MicroRNA-195/497对香烟烟雾提取物诱导的人支气管上皮细胞中TGF-β表达的影响

目的探讨microRNA-195/497(miR-195/497)在香烟烟雾提取物(CSE)诱导的人支气管上皮细胞中影响转化生长因子-β(TGF-β)表达的作用机制。方法用3%CSE诱导BEAS-2B细胞模拟慢性阻塞性肺疾病(COPD)的发病机制,实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测miR-195、miR-497、SMAD7及TGF-β基因表达。双荧光素酶报告实验验证miR-195、miR-497与SMAD7的靶向关系,将miR-195mimic和miR-497 mimic转染至3%CSE处理的细胞中,qRT-PCR检测SMAD7的表达。将miR-195 mimic、miR-497 mimic和si-SMAD7转染至3%CSE处理的细胞中,qRT-PCR检测miR-195、miR-497、SMAD7、TGF-β的基因表达,Western blotting检测SMAD7、TGF-β的蛋白表达。结果3%CSE组miR-195、miR-497 mRNA相对表达量低于正常细胞组(P<0.05),SMAD7、TGF-βmRNA相对表达量高于正常细胞组(P<0.05)。miR-195 mimic组Wt-SMAD7 mRNA相对表达量低于mimic NC组(P<0.05)。miR-195 mimic组与mimic NC组Wt-SMAD7 mRNA相对表达量比较,差异无统计学意义(P>0.05)。miR-497 mimic组WtSMAD7 mRNA相对表达量低于mimic NC组(P<0.05)。miR-497 mimic组与mimic NC组Mut-SMAD7mRNA相对表达量比较,差异无统计学意义(P>0.05)。miR-195 mimic组SMAD7 mRNA相对表达量低于mimic NC组(P<0.05)。miR-497 mimic组SMAD7 mRNA相对表达量低于mimic NC组(P<0.05)。3%CSE组细胞miR-195和miR-497相对表达量较Control组下降(P<0.05),SMAD7及TGF-β蛋白相对表达量升高(P<0.05);miR-195 mimic+3%CSE组细胞miR-195相对表达量较3%CSE组升高(P<0.05),SMAD7、TGF-β下降(P<0.05),而miR-497相对表达量无明显差异(P>0.05);miR-497 mimic+3%CSE组细胞miR-497相对表达量较3%CSE组升高(P<0.05),SMAD7、TGF-β下降(P<0.05),而miR-195相对表达量无明显差异(P>0.05);si-SMAD7+3%CSE组SMAD7、TGF-β蛋白相对表达量较3%CSE组下降(P<0.05),而miR-195、miR-497无明显差异(P>0.05)。3%CSE组SMAD7、TGF-β蛋白相对表达量较Control组升高(P<0.05),miR-195 mimic+3%CSE组、miR-497 mimic+3%CSE组、si-SMAD7+3%CSE组较3%CSE组下降(P<0.05)。结论miR-195/497可通过调控SMAD7的表达影响CSE诱导的人支气管上皮细胞中TGF-β表达。

LncRNA CASC9靶向调节miR-195-5p/VEGFA轴对口腔鳞状细胞癌细胞增殖、凋亡和迁移的影响

目的探讨长链非编码RNA癌易感性候选基因(LncRNA CASC)9对口腔鳞状细胞癌(OSCC)细胞增殖、凋亡和迁移的影响及作用机制。方法实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测人OSCC组织与细胞中LncRNA CASC9表达,筛选最佳细胞系。体外培养OSCC细胞SCC15,将细胞分为空白对照(Control)组、si-CASC9组、si-NC组、miR-195-5p mimic组、miR-NC组、si-CASC9+NC inhibitor组、si-CASC9+miR-195-5p inhibitor组、miR-195-5p mimics+pcDNA组、miR-195-5p mimics+VEGFA组,qRT-PCR检测LncRNA CASC9、miR-195-5p表达,CCK-8法检测SCC15细胞增殖,流式细胞仪检测SCC15细胞凋亡,Transwell实验检测SCC15细胞迁移;Western印迹法检测SCC15细胞中血管内皮生长因子(VEGF)A、增殖细胞核抗原(PCNA)、半胱氨酸蛋白酶(Caspase)-3、基质金属蛋白酶(MMP)-9蛋白表达。双荧光素酶报告基因实验验证miR-195-5p与LncRNA CASC9、VEGFA的靶向关系。结果LncRNA CASC9在OSCC组织与细胞中表达较癌旁组织显著上调(P<0.05);抑制LncRNA CASC9表达或过表达miR-195-5p可显著抑制SCC15细胞增殖及迁移,促进细胞凋亡(P<0.05);双荧光素酶报告基因实验显示,LncRNA CASC9、VEGFA与miR-195-5p存在靶向关系(P<0.05);抑制miR-195-5p表达可显著逆转抑制LncRNA CASC9表达对SCC15细胞增殖、凋亡及迁移的作用(P<0.05);上调VEGFA表达可显著逆转过表达miR-195-5p对SCC15细胞增殖、凋亡及迁移的作用(P<0.05)。结论LncRNA CASC9在OSCC组织与细胞中上调表达,抑制LncRNA CASC9表达可通过调节miR-195-5p/VEGFA轴抑制OSCC细胞增殖与迁移,促进细胞凋亡。

