miR-122-5p靶向调控人骨髓间充质干细胞诱导成骨分化的分子机制研究

目的:研究miR-122-5p对人骨髓间充质干细胞hBMSCs细胞成骨分化诱导的作用分子机制。方法:运用茜素红S、碱性磷酸酶活性ALP染色试剂盒检测hBMSCs成骨分化的钙结节与成骨活性;使用双荧光素酶报告基因实验验证miR-122-5p与BRCC3之间的靶向关系;运用qRT-PCR分别检测Runx2、Osterix、wnt3a、β-catenin、GSK3-β、miR-122-5以及BRCC3基因的表达情况;Western印迹检测β-catenin蛋白的表达量。结果:过表达miR-122-5p对人骨髓间充质干细胞hBMSCs细胞成骨分化诱导21天后的钙结节与干细胞成骨活性均有明显促进作用,对成骨分化中wnt/β-catenin信号通路主要转录因子Runx2、Os‐terix及wnt3a、β-catenin、GSK3-β主要基因均激活作用,过表达BRCC3对干细胞成骨分化中wnt/β-catenin信号通路主要转录因子Runx2、Osterix及wnt3a、β-catenin、GSK3-β主要基因有抑制作用;并且通过双荧光素酶报告基因与回复性实验确定miR122-5p与BRCC3之间的靶向关系,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:miR-122-5p靶向抑制BRCC3的表达诱导hBMSCs细胞通过wnt/β-catenin通路进行成骨分化诱导。

lncRNA SNHG7通过miR-122-5p/CCND1轴调节胃癌细胞的增殖、凋亡及肿瘤免疫逃逸

目的探讨长链非编码RNA小核仁RNA宿主基因(lncRNA SNHG)7通过miR-122-5p/细胞周期蛋白(CCN)D1轴对胃癌细胞的增殖、凋亡及肿瘤免疫逃逸的影响。方法采用实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测体外培养的人胃癌细胞株NCI-N87、SNU-1、MKN-45和人胃癌组织源细胞、人胃黏膜上皮细胞中lncRNA SNHG7、miR-122-5p与CCND1表达。体外培养的人胃癌细胞MKN-45,随机分为对照组、lncRNA SNHG7 siRNA(si-lncRNA SNHG7)组、lncRNA SNHG7 siRNA阴性对照(si-NC)组、lncRNA SNHG7 siRNA(si-lncRNA SNHG7)+miR-122-5p inhibitor组,分组转染后,检测各组MKN-45细胞增殖、凋亡、活化CD8+T细胞杀伤率、miR-122-5p及CCND1、细胞增殖核抗原(PCNA)、凋亡蛋白〔B细胞淋巴瘤-2相关X蛋白(Bax)、天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶(caspase)-3〕表达,并检测lncRNA SNHG7对MKN-45细胞miR-122-5p的靶向调节作用。结果与胃黏膜上皮细胞相比,胃癌组织源和MKN-45、SNU-1、NCI-N87细胞lncRNA SNHG7、CCND1 mRNA表达明显升高,miR-122-5p表达明显降低(P<0.05)。与对照组相比,si-lncRNA SNHG7组细胞活力、EdU阳性率、细胞CCND1、PCNA蛋白表达明显降低,凋亡率、活化CD8+T细胞对各组MKN-45细胞的杀伤率、miR-122-5p及Bax、caspase-3蛋白表达明显升高(均P<0.05);si-NC组细胞各指标均无显著差异(P>0.05);lncRNA SNHG7 siRNA和miR-122-5p inhibitor联合可逆转lncRNA SNHG7 siRNA对细胞各指标的作用。lncRNA SNHG7可靶向下调MKN-45细胞miR-122-5p表达。结论下调lncRNA SNHG7可通过上调miR-122-5p而降低CCND1表达,进而抑制胃癌细胞增殖,促进其凋亡,并减轻其免疫逃逸。

