微小RNA-223-3p调控Notch通路对屋尘螨所致过敏性鼻炎小鼠鼻腔炎症反应的影响实验研究

目的:探讨微小RNA(miR)-223-3p对屋尘螨(HDM)所致过敏性鼻炎(AR)小鼠鼻腔炎症反应的影响及相关机制。方法:80只BALB/c小鼠随机分为对照组、HDM致AR组(AR组)、miR-223-3p激动剂组(agomiR-223-3p组)、miR-223-3p抑制剂组(antagomiR-223-3p组)及miR-223-3p激动剂+敲低Notch1组(agomiR-223-3p+sh-Notch1组),每组各16只。利用HDM变应原提取物构建AR小鼠模型,并给予miR-223-3p激动剂(miR-223-3p agomir)、miR-223-3p抑制剂(miR-223-3p antagomir)及敲低Notch1的腺相关病毒(AAV-sh-Notch1)滴鼻治疗。末次激发后,对小鼠进行AR症状评估,并收集血清、鼻腔灌洗液(NALF)和鼻黏膜组织标本。HE染色检测鼻黏膜损伤。Diff-Quik染色检测NALF中嗜酸性粒细胞数量。ELISA检测血清HDM特异性免疫球蛋白E(HDM-sIgE)和NALF中炎症因子水平。RT-qPCR检测鼻黏膜miR-223-3p、炎症因子及Notch通路相关mRNA水平。Western blot检测鼻黏膜Notch1、Jagged1蛋白水平。结果:与对照组比较,AR组小鼠鼻痒、喷嚏、流鼻涕情况严重,鼻黏膜增厚,可见大量炎症浸润;AR症状评分、血清HDM-sIgE水平、鼻黏膜miR-223-3p水平升高;NALF中嗜酸性粒细胞增多,白介素(IL)-4、IL-5、IL-13水平升高,IL-12、干扰素-γ(IFN-γ)水平降低;鼻黏膜IL-4、IL-5、IL-13 mRNA和Notch1、Jagged1 mRNA及蛋白水平升高,IL-12、IFN-γmRNA水平降低(均P<0.05)。agomiR-223-3p组上述炎症反应较AR组增强,并激活Notch通路;antagomiR-223-3p组上述炎症反应较AR组减轻,并阻断Notch通路(均P<0.05)。与agomiR-223-3p组比较,敲低Notch表达可逆转miR-223-3p对AR小鼠鼻腔炎症反应的激活作用。结论:miR-223-3p通过激活Notch通路增强HDM所致AR小鼠鼻腔炎症反应。

微小RNA-223调节胆固醇代谢减轻代谢相关性脂肪性肝炎的作用研究

目的 探讨微小RNA(miR)-223对代谢相关性脂肪性肝炎(MASH)细胞模型中胆固醇(TC)代谢的作用,并进一步探讨miR-223对MASH的影响。方法 采用棕榈酸(PA)刺激LO2细胞构建MASH细胞模型,检测细胞内TC水平;转染miR-223后,检测细胞内TC水平。采用Western Blot检测TC代谢相关基因(HMGCS1、SR-BI和ABCA1)蛋白的相对表达水平;采用HE染色和油红O染色观察肝组织病理变化和脂质沉积情况;采用免疫组化检测F4/80观察巨噬细胞浸润情况。结果 200μM及400μM PA刺激LO2细胞36 h的TC表达水平均高于同一浓度下刺激12 h和24 h,400μM PA刺激LO2细胞36 h的TC表达水平明显高于200μM PA刺激36 h;400μM PA刺激LO2细胞36 h的miR-223表达水平明显高于miR-NC和200μM PA刺激36 h(P<0.05)。Western Blot检测结果显示,400μM PA作用LO2细胞后,SR-BI和HMGCS1基因蛋白的相对表达水平均升高,ABCA1基因蛋白的相对表达水平均降低;转染miR-223后,SR-BI和HMGCS1基因蛋白的相对表达水平均降低,ABCA1基因蛋白的相对表达水平升高(P<0.05)。免疫组化结果显示,miR-223减轻高脂饮食诱导的MASH小鼠模型中的肝脏炎症及脂肪沉积。结论 miR-223通过直接或间接调控TC生物合成、摄取及排出的关键基因HMGCS1、SR-BI和ABCA1调节MASH细胞模型中TC的平衡,并进一步减轻高脂饮食诱导的MASH。