宫颈癌患者血清微小RNA-195、双皮质素样激酶1、鳞状细胞癌抗原表达水平与临床病理特征及预后相关性研究

目的:探讨宫颈癌患者血清微小RNA-195(miR-195)、双皮质素样激酶1(DCLK1)、鳞状细胞癌抗原(SCC-Ag)水平与临床病理特征及预后的相关性。方法:选取宫颈癌患者72例为观察组,同期体检健康女性60例为对照组,比较两组血清miR-195、DCLK1、SCC-Ag表达水平。采用Spearman法分析宫颈癌患者血清miR-195、DCLK1、SCC-Ag与临床病理特征的相关性,随访3年,记录患者生存情况。采用Cox回归模型分析宫颈癌患者预后的影响因素。结果:观察组血清DCLK1、SCC-Ag水平较对照组升高,miR-195水平较对照组下降(均P<0.05)。血清miR-195水平与淋巴结转移、国际妇产科联盟(FIGO)分期、肿瘤分化程度呈负相关,DCLK1水平与FIGO分期、肿瘤分化程度呈正相关,SCC-Ag水平与肿瘤分化程度、肿瘤直径呈正相关(均P<0.05)。miR-195高表达患者3年生存率高于低表达患者,DCLK1、SCC-Ag高表达患者3年生存率低于低表达患者(均P<0.05)。FIGO分期、分化程度、淋巴结转移、肿瘤直径及血清miR-195、DCLK1、SCC-Ag水平是宫颈癌患者预后的独立影响因素(均P<0.05)。结论:宫颈癌患者血清DCLK1、SCC-Ag水平升高,miR-195水平降低,三者与临床病理特征和预后有关,是宫颈癌患者预后的独立影响因素。

circPVT1靶向调控miR-195-5p/SOX9轴影响结肠癌细胞增殖、凋亡及上皮间质转化

目的:探究环状RNA浆细胞瘤变体易位1(circPVT1)靶向调控微小RNA-195-5p(miR-195-5p)/性别决定区Y框蛋白9(SOX9)轴对结肠癌细胞增殖、凋亡及上皮间质转化(EMT)的影响。方法:体外培养人正常结肠上皮细胞NCM-460、人结肠癌细胞系(SW480、HCT116、HCT29、LOVO、SW620)至对数期,将SW480细胞分为对照组(正常培养SW480细胞不进行转染)、空载质粒组(转染空载质粒)、circPVT1沉默组[转染circPVT1小干扰RNA(siRNA)质粒]、miR-195-5p过表达组[转染miR-195-5p模拟物(mimics)质粒]、SOX9沉默组(转染SOX9 siRNA质粒)、circPVT1沉默+miR-195-5p低表达组(转染circPVT1 siRNA和miR-195-5p siRNA质粒)。各组转染相应质粒后培养48 h。荧光定量PCR法检测NCM-460细胞、人结肠癌细胞系(SW480、HCT116、HCT29、LOVO、SW620)和各组SW480细胞circPVT1、miR-195-5p、SOX9 mRNA的表达;噻唑蓝和流式细胞仪分别检测各组SW480细胞增殖和凋亡;蛋白印迹法检测各组SW480细胞SOX9、凋亡和EMT相关蛋白表达;双荧光素酶报告基因实验检测circPVT1与miR-195-5p、miR-195-5p与SOX9的靶向关系。结果:与NCM-460细胞比较,SW480细胞、HCT116细胞、HCT29细胞、LOVO细胞、SW620细胞中circPVT1、SOX9 mRNA表达显著升高,miR-195-5p表达显著降低(P<0.05);其中,SW480细胞中circPVT1、SOX9 mRNA表达最高,miR-195-5p表达最低;故选择SW480细胞进行后续实验。与对照组和空载质粒组比较,circPVT1沉默组circPVT1、SOX9 mRNA及蛋白表达显著降低,miR-195-5p表达显著升高(P<0.05);miR-195-5p过表达组miR-195-5p表达显著升高,SOX9 mRNA及蛋白表达显著降低(P<0.05);SOX9沉默组SOX9 mRNA及蛋白表达显著降低(P<0.05)。与对照组和空载质粒组比较,circPVT1沉默组、miR-195-5p过表达组、SOX9沉默组细胞增殖率、Bcl-2、Vimentin蛋白表达显著降低,凋亡率、Bax、E-cadherin蛋白表达显著升高(P<0.05)。与circPVT1沉默组比较,circPVT1沉默+miR-195-5p低表达组miR-195-5p、凋亡率、Bax、E-cadherin蛋白表达显著降低,SOX9 mRNA及蛋白、细胞增殖率、Bcl-2、Vimentin蛋白表达显著升高(P<0.05)。circPVT1与miR-195-5p、miR-195-5p与SOX9存在靶向调控关系。结论:沉默circPVT1可以靶向上调miR-195-5p表达,抑制SOX9表达,进而抑制SW480细胞增殖和EMT进程,促进其凋亡。