彩色多普勒超声检查联合血清miR-122-5p、miR-106b水平对卵巢癌的诊断价值

目的 探讨彩色多普勒超声检查联合血清微小RNA(miRNA)-122-5p、miR-106b水平对卵巢癌的早期诊断价值以及与卵巢癌周围血管侵袭的相关性。方法 回顾性选取2019年5月至2021年12月沧州市中心医院收治的102例卵巢肿瘤患者为研究对象,所有患者均行彩色多普勒超声检查,采用实时定量聚合酶链反应测定血清中miR-122-5p和miR-106b的表达水平。以病理诊断结果作为金标准,将研究对象分为卵巢癌组(n=51)和良性卵巢肿瘤组(n=51);卵巢癌组又分为侵袭组(n=32)和非侵袭组(n=19)。比较卵巢癌组与良性卵巢肿瘤组的临床资料(年龄、体重指数、生育和绝经)、彩色多普勒超声图像特征(实性包块、伴腹水、乳头状结构≥4、肿瘤最大直径>10 cm)、彩色多普勒超声血流参数[搏动指数(PI)和血流阻力指数(RI)]、血清miR-122-5p、miR-106b水平。应用多因素Logistic回归模型探究相关变量对卵巢癌的独立预测作用。应用受试者工作特征(ROC)曲线评估彩色多普勒超声检查联合血清miR-122-5p、miR-106b水平对卵巢癌的诊断价值。并比较侵袭组与非侵袭组彩色多普勒超声血流参数及血清miR-122-5p、miR-106b水平,采用Pearson相关性分析对彩色多普勒超声血流参数、miR-122-5p、miR-106b与卵巢癌周围血管侵袭的相关性进行分析。结果 卵巢癌组实性包块、伴腹水、乳头状结构≥4以及肿瘤最大直径>10 cm所占比例分别为80.39%、76.47%、74.51%、78.43%,均高于良性卵巢肿瘤组(9.80%、11.76%、29.41%、45.10%),PI、RI、血清miR-122-5p表达水平分别为0.94±0.27、0.48±0.11、1.01±0.27,均低于良性卵巢肿瘤组(1.47±0.32、0.71±0.19、1.42±0.30),miR-106b表达水平为4.57±1.13,高于良性卵巢肿瘤组(2.86±0.65),差异均有统计学意义(P<0.05)。Logistic回归模型分析显示,PI、RI、miR-122-5p、miR-106b是卵巢癌的独立预测因子,OR值分别为1.080、1.116、1.689、1.301(P<0.05)。ROC曲线分析显示,PI、RI、miR-122-5p和miR-106b以及联合诊断卵巢癌的曲线下面积(AUC)分别为0.869、0.874、0.859、0.898、0.969,其联合诊断的价值高于单独应用。侵袭组PI、RI和血清miR-122-5p表达水平均低于非侵袭组,血清miR-106b表达水平高于非侵袭组,差异均有统计学意义(P<0.05)。Pearson相关性分析显示,彩色多普勒超声血流参数PI、RI及血清miR-122-5p水平与卵巢癌周围血管侵袭呈负相关(r=-0.743、-0.696、-0.822,P<0.05),血清miR-106b水平与卵巢癌周围血管侵袭呈正相关(r=0.863,P<0.05)。结论 彩色多普勒超声检查联合血清miR-122-5p、miR-106b水平可以提高卵巢癌的早期诊断价值,并且可根据这些指标评估卵巢癌周围血管侵袭程度,值得应用推广。

miR-122在PM_(2.5)诱导的肺损伤中的作用机制

目的探索PM_(2.5)引起的肺损伤的分子机制,以期为肺损伤的诊疗提供新的靶点。方法对PM_(2.5)诱导下肺损伤的多组学数据进行差异基因筛选及分子功能分析,确定肺损伤相关的分子靶标,构建PM_(2.5)诱导的SD大鼠肺损伤模型并进行初步验证。结果HE染色结果显示,暴露组的大鼠肺泡间隔增宽,肺泡腔增大,部分肺泡断裂、融合;Masson染色结果发现暴露组大鼠肺部呈现出少量纤维化。本次实验结果发现,在PM_(2.5)诱导条件下,miR-122表达显著上调,其靶基因胰岛素样生长因子1受体(insulin-like growth factor 1,IGF1R)表达显著下调。结论PM_(2.5)会导致大鼠的肺损伤,推测miR-122通过调控其靶基因IGF1R进而影响PI3K-AKT信号通路并引起细胞凋亡,加剧肺损伤。

miR-122在脏器缺血再灌注损伤中作用机制的研究进展

心、脑、肝、肾等脏器缺血再灌注损伤(IRI)是常见的临床现象,IRI易导致脏器功能障碍,甚至导致患者死亡。miR-122是最早发现的miRNA之一,是非编码RNA,参与调控蛋白质编码基因的表达,广泛参与了多个脏器的IRI,在机体各器官IRI的发生、发展及预后中均发挥着重要作用。本文就miR-122在脏器IRI中的作用及其机制作一综述。