糖尿病肾病患者血清microRNA-21含量及其与氧化应激指标的相关性

目的分析糖尿病肾病(DN)患者血清micro RNA-21(mi R-21)含量及其与氧化应激指标的相关性。方法选择在该院接受治疗的DN患者82例作为观察组,根据病情严重程度分为轻度DN组(47例)、中重度DN组(35例),另取同期体检健康人60例作为对照组。检测各组患者的血清mi R-21含量,超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、晚期蛋白氧化产物(AOPP)等氧化应激指标水平,进一步分析两者之间的相关性。结果 1早期DN组、中晚期DN组患者血清mi R-21含量低于对照组,中晚期DN组患者血清mi R-21含量低于早期DN组;2早期DN组、中晚期DN组患者血清SOD、MDA、AOPP水平高于对照组,中晚期DN组患者血清SOD、MDA、AOPP水平高于早期DN组;3血清mi R-21含量与SOD、MDA、AOPP等氧化应激指标水平呈负相关。结论 DN患者的血清mi R-21含量降低,且与患者的氧化应激指标水平相关,有望成为诊断及指导疾病治疗的有效指标之一。

红景天苷通过micro RNA-370改善2型糖尿病小鼠糖代谢的作用机制

目的观察红景天苷改善2型糖尿病小鼠血糖作用,探讨红景天苷改善2型糖尿病小鼠糖代谢紊乱的分子机制。方法采用高脂饮食联合腹腔注射链脲佐菌素(STZ)建立2型糖尿病小鼠模型,检测血糖相关指标、血清和肝脏micro RNA-370表达,以及肝组织糖异生关键酶(PEPCK/G6Pase)蛋白表达水平,观察红景天苷对2型糖尿病小鼠糖代谢紊乱的改善作用。分离培养小鼠原代肝细胞,采用瞬时转染技术将micro RNA-370沉默或过表达,观察micro RNA-370对糖代谢的影响及红景天苷调节糖代谢的分子机制。结果与模型对照组比较,红景天苷各剂量组小鼠血糖相关指标均明显改善(P<0.05);血清和肝组织micro RNA-370表达水平以及肝组织PEPCK/G6Pase蛋白相对表达水平均不同程度降低,且呈剂量依赖性,中、大剂量组降低较明显(P<0.05),小剂量组有降低趋势,但差异无统计学意义。细胞实验中,与空白对照组比较,红景天苷组和micro RNA抑制剂组PEPCK/G6Pase表达均被抑制(P<0.05),micro RNA-370激动剂组PEPCK/G6Pase表达明显促进(P<0.05),红景天苷与micro RNA-370激动剂联用能逆转micro RNA-370激动剂所致PEPCK/G6Pase蛋白表达增高(P<0.05)。结论红景天苷能明显改善2型糖尿病小鼠糖代谢紊乱,且该作用至少部分通过抑制micro RNA-370实现。

MicroRNA-126和血管内皮生长因子在胚胎停育绒毛组织中的表达及相关性研究

目的通过分析孕早期胚胎停育与正常胚胎绒毛组织中microRNA-126(miR-126)、血管内皮生长因子(VEGF)的表达差异,探讨其在早期胚胎停育中的相关性。方法收集孕早期胚胎停育和正常胚胎绒毛组织各28例作为胚胎停育组和对照组,采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测两组miR-126和VEGF mRNA表达水平的变化。结果 1两组绒毛组织中均有miR-126表达,胚胎停育组绒毛组织中miR-126的表达高于对照组,但差异无统计学意义。2胚胎停育组绒毛组织中VEGF的表达低于对照组,差异有统计学意义。3胚胎停育组绒毛组织中miR-126与VEGF的表达呈负相关;对照组绒毛组织中miR-126与VEGF的表达呈正相关。结论 1胚胎停育绒毛组织中VEGF的表达低于正常胚胎。2VEGF的表达变化与胚胎停育的发生有一定的相关性。

