灵芝提取物通过miR-143-3p对Aβ_(25~35)诱导的神经细胞损伤的影响

目的 探讨灵芝提取物对β淀粉样蛋白(Aβ)_(25~35)诱导的神经细胞损伤的影响及其可能的作用机制。方法 采用Aβ_(25~35)诱导大鼠肾上腺嗜铬细胞PC12建立阿尔茨海默病(AD)细胞模型,不同浓度的灵芝提取物处理PC12细胞,anti-miR-NC、anti-miR-143-3p分别转染至PC12细胞后进行Aβ_(25~35)处理24 h,miR-NC、miR-143-3p mimics分别转染至PC12细胞后加入10 mg/L灵芝提取物与Aβ_(25~35)处理24 h;采用噻唑蓝(MTT)法、流式细胞术分别检测细胞增殖及凋亡;采用试剂盒检测丙二醛(MDA)的水平和超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)的活性;采用实时荧光定量-聚合酶链反应(RT-qPCR)检测miR-143-3p表达量。结果 Aβ_(25~35)作用条件下,灵芝提取物可明显降低细胞凋亡率、MDA水平、miR-143-3p表达量(P<0.05),明显升高细胞活力和SOD、CAT的活性,且呈剂量依赖性(P<0.05);转染anti-miR-143-3p后Aβ_(25~35)诱导的PC12细胞活力和SOD、CAT活性明显升高,细胞凋亡率及MDA水平明显降低(P<0.05);转染miR-143-3p mimics可明显逆转灵芝提取物对Aβ_(25~35)诱导的PC12细胞增殖、凋亡及氧化应激的作用。结论 灵芝提取物可通过抑制miR-143-3p表达减轻Aβ_(25~35)诱导的PC12细胞损伤。

hsa-circ-002179靶向miR-143-3p调控自噬-凋亡平衡在胃癌5-氟尿嘧啶化疗耐药性中的作用研究

目的探究hsa-circ-002179靶向miR-143-3p调控自噬-凋亡平衡对胃癌的5-氟尿嘧啶(5-Fu)化疗耐药性的影响。方法通过5-Fu处理AGS细胞构建5-Fu耐药细胞模型(AGS/5-Fu),采用CCK8法检测5-Fu对AGS和AGS/5-Fu细胞活性的影响,采用荧光定量PCR(qRT-PCR)检测细胞中hsa-circ-002179和miR-143-3p的表达;通过流式细胞术和Western blot分别检测细胞凋亡水平与自噬相关蛋白LC3、Beclin-1和p62的表达。同时,通过软件预测hsa-circ-002179与miR-143-3p的结合位点,并采用RIP和双荧光素酶实验验证其结合作用。结果与对照组比较,耐药组的细胞活性[(172.33±9.53)%比(106.00±6.16)%,P<0.01]和自噬水平升高、凋亡率(20.5%比43.8%,P<0.01)降低,hsa-circ-002179表达升高[(4.46±0.34)比(1.05±0.66),P<0.01];转染si-002179后,耐药细胞活性降低[(80.00±2.45)%比(102.67±7.13)%,P<0.05],而凋亡水平升高(31.3%比21.8%,P<0.05)。RIP和双荧光素酶报告实验证实hsa-circ-002179与miR-143-3p直接结合,且与对照组比较,耐药细胞中miR-143-3p的表达降低[(0.38±0.05)比(1.04±0.07),P<0.01]。并且,hsa-circ-002179能够调控miR-143-3p的水平。同时,miR-143-3p抑制剂处理能够升高转染si-002179后的耐药细胞自噬水平。自噬抑制剂处理降低了耐药细胞的自噬水平和细胞活性,升高凋亡水平;在此基础上转染OE-002179则升高自噬水平和细胞活性,降低凋亡水平,进一步转染miR-143-3p模拟物可以逆转以上变化。结论hsa-circ-002179靶向miR-143-3p可能可以调控自噬-凋亡平衡,进而影响胃癌细胞的5-Fu化疗耐药性。