血浆miR-155、miR-195水平诊断首发精神分裂症执行功能障碍的价值及交互作用

目的探讨血浆微小RNA-155(miR-155)、微小RNA-195(miR-195)水平诊断首发精神分裂症执行功能障碍的诊断价值及交互作用。方法选取2020年6月至2023年6月商丘市第二人民医院收治的105例首发精神分裂症患者作为观察组,按照1∶1配对原则,另选取同期无精神分裂症体检志愿者105例作为对照组。比较两组受检者的血浆miR-155、miR-195水平,同时比较观察组有无执行功能障碍患者的执行缺陷综合征行为评价(BADS)评分及血浆miR-155、miR-195水平,采用受试者工作特征曲线(ROC)分析血浆miR-155、miR-195水平对执行功能障碍的诊断价值,采用Pearson法分析血浆miR-155、miR-195水平与BADS评分的相关性,通过交互作用分析上述指标对首发精神分裂症执行功能障碍发生的影响。结果观察组患者的血浆miR-155、miR-195水平分别为1.88±0.54、1.93±0.37,明显高于对照组的0.98±0.30、1.06±0.15,差异均有统计学意义(P<0.05);有执行功能障碍患者的卡片测验、动作计划测验、找钥匙测验、时间判断、动物园路线、修订六元素测试评分、BADS总分分别为(2.02±0.25)分、(1.21±0.14)分、(1.13±0.10)分、(1.54±0.19)分、(0.86±0.22)分、(1.40±0.28)分、(8.16±0.41)分,明显低于无执行功能障碍患者的(3.55±0.14)分、(3.36±0.18)分、(3.43±0.15)分、(3.48±0.16)分、(3.29±0.20)分、(3.40±0.12)分、(20.51±1.03)分,血浆miR-155、miR-195水平分别为2.07±0.31、2.15±0.33,明显高于无执行功能障碍患者的1.78±0.24、1.81±0.20,差异均有统计学意义(P<0.05);经Pearson法分析结果显示,血浆miR-155、miR-195与卡片测验、动作计划测验、找钥匙测验、时间判断、动物园路线、修订六元素测试评分、BADS总分均呈负相关(P<0.05);经ROC分析结果显示,血浆miR-155、miR-195联合诊断首发精神分裂症患者执行功能障碍的AUC为0.911(95%CI:0.839~0.957),约登指数为0.742,敏感度为91.89%,特异度为82.35%;经交互作用分析结果显示,miR-155阳性表达与miR-195阳性表达在首发精神分裂症患者执行功能障碍中呈正向交互作用(32.178<7.572×11.357,为次相乘模型)(P<0.05)。结论血浆miR-155、miR-195水平与首发精神分裂症执行功能障碍发生密切相关,且两指标阳性在执行功能障碍发生过程中呈正向交互作用,联合检测对执行功能障碍具有一定诊断价值。

microRNA在肌少-骨质疏松症中的作用机制研究进展

microRNA在肌、骨代谢疾病中的作用已成为当前研究热点。本文对microRNA在肌少-骨质疏松症中的作用机制研究进行总结。首先,本文介绍microRNA的生物发生过程和基因调控机制。其次,本文分别介绍相关microRNA亚型在骨骼肌和骨骼重建中的作用。在microRNA对骨骼肌作用机制方面,归纳了5个方面:(1)调节转录因子MyoD的活化和表达;(2)调节其他肌肉特异性转录因子的表达;(3)影响肌肉细胞的增殖和分化;(4)影响肌肉细胞表型;(5)microRNA的协同作用。并从促进成骨和抑制破骨两方面说明microRNA影响骨重塑的作用机制。还对具有肌骨共生的microRNA进行了总结归纳。最后对相关研究中存在的问题与不足进行总结和展望,对肌少-骨质疏松症的防治具有积极意义。

妊娠期糖尿病患者血清miR-195-5p、VEGF-A水平与胎儿生长发育与妊娠结局的关系

目的探讨妊娠期糖尿病(GDM)患者血清微小核糖核酸-195-5p(miR-195-5p)、血管内皮生长因子A(VEGF-A)水平与妊娠不良事件和胎儿生长发育的关系。方法选择203例GDM患者,根据胎儿生长发育将GDM患者分为发育正常组(157例)、发育异常组(46例),根据不良妊娠事件将其分为结局不良组(77例)和结局良好组(126例)。收集妊娠结局相关资料;于GDM患者入组后次日晨采集其静脉血,用实时荧光定量聚合酶链反应检测血清miR-195-5p,用酶联免疫吸附试验测定血清VEGF-A。Pearson相关法分析miR-195-5p与VEGF-A的相关性,多因素Logistic回归分析血清miR-195-5p、VEGF-A对GDM患者妊娠结局的影响,绘制受试者工作特征曲线分析血清miR-195-5p、VEGF-A对GDM患者妊娠结局的预测价值。结果发育异常组血清miR-195-5p表达高于发育正常组(P<0.05),血清VEGF-A水平低于发育正常组(P<0.05)。GDM患者血清miR-195-5p表达与VEGF-A水平呈负相关(r=-0.472,P<0.05)。结局不良组年龄大于结局良好组,空腹血糖、稳态模型胰岛素抵抗指数、糖化血红蛋白(HbA1c)水平高于结局良好组,分娩孕周早于结局良好组,血清miR-195-5p表达高于结局良好组,血清VEGF-A水平低于结局良好组,比较差异均有统计学意义(P均<0.05)。年龄大、高水平HbA1c、高表达miR-195-5p是GDM患者妊娠结局的危险因素(P均<0.05),高水平VEGF-A是保护因素(P<0.05)。血清miR-195-5p、VEGF-A联合预测GDM妊娠结局的曲线下面积为0.910,高于二者单独预测(P均<0.05)。结论GDM患者血清miR-195-5p、VEGF-A水平变化与胎儿发育不良、不良妊娠结局有关,二者联合检测可预测GDM妊娠结局。

