MicroRNA-133b调节FGFR1-ERK1/2-SOX2信号通路对裸鼠肺癌NCI-H1975细胞移植瘤生长的影响

目的探讨microRNA-133b(miR-133b)对裸鼠肺癌NCI-H1975细胞移植瘤生长的抑制作用以及对成纤维细胞生长因子受体1-细胞外信号调节激酶1/2-性别决定区Y-box蛋白2信号通路(FGFR1-ERK1/2-SOX2)的影响。方法q RT-PCR检测人肺成纤维细胞、肺癌细胞株miR-133b表达。miR-133b过表达NCIH1975细胞。将NCI-H1975细胞分为对照组、mimic NC组、miR-133b mimic组、miR-133b mimic+pcDNA3.1组、miR-133b mimic+pcDNA3.1 FGFR1组。CCK-8法检测NCI-H1975细胞增殖抑制率,Transwell实验观察NCI-H1975细胞侵袭、迁移情况。复制裸鼠移植瘤模型并分组,将裸鼠分为对照组、mimic NC组、miR-133b mimic组、miR-133b mimic+AZD4547组,观察各组裸鼠肿瘤体积与重量,HE染色观察各组裸鼠肿瘤组织变化,TUNEL检测肿瘤组织细胞凋亡情况,免疫组织化学法观察裸鼠肿瘤组织Ki-67、Cyclin D1、VEGF-A的表达,Western blotting检测各组肿瘤组织FGFR1、p-ERK1/2/ERK1/2、SOX2蛋白相对表达量。结果与人肺成纤维细胞HLF-α比较,肺癌细胞株NCI-H1975、A427、NGE-1、A549中miR-133b mRNA相对表达量降低(P<0.05),其中以NCI-H1975细胞中miR-133b mRNA相对表达量最低。miR-133b mimic组miR-133b mRNA相对表达量较对照组和mimic NC组升高(P<0.05)。miR-133b可通过负调控FGFR1抑制肺癌NCIH1975细胞增殖和迁移。miR-133b mimic组移植瘤重量较对照组降低、体积缩小,miR-133b mimic+AZD4547组移植瘤重量较miR-133b mimic组降低、体积缩小(P<0.05)。miR-133b mimic组空泡样变性程度较对照组、mimic NC组减轻(P<0.05),miR-133b mimic+AZD4547组空泡样变性程度较miR-133b mimic组减轻(P<0.05)。miR-133b mimic组肿瘤组织细胞凋亡率较对照组升高(P<0.05),miR-133b mimic+AZD4547组肿瘤组织细胞凋亡率较miR-133b mimic组升高(P<0.05)。miR-133b mimic组VEGF-A、Cyclin D、Ki-67阳性细胞比例较对照组降低(P<0.05),miR-133b mimic+AZD4547组VEGF-A、Cyclin D、Ki-67阳性细胞比例较miR-133b mimic组降低(P<0.05)。miR-133b mimic组FGFR1、p-ERK1/2/ERK1/2、SOX2蛋白相对表达量较对照组降低(P<0.05),miR-133b mimic+AZD4547组FGFR1、p-ERK1/2/ERK1/2、SOX2蛋白相对表达量较miR-133b mimic组降低(P<0.05)。结论miR-133b过表达可能通过抑制FGFR1-ERK1/2-SOX2轴,抑制裸鼠肺癌NCI-H1975细胞移植瘤生长。

microRNA-133b对胶质母细胞瘤细胞迁移和侵袭的影响

目的探讨microRNA(miR)-133b对胶质母细胞瘤(GBM)细胞的作用,并分析其作用的分子机制。方法应用实时逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测20例人GBM标本及正常人脑胶质细胞系HEB中miR-133b的表达水平。Transwell侵袭实验评估miR-133b对GBM细胞迁移和侵袭的影响。Western blotting和荧光素酶报告实验来确定miR-133b的靶基因。结果与正常人脑胶质细胞系HEB比较,miR-133b在GBM标本中的相对表达量明显降低(1.0±0.17 vs.2.42±0.69,P<0.05);转染miR-133b mimic后GBM迁移和侵袭跨膜细胞数分别为66±17和60±14,均低于转染NC组(P<0.05);与转染NC组比较,转染miR-133b mimic后MMP-14蛋白表达水平明显下降(P<0.05)。荧光素酶报告基因分析实验进一步验证mir-133b靶向调节MMP-14。结论 miR-133b通过直接靶向调节MMP-14抑制GBM的迁移和侵袭能力,可作为GBM诊断和治疗的候选靶点。