外周血miRNA-126与miRNA-143表达对颅内动脉瘤介入术后患者复发的预测价值

目的:探讨外周血微小RNA-126(miRNA-126)、miRNA-143表达水平对颅内动脉瘤介入术后患者复发的预测价值。方法:选取113例行介入栓塞术治疗的颅内动脉瘤患者为研究对象,根据术后不同Raymond分级分为RaymondⅠ级组(n=88)、RaymondⅡ级组(n=13)和RaymondⅢ组(n=12);根据不同预后分为复发组(n=19)和未复发组(n=94)。比较不同分级患者、不同预后患者外周血miRNA-126、miRNA-143表达水平,分析其与Raymond分级的相关性及其对颅内动脉瘤患者介入栓塞术后复发的预测价值。结果:与RaymondⅠ级组相比,RaymondⅡ级组和RaymondⅢ级组患者miRNA-126表达水平均升高(P<0.05),miRNA-143表达水平均降低(P<0.05)。相关性分析显示,miRNA-126水平与Raymond分级正相关(r=0.364,P<0.05),miRNA-143水平与Raymond分级负相关(r=-0.347,P<0.05)。复发组患者外周血miRNA-126表达水平高于未复发组(P<0.05),miRNA-143表达水平低于未复发组(P<0.05)。ROC曲线分析显示,外周血miR-126、miR-143及其联合预测颅内动脉瘤患者介入栓塞术后复发的曲线下面积分别为0.767、0.826、0.968,联合检测预测的价值高于两者单独预测(P<0.05)。结论:外周血miRNA-126、miRNA-143联合检测能提高颅内动脉瘤介入术后复发的预测价值。

microRNA在肌少-骨质疏松症中的作用机制研究进展

microRNA在肌、骨代谢疾病中的作用已成为当前研究热点。本文对microRNA在肌少-骨质疏松症中的作用机制研究进行总结。首先,本文介绍microRNA的生物发生过程和基因调控机制。其次,本文分别介绍相关microRNA亚型在骨骼肌和骨骼重建中的作用。在microRNA对骨骼肌作用机制方面,归纳了5个方面:(1)调节转录因子MyoD的活化和表达;(2)调节其他肌肉特异性转录因子的表达;(3)影响肌肉细胞的增殖和分化;(4)影响肌肉细胞表型;(5)microRNA的协同作用。并从促进成骨和抑制破骨两方面说明microRNA影响骨重塑的作用机制。还对具有肌骨共生的microRNA进行了总结归纳。最后对相关研究中存在的问题与不足进行总结和展望,对肌少-骨质疏松症的防治具有积极意义。

miR-143-3p和miR-509-5p在儿童肺炎支原体肺炎疾病程度及预后评估中的应用价值

目的分析微小核糖核酸-143-3p(miR-143-3p)与微小核糖核酸-509-5p(miR-509-5p)在肺炎支原体肺炎患儿血清中的表达水平,及其与疾病严重程度和预后的关系。方法选取2020年5月至2022年4月邯郸市妇幼保健院收治的肺炎支原体肺炎患儿135例(肺炎支原体肺炎组),根据疾病严重程度分为轻症组84例和重症组51例,另选取同期体检健康儿童130例作为对照组,实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测血清miR-143-3p与miR-509-5p水平;对肺炎支原体肺炎患儿进行肺功能检测,测定呼吸频率(RR)、潮气量(VT)、呼气时间(Te)、达峰时间(TPTEF)、达峰容积(VPTEF),计算TPTEF/Te、VPTEF/VT;采用Pearson法分析肺炎支原体肺炎患儿RR、VT、TPTEF/Te、VPTEF/VT与血清miR-143-3p、miR-509-5p的相关性;受试者工作特征(ROC)曲线分析血清miR-143-3p和miR-509-5p对重症肺炎支原体肺炎以及预后不良的预测价值。结果肺炎支原体肺炎组miR-143-3p水平为(0.25±0.04),miR-509-5p为(0.37±0.04),均低于对照组(P<0.05);与轻症组相比,重症组肺炎支原体肺炎患儿RR升高,VT、TPTEF/Te、VPTEF/VT、血清miR-143-3p及miR-509-5p水平均降低(P<0.05);肺炎支原体肺炎患儿血清miR-143-3p、miR-509-5p与VT、TPTEF/Te、VPTEF/VT均呈正相关(P<0.05);血清miR-143-3p、miR-509-5p预测重症肺炎支原体肺炎的曲线下面积为0.820(灵敏度为82.4%,特异度为83.3%)、0.849(灵敏度为72.5%,特异度为92.9%);血清miR-143-3p、miR-509-5p预测预后不良的曲线下面积为0.735(灵敏度为79.6%,特异度为63.0%)、0.859(灵敏度为81.5%,特异度为87.3%)。结论肺炎支原体肺炎患儿血清miR-143-3p、miR-509-5p水平降低,二者均对疾病严重程度和预后具有判别价值,有望作为临床病情评估以及预后判断的指标。