microRNA-133a拮抗苯肾上腺素诱导的小鼠心肌肥大

目的利用心肌细胞肥大体外模型研究mi R-133a抗心肌肥大的作用机制。方法构建mi R-133a腺病毒表达载体,导入293细胞并收获高表达mi R-133a的病毒;取12只出生1~3 d内的小鼠心脏,采用酶消化及梯度离心法获得心肌细胞,分为对照组和模型组,模型组加入苯肾上腺素（PE）诱导;将高表达mi R-133a的腺病毒感染模型组的心肌细胞,观察细胞面积的变化,RTPCR检测Acta1、Actc1、Actb、Myh6、Myh7、BNP基因的表达。结果模型组心肌细胞加入PE培养后,较对照组面积增大3倍以上,Acta1等基因表达显著增高;肥大后模型组的心肌细胞采用mi R-133a病毒感染后较未加入mi R-133a病毒的模型组的心肌细胞的面积缩小,Acta1等基因表达显著降低。结论 mi R-133a是心肌肥大的重要调节因子,有拮抗心肌肥大的作用。

microRNA-155在类风湿关节炎外周血中的表达及临床意义

目的通过研究micro RNA-155(mi R-155)在类风湿关节炎(RA)患者外周血的表达水平,分析mi R-155与疾病临床特征的相关性,探讨其在RA发病及疾病进展中的意义。方法抽取50例初发RA患者及36例健康对照组外周血分离PBMC(外周血单个核细胞),提取和纯化mi RNA,实时定量PCR检测mi R-155的表达,以小分子RNA U6作为内对照,对mi R-155的表达量进行相对定量分析。同时收集RA患者有关的临床参数,统计分析mi R-155的表达水平与RA合并临床参数的相关性。对RA活动组中,随机分为甲氨蝶呤(MTX)单药治疗组,肿瘤坏死因子(TNF)-α抑制剂单药治疗组,两组随访观察12周,收集患者治疗前后外周血。实时荧光定量PCR法检测RA患者治疗前后外周血mi R-155的表达水平变化。结果RA患者中PBMC中mi R-155的表达水平较健康对照组明显升高,(P<0.01);同时RA患者mi R-155的表达与患者活动度有关,与肺间质病变等无明显相关,RA患者TNF-α抑制剂单药治疗组中,mi R-155的表达较治疗前下降,而在甲氨蝶呤治疗组中无明显下降。结论 mi R-155在RA的PBMC中异常高表达,且与RA的活动度相关,提示mi R-155可能可作为RA诊断及RA活动的一个预测指标。mi R-155在RA的发病机制中可能参与了TNF-α的致炎过程。

血清microRNA-375在非小细胞肺癌中的表达水平及其临床意义

目的：探讨micro RNA-375（mi R-375）在非小细胞肺癌（non small-cell lung cancer,NSCLC）患者血清中的表达水平及临床意义。方法：采用实时荧光定量PCR方法检测82例非小细胞肺癌患者和对照组100例健康人血清的mi R-375的表达水平,分析其与临床病理参数之间的关系。结果：NSCLC组血清mi R-375表达水平显著低于对照组,并且其表达与临床分期和淋巴结转移有关（P〈0.05）。血清mi R-375在ROC曲线下面积（area under the ROC curve,AUC）为0.905（95%CI：0.860~0.950）。当血清mi R-375临界值取0.995时,对NSCLC诊断的灵敏度为92.0%,特异度为78.0%。结论：血清mi R-375可能作为一种新型NSCLC诊断的分子标志物和潜在的基因靶向治疗靶点。