GDF15、miR-122、AFP和PIVKA-Ⅱ联合评估在HBV感染肝硬化患者肝细胞癌发生风险中的预测价值

目的评估血清生长分化因子15(GDF15)、microRNA-122(miR-122)、甲胎蛋白(AFP)和异常凝血酶原(PIVKA-Ⅱ)联合检测在监测乙肝病毒(HBV)感染肝硬化患者中肝细胞癌(HCC)的风险预测价值。方法将2017年12月至2022年1月在首都医科大学附属北京友谊医院就诊的45例HBV相关肝硬化患者、50例HCC患者纳入横断面研究,设为肝硬化组和HCC组;另选22例监测期间新确诊HCC的HBV肝硬化患者纳入纵向研究队列,分别对肝硬化组和HCC组患者以及监测期间新确诊HCC的HBV肝硬化患者的系列血清标本[新确诊HCC前12~18个月(T_(1))、新确诊HCC前6~12个月(T_(2))以及HCC诊断时(T_(3))]进行检测,测定GDF15、miR-122、AFP和PIVKA-Ⅱ水平。比较各组患者每项标志物的检测水平,采用受试者工作特征(ROC)曲线分析GDF15、miR-122、AFP和PIVKA-Ⅱ单独或联合检测对HCC患者的诊断价值,评估标志物的组合预测HBV感染肝硬化患者的HCC风险。结果横断面研究中,HCC组患者血清GDF15、AFP和PIVKA-Ⅱ水平分别为1760.64 pg/mL、40.24 ng/mL、106.37 mAU/mL,均显著高于肝硬化组患者(1357.63 pg/mL、9.07 ng/mL、22.59 mAU/mL),miR-122水平为38.72,则显著低于肝硬化组患者(75.70),差异均有统计学意义(P<0.05)。GDF15、miR-122、AFP和PIVKA-Ⅱ单独诊断HCC时,曲线下面积(AUC)分别为0.734、0.644、0.776、0.823;AFP和GDF15两项联合,AUC为0.835;GDF15、AFP和PIVKA-Ⅱ三项联合,AUC为0.860;GDF15、miR-122、AFP和PIVKA-Ⅱ四项联合,AUC最佳为0.876。区分肝硬化和HCC时,PIVKA-Ⅱ具有较高的敏感度(72.5%);GDF15具有较高的特异度(83.2%);AFP和PIVKA-Ⅱ联合,特异度最高(92.0%);四项联合,敏感度增加(82.2%),约登指数最高(0.622)。纵向研究结果未观察到每种单一生物标志物随时间的变化,而GDF15、AFP和PIVKA-Ⅱ三项联合以及GDF15、miR-122、AFP和PIVKA-Ⅱ四项联合,在三个时间点的检测值差异有统计学意义(P<0.01)。肝硬化患者横截面和纵向(T_(1))之间观察到四项组合的差异有统计学意义(P<0.05),提示标志物的联合应用可有效区分即将发生HCC和不会发生HCC的肝硬化患者。结论GDF15、miR-122、AFP和PIVKA-Ⅱ联合检测可以提高对HBV相关肝硬化和HCC患者的分辨力,且在HBV相关的肝硬化中,GDF15、miR-122、AFP和PIVKA-Ⅱ的组合能够识别HCC发展风险较高的患者,具有临床价值。

UCA1/miR-122-5p/CPEB1轴促进肺腺癌的顺铂耐药发生机制研究

目的探讨尿路上皮癌胚抗原1(UCA1)/miR-122-5p/pcDNA-胞质多聚腺苷酸元件结合蛋白1(CPEB1)轴促进肺腺癌的顺铂耐药发生机制研究。方法通过实时荧光反转录定量PCR(RT-qPCR)检测UCA1相关miRNA分子,并通过细胞转染获得miR-122-5p和CPEB1相关细胞株。通过双荧光素酶报告实验分别验证UCA1与miR-122-5p、CPEB1与miR-122-5p的结合。药物敏感性实验获得顺铂药物半抑制浓度(IC50);通过肿瘤基因组图谱(TCGA)数据库分析CPEB1在肺腺癌中的表达情况以及与免疫细胞功能的关系。结果miR-122-5p在肺腺癌细胞中的表达水平明显升高,并通过双荧光素酶报告实验以验证UCA1与miR-122-5p结合,构建miR-122-5p抑制物和模拟物转染肺腺癌细胞株,发现miR-122-5p抑制后,顺铂IC50浓度下降,而miR-122-5p过表达后,顺铂IC50浓度升高。CPEB1在肺腺癌细胞中的表达水平明显降低,双荧光素酶报告实验证实CPEB1是与miR-122-5p结合,CPEB1过表达后,顺铂IC50浓度减低;对TCGA数据库分析显示肺腺癌组织CPEB1 mRNA明显低于癌旁组织,ROC曲线分析显示CPEB1表达水平能较好地用于诊断肺腺癌(AUC=0.849),进一步分析显示CPEB1表达水平与肺腺癌患者的细胞功能如T细胞、B细胞、CD8+T细胞、自然杀伤细胞、巨噬细胞、中性粒细胞、树突状细胞、肥大细胞存在密切关联。结论UCA1与miR-122-5p存在结合位点,后者可影响肺腺癌的顺铂耐药,并与靶基因CPEB1结合;肺腺癌中CPEB1呈低表达,降低肺腺癌顺铂药物的敏感性。UCA1/miR-122-5p/CPEB1轴有望为干预肺腺癌顺铂耐药的靶点。