长链非编码RNA AFAP1-AS1靶向miR-195-5p对肝癌细胞生物学行为的影响

目的探讨长链非编码核糖核酸(lncRNA)AFAP1-AS1及微小核糖核酸-195-5p(miR-195-5p)对肝细胞癌(HCC)细胞生物学行为的影响。方法常规培养人HCC细胞系(HepG2、Hep3B、SMMC-7721、Bel7402、SK-hep1细胞)和正常人肝细胞(HL-7702细胞),用实时荧光定量PCR法检测AFAP1-AS1、miR-195-5p并筛选实验细胞。将对数生长期实验细胞随机分为si-AFAP1-AS1组、si-NC组,miR-195-5pmimics组、mimics-NC组,miR-195-5pinhibitor+si-NC组、miR-195-5p inhibitor+si-AFAP1-AS1组、inhibitor-NC+si-AFAP1-AS1组、inhibitor-NC+si-NC组,用Lipofectamine 2000试剂将相应质粒按照分组转染入细胞。用CCK-8实验、菌落形成实验检测细胞增殖能力,用流式细胞术检测细胞凋亡及细胞周期,用Transwell实验检测细胞迁移及侵袭能力,用双荧光素酶报告基因实验验证AFAP1-AS1与miR-195-5p的靶向关系。结果HCC细胞中AFAP1-AS1表达高于正常人肝细胞(P均<0.05),HCC细胞中miR-195-5p表达低于正常人肝细胞(P均<0.05)。由于SK-hep1细胞中AFAP1-AS1表达最高、miR-195-5p表达最低,因此,后续研究均采用SK-hep1细胞进行实验。与si-NC组比较,si-AFAP1-AS1组中AFAP1-AS1表达低、细胞增殖能力低、迁移和侵袭细胞少、G0/G1期细胞比例高、细胞凋亡率高(P均<0.05)。通过Starbase v3.0在线数据库预测发现,AFAP1-AS1与miR-195-5p有互补的结合位点。双荧光素酶报告基因实验结果显示,miR-NC组、miR-195-5p组共转染WT-AFAP1-AS1后相对荧光素酶活性比较差异有统计学意义(P<0.05),共转染MUT-AFAP1-AS1后相对荧光素酶活性比较差异无统计学意义(P>0.05)。与inhibitor-NC+si-NC组比较,si-NC+miR-195-5p inhibitor组细胞增殖能力高、迁移和侵袭细胞多、G_(0)/G_(1)期细胞比例低、细胞凋亡率低(P均<0.05),而si-AFAP1-AS1+miR-195-5p inhibitor组上述细胞生物学行为则相反。结论lncRNA AFAP1-AS1可能通过竞争性结合miR-195-5p参与调控HCC细胞增殖、迁移、侵袭、凋亡等生物学行为。

血浆miR-379、miR-195、Gas6水平早期检测在AMI患者中的应用价值

目的分析血浆微小RNA-379(miR-379)、微小RNA-195(miR-195)、生长停滞特异性蛋白6(Gas6)水平早期检测在急性心肌梗死(AMI)患者中的应用价值。方法选取2021年5至2022年7月于首都医科大学附属北京世纪坛医院心内科住院治疗的265例患者,分为AMI组(n=127)和非AMI组(n=138),选取同期120名健康体检者设为对照组。比较三组入组时的血浆miR-379、miR-195表达量及Gas6水平;采用Pearson相关系数分析AMI患者入组时的血浆Gas6水平与miR-379、miR-195表达量的关系;采用受试者工作曲线(ROC)分析入组时的血浆Gas6水平及miR-379、miR-195表达量对早期AMI的诊断价值。结果三组入组时的血浆miR-379、miR-195、Gas6水平比较差异有统计学意义(P<0.05);血浆miR-379水平比较:AMI组<非AMI组<对照组,miR-195、Gas6水平比较:AMI组>非AMI组>对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。Pearson相关系数分析显示,Gas6与miR-379水平呈负相关(P<0.05),与miR-195水平呈正相关(P<0.05)。ROC结果显示,血浆miR-379、miR-195、Gas6水平单独诊断早期AMI具有一定局限性(AUC=0.808、0.718、0.752),三者联合诊断的效能更佳(AUC=0.879)。结论血浆miR-379、miR-195、Gas6水平在AMI患者中异常表达,三指标可作为AMI早期疾病诊断的参考指标。