microRNA-21通过促进成纤维细胞的增殖和分化调节心肌梗死后的心脏重塑

目的探讨小鼠心肌梗死模型中microRNA-21(miR-21)对心脏成纤维细胞增殖和分化的影响。方法利用左前降支结扎法构建小鼠心肌梗死模型(心肌梗死组),以心电图及病理改变作为建模成功的观察指标。采用荧光定量PCR检测各组心肌组织miR-21的表达。利用miR-21的模拟物(miR-21 mimic)转染小鼠成纤维细胞(miR-21 mimic组),使其在细胞中呈过表达状态,然后标记5-乙炔基-2′脱氧尿嘧啶核苷(EdU),通过荧光显微镜观察成纤维细胞的增殖情况,蛋白质印迹法检测成纤维细胞α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和小鼠Smad同源物7(Smad7)的表达,并与随机对照组及空白对照组比较。结果与假手术组比较,心肌梗死组梗死交界区的miR-21的表达量明显上调[(6.043±0.231)×10-4vs(1.620±0.451)×10-4,P<0.01],miR-21 mimic组成纤维细胞miR-21基因表达较随机对照组和空白对照组显著上调[(4.839±0.705)×10-4vs(1.143±0.064)×10-4vs(1.017±0.201)×10-4,P<0.01],miR-21mimic组成纤维细胞EdU染色阳性率较随机对照组和空白对照组显著增加[(27.892±1.645)%vs(12.553±1.227)%vs(13.946±1.550)%,P<0.01];同时,miR-21 mimic组成纤维细胞Smad7蛋白的表达明显下调,而α-SMA的表达显著上调。结论心肌梗死后,上调的miR-21可以通过调节转化生长因子(TGF)-β信号通路中Smad7的表达促进成纤维细胞的增殖和分化,进而调节心梗后的心脏重塑。

血浆微小RNA-223及叉头框蛋白3a水平与冠心病患者心脏结构及功能的相关性研究

目的探讨血浆微小RNA-223(miR-223)及叉头框蛋白3a(FoxO3a)水平与冠心病患者心脏结构变化的相关性。方法纳入2019年1月至2020年12月在新疆医科大学第一附属医院住院的126例冠心病患者为研究组和111例非冠心病患者为对照组,平均年龄(66.38±12.12)岁比(49.35±9.60)岁。通过酶联免疫分析法,检测所有研究对象血浆miR-223及FoxO3a水平,分析其与超声心动图中左心房(LA)、右心房(RA)、左心室舒张末期容积(EDV)、左心室收缩末期容积(ESV)、室间隔、右心室流出道、右心室(RV)、肺动脉、室壁运动评分、MV-E、MV-A、MV-E/A和射血分数(EF)等指标的关系。结果两组在年龄、合并高血压方面差异具有统计学意义(t=6.954、χ^(2)=12.014,P=0.000、0.001)。研究组miR-223[(0.415±0.065)ng/L比(0.309±0.057)ng/L]、FoxO3a[(0.402±0.058)ng/L比(0.306±0.059)ng/L]水平明显高于对照组,且差异具有统计学意义(P<0.05)。相关分析中,miR-223和FoxO3a水平间呈正相关(r=0.485,P=0.000)。miR-223和FoxO3a水平与冠心病之间,年龄成为控制变量后仍呈相关性(r=0.388,P=0.000;r=0.506,P=0.000)。miR-223水平与心脏超声各指标中与LA、EDV、ESV、RA、室壁运动评分呈正相关(r=0.358、0.338、0.339、0.282、0.274,P=0.001、0.002、0.002、0.012、0.015)。FoxO3a水平与超声心动图各指标中与LA、EDV、ESV、室壁运动评分呈正相关(r=0.302、0.312、0.380、0.373,P=0.007、0.005、0.001、0.001),与FE呈负相关(r=-0.278,P=0.013)。结论血浆miR-223、FoxO3a水平在冠心病患者中明显升高,呈高表达状态,并与冠心病患者发生心脏结构的变化有一定的相关性。