血清HBV-DNA载量与老年慢性乙肝患者肝功能指标及血清miR-21、miR-122水平的关联性研究

目的:探究血清乙型肝炎病毒脱氧核糖酸(HBV-DNA)载量与老年慢性乙肝(CHB)患者肝功能指标及血清miR-21、miR-122的关联性。方法:选取某院2021年1月—2023年6月收治的120例老年CHB患者为研究对象,将其按照HBV-DNA载量分为低载量组(<105 copies/mL)(n=48)、中载量组(105~107 copies/mL)(n=42)及高载量组(>107 copies/mL)(n=30)。比较3组一般资料、血清肝功能指标[丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)、谷氨酰转移酶(GGT)、碱性磷酸酶(ALP)]及血清miR-21、miR-122水平。采用Pearson相关分析法分析老年CHB患者血清HBV-DNA载量与肝功能指标及血清miR-21、miR-122水平的相关性。结果:3组间性别、年龄、BMI、病程、吸烟史、饮酒史、高血压病史、糖尿病病史、冠心病病史等一般资料比较,差异无统计学意义(P>0.05)。3组间血清ALT、AST、GGT、ALP及miR-21水平呈现低载量组﹤中载量组﹤高载量组,血清miR-122水平呈现低载量组>中载量组>高载量组,差异均有统计学意义(P<0.05)。相关分析显示,老年CHB患者血清HBV-DNA载量与血清ALT、AST、GGT、ALP及miR-21水平呈正相关,与血清miR-122水平呈负相关(P均<0.001)。结论:血清HBV-DNA载量与老年CHB患者血清ALT、AST、GGT、ALP及miR-21水平均呈正相关,与血清miR-122水平呈负相关,检测血清miR-21、miR-122水平可为老年CHB的诊断及病情评估提供参考依据。

不同中医证型胃癌患者外周血miR-21、miR-122水平变化及临床意义

目的:观察探讨不同中医证型胃癌(GC)患者外周血miR-21、miR-122水平变化及临床意义。方法:选取2022年1月~2023年1月我院收治的100例GC患者为研究对象,根据其临床表现和体征进行中医证型分型,比较不同中医证型GC患者外周血miR-21、miR-122水平、毒副反应发生率及化疗半年后的存活情况。结果:100例GC患者中47例为脾胃湿热证,17例为脾胃虚寒证,15例为肝胃不和证,13例为瘀血内阻证,8例为痰浊凝滞证。不同中医证型GC患者外周血miR-21水平为脾胃湿热证>脾胃虚寒证>肝胃不和证>瘀血内阻证>痰浊凝滞证,miR-122水平为脾胃湿热证<脾胃虚寒证<肝胃不和证<瘀血内阻证<痰浊凝滞证,且两组间比较差异均有统计学意义(P<0.05)。脾胃湿热证患者胃肠道反应和骨髓抑制发生率明显高于痰浊凝滞证和瘀血内阻证(P<0.05),神经系统反应及肾损害发生率明显高于瘀血内阻证(P<0.05);脾胃虚寒证患者骨髓抑制发生率明显高于痰浊凝滞证和瘀血内阻证(P<0.05),神经系统反应发生率明显高于瘀血内阻证(P<0.05);肝胃不和证患者神经系统反应发生率明显高于瘀血内阻证(P<0.05)。不同中医证型GC患者化疗后随访6个月的生存率为脾胃湿热证<脾胃虚寒证<肝胃不和证<瘀血内阻证<痰浊凝滞证,但组间比较差异均无统计学意义(P>0.05)。结论:不同中医证型GC患者外周血miR-21、miR-122表达存在差异,检测二者水平对评估患者病情进展及预后有一定价值。

miR-122-5p通过靶向Circ_MTM1在HBV相关肝纤维化中的分子机制研究

目的:研究微小核糖核酸microRNA-122-5p (miR-122-5p)对HBV感染相关肝纤维化的作用及分子机制。方法:分别用采用HBsAg、HBeAg酶联免疫吸附剂测定(ELISA)试剂盒和实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测HBV表面抗原(HBsAg)、抗原(HBeAg)水平以及HBV DNA、HBV共价闭合环状DNA (cccDNA)水平,并采用蛋白质印迹法(Western blot)检测相应蛋白水平。RT-qPCR检测人肝星状细胞(LX-2细胞)和HBV相关肝纤维化组织细胞中Circ_MTM1、miR-122-5p的表达情况。应用生物信息学软件StarBaseV3.0预测miR-122-5p的可能靶基因,并应用双荧光素酶检测方法判定miR-122-5p对其靶基因Circ_MTM1表达的调节作用。结果:miR-122-5p在HBV相关性肝纤维化组织和细胞中低表达,而Circ_MTM1在HBV相关性肝纤维化组织和细胞中高表达。miR-122-5p靶向下调Circ_MTM1的表达,通过下调Circ_MTM1可抑制HBV相关肝纤维化的进程。结论:miR-122-5p与Circ_MTM1在HBV相关肝纤维化中存在靶向关系,Circ_MTM1通过调控肝纤维化相关蛋白的水平在HBV相关肝纤维化进程中起到启动子作用。