microRNA-133b调节FOXL2基因的表达促进Hela细胞的增殖

目的:探讨micro RNA-133b(mi R-133b)是否调控FOXL2基因的表达,阐明mi R-133b及FOXL2在Hela细胞(宫颈癌细胞)中的具体作用机制。方法:生物信息学方法分析mi R-133b是否靶向作用于FOXL2基因。体外培养Hela细胞,分实验组(mi R-133b组)和对照组(negative control组,NC组),分别瞬时转染mi R-133b及NC mimics,48 h后用Trizol及RIPA法分别提取细胞总RNA及总蛋白,RT-PCR技术检测两组FOXL2 m RNA的表达水平,Western Blot技术检测两组FOXL2蛋白的表达水平,MTT法连续7 d分别测两组Hela细胞的增殖活力。结果:mi R-133b可能作用于FOXL2 m RNA 3′UTR区域。实验组FOXL2m RNA和FOXL2蛋白表达水平较对照组均明显降低(P<0.01),实验组Hela细胞的增殖活力较对照组明显增强(P<0.01)。结论:过表达的mi R-133b通过结合并影响Hela细胞中FOXL2 m RNA靶向抑制FOXL2蛋白的表达促进Hela细胞的增殖,这可能为宫颈癌的诊疗提供作用靶点。

microRNA-133b过表达载体的构建及在Eca109细胞的表达鉴定

目的构建携带Human Hsa-mir-133b基因的miRNA干扰慢病毒载体(pl KD-Ubc-e GFP-U6-shRNA),并成功转染食管癌Eca109细胞株。为研究微小RNA133b(miR-133b)对食管癌Eca109细胞的作用奠定基础。方法凭据Human Hsa-miR-133b基因的转录目录,设计shRNA的靶点并进行引物的合成。将单链的引物退火成带粘性末端的双链片段,将其衔接于双酶切的RNA干扰载体,替换原有的ccd B毒性基因,用重组的质粒转染感受态细胞,并测定序列。筛选出来的阳性克隆即为miR-133b的干扰载体质粒。提取测序结果准确的克隆里含有的载体质粒。将重组的载体质粒转染至食管癌Eca109细胞。结果成功构建了miR-133b干扰慢病毒载体,重组质粒进行PCR鉴定及序列测定证实DNA oligo成功连到载体中,并实现食管癌ECA109细胞中重组载体质粒的稳定转染。在荧光倒置显微镜下分别观察到重组空载体组转染的Eca109细胞和过表达载体组转染的Eca109细胞发出不同强度的带有绿色荧光的信号。结论该实验成功构建了人miR-133b基因的干扰慢病毒载体,采取脂质体法对食管癌Eca109细胞进行质粒转染,获得高表达,为进一步研究miR-133b的功能奠定牢固的基础。

MicroRNA-133b抑制人横纹肌肉瘤细胞增殖与迁移的研究

该研究首先通过Real-time RT-PCR检测发现,microRNA-133b在人横纹肌肉瘤细胞RD和A204中的表达量比正常肌肉组织中的表达量明显降低,再通过阳离子脂质体介导的方法将microRNA-133b转染入横纹肌肉瘤细胞RD和A204细胞中,并应用MTS法、Transwell法研究发现,microRNA-133b可明显抑制RD和A204细胞的增殖与迁移;采用Western blot法检测转染后细胞内与增殖、迁移及细胞周期相关的蛋白表达,发现microRNA-133b能下调RD和A204细胞中的LIMand SH3 protein 1(LASP1)、c-MET、p-MET、p-AKT、p-ERK1/2、p-Rb的表达水平,并降低RD和A204细胞中细胞周期蛋白CDK4和CDK6表达量。该研究表明,microRNA-133b是通过下调LASP1、c-MET和p-MET的表达水平,影响c-MET下游信号分子p-AKT、p-ERK1/2的表达水平,同时还下调细胞周期相关蛋白如CDK4、CDK6、p-Rb等的表达,从而影响RD和A204细胞的增殖与迁移。