血清miR-486-5p和miR-195-5p在慢性阻塞性肺疾病患者中的表达水平及临床意义

目的探讨慢性阻塞性肺疾病(COPD)患者血清微小RNA(miR)-486-5p和miR-195-5p水平与病情严重程度的关系。方法选取2022年5月至2023年4月于该院就诊的102例COPD患者纳入COPD组,根据COPD全球倡议(GOLD)评分,将COPD患者分为急性加重COPD组(AECOPD组)54例和稳定COPD组(SCOPD组)48例,根据病情严重程度分为Ⅰ级17例、Ⅱ级27例、Ⅲ级33例、Ⅳ级25例。并招募同期于该院进行体检的100例健康志愿者作为对照组。收集所有研究对象基线资料及肺功能指标,采用实时荧光定量聚合酶链反应检测COPD患者血清miR-486-5p、miR-195-5p水平。采用Spearman或Pearson相关分析血清miR-486-5p、miR-195-5p水平与临床指标的相关性。采用受试者工作特征(ROC)曲线分析血清miR-486-5p、miR-195-5p对AECOPD的诊断价值。结果AECOPD组、SCOPD组第1秒用力呼气容积(FEV1)占预计值百分比(FEV1%pred)、FEV1与用力肺活量(FVC)比值(FEV1/FVC)及血清miR-486-5p、miR-195-5p水平低于对照组,白细胞计数高于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05);AECOPD组动脉血二氧化碳分压(PaCO 2)、白细胞计数、mMRC明显高于SCOPD组,FEV1%pred、FEV1/FVC、氧合指数(PaO 2/FiO 2)及血清miR-486-5p、miR-195-5p低于SCOPD组,差异均有统计学意义(P<0.05)。血清miR-486-5p、miR-195-5p及二者联合检测诊断AECOPD的曲线下面积(AUC)分别为0.865、0.843、0.912,其中二者联合检测诊断AECOPD的AUC明显高于2项指标单独检测的AUC(Z=1.963、2.211,P<0.05)。COPD患者血清miR-486-5p、miR-195-5p水平与FEV1%pred、FEV1/FVC、PaO 2/FiO 2呈正相关(r=0.497、0.614、0.332,0.512、0.572、0.353,P<0.05),血清miR-486-5p、miR-195-5p水平与PaCO 2、mMRC呈负相关(r=-0.327、-0.553,-0.341、-0.518,P<0.05)。血清miR-486-5p、miR-195-5p水平在Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ级COPD患者中依次降低,两级间比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论COPD患者血清miR-486-5p、miR-195-5p水平下降,且与病情严重程度及肺功能指标存在相关性,可作为临床评估COPD患者病情的新指标。

长链非编码RNA FGD5-AS1调节miR-195-5p/PIM1轴对高糖诱导的心肌细胞损伤的影响

目的探讨长链非编码RNA FGD5反义RNA1(lncRNA FGD5-AS1)调节miR-195-5p/PIM1轴对高糖诱导的心肌细胞损伤的影响。方法将大鼠心肌细胞H9c2及人心肌细胞随机分为对照组、模型组、lncRNA FGD5-AS1过表达组、miR-195-5p inhibitor组、阴性对照组、lncRNA FGD5-AS1过表达+miR-195-5p mimics组,分组处理后检测其lncRNA FGD5-AS1、miR-195-5p和PIM1表达、增殖、凋亡、促炎性细胞因子水平。结果与对照组相比,模型组细胞lncRNA FGD5-AS1、PIM1 mRNA及蛋白表达、存活率,增殖率降低(P<0.05);miR-195-5p表达,凋亡率,肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)水平升高(P<0.05);过表达lncRNA FGD5-AS1可逆转模型组细胞上述变化,上调miR-195-5p可减弱过表达lncRNA FGD5-AS1的逆转作用。结论过表达lncRNA FGD5-AS1可通过下调miR-195-5p增强PIM1表达,从而抑制高糖诱导的心肌细胞炎症反应,促进细胞存活,减轻细胞凋亡。

CircOGDH通过调控miR-195-5p/PGAM5轴对氧糖剥夺/复糖复氧诱导的小胶质细胞损伤的影响

目的:探讨环状RNA OGDH(CircOGDH)通过调控miR-195-5p/磷酸甘油酸变位酶5(PGAM5)轴对氧糖剥夺/复糖复氧(OGD/R)诱导的小胶质(MG)细胞损伤的影响。方法:将体外培养的HMC3细胞分为:NC组(正常培养)、OGD/R、si-NC组、si-CircOGDH组、mimic NC组、miR-195-5p mimic组、si-CircOGDH+inhibitor NC组、si-CircOGDH+miR-195-5p inhibitor组。除NC组外,剩余组在转染对应物质前构建OGD/R模型。qRT-PCR法测定CircOGDH、miR-195-5p、PGAM5 mRNA表达水平;测定各组细胞增殖、凋亡、活性氧(ROS)及炎性因子水平;Western blot检测Cleaved caspase-3、Bax表达;双荧光素酶基因实验检测CircOGDH与miR-195-5p、PGAM5与miR-195-5p之间的靶向关系。结果:与NC组对比,OGD/R组miR-195-5p表达、OD450值均降低,CircOGDH、PGAM5 mRNA表达、凋亡率、ROS及炎性因子水平、Cleaved caspase-3、Bax蛋白表达均升高(P<0.05);对比OGD/R组和si-NC组,si-CircOGDH组miR-195-5p表达、OD450值均升高,CircOGDH、PGAM5 mRNA表达、凋亡率、ROS及炎性因子水平、Cleaved caspase-3、Bax蛋白表达均降低(P<0.05);miR-195-5p mimic组分别与OGD/R组、mimic NC组对比,CircOGDH无显著差异(P>0.05),miR-195-5p表达、OD450值均升高,PGAM5 mRNA表达、凋亡率、ROS及炎性因子水平、Cleaved caspase-3、Bax蛋白表达均降低(P<0.05);与si-CircOGDH+inhibitor NC组对比,si-CircOGDH+miR-195-5p inhibitor组CircOGDH差异不显著(P>0.05),miR-195-5p表达、OD450值均降低,PGAM5 mRNA表达、凋亡率、ROS及炎性因子水平、Cleaved caspase-3、Bax蛋白表达均升高(P<0.05)。双荧光素酶基因实验显示miR-195-5p和CircOGDH、PGAM5均存在靶向关系。结论:沉默CircOGDH可促进OGD/R诱导的HMC3细胞增殖,抑制其炎症反应和凋亡,可能与调控miR-195-5p/PGAM5轴有关。