MicroRNA-146a与风湿性疾病

MicroRNAs（miRNAs）是一类短小（20～24nt）的非编码RNA,通过对基因表达的转录后调节参与很多生物学过程。越来越多的研究证明,miRNAs尤其miRNA-146a在免疫和自身免疫中发挥着重要作用。本文将miRNA-146a在风湿性疾病中的生物学功能及研究进展作一综述。

抑制microRNA-21表达降低HCT-116细胞侵袭转移能力的实验研究

目的:探讨抑制人结肠癌细胞HCT-116 micro RNA-21表达降低结肠癌细胞侵袭转移能力作用机制。方法:应用表达反义micro RNA-21的质粒mi RZip21转染HCT-116细胞,检测micro RNA-21的变化,Target Scan和Pic Tar等工具筛选与侵袭转移相关的靶基因,实时定量PCR方法检测转染前后靶基因m RNA的变化,Western blot检测靶基因蛋白表达变化,平皿划痕和Transwell实验观察抑制micro RNA-21与否HCT-116细胞转移和侵袭能力。结果:筛选出4种与侵袭转移相关的micro RNA-21靶基因:TIMP-3,RECK,BMPRⅡ和PCDH17;mi RZip21质粒转染HCT-116后,micro-RNA 21表达水平下降约40%,靶基因TIMP-3和RECK的m RNA及靶蛋白表达上升明显,有统计学意义(P<0.05);平皿划痕和Transwell实验结果表明抑制micro RNA-21后,HCT-116细胞转移侵袭能力明显减弱,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:抑制micro RNA-21的表达能够减弱HCT-116细胞的侵袭和转移能力。

胃癌组织中microRNA-224阳性表达与患者预后相关性分析

目的:探讨micro RNA-224于胃癌组织中的阳性表达与患者临床病理特征及预后的相关性。方法:应用原位杂交技术检测micro RNA-224在50例石蜡固定癌旁非肿瘤胃黏膜组织及112例石蜡胃肿瘤组织切片中的表达情况,分析其与肿瘤患者各病理参数及预后的相关性。原位杂交按照原位杂交试剂盒的说明书进行。结果:micro RNA-224在胃癌组织中阳性表达率49.1%(55/112),癌旁非肿瘤胃黏膜组织中阴性表达。其阳性表达与TNM分期、淋巴结转移、远处转移及浸润深度存在相关性(P<0.05),而与性别、年龄、肿瘤大小、肿瘤的部位、分化程度、Lauren分型无关(P>0.05)。micro RNA-224阴性表达比阳性表达者5年生存率高,差异有统计学意义(P<0.001)。经COX多因素分析显示:micro RNA-224的表达是影响胃癌患者预后的独立因素之一(P<0.05)。结论:micro RNA-224在肿瘤组织中阳性表达与TNM分期、淋巴结转移、远处转移及浸润深度密切相关,是影响胃癌患者预后的独立因素之一。