MicroRNA-196b、IGFBP-3在非小细胞肺癌组织中的表达及与预后关系

目的 探究microRNA-196b(miR-196b)、胰岛素样生长因子结合蛋白-3(IGFBP-3)在非小细胞肺癌(NSCLC)组织中的表达及与预后的关系。方法 选取2020年4月—2022年4月在无锡市第二人民医院手术治疗的NSCLC患者78例。收集患者的病历资料,采用实时荧光定量聚合酶链反应检测癌组织、癌旁组织中miR-196b、IGFBP-3的表达。所有患者随访12个月,根据预后结局分为进展组、稳定组。筛查NSCLC患者预后的影响因素,评估组织中miR-196b、IGFBP-3表达对NSCLC患者预后的预测效能。分析癌组织中miR-196b、IGFBP-3不同表达患者生存曲线的差异。结果 进展组临床分期Ⅲ期占比、术前淋巴结转移率均高于稳定组(P <0.05)。进展组癌组织miR-196b相对表达量高于稳定组(P <0.05),IGFBP-3阳性表达率低于稳定组(P <0.05)。癌组织miR-196b相对表达量高于癌旁组织(P <0.05),IGFBP-3阳性表达率低于癌旁组织(P <0.05)。多因素逐步Logistic回归分析结果显示:临床分期[O^R=3.684(95%CI:1.259,10.778)]、术前淋巴结转移[O^R=3.557(95%CI:1.216,10.408)]、癌组织miR-196b表达[O^R=3.979(95%CI:1.359,11.641)]是NSCLC患者预后的危险因素(P <0.05),癌组织IGFBP-3表达阳性[O^R=0.220(95%CI:0.075,0.642)]是NSCLC患者预后的保护因素(P <0.05)。癌组织miR-196b、IGFBP-3及联合预测NSCLC患者预后的敏感性分别为66.25%(95%CI:0.512,0.797)、60.00%(95%CI:0.496,0.781)、87.50%(95%CI:0.725,0.963),特异性分别为69.74%(95%CI:0.534,0.825)、76.32%(95%CI:0.603,0.892)、72.37%(95%CI:0.576,0.861),曲线下面积分别为0.703、0.680、0.805。miR-196b低表达组生存情况优于高表达组(P <0.05)。IGFBP-3阳性表达组生存情况优于阴性表达组(P <0.05)。结论 NSCLC患者癌组织miR-196b、IGFBP-3表达与预后相关,且联合预测NSCLC患者预后效能良好。

冠心病病人外周血微RNA-133b表达与预后的关系分析

目的 探究冠心病病人外周血微RNA-133b(miR-133b)表达水平,并分析其表达与病人预后的关系。方法 选取2019年7月至2021年1月于华北石油管理局总医院就诊的冠心病病人95例,其中稳定性冠心病(SACD)病人54例为SACD组,急性冠状动脉综合征(ACS)41例为ACS组,另选同期该院进行体检的健康人群60例作为对照组。采用实时荧光定量PCR法检测血清miR-133b水平;随访6个月,根据是否出现主要心脏不良事件,分为预后不良组(出现主要心脏不良事件,33例)和预后良好组(未出现主要心脏不良事件,62例)。采用Spearman相关性分析检验血清miR-133b水平与Gensini评分的关系;采用多因素logistic回归分析影响冠心病病人预后的危险因素;采用受试者操作特征曲线(ROC曲线)分析血清miR-133b水平对冠心病病人预后不良的预测价值。结果 SACD组、ACS组身体质量指数、高血压、吸烟史及血脂异常者比例高于对照组(P<0.05),ACS组Gensini评分、病变支数≥3支占比高于SACD组(P<0.05)。ACS组、SACD组血清miR-133b(1.59±0.15比1.36±0.12比1.02±0.05)水平均高于对照组(P<0.05),ACS组血清miR-133b水平高于SACD组(P<0.05)。SACD组病人血清miR-133b水平与Gensini评分呈正相关(r=0.58,P<0.001),ACS组病人血清miR-133b水平与Gensini评分也呈正相关(r=0.57,P<0.001)。预后不良组病人Gensini评分、血清miR-133b水平及病变支数≥3支占比高于预后良好组(P<0.05)。Gensini评分、病变支数、miR-133b均为影响冠心病病人预后的危险因素(P<0.05)。血清miR-133b水平预测冠心病病人预后不良的曲线下面积为0.83,最佳截断值为1.55,灵敏度高达97.0%,特异度为64.5%。结论 冠心病病人血清miR-133b水平升高,对病人的预后不良有一定的预测价值。