SVA及α-干扰素对PK-15细胞microRNA转录谱影响的分析

为探究猪塞内卡病毒A(SVA)感染、干扰素(IFN-α)处理对猪肾细胞(PK-15)微RNA(microRNA,miRNA)转录谱的影响,本研究分别构建SVA感染的PK-15(PK-15/SVA)、IFN-α处理的PK-15(PK-15/IFN),SVA感染再经IFN-α处理的PK-15细胞(PK-15/SVA/IFN),通过荧光定量PCR(qPCR)分别检测各组细胞中SVA VP1及IFN-αmRNA的转录水平。结果显示,与PK-15相比,PK-15/SVA及PK-15/SVA/IFN细胞中SVA VP1基因的转录水平极显著升高(P<0.001),PK-15/SVA/IFN中IFN-α的转录水平显著或极显著升高(P<0.05、P<0.01)。通过转录组测序技术(RNA-Seq)分析各组细胞miRNA的转录谱,采用Spss软件统计各组细胞中转录差异miRNA的数量;利用基于负二项分布的DESeq2筛选各组细胞中转录显著差异miRNA;采用miRanda、PITA和RNAhybrid 3个软件预测各组细胞转录显著差异miRNA的靶基因,通过miREvo和mirdeep2软件预测各组细胞中的新miRNA并通过与猪miRNA序列比对得到已知miRNA;分别采用GO功能和KEGG富集分析各组细胞转录显著差异miRNA涉及的生物学功能及信号通路。统计分析结果显示,与PK-15相比,PK-15/IFN、PK-15/SVA和PK-15/SVA/IFN中均存在转录显著差异miRNA,且在SVA感染后细胞中转录的miRNA数量增多,IFN-α刺激则会减少细胞中转录的miRNA数量,SVA感染后再经IFN-α处理则转录的miRNA数量又有所降低。筛选结果显示,与PK-15相比,PK-15/SVA中有167种转录显著差异miRNA,其中94种转录显著上调,73种转录显著下调;与PK-15相比,PK-15/IFN中有98种转录显著差异miRNA,其中55种转录显著上调,43种转录显著下调。预测结果显示,共有290种转录显著差异miRNA有对应靶基因,且共预测到292种新miRNA和345种已知miRNA。选取6种转录显著差异miRNA采用Graphpad prism6.0进行miRNA-mRNA的互作网络展示。结果显示,miR-221-5p的靶基因显著多于其他miRNA,且其靶基因主要与癌症、病毒感染的治疗及宿主的免疫反应有关。GO功能结果显示,在经IFN-α处理或SVA感染后,转录显著差异miRNA的靶基因主要富集于细胞组分和生物过程等功能。KEGG分析结果显示,与PK-15相比,PK-15/SVA和PK-15/IFN细胞中转录显著差异miRNA的靶基因主要富集于Rap1和NF-κB信号通路;与PK-15/IFN相比,PK-15/SVA/IFN细胞中转录显著差异miRNA的靶基因主要富集于PI3K-Akt、NF-κB和肿瘤坏死因子(TNF)等抗病毒免疫相关信号通路;与PK-15/SVA相比,PK-15/SVA/IFN细胞中转录显著差异miRNA的靶基因主要富集于Rap1、NF-κB、TNF和MAPK信号通路。16种转录显著差异miRNA的qPCR结果与RNA-Seq结果一致。综上所述,本研究首次证实IFN-α处理、SVA感染均显著影响PK-15细胞miRNA转录谱,前者促进miRNA的转录,后者则抑制miRNA的转录。其中转录显著差异miRNA的靶基因与宿主抗病毒及肿瘤免疫均等信号通路密切相关,该结果为阐明SVA感染宿主细胞后非编码RNA转录谱变化的分子机制研究奠定基础。

miR-195、miR-125和钙网蛋白在弥漫大B细胞淋巴瘤中的表达及相关性研究

目的:分析微小RNA-195(mi R-195)、mi R-125和钙网蛋白在弥漫大B细胞淋巴瘤(DLBCL)中的表达及相关性。方法:选取2020年4月-2021年4月河北省邯郸市第一医院与河北医科大学第二医院病理科归档的资料齐全完整的80例DLBCL患者作为研究对象纳入研究组,另外选取70例淋巴结反应性增生患者纳入对照组。采用实时荧光定量PCR法检测mi R-195、mi R-125表达量,Western blot检测钙网蛋白表达情况,采用Pearson相关性分析法分析mi R-195、mi R-125和钙网蛋白与DLBCL之间的相关性,ROC曲线分析mi R-195、mi R-125和钙网蛋白对DLBCL的预测价值。结果:与对照组相比,研究组中mi R-195表达量降低,mi R-125、钙网蛋白表达量升高(P<0.001)。mi R-195、mi R-125和钙网蛋白的表达水平与患者性别、年龄、原发部位、B症状无关,与免疫表型、Ann Arbor临床分期、乳酸脱氢酶、IPI评分、结节累及、Ki-67指数有关,非生发中心来源、Ann Arbor分期为Ⅲ-Ⅳ期、乳酸脱氢酶>245 U/L、IPI评分3-5分、结节累及≥2处、Ki-67指数≥75%的DLBCL患者mi R-195表达水平降低,mi R-125、钙网蛋白表达水平升高(P<0.05)。Pearson相关性分析显示,mi R-195与mi R-125呈负相关(r=-0.536),mi R-125与钙网蛋白呈负相关(r=-0.545);mi R-125与钙网蛋白呈正相关(r=0.523)。ROC曲线显示,与mi R-195、mi R-125和钙网蛋白单项诊断相比,三项联合对DLBCL的预测价值较高(P<0.001)。结论:mi R-195在DLBCL中表达降低,mi R-125、钙网蛋白表达升高,且随着疾病的分期与IPI评分的升高,mi R-195降低加剧,mi R-125、钙网蛋白升高加剧,三者可能共同参与DLBCL的发生进展。