过氧化物酶体增殖物激活受体γ调控微RNA-223水平改善高脂诱导胰岛素抵抗细胞糖吸收障碍

目的观察过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)调控miRNA-223水平在高脂诱导的胰岛素抵抗中的作用。方法Wistar雄性大鼠通过高脂饲料喂养,建立2型糖尿病动物模型并予以吡格列酮治疗,以qPCR、葡萄糖氧化酶-过氧化物酶法和ELISA法检测吡格列酮治疗前后2型糖尿病大鼠血清miRNA-223、血糖及4种炎症因子(IL-1β、IL-6、IL-8、TNF-α)水平的变化;以软脂酸诱导HepG2细胞胰岛素抵抗模型,上调或抑制PPARγ蛋白或miRNA-223水平后,以细胞葡萄糖吸收实验、蛋白质印迹法和qPCR法检测细胞葡萄糖吸收水平、细胞葡萄糖转运蛋白(葡萄糖转运蛋白1、2、4;胰岛素受体底物1、2)表达及miRNA-223水平的变化。结果与治疗前相比,吡格列酮治疗7 d后大鼠空腹血糖水平下降、血清miRNA-223水平上升、血清炎症因子(IL-1β、IL-6、IL-8、TNF-α)相对表达量下降(P均<0.001)。经软脂酸处理24 h后,软脂酸组HepG2细胞PPARγ蛋白表达和miRNA-223水平均较空白对照组降低,且细胞葡萄糖吸收水平下降(P均<0.05);上调PPARγ蛋白可改善软脂酸导致的细胞葡萄糖吸收水平下降、升高miRNA-223及炎症因子水平(P均<0.05)。抑制PPARγ表达可导致细胞葡萄糖吸收水平降低(P<0.05)、miRNA-223表达水平下降(P<0.05),但对正常状态下炎症因子水平无调节作用;过表达miRNA-223可改善软脂酸诱导的细胞葡萄糖吸收水平下降和炎症因子水平增高(P均<0.05),以及上调葡萄糖转运蛋白1、葡萄糖转运蛋白4、胰岛素受体底物1的表达(P均<0.05);抑制miRNA-223对软脂酸诱导的细胞葡萄糖吸收水平及葡萄糖转运蛋白1、葡萄糖转运蛋白4、胰岛素受体底物1表达的作用与过表达miRNA-223效果相反(P均<0.05)。但过表达或抑制miRNA-223均对PPARγ表达无影响。结论PPARγ通过调节miRNA-223水平改善高脂诱导的胰岛素抵抗细胞葡萄糖吸收。

食管鳞癌微小RNA-223表达临床意义研究

目的通过检测食管鳞状细胞癌(esophageal squamous cell carcinoma,ESCC)患者及健康对照者血清微小RNA-223(microRNA-223,miR-223)的表达来分析其与ESCC诊断、预后之间的相关性。方法以小无编码RNA U6为内参基因,通过miRNAs提取、反转录及实时荧光定量聚合酶链反应等检测50例ESCC患者(病例组)和50名年龄、性别与之相匹配的健康对照者(对照组)血清中miR-223的表达水平,再参照ESCC患者的临床病理特征进行统计学分析。结果病例组血清miR-223表达显著高于对照组(P<0.001)。在不同淋巴结转移情况、不同远处转移情况及不同临床分期的患者中,血清miR-223表达差异均有统计学意义(P<0.01)。结论血清miR-223表达水平与ESCC的发生、转移及临床分期密切相关,提示miR-223可能成为一个有效且无创的诊断及判断ESCC预后的血清生物标志物。

MicroRNA-599对静脉曲张中血管平滑肌细胞去分化的影响及其机制研究

目的研究micro RNA-599(miR-599)在曲张静脉中的表达,探讨miR-599是否通过下调血小板源性生长因子B(PDGF-BB),抑制曲张静脉中血管平滑肌细胞(VSMCs)去分化。方法收集大隐静脉移植术患者中曲张静脉和正常静脉标本,通过实时荧光定量聚合酶链反应(q RT-PCR)检测42例曲张静脉组织及39例正常静脉组织中miR-599、miR-200、miR-145、miR-146b、miR-155的表达;Western blot检测两组标本中SMactin、SM-22、SM-MCH、OPN的表达;在细胞实验中,转染miR-599mimic和miR-NC至离体培养的VSMCs中,Western blot检测VSMCs中SM-actin、SM-22、SM-MCH、OPN、PDGF-BB的表达,噻唑蓝法测细胞增殖、划痕实验观察细胞迁移,利用荧光素酶试验验证PDGF是miR-599的靶基因。结果相比于正常静脉组织,miR-599在曲张静脉中的表达降低(F=73.012,P=0.001)。两组miR-146b、miR-200、miR-30、miR-155的表达量比较,差异无统计学意义。相比于正常静脉组织,曲张静脉组织中SM-actin、SM-22、SM-MCH的表达降低(P<0.05),OPN的表达升高(F=56.414,P=0.009);在细胞实验中,相比于对照组,miR-599组VSMCs中SM-actin、SM-22、SM-MCH的表达升高(P<0.05),OPN的表达降低(F=27.353,P=0.022),细胞增殖减少(F=37.824,P=0.016),迁移减少(F=69.365,P=0.001),PDGF表达量减少(F=55.345,P=0.004)。荧光素酶试验结果显示,miR-599能够降低PDGF-3'-UTR质粒的荧光素活性(F=21.429,P=0.036)。结论在曲张静脉组织中,miR-599低表达。在VSMCs中,miR-599可以通过下调PDGF-BB而抑制VSMCs去分化。