老年性白内障患者泪液中miR-223和miR-143-3p水平表达与术后干眼症的相关性研究

目的探究老年性白内障患者术后干眼与泪液中miR-223,miR-143-3p水平表达的相关性。方法选取2022年5月~2023年2月于贵港东晖医院眼科行白内障术的92例老年性白内障患者作为研究对象,根据术后7天内有无发生干眼将其分为干眼症组(n=42)和无干眼症组(n=50),另选取同期体检的92例健康者作为健康对照组。采用Pearson法分析泪液miR-223,miR-143-3p表达水平与干眼诊断指标:泪膜破裂时间(break-up time,BUT)、角膜荧光素染色(corneal fluorescein staining,FL)评分和泪液分泌试验(schirmers test,SIt)的相关性;采用多因素Logistic回归分析影响白内障术后干眼发生的相关因素;采用受试者工作特征(receiver operating characteristic,ROC)曲线分析泪液miR-223和miR-143-3p对白内障术后干眼的预测价值。结果无干眼症组患者BUT(12.27±1.69s)及SIt(9.17±1.66mm)高于干眼症组(8.95±1.02s,4.36±0.97mm),FL(0.74±0.11分)则低于干眼症组(2.52±0.37分),差异具有统计学意义(t=11.136,16.546,32.386,均P<0.05)。干眼症组患者泪液miR-223(0.87±0.08)表达水平低于健康对照组(1.02±0.03)和无干眼症组(0.92±0.13),泪液miR-143-3p(1.37±0.32)表达水平高于健康对照组和无干眼症组(1.01±0.02,1.15±0.26),差异具有统计学意义(t=15.772,2.170;10.793,3.638,均P<0.05)。泪液中miR-223表达水平与BUT,SIt呈正相关(r=0.587,0.503,均P<0.001),与FL呈负相关(r=-0.442,P<0.001),miR-143-3p与BUT,SIt呈负相关(r=-0.714,-0.549,均P<0.001),与FL呈正相关(r=0.667,P<0.001)。干眼症组有角结膜疾病史、手术切口长度≥3 mm的患者所占比例高于无干眼症组(χ2=12.583,6.505,均P<0.05),且干眼症组患者泪液miR-223表达水平低于无干眼症组,miR-143-3p表达水平则高于无干眼症组,差异具有统计学意义(t=2.170,3.638,均P<0.05)。角结膜疾病史(OR=1.982)、手术切口长度(OR=2.036)及miR-143-3p(OR=1.653)为白内障患者术后发生干眼的危险因素,miR-223(OR=0.574)则为保护因素(P<0.05);泪液miR-223和miR-143-3p单独检测预测白内障术后干眼发生的曲线下面积(area under the cure,AUC)分别为0.692,0.719,而二者联合检测的AUC为0.880,二者联合检测优于miR-223和miR-143-3p各自单独检测(Z=3.869,3.810,均P<0.001)。结论老年性白内障术后干眼的发生与泪液中miR-223和miR-143-3p表达水平有关。