miR-101、miR-122在妊娠期糖尿病患者血清和胎盘组织中表达及意义分析

分析妊娠期糖尿病血清、胎盘miR-101、miR-122表达特点与指导意义。方法:选取2022年10月~2023年09月孕产妇70例,其中妊娠期糖尿病35例设为A组,血糖正常孕妇35例设为B组,分析孕妇血清和胎盘miR-101与miR-122表达对孕妇血糖、胰岛素情况的影响。结果:A组血清、胎盘miR-101活性高于B组(P<0.05);A组血清、胎盘miR-122显著高表达(P<0.05);FBG与血清miR-101正相关,FIN、HOMA-IS与血清miR-101负相关(P<0.05);FBG、HOMA-IR与miR-122正相关,FIN与血清miR-101负相关(P<0.05)。结论:妊娠期糖尿病患者常见miR-101、miR-122激活,可能影响机体胰岛素分泌,根据miR-101、miR-122变化实施针对性管理,以促进疾病防控。

miR-122在前列腺癌中的表达水平与临床病理特征的相关性

目的探讨miR-122在前列腺癌中的表达水平与临床病理特征的相关性。方法检测168例进行前列腺检查的患者外周血miR-122与PCA3的表达水平,调查所有患者的一般资料、临床病理资料并进行相关性分析。结果病理诊断为前列腺癌68例(前列腺癌组,Ⅰ级38例、Ⅱ级22例、Ⅲ级8例),前列腺增生100例(前列腺增生组)。前列腺癌组的miR-122相对表达水平高于前列腺增生组(P<0.05),PCA3含量也高于前列腺增生组(P<0.05),且在不同病理分级患者中均有差异(P<0.05)。前列腺癌组的Pearson结果显示,临床分级、PCA3含量与miR-122相对表达水平存在正相关性(P<0.05);COX结果显示,临床分级、PCA3含量均为影响外周血miR-122相对表达水平的重要因素(P<0.05)。结论miR-122在前列腺癌中呈现高表达水平,与患者的病理分级、外周血PCA3含量存在相关性,可为前列腺癌的临床诊治提供较可靠的客观学依据。

携带miR-122a的间充质干细胞来源外泌体对糖尿病性心肌病的作用研究

目的:探究携带miR-122a的间充质干细胞来源外泌体对糖尿病性心肌病(DCM)的作用及其相关分子机制。方法:将miR-122a和miR-NC转染至分离的小鼠骨髓来源间充质干细胞(BMSC),提取BMSC外泌体(BMSC-Exos)并通过Western blot鉴定。将30只C57/B6小鼠平均分为:对照组、miR-122a组和miR-NC组。除对照组外,miR-122a组和miR-NC组通过高脂高糖饮食联合STZ诱导DCM模型,随后miR-122a组和miR-NC组分别尾静脉注射BMSC-Exos-miR-122a和BMSC-ExosmiR-NC,而对照组腹腔注射等量枸橼酸钠缓冲液。结束实验后检测各组小鼠心功能指标,通过HE检测心肌组织病理水平,ELISA检测心肌组织ROS、IL-1β、IL-6和TNF-α水平,western blot检测小鼠心肌组织LC3Ⅱ、LC3Ⅰ、Beclin1和γH2AX蛋白表达水平。结果:细胞转染后,与BMSC-miR-NC比较,BMSC-miR-122a中miR-122a表达升高(P<0.05)。提取的BMSC-Exos有典型的Exo形态,粒径大约为100nm,外泌体标志蛋白CD63和CD81高表达。与对照组比较,miR-NC组舒张末期室间隔厚度(IVSd)、舒张末期后壁厚度(PWd)、左室短轴缩短率(LVFS)、每搏输出量(SV)、心排出量(CO)降低(P<0.05),左室舒张末期内径(LVDd)、左室收缩末期内径(LVDs)、左室质量(LVM)升高(P<0.05);心肌结构紊乱,炎性细胞浸润增加;心肌组织ROS、IL-1β、IL-6和TNF-α水平升高(P<0.05),LC3Ⅱ/LC3Ⅰ、Beclin1蛋白表达水平降低(P<0.05),γH2AX蛋白表达水平升高(P<0.05)。与miR-NC组比较,miR-122a组IVSd、PWd、LVFS、SV、CO升高(P<0.05),LVDd、LVDs、LVM降低(P<0.05);心肌结构恢复,炎性细胞浸润减少;心肌组织ROS、IL-1β、IL-6和TNF-α水平降低(P<0.05),LC3Ⅱ/LC3Ⅰ、Bec-lin1蛋白表达水平升高(P<0.05),γH2AX蛋白表达水平降低(P<0.05)。结论:DCM会引发心肌细胞自噬水平大幅度降低。携带miR-122a的BMSC-Exos可通过恢复心肌细胞自噬水平,降低炎性水平和细胞损伤,改善DCM的疾病症状。