早发型子痫前期患者血清microRNA-26b表达及其与胎盘早剥发生的关系

目的分析早发型子痫前期患者血清microRNA-26b(miR-26b)表达及其与胎盘早剥发生的关系。方法选取2019年8月至2022年8月荆州市中心医院收治的102例早发型子痫前期患者作为研究对象。检测所有患者miR-26b相对表达量,随访至患者分娩,根据胎盘早剥发生情况分成胎盘早剥组与非胎盘早剥组,分析早发型子痫前期患者血清miR-26b表达及其与胎盘早剥发生的关系。结果随访至产妇分娩,102例早发型子痫前期患者胎盘早剥发生率为17.65%(18/102)。胎盘早剥组血清miR-26b相对表达量高于非胎盘早剥组(P<0.05)。根据确诊疾病时血清miR-26b四分位数将患者分为Q1组(n=25)、Q2组(n=27)、Q3组(n=24)及Q4组(n=26),Q4组胎盘早剥发生率高于Q1组、Q2组及Q3组(P<0.05)。经点二列相关性分析检验,血清miR-26b与早发型子痫前期患者胎盘早剥发生率呈正相关(r=0.458,P<0.05)。绘制受试者工作特征(ROC)曲线,血清miR-26b对早发型子痫前期患者胎盘早剥具有中等预测价值,且当血清miR-26b相对表达量为2.465时,可获得最佳预测价值。结论早发型子痫前期患者血清miR-26b与胎盘早剥发生有关,检测血清miR-26b相对表达量能为预测胎盘早剥发生提供重要价值。

RohA信号通路介导miR-133b调控脑缺血再灌注后血脑屏障通透性

目的:探究miR-133b在脑缺血再灌注后血脑屏障通透性调控中的作用及其机制。方法:采用大脑中动脉闭塞再灌注(MCAO/R)小鼠模型,小鼠脑内注射miR-133b agomir进行miR-133b过表达,TTC染色检测miR-133b过表达对小鼠脑梗死体积的影响;实时定量PCR检测MCAOR小鼠缺血侧脑组织及外周血miR-133b表达水平;采用悬挂实验评估miR-133b过表达对MCAO/R模型小鼠神经功能改善的影响;Western blot及ELISA检测miR-133b过表达对MCAO/R模型小鼠脑内RohA、claudin-5、ZO-1表达水平的影响;采用伊文思蓝渗透法评估小鼠血脑屏障通透性。结果:在MCAO/R模型小鼠缺血侧脑皮层组织与血浆中的miR-133b表达水平均降低,miR-133b过表达可显著减少MCAO/R小鼠脑梗死的体积,改善小鼠神经功能损害;miR-133b过表达可使MCAO/R小鼠脑内缺血区RohA、claudin-5、ZO-1蛋白表达显著降低。结论:小鼠脑缺血再灌注后体内miR-133b表达水平下降,miR-133b过表达具有降低脑缺血再灌注后脑血屏障通透性,发挥抗脑缺血作用,其机制可能是通过RohA信号通路介导的。

血浆lncRNA SNHG12、miR-133b预测乳腺癌新辅助治疗效果的价值

目的探讨血浆长非编码RNA小核仁宿主基因12(lncRNA SNHG12)、微小RNA(miR)-133b预测乳腺癌新辅助治疗效果的价值。方法选取2022年1月至2023年1月在该院进行新辅助治疗的86例乳腺癌患者作为乳腺癌组,依据新辅助治疗效果分为病理学完全缓解(pCR)组和non-pCR组。另选取同期在该院进行健康体检的50例健康女性作为对照组。检测并比较所有研究对象lncRNA SNHG12、miR-133b表达水平。采用多因素Logistic逐步回归模型分析影响乳腺癌新辅助治疗效果的因素。绘制受试者工作特征(ROC)曲线分析血浆lncRNA SNHG12、miR-133b单独及联合检测对乳腺癌新辅助治疗效果的预测价值。结果乳腺组血浆lncRNA SNHG12表达水平高于对照组,miR-133b表达水平低于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。pCR组纳入34例患者,non-pCR组纳入52例患者。pCR组与non-pCR组雌激素受体、孕激素受体、人表皮生长因子受体-2(HER-2)、细胞增殖核抗原、分子分型比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。pCR组lncRNA SNHG12表达水平低于non-pCR组,miR-133b表达水平高于non-pCR组,差异均有统计学意义(P<0.05)。多因素Logistic逐步回归分析结果显示,分子分型为HER-2过表达型、lncRNA SNHG12表达水平升高、miR-133b表达水平降低是乳腺癌新辅助治疗效果的危险因素(P<0.05)。ROC曲线分析结果显示,血浆lncRNA SNHG12、miR-133b单独检测预测乳腺癌患者新辅助治疗效果的曲线下面积(AUC)分别为0.850、0.951,均低于二者联合检测的0.963。86例乳腺癌中Luminal A型11例(pCR 1例、non-pCR 10例)、Luminal B型43例(pCR 12例、non-pCR 31例)、HER-2过表达型16例(pCR 14例、non-pCR 2例)、三阴型16例(pCR 7例、non-pCR 9例)。ROC曲线分析lncRNA SNHG12、miR-133b对4种不同亚型乳腺癌新辅助治疗效果的预测效能结果显示,血浆lncRNA SNHG12、miR-133b单独及联合检测预测Luminal B型乳腺癌患者新辅助治疗效果的AUC分别为0.753、0.974、0.981,预测HER-2过表达型乳腺癌患者新辅助治疗效果的AUC分别为0.804、0.857、0.893。预测三阴型乳腺癌患者新辅助治疗效果的AUC分别为0.849、1.000、1.000。结论乳腺癌患者血浆lncRNA SNHG12表达增高,miR-133b表达降低,二者联合检测对乳腺癌新辅助治疗效果具有较好的预测价值。