miR-143-5p和miR-335-5p在宫颈癌组织中的表达及临床意义

目的分析微小核糖核酸-143-5p(miR-143-5p)和miR-335-5p在宫颈癌组织中的表达及其临床意义。方法选择2018年7月—2020年6月康复大学青岛中心医院/青岛市中心医院肿瘤妇科二科手术治疗的宫颈癌患者120例,随访期间失访5例,根据随访结果将患者分为预后良好组78例和预后不良组37例;采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测宫颈癌组织及其癌旁组织中miR-143-5p、miR-335-5p的相对表达量;多因素Logistic回归分析影响宫颈癌患者预后的因素;受试者工作特征(ROC)曲线分析miR-143-5p、miR-335-5p预测宫颈癌患者预后的价值。结果癌组织中miR-143-5p、miR-335-5p水平低于癌旁组织(t/P=22.710/<0.001、22.950/<0.001);FIGO分期为Ⅲ~Ⅳ期、肿瘤中低分化、有淋巴结转移的宫颈癌患者癌组织中miR-143-5p、miR-335-5p水平低于FIGO分期为Ⅰ~Ⅱ期、肿瘤高分化、无淋巴结转移的患者(miR-143-5p:χ^(2)/P=3.041/0.003、3.573/0.001、3.443/0.001;miR-335-5p:χ^(2)/P=5.769/<0.001、2.890/0.005、2.738/0.007);预后不良组癌组织miR-143-5p、miR-335-5p水平低于预后良好组(t/P=3.718/<0.001、3.150/0.002);预后良好组患者FIGO分期Ⅰ~Ⅱ期、无淋巴结转移比例高于预后不良组(χ^(2)/P=18.261/<0.001、9.635/0.002);FIGO分期Ⅲ~Ⅳ期是影响宫颈癌患者预后的危险因素[OR(95%CI)=4.105(1.484~11.353)],而miR-143-5p高、miR-335-5p高是其保护因素[OR(95%CI)=0.196(0.084~0.458)、0.220(0.088~0.549)];癌组织miR-143-5p、miR-335-5p及二者联合预测宫颈癌患者预后的AUC分别为0.743、0.726、0.879,二者联合优于各自单独预测价值(Z/P=2.346/0.019、2.601/0.009)。结论miR-143-5p、miR-335-5p在宫颈癌组织中呈下调表达,二者联合预测宫颈癌患者预后的价值较高。

自身免疫性肝炎患者血清miR431-5-p和miR143-3-p表达与病情严重程度的关系研究

目的 分析自身免疫性肝炎(AIH)患者血清微小RNA(miRNA)miR-431-5p和miR-143-3p表达与患者病情严重程度的关系。方法 选取东莞市人民医院2021年1月至2023年6月收治的118例AIH患者(AIH组),根据不同分期分为活动期(62例)、缓解期(56例),并根据不同病情严重程度分为轻度(36例)、中度(47例)、重度(35例)。另选取同期118例体检健康志愿者作为对照组。采用实时荧光定量聚合酶链反应(q-PCR)检测血清中miR-431-5p和miR-143-3p表达水平;采用Pearson相关性分析血清miR-431-5p、miR-143-3p相对表达水平与临床资料的相关性分析;采用多因素Logistic回归分析影响AIH患者病情严重程度的因素;采用受试者工作特征(ROC)曲线分析血清miR-431-5p、miR-143-3p对AIH患者病情严重程度的诊断价值。结果 AIH组血清miR-431-5p、miR-143-3p相对表达水平低于对照组(P<0.05)。轻度、中度、重度患者血清miR-431-5p、miR-143-3p相对表达水平依次降低(P<0.05)。活动期患者总胆红素(TB)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)高于缓解期患者(P<0.05),血清miR-431-5p、miR-143-3p相对表达水平低于缓解期患者(P<0.05)。经Pearson相关性分析显示,血清miR-431-5p、miR-143-3p与TB、ALT、AST水平呈负相关(P<0.05)。Logistic回归分析结果显示,血清miR-431-5p、miR-143-3p相对表达水平为影响AIH患者病情严重程度的保护因素(P<0.05)。血清miR-431-5p、miR-143-3p联合诊断AIH患者病情严重程度的曲线下面积优于二者单独诊断(P<0.05)。结论 AIH患者血清中miR-431-5p、miR-143-3p均呈低表达,且与病情严重程度密切相关,二者联合检测对AIH患者病情严重程度有一定的诊断价值。

miR-143-3p靶向调控TLR2/NF-κB/NLRP3通路对溃疡性结肠炎细胞焦亡的影响

目的研究miR-143-3p对LPS+ATP诱导HCT-116细胞焦亡的影响。方法双荧光素酶检测miR-143-3p与TLR2基因靶向关系。转染miR-143-3p mimic后建立焦亡模型,流式细胞术检测细胞凋亡,生化法检测Caspase-1活性及LDH含量;ELISA法检测IL-1β、IL-18含量。q-PCR检测NF-κB、TLR2、NLRP3、GSDMD mRNA水平;免疫荧光检测NLRP3、ASC蛋白表达;Western blot检测TLR2、GSDMD、p-NF-κB p65、cleave Caspase-1蛋白表达。结果双荧光素酶检测发现miR-143-3p靶向调控TLR2表达。miR-143-3p mimic组和si TLR2组较模型组细胞中NF-κB、TLR2、NLRP3、GSDMD mRNA表达及TLR2、GSDMD、p-NF-κB p65、cleave Caspase-1、ASC、NLRP3蛋白表达降低;Caspase-1活性及LDH、IL-1β、IL-18含量降低。结论miR-143-3p靶向TLR2基因调控NF-κB/NLRP3/Caspase-1信号通路调控溃疡性结肠炎细胞焦亡。