miR-122靶向调控RhoA基因影响乙型肝炎病毒复制与表达的机制研究

目的探讨miR-122通过调控小G蛋白超家族成员RhoA基因对隐匿性乙型肝炎病毒(HBV)复制与表达的影响及其作用机制。方法实时荧光定量PCR测定HBV(+)与HBV(-)的肝癌患者组织、HepG2细胞与HepG2.2.15细胞中miR-122表达差异,实时荧光定量PCR和Western Blot检测HBV(+)与HBV(-)的肝癌患者组织、HepG2细胞与HepG2.2.15细胞中RhoA mRNA和RhoA蛋白的表达差异;按照实验分组将pEGFP-C1-miR-122与pcDNA3.0-V14RhoA转染至HepG2.2.15细胞,实时荧光定量PCR测定miR-122与RhoA mRNA表达,Western Blot检测RhoA蛋白表达;生物信息学方法预测miR-122与RhoA基因的靶向结合位点,构建野生型RhoA 3′非翻译区(3′UTR)和突变型RhoA 3′UTR双荧光素酶表达载体,检测细胞荧光素酶活性变化;酶联免疫吸附试验测定细胞培养上清液中乙型肝炎表面抗原(HBsAg)与乙型肝炎e抗原(HBeAg)水平,实时荧光定量PCR检测细胞培养上清液中HBV DNA水平,Western Blot检测细胞内Rho相关蛋白激酶(ROCK)-1与ROCK-2相对表达水平。结果相较于HBV(-)肝癌患者组织,HBV(+)肝癌患者组织中miR-122表达下调,RhoA mRNA和RhoA蛋白相对表达水平上调(P<0.05);与HepG2细胞比较,HepG2.2.15细胞中miR-122表达也下调,RhoA mRNA和RhoA蛋白相对表达水平上调(P<0.05)。经预测发现RhoA mRNA 3′UTR与miR-122在特定区域存在碱基互补现象,miR-122 mimic和RhoA 3′UTR WT重组质粒共转染的细胞中相对荧光素酶活性降低(P<0.05)。此外,过表达miR-122的HepG2.2.15细胞中RhoA mRNA和RhoA蛋白相对表达水平下调(P<0.05)。与空白组比较,miR-122组HepG2.2.15细胞培养上清液HBsAg与HBeAg水平均降低,HBV DNA表达降低,ROCK-1与ROCK-2表达均上调(P<0.05);而V14RhoA组HBsAg与HBeAg水平则高于空白组,HBV DNA表达升高,ROCK-1与ROCK-2表达均上调(P<0.05)。结论miRNA-122可通过下调RhoA基因表达抑制HBV的复制和表达,其机制可能与抑制Rho/ROCK信号通路激活有关。

白花香莲解毒颗粒治疗HBeAg阳性慢性乙型肝炎的临床疗效及对血浆外泌体miR-122表达的影响

目的:观察壮药白花香莲解毒颗粒治疗HBeAg阳性慢性乙型肝炎的临床疗效及对血浆外泌体miR-122表达的影响。方法:将120例HBeAg阳性的慢性乙型肝炎患者随机分为两组,对照组60例给予恩替卡韦治疗,观察组60例给予恩替卡韦联合白花香莲解毒颗粒治疗,两组均治疗48周,同时选取健康体检者30例作为健康组。观察治疗前后两组临床疗效、乙肝两对半定量、血浆外泌体miR-122、乙肝病毒脱氧核糖核酸(HBV DNA)的水平、肝功能及不良反应事件发生情况。结果:治疗48周,观察组总有效率[90%(54/60)]明显高于对照组[71.67%(43/60)](P<0.05)。治疗12、24、48周时,两组HBeAg滴度、血清丙氨酸氨基转移酶水平逐渐下降,且观察组显著低于对照组(P<0.05);观察组血浆中miR-122相对表达量高于治疗前(P<0.05),对照组血浆中miR-122相对表达量与治疗前比较,差异无统计学意义(P>0.05)。治疗12、24、48周时,两组血清HBV-DNA水平逐渐下降(P<0.05);观察组治疗12、24周时HBV-DNA水平低于对照组(P<0.05),但治疗48周后,两组HBV-DNA水平比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论:白花香莲解毒颗粒能够抑制HBV-DNA的复制及HBeAg分泌,改善肝功能,其疗效机制可能与调节血浆外泌体miR-122的表达有关。

