0.05)。随着转染时间的增长,宫颈癌Hela细胞中miRNA-451的相对表达量均明显升高(P﹤0.05),细胞存活率逐渐降低,miRNA-451过表达能够将宫颈癌Hela细胞的周期阻滞于G0/G1期并明显促进细胞凋亡。miRNA-451-mimics组宫颈癌Hela细胞p-AKT、Bcl-2蛋白的相对表达量均明显低于对照组(P﹤0.01)。结论miRNA-451在宫颈癌组织中低表达,且与宫颈癌患者FIGO分期、淋巴结转移、分化程度有关,miRNA-451过表达能通过阻断AKT/Bcl-2信号通路来抑制宫颈癌细胞的增殖并诱导其凋亡。

微小RNA-451在小细胞性贫血及慢性感染贫血儿童血清中的表达及临床意义

目的 分析微小RNA-451(miR-451)在小细胞性贫血及慢性感染贫血儿童血清中的表达情况,探讨miR-451与红细胞相关参数的相关性及其对儿童贫血的诊断价值。方法 采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)分别检测小细胞性贫血组(n=80)、慢性感染贫血组(n=80)、健康对照组(n=80)儿童血清miR-451表达水平;采用Pearson相关分析法探讨血清miR-451与红细胞相关参数[红细胞分布宽度(RDW)、红细胞(RBC)、平均红细胞血红蛋白浓度(MCHC)、血红蛋白(Hb)、平均红细胞血红蛋白含量(MCH)、平均红细胞体积(MCV)]的相关性;绘制受试者工作特征(ROC)曲线,分析miR-451对小细胞性贫血、慢性感染贫血、贫血严重程度的诊断价值;采用多因素Logistic回归分析探讨儿童发生小细胞性贫血、慢性感染贫血的影响因素。结果 小细胞性贫血组、慢性感染贫血组儿童血清miR-451表达水平低于健康对照组,差异有统计学意义(P<0.05);miR-451与RDW呈负相关(r=-0.388,P<0.05),与Hb、RBC、MCHC、MCH、MCV分别呈正相关(r=0.402、0.393、0.391、0.360、0.323,P<0.05)。ROC曲线分析结果显示,血清miR-451诊断小细胞性贫血、慢性感染贫血的曲线下面积分别为0.718、0.735,诊断价值高于红细胞相关参数RDW、Hb、RBC、MCHC、MCH、MCV,差异有统计学意义(P<0.05)。多因素Logistic回归分析结果显示,体质量指数、RDW、Hb、RBC、MCHC、MCH、MCV、miR-451均为儿童发生小细胞性贫血、慢性感染贫血的影响因素(P<0.05)。随着儿童贫血程度的加重,血清miR-451表达水平逐渐降低,差异有统计学意义(P<0.05);ROC曲线分析结果显示,血清miR-451水平对儿童贫血严重程度具有较高的诊断价值。结论 miR-451在小细胞性贫血、慢性感染贫血儿童血清中表达降低,且其表达水平与红细胞相关参数水平存在相关性,血清miR-451对小细胞性贫血、慢性感染贫血和贫血严重程度均具有较高的诊断价值。