5-羟色胺对心肌细胞内游离钙浓度的影响

目的 观察 5 -羟色胺 (5 - HT)对新生大鼠心肌细胞内游离 Ca2 + 浓度的影响 ,并探讨其作用机制 .方法 培养 SD大鼠 (1～ 3d)心肌细胞 ,应用特异性 Ca2 +荧光指示剂 Fluo- 3/AM负载细胞 ,激光共聚焦显微镜检测游离 Ca2 + 浓度 .结果 5 - HT在 10 - 6 ,10 - 5,10 - 4 m ol· L- 1 时均可升高心肌游离Ca2 + 浓度 ,且随剂量增加而加强 ;二氢吡啶类钙通道阻断剂lacidipine可部分拮抗 5 - HT的作用 ;心肌肌浆网内钙释放通道 ryanodine受体调节剂 ryanodine,在 10 - 5mol· L- 1 时也可部分拮抗 5 - HT的作用 ;用 EGTA络合细胞外液中游离Ca2 + ,5 - HT升高心肌游离 Ca2 + 作用明显减弱 ;此外 ,5 - HT二型受体 (5 - HT2 R)阻断剂赛庚定具有显著抑制 5 - HT升高心肌游离 Ca2 + 的作用 .结论 5 - HT具有升高心肌游离 Ca2 + 的作用 ,其机制可能与细胞外 Ca2 +经 5 - HT2

猪内源性逆转录病毒体外感染人胚肾细胞系HEK-293的初步研究

目的 对猪内源性逆转录病毒(PERV)体外感染人胚肾细胞系HEK 293的能力进行检测。方法 建立体外感染人胚肾细胞系HEK -293的方法,用免疫电镜的方法观察PERV粒子,聚合酶链反应(PCR)、逆转录聚合酶链反应(RT- PCR)检测与PERV共培养24h后HEK 293细胞基因组中PERV前病毒基因的整合、表达并对PERV亚型进行鉴定,激光共聚焦显微镜检测PERV -gag蛋白的表达并进行定量分析。结果 电镜下可观察到PERV的圆形病毒粒子;与PERV共培养24h后HEK -293细胞基因组中检测到PERV前病毒DNA,且mRNA也有效表达,PERV亚型为PERV -A,B型;激光共聚焦显微镜观察到PERV -gag蛋白在感染细胞HEK- 293的胞质表达,但表达量下降。结论PERV具有体外感染人胚肾细胞系HEK- 293的能力,病毒蛋白可以有效表达,因此在猪到人的异种器官移植研究中对PERV可能引起的人兽共患病进行安全性评价是极有必要的。