血清miR-122与STEMI患者动脉粥样硬化疾病负担和长期临床结局的关系

目的 探讨ST段抬高型心肌梗死(STEMI)患者血清微小RNA(miRNA)-122与动脉粥样硬化疾病负担及长期临床结局的相关性。方法 前瞻性纳入2014年9月至2016年5月104例在该院接受经皮冠状动脉介入治疗的STEMI患者,使用SYNTAX评分和Gensini评分评估STEMI患者动脉粥样硬化疾病负担。同期纳入100例无已知心血管疾病的健康志愿者作为对照组。采用实时荧光定量PCR法检测血清miR-122表达水平。结果 STEMI组患者血清miR-122水平显著高于对照组(Z=-8.064,P<0.001)。血清miR-122水平≥2.25与多支血管疾病发生率升高有关(OR=2.04,95%CI:1.09~3.83,P=0.031)。STEMI患者血清miR-122水平与SYNTAX评分、Gensini评分呈正相关(r=0.447、0.402,均P<0.001)。多元线性回归分析显示,血清miR-122水平是影响SYNTAX评分(t=5.228,P<0.001)和Gensini评分(t=2.955,P=0.009)的独立临床因素。随访期间,有26例(25.0%)患者出现了新的临床事件,发生不良临床事件患者的血清miR-122水平高于未发生不良事件患者(Z=-2.837,P=0.005)。受试者工作特征(ROC)曲线分析显示,血清miR-122水平预测患者不良临床结局的曲线下面积为0.755(95%CI:0.664~0.845)。多因素Logistic回归分析显示,血清miR-122水平≥2.25是STEMI患者不良临床结局的独立危险因素(P<0.05)。结论 STEMI患者血清miR-122水平升高与更高的动脉粥样硬化疾病负担及不良临床结局有关。

miR-122-5p靶向KDM2A对骨髓间充质干细胞成骨分化的影响

目的探讨miR-122-5p靶向组蛋白去甲基化酶2A(histone demethylation protein 2A,KDM2A)对骨髓间充质干细胞成骨分化的影响。方法体外培养人骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cell,BMSC),利用qRT-PCR和Western blot方法检测miR-122-5p和KDM2A对BMSC成骨相关指标(OPN、OCN和RUNX2)表达情况的影响;茜素红染色和碱性磷酸酶染色检测miR-122-5p和KDM2A对BMSC钙沉积和碱性磷酸酶活性的影响;双荧光素酶实验验证miR-122-5p和KDM2A之间的结合关系;miR-122-5p inhibitor和si-KDM2A共转染研究两者对BMSC成骨分化的影响。结果miR-122-5p mimic和si-KDM2A能够促进BMSC成骨相关基因的表达水平、钙结节沉积及碱性磷酸酶活性,miR-122-5p和KDM2A两者之间存在靶向结合关系,且miR-122-5p能够靶向抑制KDM2A表达,进而促进BMSC成骨相关基因的表达水平、钙结节沉积及碱性磷酸酶活性。结论miR-122-5p靶向抑制KDM2A表达,进而促进BMSC成骨分化。