MicroRNA-26b下调MALAT-1抑制乳腺癌MCF-7细胞恶性生物学行为的机制研究

目的 探索microRNA-26b(miR-26b)通过MALAT-1抑制乳腺癌MCF-7细胞恶性生物学行为的分子机制。方法 以乳腺癌细胞系MCF-7作为研究对象,采用慢病毒LV-miR-26b-ctrl和LV-miR-26b转染肿瘤细胞,逆转录聚合酶链反应检测MALAT-1、miR-26a和miR-26b的mRNA表达,平板克隆形成实验、CCK-8细胞增殖实验、软琼脂成瘤实验、细胞划痕实验、Transwell细胞侵袭实验分别检测肿瘤细胞的增殖、体外成瘤、迁移和侵袭能力。结果 E2组与Mock组MCF-7细胞24、48、72和96 h时吸光度值比较,经重复测量设计的方差分析,结果:(1)不同时间点吸光度值比较,差异有统计学意义(P <0.05);(2)两组吸光度值比较,差异有统计学意义(P <0.05),与Mock组比较,E2组72和96 h时细胞增殖能力较Mock组提高(P <0.05);(3)两组吸光度值变化趋势比较,差异有统计学意义(P <0.05)。与Mock组相比,E2组MALAT-1相对表达量升高(P <0.05),miR-26a、miR-26b mRNA相对表达量下降(P <0.05)。高表达miR-26b的乳腺癌患者的生存情况优于低表达miR-26b组,死亡风险更低(P <0.05),低表达miR-26a组患者的生存情况优于高表达miR-26a组(P <0.05),用Cox比例风险回归模型,将miR-26a作为一个独立的预后因素来比较,两组患者的死亡风险比较无差异(P>0.05)。与LV-miR-26b-ctrl组比较,LV-miR-26b-ctrl/E2组乳腺癌细胞的MALAT-1相对表达量升高(P <0.05),与LV-miR-26b-ctrl/E2组比较,LV-miR-26b/E2组乳腺癌细胞的MALAT-1相对表达量降低(P <0.05)。LV-miR-26b-ctrl组、LV-miR-26b-ctrl/E2组、LV-miR-26b/E2组细胞在24、48、72和96 h时吸光度值比较,经重复测量设计的方差分析,结果:(1)不同时间点吸光度值比较,差异有统计学意义(P <0.05);(2)各组吸光度值比较,差异有统计学意义(P <0.05),LV-miR-26b-ctrl/E2组72和96 h时细胞增殖能力明显较LV-miR-26b-ctrl组增强(P <0.05),LV-miR-26b/E2组72和96 h时细胞增殖能力较LV-miR-26b-ctrl/E2组降低(P <0.05);(3)各组吸光度值变化趋势比较,差异有统计学意义(P <0.05)。E2处理后的LV-miR-26b-ctrl肿瘤细胞增殖和体外成瘤能力增强。与LV-miR-26bctrl/E2组比较,LV-miR-26b/E2组肿瘤细胞的增殖和体外成瘤能力降低。在24 h时,LV-miR-26b-ctrl/E2组细胞划痕间隙较LV-miR-26b-ctrl组变窄,LV-miR-26b/E2组24 h时细胞的划痕间隙较LV-miR-26bctrl/E2组明显增宽。LV-miR-26b-ctrl/E2组Transwell小室下方的乳腺癌细胞数量较LV-miR-26b-ctrl组增多,LV-miR-26b/E2组的肿瘤细胞数量较LV-miR-26b-ctrl/E2组减少。结论 下调MALAT-1可能是miR-26b抑制乳腺癌恶性生物学行为的分子机制之一,miR-26b有望成为乳腺癌治疗的调控靶点。