过表达MicroRNA-195抑制子宫内膜癌细胞系Ishikawa的增殖、迁移与侵袭能力

目的:观察MicroRNA-195对子宫内膜癌细胞增殖、迁移与侵袭能力的影响。方法:取对数生长期人子宫内膜癌细胞系Ishikawa,分别转染MicroRNA-195模拟物(MicroRNA-195过表达组)、MicroRNA-195抑制物(MicroRNA-195低表达组)及阴性对照质粒MicroRNA-NC(空白质粒组)。转染48h后,qRT-PCR法检测细胞中MicroRNA-195表达,CCK-8法检测细胞增殖,Transwell小室实验检测细胞迁移与侵袭能力,Western blot法检测Akt、p-Akt蛋白表达。将转染MicroRNA-195模拟物、MicroRNA-195抑制物及阴性对照质粒MicroRNA-NC的人子宫内膜癌细胞系Ishikawa分别注射至裸鼠皮下,每天检测肿瘤体积,实验周期为3周。结果:MicroRNA-195过表达可抑制人子宫内膜癌细胞系Ishikawa的增殖、迁移与侵袭能力(P<0.05),提高p-Akt蛋白表达(P<0.05);MicroRNA-195低表达可促进人子宫内膜癌细胞Ishikawa的增殖、迁移与侵袭能力(P<0.05),降低p-Akt蛋白表达(P<0.05)。MicroRNA-195过表达可抑制裸鼠体内人子宫内膜癌细胞Ishikawa的增殖(P<0.05),MicroRNA-195低表达可促进裸鼠体内人子宫内膜癌细胞Ishikawa的增殖(P<0.05)。结论:MicroRNA-195可抑制子宫内膜癌细胞Ishikawa的增殖、迁移与侵袭能力,其作用机制可能与激活PI3K/Akt信号通路有关。

miR-195及miR-21-3p在老年重症急性胰腺炎中的表达及相关性

选取新疆医科大学第一附属医院2020年2月—2022年3月收治的老年重症急性胰腺炎患者102例作为研究对象,按照不同疾病严重程度分为轻度组(n=45)及重度组(n=57),同时选择健康受试者50例作为对照组,全部人员均接受了荧光定量法检测,对3组人员的miR-195及miR-21-3p表达水平进行测量;对比轻度组与重度组急性生理与慢性健康评估(APACHEⅡ)评分、RANSON系统评分;采用Spearman相关性探讨APACHEⅡ及RANSON分别与微小RNA-195(miR-195)及微小RNA-21-3p(miR-21-3p)表达水平相关性;将老年重症急性胰腺炎患者按照不同预后分为死亡组(n=21)及生存组(n=36),采用ROC曲线分析miR-195及miR-21-3p对老年重症急性胰腺炎的预测价值。结果显示,轻度组与重度组的miR-195及miR-21-3p表达水平均明显高于对照组,重度组的miR-195及miR-21-3表达水平均明显高于轻度组,差异有统计学意义(P<0.05)。重度组与轻度组相比,APACHEⅡ评分及RANSON评分均较高,差异有统计学意义(P<0.05)。采用Spearman相关性分析,APACHEⅡ及RANSON评分分别与miR-195及miR-21-3p表达水平均呈现出了明显的正相关性(P<0.05)。死亡组与生存组相比miR-195及miR-21-3p表达水平较高,差异有统计学意义(P<0.05)。ROC曲线分析可见,miR-195及miR-21-3p分别用于预测重度急性胰腺炎患者曲线下面积分别为0.932、0.901。miR-195及miR-21-3p在老年重症急性胰腺炎患者中呈现出了异常升高的表达水平,与疾病严重程度呈现出了正相关性;miR-195及miR-21-3p在预测老年重症急性胰腺炎不良预后上具有一定的应用价值。

微小RNA-195通过靶向抑制PH结构域富亮氨酸重复蛋白磷酸酶2表达参与香烟烟雾诱导急性肺损伤机制研究

目的:探究miR-195通过靶向抑制PH结构域富亮氨酸重复蛋白磷酸酶2(PHLPP2)表达参与香烟烟雾诱导急性肺损伤的机制。方法:选择90只健康小鼠,均分为A、B、C三组,使用香烟烟雾暴露建立小鼠急性肺损伤模型,A组为正常对照组,B组为低剂量干预组,C组为高剂量干预组,干预后检测三组小鼠肺泡灌洗液中肿瘤坏死因子(TNF-α)、白介素-8(IL-8)及基质金属蛋白酶9(MMP-9)水平,对比三组小鼠肺泡灌洗液中白细胞、中性粒细胞计数,对比三组小鼠肺组织中髓过氧化物酶(MPO)、超氧化物歧化酶(SOD)及谷胱甘肽(GSH)水平,最后检测三组小鼠肺组织中miR-195及PHLPP2蛋白表达量。结果:①肺泡灌洗液中TNF-α、IL-8及MMP-9水平C组>B组>A组,组间对比差异具有统计学意义(均P<0.05);②肺泡灌洗液中白细胞、中性粒细胞计数C组>B组>A组,组间对比差异具有统计学意义(均P<0.05);③肺泡灌洗液中MPO、SOD、GSH水平C组>B组>A组,组间对比差异具有统计学意义(均P<0.05);④肺组织中miR-195表达C组>B组>A组,PHLPP2蛋白表达C组<B组<A组,组间对比差异具有统计学意义(均P<0.05)。结论:香烟烟雾能够诱导小鼠肺组织出现炎性改变,其机制可能与miR-195过表达并抑制PHLPP2蛋白表达有关。