多囊卵巢综合征患者血清miR-29a、miR-143-3p表达及临床意义

目的分析多囊卵巢综合征(PCOS)患者血清微RNA(miRNA)-29a、miR-143-3p表达与肥胖、糖脂代谢和胰岛素抵抗(IR)的关系。方法选取2019年6月至2022年6月厦门大学附属中山医院(以下简称“我院”)收治的86例PCOS患者为PCOS组,另选取我院同期49名体检健康志愿者为对照组。根据体重指数(BMI)将PCOS患者分为肥胖组(36例)与非肥胖组(50例),根据稳态模型评估(HOMA)-IR分为IR组(61例)与非IR组(25例)。比较各组血清miR-29a、miR-143-3p表达,肥胖指标[BMI、腰臀比(WHR)]、糖脂代谢指标[空腹血糖(FBG)、空腹胰岛素(FINS)、总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)]及HOMA-IR;分析PCOS患者血清miR-29a、miR-143-3p表达与肥胖指标、糖脂代谢指标和HOMA-IR的相关性。结果PCOS组BMI、WHR、FBG、FINS、HOMA-IR、TC、TG、LDL-C、miR-29a、miR-143-3p高于对照组,HDL-C低于对照组(P<0.05)。肥胖组血清miR-29a、miR-143-3p表达高于非肥胖组(P<0.05)。IR组血清miR-29a、miR-143-3p表达高于非IR组(P<0.05)。PCOS患者血清miR-29a、miR-143-3p表达与BMI、WHR、FBG、FINS、HOMA-IR、TC、TG、LDL-C呈正相关(r/rs>0,P<0.01),与HDL-C呈负相关(r<0,P<0.01)。结论PCOS患者血清miR-29a、miR-143-3p高表达,与肥胖、糖脂代谢和IR密切相关。

miR-143-3p通过靶向integrinβ1抑制肝癌进展

目的探讨肝癌中miR-143-3p的表达及其对肝癌细胞恶性生物学行为的影响,并分析潜在的机制。方法收集肝癌组织,用RT-qPCR和Western blot法分别检测miR-143-3p和integrinβ1的表达。体外培养肝癌细胞,并用miR-143-3p mimics转染后,用XTT和EDU法检测过表达miR-143-3p对细胞增殖活力的影响,用Transwell法检测过表达miR-143-3p对细胞迁移与侵袭的影响,Western blot法检测过表达miR-143-3p对integrinβ1表达的影响。用荧光素酶活性法检测miR-143-3p与integrinβ1的靶向关系。用XTT、EdU和Transwell法检测过表达integrinβ1对已转染miR-143-3p mimics的肝癌细胞增殖、迁移与侵袭的影响。结果与癌旁正常组织比较,肝癌组织中miR-143-3p表达降低,integrinβ1表达升高,且二者均随疾病分期进展进一步降低或增高。过表达miR-143-3p能抑制肝癌细胞增殖、迁移和侵袭,并能下调integrinβ1表达。过表达integrinβ1能逆转miR-143-3p对肝癌细胞的抑制作用。integrinβ1为miR-143-3p的靶点。结论miR-143-3p在肝癌中表达下调,而上调miR-143-3p能通过靶向integrinβ1抑制肝癌细胞增殖、迁移与侵袭。

