人参皂苷Rg3对人乳腺癌MCF-7细胞血管生成拟态的影响

目的探讨人参皂苷Rg3对人乳腺癌MCF-7细胞体外血管生成拟态的抑制作用及其机制。方法取MCF-7对数生长期细胞分为实验组和对照组,实验组加入含有终浓度为10、20、50、100、150及300 mg/L的Rg3完全培养基;对照组加入含DMSO完全培养基。CCK-8法分析Rg3对MCF-7细胞增殖的影响,分析实验组各浓度下的抑制率和Rg3半数抑制浓度(IC50)并确定实验浓度。体外管道形成抑制实验观察Rg3对MCF-7细胞血管生成拟态的影响。实时荧光定量PCR法检测Rg3对细胞血管内皮生长因子-A(VEGF-A)和基质金属蛋白酶(MMP)9m RNA的表达水平的影响。蛋白免疫印迹法检测Rg3对细胞低氧诱导因子(HIF)-1α、VEGF-A和MMP9蛋白表达的影响。双抗夹心酶联免疫法测定Rg3对细胞培养上清液中VEGF-A、MMP9蛋白表达的影响。结果人参皂苷Rg3可以有效抑制MCF-7细胞增殖,其平均IC50为(115.34±8.50)mg/L;选取50、100和150 mg/L的Rg3作为实验浓度。50、100和150 mg/L组形成的管状结构数目分别为(19.0±1.0)、(15.0±1.5)、(10.0±1.7)个/视野,呈逐渐降低趋势;且均较对照组(22.0±1.8)减少(均P<0.05)。对照组、50 mg/L组、100 mg/L组及150 mg/L组细胞中的VEGF-A和MMP9的m RNA和蛋白表达水平、HIF-1α的蛋白表达水平均呈逐渐下降趋势(P<0.05)。对照组、50 mg/L组、100 mg/L组及150 mg/L组细胞培养上清液中的VEGF-A蛋白呈逐渐下降趋势(P<0.05);后3组的MMP9蛋白表达水平均呈逐渐下降趋势(P<0.05),但50 mg/L组与对照组的MMP9蛋白表达水平差异无统计学意义。结论人参皂苷Rg3可以抑制MCF-7细胞体外血管形成拟态的能力,其分子机制可能与抑制MCF-7细胞中HIF-1α、VEGF-A和MMP9的蛋白表达有关。

基于肉瘤基因信号通路探讨槲皮素对乳腺癌MCF-7细胞的作用机制

目的:探讨槲皮素通过RAS/RAF/MEK1信号通路对乳腺癌MCF-7细胞的作用机制。方法:将乳腺癌MCF-7细胞分为空白对照组、低剂量组、中剂量组、高剂量组、极高剂量组,采用CCK-8细胞活力检测法测定不同组别的MCF-7细胞24 h、48 h、72 h的细胞活性;采用流式细胞术检测不同组别MCF-7细胞的凋亡率;采用蛋白质印迹法检测不同组别MEK1、RAS、YAP蛋白的表达;采用免疫荧光染色观察雌激素受体、孕激素受体染色情况。结果:与空白对照组比较,低剂量组、中剂量组、高剂量组及极高剂量组的MCF-7细胞活力均出现下降,呈浓度依赖,不具有时间依赖性,差异有统计学意义(P<0.05);乳腺癌细胞MCF-7的晚期凋亡率明显增加,差异有统计学意义(P<0.05);低剂量组、中剂量组和极高剂量组MCF-7细胞的MEK1、RAS、YAP蛋白的表达出现不同程度下降,差异有统计学意义(P<0.05);低剂量组、中剂量组、高剂量组及极高剂量组的MCF-7细胞中雌激素受体、孕激素受体表达增加,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:槲皮素具有针对乳腺癌MCF-7细胞的抗肿瘤作用,且具有浓度依赖性,其机制可能与对RAS/RAF/MEK1信号通路的抑制有关。

阿西替尼对乳腺癌细胞生物学活性的影响

目的研究阿西替尼对乳腺癌细胞MCF-7增殖、凋亡和迁移的影响。方法 MTT法检测阿西替尼对MCF-7细胞增殖的影响,流式细胞仪检测阿西替尼作用MCF-7细胞48 h后对细胞周期的影响,并进一步用免疫印迹的方法检测周期蛋白Cyclin D和Cyclin E表达量的变化;流式细胞仪检测阿西替尼对MCF-7细胞凋亡的影响,并用免疫印迹的方法检测凋亡相关蛋白Pro-Caspase-8和Pro-Caspase-9表达水平的变化;Transwell小室实验检测阿西替尼对MCF-7细胞迁移的影响,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)的方法检测迁移相关蛋白MMP-2和MMP-9表达的变化。结果阿西替尼抑制MCF-7细胞增殖呈时间和剂量依赖性,将MCF-7细胞抑制在G1期,并且G1期调控蛋白随阿西替尼浓度增加表达量逐渐降低;阿西替尼促进MCF-7细胞的凋亡,并且蛋白前体Pro-Caspase-8和Pro-Caspase-9的表达量随阿西替尼浓度的增加而逐渐减少;阿西替尼抑制MCF-7细胞的迁移,迁移相关蛋白MMP-2和MMP-9的m RNA水平随阿西替尼浓度增加而表达下调。结论阿西替尼通过把MCF-7细胞控制在G1期而抑制细胞的增殖,阿西替尼促进MCF-7细胞的凋亡,并能抑制其转移。