微RNA-223下调心脏特异性新激酶基因表达对心肌细胞肥大的抑制效应

目的探讨微RNA-223(miRNA-223)通过下调心脏特异性新激酶(TNNI3K)基因表达对心肌细胞肥大的调控作用。方法选取原代培养新生大鼠心肌细胞,以内皮素-1(ET-1)人工诱导心肌细胞肥大。应用实时定量PCR测定miRNA-223的表达水平。通过化学修饰RNA模拟物转染实现miRNA-223的过表达,通过重组腺病毒转染实现TNNI3K的过表达。采用抗α-辅肌动蛋白(α-actinin)荧光染色法测量细胞大小,实时定量PCR检测心肌细胞肥大标志性基因的表达,Western印迹法测定TNNI3K和心肌肌钙蛋白I(cTnI)的蛋白表达,荧光素酶检测法判定miRNA-223与TNNI3K的3’端非编码区(3’-UTR)接合。结果 ET-1诱导的肥大心肌细胞的miRNA-223表达量显著低于正常心肌细胞(P<0.01),下调约40%。外源性miRNA-223干预后能显著缩小ET-1诱导的肥大心肌细胞的表面积(P<0.01)。miRNA-223模拟物转染组心肌细胞中经典的肥大标志性基因心房钠尿肽(ANP)、α-actinin、Myh6、Myh7的相对表达水平均显著低于空白心肌细胞组(P值分别<0.01、0.05)。荧光素活性检测实验显示,miRNA-223模拟物与TNNI3K的3’-UTR核心序列重组体共反应组的相对荧光表达显著低于内对照载体组(P<0.01),减少约60%,表明miRNA-223与TNNI3K的3’-UTR核心区可直接接合。miRNA-223组心肌细胞中的TNNI3K蛋白相对表达量显著低于空白心肌细胞组和错义miRNA(scr-miRNA)转染组(P值均<0.01),减少约90%。Western印迹法结果显示,miRNA-223模拟物转染组心肌细胞的磷酸化cTnI蛋白表达量显著低于空白心肌细胞组和scr-miRNA转染组(P值均<0.01),减少约40%;空白心肌细胞组、scr-miRNA转染组和miRNA-223模拟物转染组间cTnI蛋白表达量的差异无统计学意义(P值均>0.05)。结论 miRNA-223通过直接下调TNNI3K基因表达抑制心肌细胞肥大,此调控效应与cTnI的磷酸化受限有关。

稳定表达HBx和MicroRNA-21基因肝卵圆细胞株构建的试验研究

目的研究构建可以稳定表达HBx和MicroRNA-21基因的肝卵圆细胞株的方法。方法采用LE培养基培养大鼠卵圆细胞株(LE/6),以质粒Pc DNA3.1-HBVx中的HBVx序列为模板,PCR法扩增得到目的基因片段A。将HBx目的基因片段和质粒载体p EGFP-Nl进行双酶切,线性化得到重组质粒命名为p EGFP-HBx。重组质粒转化感受态大肠埃希菌DH5a,并进行筛选培养。用脂质体法将质粒转染卵圆细胞,作为p EGFP-HBx组;用脂质体法将质粒转染质粒载体p EGFP-Nl,作为p EGFP-NI质粒组。最后将Pre-MicroRNA-21与HBx-LE/6共培养,培养24 h后用荧光显微镜观察转染细胞的荧光表达情况。结果 p EGFP-HBx中GFP表达量经荧光定量PCR仪器确定为92.28%,且表达程度强;Pre-MicroRNA-21与HBx-LE/6共培养完成后,p EGFP-HBx组内MicroRNA-21的转录水平经仪器测量为1.77±0.24,显著高于p EGFP-NI质粒组内的0.36±0.21,差异有统计学意义(P<0.05)。结论本研究成功地构建了稳定表达HBx和MicroRNA-21基因肝卵圆细胞株,为进一步研究HBx蛋白、mi RNA-21、肝卵圆细胞与肝癌之间的关系提供了实验基础。