microRNA-21和microRNA-143在结直肠癌中的表达及临床意义

目的探讨结直肠癌中microRNA-21和microRNA-143的表达及其与临床病理特征的关系。方法采用Real-timePCR法检测microRNA-21和microRNA-143在结直肠癌中的表达,分析microRNA-21和microRNA-143的表达与结直肠癌临床分期、分级的关系。结果①microRNA-21在结直肠癌较癌旁正常结直肠黏膜的表达明显增高(P<0.05),其表达与浸润深度、淋巴结转移、远处器官转移、Dukes分期相关,与性别、年龄及肿瘤部位、肿瘤大小、分化程度不相关。②microRNA-143在结直肠癌较癌旁正常结直肠黏膜的表达明显降低(P<0.05),其表达量与分化程度相关,与患者年龄、性别和肿瘤部位、肿瘤大小、淋巴结转移、远处器官转移、Dukes分期等差异无统计学意义。结论①microRNA-21在结直肠癌中高表达、与肿瘤的浸润、淋巴结转移、远处器官转移有关,提示microRNA-21可能作为致癌基因,与肿瘤的浸润与转移有关。②microRNA-143在结直肠癌中低表达,与除分化程度以外的临床病理参数无关,提示microRNA-143可能发挥抑癌基因的作用。

MicroRNA-143在肥胖及胰岛素抵抗中的研究进展

微小RNA(microRNA,miRNA)是一类由20～25个核苷酸组成的内源性非编码单链小分子RNA,能在转录后水平调控基因的表达,研究证实miRNA在人体的一系列生物学过程中发挥着重要作用。近期研究发现,miRNA与肥胖、糖尿病等代谢性疾病密切相关。其中,miRNA-143在肥胖和胰岛素抵抗(insulin resistance,IR)状态下异常表达,推测其可能参与了肥胖、糖尿病等疾病的发生发展。文中就此领域的研究进展作一综述。

MicroRNA-143通过抑制EMT机制延缓膀胱癌演进

目的:研究MicroRNA-143在膀胱癌中通过抑制EMT机制,降低肿瘤浸润、转移的风险,从而延缓膀胱癌演进。材料和方法:分别测定不同分期分级的膀胱癌病例标本及膀胱癌细胞株中MicroRNA-143、c-myc及E-Cadherin的表达,分析它们之间统计学意义;转染MicroRNA-143及c-myc的siRNA至浸润性膀胱癌细胞株中,测定E-Cadherin表达,通过侵袭及迁移等生物学行为测定EMT机制。结果:不论病例标本还是细胞株,恶性程度高的膀胱癌中MicroRNA-143、E-Cadherin表达均低于浅表性膀胱癌,而c-myc则反之;转染MicroRNA-143及c-myc的siRNA至浸润性膀胱癌细胞株中后,E-Cadherin表达增高,细胞株的侵袭及迁移能力降低,EMT受抑制。结论:MicroRNA-143通过下调其靶基因c-myc,致使E-Cadherin表达增加,抑制EMT机制,延缓肿瘤演进。

microRNA-143在非小细胞肺癌中的表达及临床病理意义

目的:检测肺癌组织及其癌旁组织和正常肺组织中microRNA-143的表达差异,并探讨其可能存在的临床意义。方法:采用Real-time PCR检测来比较人的肺癌组织与相应癌旁组织及正常肺组织中microRNA-143的表达差异,比较microRNA-143基因的表达与患者病理参数的关系。结果:microRNA-143在肺癌组织中的表达低于对应的癌旁组织和正常肺组织(P<0.05),microRNA-143的表达程度与患者的性别、年龄、肺癌的病理分型及有无淋巴结转移无关(P>0.05)。结论:microRNA-143在肺癌组织中的表达下调,提示microRNA-143基因表达下调可能在肺癌的发生发展中起作用。