MicroRNA-133表达对人胆管癌细胞QBC939迁移和侵袭的影响

目的探讨MicroRNA-133(miR-133)表达对人胆管癌细胞QBC939迁移、侵袭的影响,探寻其中可能存在的分子机制。方法实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测人胆管癌细胞QBC939 miR-133各亚型的表达,选择适合的亚型进行实验。将人胆管癌细胞QBC939分为3组:干扰组(转染miR-133a-5p抑制物),阴性对照组(转染miR-133a-5p模拟物)及空白对照组,qRT-PCR检测3组miR-133a-5p mRNA相对表达量;Transwell实验检测各组人胆管癌细胞迁移和侵袭的能力;Western blotting检测3组人胆管癌细胞中LASP-1蛋白家族成员(LIM、SH3-1蛋白)的相对表达量。结果miR-133的3种亚型中,miR-133a-5p mRNA相对表达量最高(P<0.05)。干扰组人胆管癌细胞的miR-133a-5p mRNA相对表达量(0.70±0.08)低于阴性对照组及空白对照组(P<0.05)。与阴性对照组及空白对照组比较,干扰组细胞迁移数(72.0±11.0)和侵袭数(20.0±3.0)明显减少(P<0.05)。与阴性对照组及空白对照组比较,干扰组人胆管癌细胞的LIM蛋白相对表达量最高,SH3-1蛋白相对表达量最低(P<0.05)。结论miR-133a-5p能调控LIM蛋白、SH3-1蛋白的表达。miR-133a-5p低表达能抑制人胆管癌细胞QBC939的迁移和侵袭,这可能是通过miR-133a-5p对LASP-1蛋白表达的调控实现的。miR-133a-5p有望成为胆管癌靶向治疗的新靶点。

地红方通过miR-133b/DUSP1/JNK通路干预糖尿病肾病氧化应激损伤

目的研究地红方对糖尿病肾病细胞模型氧化应激损伤的影响。方法地红方含药血清制备,小鼠肾小球系膜细胞常规培养、传代。按以下分组:对照组(5.5mmol/L葡萄糖+正常血清)、高糖组(30mmol/L葡萄糖+正常血清)、地红方低剂量组(30mmol/L葡萄糖+5%地红方含药血清)、地红方中剂量组(30mmol/L葡萄糖+10%地红方含药血清)、地红方高剂量组(30mmol/L葡萄糖+20%地红方含药血清)。采用实时荧光定量PCR检测miR-133b、DUSP1 mRNA表达。Western blotting检测DUSP1、p-JNK、Drp1、Fis1蛋白表达。Elisa检测SOD、MDA表达。结果与高糖组比较,地红方组miR-133b、MDA、p-JNK、Drp1、Fis1表达明显下降(P<0.05),而DUSP1、SOD表达显著升高(P<0.05)。结论地红方可通过miR-133b/DUSP1/JNK通路调控线粒体分裂改善糖尿病肾病氧化应激损伤。

MicroRNA-206、microRNA-29b、microRNA-133a的表达及对骨折患者延迟愈合的预测价值

目的分析microRNA-206(miR-206)、microRNA-29b(miR-29b)、microRNA-133a(miR-133a)的表达及对骨折患者延迟愈合的预测价值,为临床应用提供依据。方法选取2020年1月—2020年12月四川省医学科学院·四川省人民医院收治的123例骨折延迟愈合患者作为观察组,另取该院100例骨折愈合正常患者作为对照组。采用实时荧光定量聚合酶链反应检测患者血清miR-206、miR-29b、miR-133a的表达;绘制受试者工作特征(ROC)曲线,分析各指标单独及联合预测骨折延迟愈合的价值。结果观察组血清miR-206、miR-29b、miR-133a相对表达量高于对照组(P<0.05)。miR-206、miR-29b、miR-133a预测骨折延迟愈合的准确性分别为82.79%、83.90%和86.67%,较3者联合预测准确性(96.72%)低。3者联合预测骨折延迟愈合的敏感性和特异性分别为95.94%(95%CI:0.922,0.986)、96.00%(95%CI:0.937,0.993),高于单独预测。结论骨折延迟愈合患者血清miR-206、miR-29b、miR-133a相对表达量较高;3者联合检测可有效预测患者延迟愈合,具有较高的临床应用价值。