MicroRNA-122介导Mex3a表达抑制膀胱癌细胞恶性生物学行为的机制研究

目的探究miR-122介导Mex3a表达抑制膀胱癌细胞增殖、迁移,促进细胞凋亡的发生机制。方法通过实时荧光定量聚合酶链反应检测miR-122和Mex3a在正常人膀胱上皮细胞SVHUC-1和人膀胱癌细胞系T24和HT1376中的表达。构建过表达miR-122和低表达Mex3a的T24细胞,并通过CCK-8法、细胞划痕实验和流式细胞术评估miR-122和Mex3a对膀胱癌细胞增殖、迁移和凋亡的影响。双萤光素酶实验验证miR-122和Mex3a的靶向关系。在过表达miR-122的细胞中进一步过表达Mex3a,检测细胞增殖、迁移、凋亡和PI3K/Akt信号通路的变化。结果SVHUC-1细胞miR-122相对表达量较T24、HT1376细胞高(P<0.05),Mex3a mRNA相对表达量较T24、HT1376细胞低(P<0.05)。miR-122 mimic组miR-122相对表达量较mimic NC组高(P<0.05)。mimic NC组与miR-122 mimic组在0、24、48、72 h的T24细胞吸光度值比较,经重复测量设计的方差分析,结果:①不同时间点的细胞吸光度值有差异(P<0.05);②mimic NC组与miR-122 mimic组的细胞吸光度值有差异(P<0.05),miR-122 mimic组细胞增殖能力较mimic NC组被抑制;③mimic NC组与miR-122 mimic组细胞吸光度值变化趋势有差异(P<0.05)。mimic NC组划痕愈合率较miR-122 mimic组高(P<0.05)。mimic NC组细胞凋亡率较miR-122 mimic组低(P<0.05)。mimic NC组WT-Mex3a相对表达量较miR-122 mimic组高(P<0.05)。mimic NC组Mex3a mRNA相对表达量较miR-122 mimic组高(P<0.05)。si-NC组Mex3a mRNA相对表达量较si-Mex3a组高(P<0.05)。si-NC组p-PI3K、p-Akt蛋白较si-Mex3a组高(P<0.05)。si-NC组与si-Mex3a组在0、24、48和72 h的T24细胞吸光度值比较,经重复测量设计的方差分析,结果:①不同时间点间的细胞吸光度值有差异(P<0.05);②si-NC组与si-Mex3a组细胞吸光度值有差异(P<0.05);③si-NC组与si-Mex3a组细胞吸光度值变化趋势有差异(P<0.05)。si-NC组划痕愈合率较si-Mex3a组高(P<0.05)。si-NC组细胞凋亡率较si-Mex3a组低(P<0.05)。miR-122 mimic+oe-Mex3a组Mex3a mRNA相对表达量较miR-122 mimic+oe-N组高(P<0.05)。miR-122 mimic+oe-NC组p-PI3K、p-AKT蛋白相对表达量较miR-122 mimic+oe-Mex3a组低(P<0.05)。miR-122 mimic+oe-NC组与miR-122 mimic+oe-Mex3a组在0、24、48、72 h的T24细胞吸光度值比较,经重复测量设计的方差分析,结果:①不同时间点的细胞吸光度值有差异(P<0.05);②miR-122 mimic+oe-NC组与miR-122 mimic+oe-Mex3a组细胞吸光度值有差异(P<0.05),miR-122 mimic+oe-Mex3a组较miR-122 mimic+oe-NC组细胞增殖能力增强;③miR-122 mimic+oe-NC组与miR-122 mimic+oe-Mex3a组细胞吸光度值变化趋势有差异(P<0.05)。miR-122 mimic+oe-NC组划痕愈合率较miR-122 mimic+oe-Mex3a组低(P<0.05)。miR-122 mimic+oe-NC组细胞凋亡率较miR-122 mimic+oe-Mex3a组高(P<0.05)。结论miR-122可能通过抑制Mex3a的表达,抑制PI3K/Akt信号通路,从而抑制膀胱癌细胞的增殖、迁移,并促进凋亡。

MicroRNA-122-5P通过靶向MMP-9抑制TPA诱导的SW480细胞侵袭迁移能力

目的:研究miR-122-5p对TPA诱导人结直肠癌SW480细胞MMP-9表达及侵袭迁移的影响。方法:利用生物信息学筛选结直肠癌差异基因,预测其靶基因miRNA。用TPA(100nM)处理SW480细胞,通过RT-qPCR、Western blot法检测基因和蛋白表达水平;明胶酶谱法检测MMP-9细胞外分泌情况;Transwell检测细胞侵袭和迁移能力。结果:MMP-9在结肠癌组织中高表达,筛选出上游靶基因miR-122-5P;TPA诱导MMP-9 mRNA表达呈时间依赖性上调(P<0.01),诱导miR-122-5p的表达下调(P<0.01);过表达miR-122-5p明显下调TPA诱导的MMP-9 mRNA和蛋白表达(P<0.05),且MMP-9胞外分泌减少,细胞的侵袭、迁移能力显著下降(P<0.01)。结论:miR-122-5p可能通过调控TPA诱导MMP-9的表达,进而抑制结直肠癌SW480细胞侵袭和迁移能力,为克服结直肠癌转移研究提供新的思路。

miR-122在消化系统肿瘤作用的研究进展

微小RNAs(MicroRNAs,MiRNAs)是一类在转录后水平调节基因表达的小型非编码RNA,其参与肿瘤发生、血管生成及转移,并且在消化系统肿瘤复发和耐药过程中起重要作用[1]。miR-122是一种有22个核苷酸的miRNA,其在人类肝脏胚胎发育过程中急剧上调,在肝细胞的发育和分化中起重要作用,其对肿瘤相关基因及信号通路的靶向调节是肿瘤发生发展的关键。miR-122在消化系统肿瘤发生、发展中的重要作用已被广泛报道,并被认为是治疗肿瘤的潜在靶点。本文就miR-122与消化系统肿瘤的关系进行一简要综述。