SVA及α-干扰素对PK-15细胞microRNA转录谱影响的分析

为探究猪塞内卡病毒A(SVA)感染、干扰素(IFN-α)处理对猪肾细胞(PK-15)微RNA(microRNA,miRNA)转录谱的影响,本研究分别构建SVA感染的PK-15(PK-15/SVA)、IFN-α处理的PK-15(PK-15/IFN),SVA感染再经IFN-α处理的PK-15细胞(PK-15/SVA/IFN),通过荧光定量PCR(qPCR)分别检测各组细胞中SVA VP1及IFN-αmRNA的转录水平。结果显示,与PK-15相比,PK-15/SVA及PK-15/SVA/IFN细胞中SVA VP1基因的转录水平极显著升高(P<0.001),PK-15/SVA/IFN中IFN-α的转录水平显著或极显著升高(P<0.05、P<0.01)。通过转录组测序技术(RNA-Seq)分析各组细胞miRNA的转录谱,采用Spss软件统计各组细胞中转录差异miRNA的数量;利用基于负二项分布的DESeq2筛选各组细胞中转录显著差异miRNA;采用miRanda、PITA和RNAhybrid 3个软件预测各组细胞转录显著差异miRNA的靶基因,通过miREvo和mirdeep2软件预测各组细胞中的新miRNA并通过与猪miRNA序列比对得到已知miRNA;分别采用GO功能和KEGG富集分析各组细胞转录显著差异miRNA涉及的生物学功能及信号通路。统计分析结果显示,与PK-15相比,PK-15/IFN、PK-15/SVA和PK-15/SVA/IFN中均存在转录显著差异miRNA,且在SVA感染后细胞中转录的miRNA数量增多,IFN-α刺激则会减少细胞中转录的miRNA数量,SVA感染后再经IFN-α处理则转录的miRNA数量又有所降低。筛选结果显示,与PK-15相比,PK-15/SVA中有167种转录显著差异miRNA,其中94种转录显著上调,73种转录显著下调;与PK-15相比,PK-15/IFN中有98种转录显著差异miRNA,其中55种转录显著上调,43种转录显著下调。预测结果显示,共有290种转录显著差异miRNA有对应靶基因,且共预测到292种新miRNA和345种已知miRNA。选取6种转录显著差异miRNA采用Graphpad prism6.0进行miRNA-mRNA的互作网络展示。结果显示,miR-221-5p的靶基因显著多于其他miRNA,且其靶基因主要与癌症、病毒感染的治疗及宿主的免疫反应有关。GO功能结果显示,在经IFN-α处理或SVA感染后,转录显著差异miRNA的靶基因主要富集于细胞组分和生物过程等功能。KEGG分析结果显示,与PK-15相比,PK-15/SVA和PK-15/IFN细胞中转录显著差异miRNA的靶基因主要富集于Rap1和NF-κB信号通路;与PK-15/IFN相比,PK-15/SVA/IFN细胞中转录显著差异miRNA的靶基因主要富集于PI3K-Akt、NF-κB和肿瘤坏死因子(TNF)等抗病毒免疫相关信号通路;与PK-15/SVA相比,PK-15/SVA/IFN细胞中转录显著差异miRNA的靶基因主要富集于Rap1、NF-κB、TNF和MAPK信号通路。16种转录显著差异miRNA的qPCR结果与RNA-Seq结果一致。综上所述,本研究首次证实IFN-α处理、SVA感染均显著影响PK-15细胞miRNA转录谱,前者促进miRNA的转录,后者则抑制miRNA的转录。其中转录显著差异miRNA的靶基因与宿主抗病毒及肿瘤免疫均等信号通路密切相关,该结果为阐明SVA感染宿主细胞后非编码RNA转录谱变化的分子机制研究奠定基础。

microRNA-143对小鼠失神经肌肉萎缩中肌纤维的影响

为研究microRNA-143(miR-143)对小鼠失神经肌肉萎缩中肌纤维的影响,通过对小鼠进行坐骨神经切断术,构建小鼠腓肠肌失神经萎缩模型,并注射miR-143模拟物或miR-143抑制剂,采用实时定量PCR检测miR-143的表达量,比较肌肉湿重和肌纤维直径,研究miR-143对小鼠失神经腓肠肌的调控作用。结果显示:注射miR-143模拟物的小鼠,其肌纤维直径明显低于对照组,而注射miR-143抑制剂的小鼠,其失神经腓肠肌组织肌纤维的直径明显高于对照组。结果说明,miR-143对小鼠失神经腓肠肌肌肉萎缩的修复起着一定调节作用。