血清microRNA-27a、核因子-κB与动脉瘤性蛛网膜下腔出血患者介入栓塞治疗疗效的关系

目的探讨血清microRNA-27a(miR-27a)、核因子-κB(NF-κB)与动脉瘤性蛛网膜下腔出血患者介入栓塞治疗疗效的关系。方法回顾性分析2021年4月—2023年4月在枣庄市立医院接受介入治疗的162例动脉瘤性蛛网膜下腔出血患者的病历资料,术后2周评估疗效并分为有效组和无效组,比较两组患者的血清miR-27a、NF-κB水平,筛查动脉瘤性蛛网膜下腔出血患者介入栓塞治疗效果的影响因素,分析血清miR-27a、NF-κB对动脉瘤性蛛网膜下腔出血患者介入栓塞治疗效果的评估价值。结果162例动脉瘤性蛛网膜下腔出血患者中,显效62例,有效78例,无效22例。两组患者性别、年龄、体质量指数、高血压家族史、动脉瘤直径、动脉瘤颈宽、动脉瘤位置、发病至介入栓塞治疗时间、Hunt-Hess分级、血管内皮生长因子、一氧化氮合酶及内皮素-1比较,经χ^(2)/t检验,差异均无统计学意义(P>0.05)。无效组患者颅脑CT FisherⅢ~Ⅳ级占比高于有效组(P<0.05),NF-κB、miR-27a相对表达量高于有效组(P<0.05)。多因素逐步Logistic回归分析结果显示:颅脑CT Fisher分级[OR=4.513(95%CI:1.801,11.304)]、NF-κB相对表达量[OR=4.406(95%CI:1.759,11.036)]和miR-27a相对表达量[OR=4.491(95%CI:1.793,11.248)]是动脉瘤性蛛网膜下腔出血患者介入栓塞治疗无效的危险因素(P<0.05)。受试者工作特征曲线分析结果显示,血清miR-27a、NF-κB和联合预测动脉瘤性蛛网膜下腔出血患者介入栓塞治疗效果的敏感性分别为67.9%(95%CI:0.541,0.759)、60.3%(95%CI:0.529,0.714)、72.5%(95%CI:0.641,0.816),特异性分别为77.1%(95%CI:0.681,0.863)、84.2%(95%CI:0.752,0.937)、96.1%(95%CI:0.814,0.998),曲线下面积分别为0.746(95%CI:0.631,0.854)、0.735(95%CI:0.629,0.851)、0.851(95%CI:0.772,0.958)。结论血清miR-27a和NF-κB的异常表达与动脉瘤性蛛网膜下腔出血患者经血管介入栓塞术治疗的疗效反应相关。联合检测血清miR-27a与NF-κB可提高对动脉瘤性蛛网膜下腔出血患者介入栓塞治疗效果的预测价值。

Long Non-coding RNA PCED1B Antisense RNA 1 Promotes Cell Proliferation and Invasion in Hepatocellular Carcinoma by Regulating the MicroRNA-34a/CD44 Axis

Objective This study aimed to examine the role of long non-coding RNA PCED1B antisense RNA 1(PCED1B-AS1)in the development of hepatocellular carcinoma(HCC).Methods A total of 62 pairs of HCC tissues and adjacent non-tumor tissues were obtained from 62 HCC patients.The interactions of PCED1B-AS1 and microRNA-34a(miR-34a)were detected by dual luciferase activity assay and RNA pull-down assay.The RNA expression levels of PCED1B-AS1,miR-34a and CD44 were detected by RT-qPCR,and the protein expression level of CD44 was determined by Western blotting.The cell proliferation was detected by cell proliferation assay,and the cell invasion and migration by transwell invasion assay.The HCC tumor growth after PCED1B-AS1 was downregulated was determined by in vivo animal study.Results PCED1B-AS1 was highly expressed in HCC tissues,which was associated with poor survival of HCC patients.Furthermore,PCED1B-AS1 interacted with miR-34a in HCC cells,but they did not regulate the expression of each other.Additionally,PCED1B-AS1 increased the expression level of CD44,which was targeted by miR-34a.The cell proliferation and invasion assay revealed that miR-34a inhibited the proliferation and invasion of HCC in vitro,while CD44 exhibited the opposite effects.Furthermore,PCED1B-AS1 suppressed the role of miR-34a.Moreover,the knockdown of PCED1B-AS1 repressed the HCC tumor growth in nude mice in vivo.Conclusion PCED1B-AS1 may play an oncogenic role by regulating the miR-34a/CD44 axis in HCC.