miR-195在孕产妇下肢深静脉血栓患者外周血中的表达及其临床意义

目的探讨微小RNA-195(miR-195)在孕产妇下肢深静脉血栓(DVT)外周血中的表达水平及临床意义。方法选择2017年1月至2019年12月唐山市妇幼保健院产检并分娩的116例孕产妇DVT患者为DVT组,另选择同期109例产检并分娩且未发生DVT的孕产妇为非DVT组。检测所有受试者的miR-195、D-二聚体(DD)、红细胞计数及凝血功能指标[纤维蛋白原(Fib)、凝血酶原时间(PT)、部分活化凝血酶时间(APTT)、国际标准化比值(INR)]表达水平;收集两组的临床资料,Logistic回归分析孕产妇并发DVT的危险因素,受试者工作特征曲线(ROC)评估miR-195对孕产妇并发DVT的诊断价值,Pearson分析miR-195与DD、红细胞计数、Fib、PT、APTT、INR的相关性。结果两组年龄、分娩方式、产后出血、妊娠合并症、体质量指数(BMI)、产褥期卧床时间、miR-195、DD、Fib、PT、APTT等比较,差异有统计学意义(χ^(2)=5.015、10.025、9.565、5.408,t=2.591、9.430、18.139、2.923、9.752、13.145、15.646,P<0.05)。Logistic回归分析显示,年龄、分娩方式、产后出血、妊娠合并症、BMI、产褥期卧床时间、miR-195、DD、Fib、PT、APTT均与孕产妇并发DVT的独立有关(χ^(2)=5.015、10.025、9.565、5.408,t=2.591、9.430、18.139、2.923、9.752、13.145、15.646,P<0.05)。ROC曲线显示,miR-195诊断孕产妇并发DVT的AUC为0.952。Pearson相关分析显示,miR-195与DD、Fib呈正相关,与PT、APTT呈负相关(r=0.503、0.541、-0.324、-0.306,P<0.05)。结论DVT孕产妇外周血中miR-195表达水平升高,可为孕产妇DVT早期诊断及预防提供参考。

MicroRNA-195与Bcl-2/Bax在钙化大鼠主动脉中的表达及其相互作用

目的观察Bcl-2/Bax和microRNA(miRNA)-195在大鼠血管钙化中表达的变化和相互关系。方法将16只实验大鼠随机分对照组和钙化组,每组8只。钙化组肌肉注射维生素D3(30万U/kg,1次)和尼古丁灌胃(25mg/kg溶于花生油中,早、晚各1次)诱导大鼠血管钙化模型,对照组大鼠予灌服等量生理盐水。建模6周后,股动脉放血处死大鼠,将主动脉用Von Kossa梁色后,观察其形态特征。用免疫组化染色法和免疫印迹法检测凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax的表达,应用实时荧光定量多聚酶链式反应(qRT-PCR)法检测miRNA-195的表达。结果钙化组的主动脉有大量黑色颗粒沉淀。钙化组主动脉组织中Bax的表达与对照组无明显差别,而Bcl-2的表达升高(P<0.05)。钙化组miRNA-195的表达量高于对照组(P<0.01)。Pearson直线相关分析显示,钙化的主动脉中miRNA-195表达的水平与Bcl-2表达的水平呈显著正相关(r=0.791,P<0.05)。结论钙化的主动脉组织中miRNA-195的表达升高,并伴有Bcl-2蛋白的表达上调。miRNA-195与Bcl-2可能参与主动脉钙化。

MicroRNA-195-5p调节Bmpr1α表达对骨髓间充质干细胞成脂分化的影响

目的探讨miR-195-5p在补肾方含药血清干预大鼠原代骨髓间充质干细胞(bone mesenchymal stem cell,BM SC)中的表达及其对成脂分化的影响。方法体外贴壁法原代培养的大鼠BM SC细胞经流式细胞术、CD44和CD34免疫荧光染色鉴定后,与椎间盘软骨细胞和成骨细胞一起采用荧光定量RT-PCR方法检测细胞中rno-miR-195-5p的表达情况;采用荧光素酶报告基因实验验证骨形态发生蛋白受体-1α(Bmpr1α)是否为rno-miR-195-5p的靶基因,采用Western印迹法和油红O染色检测rno-miR-195-5p对Bmpr1α表达和BMSC成脂分化的影响。结果流式细胞术与免疫荧光分析显示所培养细胞具备BMSC特征。rno-miR-195-5p在补肾方含药血清干预的原代BM SC中表达明显升高(P<0.01),且在分化完成的软骨细胞和成骨细胞中高表达。双荧光素酶报告实验与Western印迹法证实Bmpr1α是rno-miR-195-5p的靶基因。转染rno-miR-195-5p mimics上调BM SC中rno-miR-195-5p可抑制Bmpr1α的表达(P<0.05),降低成脂分化能力;而转染rno-miR-195-5p inhibitor可显著增加BM SC中Bmpr1α的表达(P<0.01),增强成脂分化能力。结论补肾方含药血清干预BMSC上调rno-miR-195-5p,通过降低其靶基因Bmpr1α的表达而降低BMSC的成脂分化,改善骨质疏松症状。