蒲公英和紫花地丁水提物的抗癌活性研究

目的探究蒲公英根提物(DRE)和紫花地丁全草水提物(VE)对人源性乳腺癌细胞株(MCF-7)和人源性肝癌细胞株(HepG2)的增殖抑制率及细胞活性的影响。方法制备不同药物质量浓度梯度的DRE和VE,作用于MCF-7细胞和HepG2细胞,用细胞形态学分析、AO/PI双染法、MTT法以及线粒体膜电位检测法等探究2种抗癌药用植物对2种癌细胞在生长活力、抑制增殖能力及线粒体膜电位变化等方面的影响。结果通过MTT法检测可知,药物作用48 h后,对MCF-7细胞抑制效果较好的为DRE,质量浓度为6.0 mg·mL^-1时抑制效果最佳,细胞致死率达92.53%;对HepG2细胞抑制效果较好的为VE,质量浓度为6.0 mg·mL^-1时抑制效果最佳,细胞致死率达93.46%,且2种细胞的细胞活力均下降,线粒体膜电位也呈下降趋势。结论DRE和VE能够降低MCF-7和HepG2细胞的细胞活力,对癌细胞的增殖有明显的抑制作用,能够诱导癌细胞产生凋亡。

环状RNA含有16A的脱水酶结构域分子-微小RNA-1237-5p-细胞凋亡相关酪氨酸激酶轴调控乳腺癌细胞密歇根癌症基金会7号细胞凋亡

目的观察环状RNA含有16A的脱水酶结构域分子(circRNA ABHD16A)-微小RNA(miRNA,miR)-1237-5p-细胞凋亡相关酪氨酸激酶(AATK)轴对乳腺癌细胞密歇根癌症基金会7号细胞(MCF-7)凋亡的影响.方法运用中国科学引文数据库(CSCD)和Target Scan在线分析分别分析ABHD16A与miR-1237-5p和miR-1237-5p与AATK的相关性.利用Luciferase assay检测circRNA ABHD16A是否靶向miR-1237-5p以及miR-1237-5p是否靶向AATK.在过表达或敲低circRNA ABHD16A的情况下,通过蛋白质印迹法(Western blot)检测AATK和乳腺癌细胞MCF-7凋亡标志蛋白表达;通过噻唑蓝(MTT)实验分析乳腺癌细胞MCF-7的细胞活力;通过磷脂酰丝氨酸外翻分析(Annexin V)染色检测乳腺癌细胞MCF-7的凋亡水平.Student's t检验分析两组单向方差分析.结果circRNA ABHD16A靶向miR-1237-5p;miR-1237-5p靶向AATK3'UTR的320-326和469-475区域.过表达ABHD16A时,AATK的表达量明显上升(t=15.295,P<0.01),细胞凋亡相关蛋白bcl-2拮抗剂(bak),bcl-2相关X凋亡调节因子(bax)和被切割的胱天蛋白酶9(cleaved-Cas9)的表达量明显上升(t=7.403、8.381、21.583,P<0.01),而bcl-2细胞凋亡调节剂(bcl-2)的表达量明显下降(t=6.301,P<0.01),MCF7细胞活力水平下降(t=17.392,P<0.01),凋亡水平上升(t=8.491,P<0.05).敲低ABHD16A时,AATK的表达量明显下降(t=9.290,P<0.01),细胞凋亡相关蛋白bak、bax和cleaved-Cas9的表达量明显下降(t=8.381、5.296、11.492,P<0.01),而bcl-2的表达量明显上升(t=5.609,P<0.01),MCF7细胞活力水平上升(t=5.694,P<0.01),凋亡水平下降(t=13.502,P<0.01).结论circRNA ABHD16A靶向miR-1237-5p后增加AATK的表达量,并促进乳腺癌细胞MCF-7凋亡.

白桦脂醇的选择性雌激素受体调节作用实验研究

目的对白桦脂醇的选择性雌激素受体调节作用进行研究,探讨其植物雌激素活性。方法将40只性未成熟雌性小鼠采用随机数字表法分为空白组,雌激素组,白桦脂醇低、高剂量组4组,每组10只,分别给予生理盐水及17β-雌二醇(17β-E2)、白桦脂醇混悬液灌胃7 d。灌胃结束后,通过酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测小鼠血清雌二醇(E2)、黄体生成素(LH)、卵泡刺激素(FSH)水平;剖取子宫称重,计算子宫增重率和子宫指数;通过Western bolt法检测小鼠子宫组织中雌激素受体(ER)α、ERβ和雌激素膜受体G蛋白偶联受体30(GPR30)蛋白的表达;通过细胞增殖实验观察白桦脂醇对人乳腺癌细胞(MCF-7)的促增殖作用;通过细胞增殖拮抗实验观察ER阻断剂ICI182780、ERα阻断剂MPP、ERβ阻断剂THC、雌激素膜受体GPR30阻断剂G15等4种阻断剂对白桦脂醇促MCF-7细胞增殖作用的影响。结果白桦脂醇能明显升高性未成熟雌性小鼠的子宫增重率、子宫指数,血清E2、FSH水平,以及子宫组织中ERα、GPR30蛋白的表达水平(P<0.05或P<0.01),促进MCF-7细胞增殖(P<0.01),且其促MCF-7细胞增殖作用能被ICI182780、MPP、G15所拮抗(P<0.01)。结论白桦脂醇具有雌激素样活性,此活性由ERα和GPR30介导。