微RNA-223在慢性阻塞性肺疾病血清外泌体中的表达

目的探讨微RNA-223(miRNA-223)在慢性阻塞性肺疾病(COPD)血清外泌体中表达情况及临床意义。方法选择2019年3月至2021年6月在济宁市第一人民医院呼吸科治疗的稳定期COPD病人113例作为观察对象(COPD组),根据肺功能将COPD病人分为轻度组40例、中度组31例、重度组25例和极重度组17例,另选取同期在济宁市第一人民医院体检的100例健康体检人员作为对照组。提取各研究对象血清外泌体,并进行鉴定;检测各研究对象血清外泌体miRNA-223水平,血清炎性因子肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)、C-反应蛋白(CRP)水平及肺功能指标第1秒用力呼气容积(FEV1)、FEV1占预计值百分比(FEV1%pred)、FEV1占用力肺活量(FVC)百分比(FEV1/FVC);采用Pearson分析COPD病人血清外泌体miR⁃NA-223与TNF-α、IL-6、CRP、FEV1%pred、FEV1、FEV1/FVC相关性。结果COPD组病人肺功能指标FEV1%pred(62.05±11.38比101.87±12.45)、FEV1[(1.77±0.62)L比(2.83±0.44)L]、FEV1/FVC[(64.01±11.52)%比(86.47±8.08)%]显著低于对照组(P<0.05);电镜结果显示,血清外泌体为圆形或椭圆形囊泡状结构,直径约100 nm;蛋白质印迹法结果显示,对照组与COPD组外泌体均表达特异性蛋白CD63、CD9、TSG101,说明成功提取血清外泌体,可用于后续实验。COPD组血清外泌体miRNA-223水平及血清TNF-α、IL-6、CRP水平显著高于对照组(P<0.05);轻度、中度、重度、极重度组COPD病人血清外泌体miRNA-223表达水平依次升高,组间两两比较差异有统计学意义(P<0.05),重度、极重度COPD病人血清TNF-α、IL-6、CRP水平显著高于轻、中度病人(P<0.05),轻度与中度、重度与极重度COPD病人之间血清TNF-α、IL-6、CRP水平差异无统计学意义(P>0.05);相关性分析显示,COPD病人血清外泌体miRNA-223水平与TNF-α、IL-6、CRP水平呈正相关,与FEV1%pred、FEV1、FEV1/FVC呈负相关(均P<0.05)。结论miRNA-223在COPD病人血清外泌体中表达水平升高,且与病人疾病严重程度有关,可能作为判断COPD病情严重程度的潜在标志物。

microRNA-21、microRNAlet-7a在三阴性乳腺癌与LuminalA型乳腺癌血清中的表达差异

目的:探讨micro RNA-21、micro RNAlet-7a在三阴性乳腺癌与Luminal A型乳腺癌中的差异及与临床参数间相关性,为三阴性乳腺癌的治疗提供分子靶点。方法:收集三阴性、Luminal A型乳腺癌各33例以及健康者血清29例,通过q PCR检测血清中micro RNA-21、let-7a的表达情况。结果:micro RNA-21在三阴组血清中表达高于Luminal A组(P<0.05)及正常组(P<0.05)。Let-7a在三阴组血清中表达低于正常组(P<0.05)。三阴组血清中micro RNA-21高表达与临床分期晚呈正相关(P>0.05)。结论:micro RNA-21在Luminal A型与三阴性乳腺癌中的表达差异可作为三阴性乳腺癌特异性治疗的候选靶点。