自发性脑出血患者血清miR-143和HMGA2表达水平与预后的预测价值研究

目的分析自发性脑出血(spontaneous intracerebral hemorrhage,sICH)患者血清微小核糖核酸(microRNA,miR)-143,高迁移率族蛋白A2(high mobility group protein A2,HMGA2)的水平及其与预后的关系。方法选取2020年8月~2022年6月首都医科大学附属北京友谊医院平谷医院收治的129例sICH患者作为sICH组,根据sICH患者脑出血体积分为小血肿组50例(n=50,<10 ml)、中血肿组(n=45,10~30 ml)和大血肿组(n=34,>30 ml);根据sICH患者住院30天内是否死亡,将患者分为死亡组(n=40,预后不良)和存活组(n=89,预后良好),另选取同期来医院体检的131例健康者作为对照组。收集受试者临床资料,分别采用荧光定量PCR法和酶联免疫吸附法检测sICH患者入院24 h内、健康者体检时血清miR-143和HMGA2水平;分析sICH患者血清miR-143和HMGA2水平与美国国立卫生研究院卒中量表(NIHSS)、格拉斯哥昏迷量表(GCS)、Rankin量表(mRS)评分间的相关性,miR-143和HMGA2对sICH患者预后不良的预测价值以及影响sICH患者预后不良的危险因素。结果与对照组比较,sICH组血清miR-143水平(0.35±0.10 vs 1.03±0.07)降低,HMGA2水平(266.97±79.38mg/ml vs 153.13±40.24mg/ml)升高,差异具有统计学意义(t=63.599,14.618,均P<0.001)。小血肿组、中血肿组和大血肿组sICH患者血清miR-143水平(0.38±0.11,0.34±0.10,0.27±0.09)依次降低,HMGA2水平(212.01±78.72mg/ml,251.62±79.31mg/ml,368.11±80.44mg/ml)依次升高,差异具有统计学意义(F=11.895,40.424,均P<0.001)。与存活组比较,死亡组患者血清miR-143水平(0.30±0.06 vs 0.37±0.12)降低,HMGA2水平(316.81±80.03mg/ml vs 244.57±79.09mg/ml)升高,差异具有统计学意义(t=3.493,4.781,均P<0.05)。sICH患者血清miR-143水平与NIHSS,mRS评分呈负相关(r=-0.423,-0.498,均P<0.001),与GCS评分呈正相关(r=0.546,P<0.001)。HMGA2水平与NIHSS,mRS评分呈正相关(r=0.875,0.863,均P<0.001),与GCS评分呈负相关(r=-0.659,P<0.001)。血清miR-143,HMGA2及二者联合预测sICH患者预后不良的曲线下面积分别为0.733,0.811,0.856,NIHSS评分高[OR(95%CI)=1.968(1.108~3.495)]、GCS评分低[OR(95%CI)=1.923(1.043~3.545)]、mRS评分高[OR(95%CI)=2.130(1.204~3.768)]、血清miR-143水平低[OR(95%CI)=2.013(1.120~3.617)]和HMGA2水平高[OR(95%CI)=2.330(1.325~4.097)]是sICH患者预后不良的危险因素(均P<0.05)。结论sICH患者血清miR-143和HMGA2异常表达与患者出血体积及预后有关,可作为sICH患者病情评估和预后评估的辅助指标。

MicroRNA-143对白血病细胞系U-937细胞增殖及凋亡的影响

目的:研究microRNA-143(miR-143)在急性髓系白血病(AML)患者中的表达,以及过表达miR-143对AML细胞系U-937细胞增殖和凋亡的影响,验证miR-143和长链非编码RNA MALAT-1之间的靶向关系,探讨miR-143在AML发病过程中可能的作用机制。方法:采用RT-qPCR法检测AML患者骨髓中miR-143的表达。在U-937细胞系中过表达miR-143,采用CCK-8法、克隆形成实验、流式细胞术检测细胞的增殖,通过Hoechst 33258荧光染色、流式细胞术检测细胞的凋亡情况。同时,通过生物信息学,RT-qPCR、双荧光素酶报告基因实验预测及验证miR-143和MALAT-1之间的靶向关系。结果:miR-143在AML患者中的表达量较正常人显著降低。miR-143过表达可抑制U-937细胞的增殖,同时促进细胞凋亡。miR-143结合位点位于MALAT-1 RNA序列上,在miR-143过表达的U-937细胞中MALAT-1的表达下调;沉默miR-143后,MALAT-1表达量升高;然而,沉默MALAT-1后,miR-143的表达未见显著改变。结论:MiR-143在AML患者中低表达。过表达miR-143抑制U-937细胞增殖,促进细胞凋亡。其作用机制可能与靶向调控MALAT-1的表达有关。

MicroRNA-143与消化系肿瘤的研究进展

近来研究发现microRNA具有癌基因或抑癌基因样作用,是肿瘤发生、发展过程中的重要分子,其中miR-143在消化系肿瘤中表达下调,通过其对靶基因的调控,可抑制肿瘤细胞的增殖、浸润及转移.本文就近年来miR-143在消化系肿瘤中的作用的研究进展作一综述.