微小RNA-133b对心肌纤维化的影响

目的研究微小RNA-133b(miR-133b)对心肌纤维化的影响。方法选取人心肌成纤维细胞(CFs),采用CCK8检测过表达及敲低miR-133b时细胞增殖情况,qRT-PCR及Westernblot检测结缔组织生长因子(CTGF)、α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、Ⅰ型胶原蛋白(collagenⅠ)及Ⅲ型胶原蛋白(collagenⅢ)的表达水平;生物学软件预测miR-133b的靶基因,双荧光素酶报告实验证实miR-133b与靶基因的直接调控作用。结果qRT-PCR检测结果显示,转染miR-133bmimic后miR-133b的表达水平明显高于阴性对照组(t=26.219,P=0.000),转染miR-133binhibitor后miR-133b的表达水平明显低于阴性对照组(t=6.738,P=0.003)。转染CFs21、45、69、93和117h后,与阴性对照组相比,miR-133bmimic组CFs增殖能力明显降低,而miR-133binhibitor组CFs增殖水平明显上升(P均<0.05)。与阴性对照组相比,过表达miR-133b后,CTGF(t=9.213,P=0.001;t=8.195,P=0.001)、α-SMA(t=6.511,P=0.003;t=4.434,P=0.011)、collagenⅠ(t=3.172,P=0.034;t=4.053,P=0.015)及collagenⅢ(t=6.404,P=0.003;t=5.319,P=0.006)的mRNA和蛋白表达水平均明显下调;敲低miR-133b后,CTGF(t=9.439,P=0.001;t=14.100,P=0.000)、α-SMA(t=4.519,P=0.011;t=4.377,P=0.012)、collagenⅠ(t=5.966,P=0.004;t=5.514,P=0.005)及collagenⅢ(t=4.622,P=0.010;t=4.996,P=0.008)的mRNA和蛋白表达水平均明显上升。共转染miR-133bmimic和WT3’UTR表达载体细胞的相对荧光素酶活性明显低于共转染mimiccontrol和WT3’UTR表达载体的细胞(t=5.654,P=0.005),共转染miR-133bmimic和MUT3’UTR表达载体细胞的相对荧光素酶活性与共转染mimiccontrol和MUT3’UTR表达载体的细胞差异无统计学意义(t=0.380,P=0.724)。结论miR-133b可能是通过靶向抑制CTGF来影响CFs的活化增殖,从而改善心肌纤维化。

慢性心力衰竭患者血清miR-133a、miR-133b水平与心功能和心肌重构的关系

目的探讨慢性心力衰竭(CHF)患者血清miR-133a、miR-133b水平与心功能、心肌重构的关系。方法研究对象为132例CHF患者。心功能NYHA分为Ⅰ~Ⅱ级43例,Ⅲ级52例,Ⅳ级37例。超声心动图检查检测心功能指标心输出量(CO)、左室射血分数(LVEF)及左室舒张末期内径(LVEDD)、左心房内径(LAP)、左心室后壁厚度(LVPW)、左室质量指数(LVMI)、左室重构指数(LVRI)。实时荧光定量PCR法检测血清miR-133a、miR-133b。结果 CHF患者血清miR-133a、miR-133b表达量随心功能分级升高而升高(P均<0.05)。LVEDD、LAP、LVPW、LVMI随心功能分级升高而升高,LVRI、CO、LVEF随心功能分级升高而降低(P均<0.05)。血清miR-133a、miR-133b相对表达量与CO、LVEF均呈负相关(r分别为-0.584、-0.622,-0.477、-0.514,P均<0.05)。miR-133a、miR-133b相对表达量与LAP、LVPW、LVMI均呈正相关(r分别为0.724、0.638,0.681、0.611,0.596、0.573,P均<0.05)。血清miR-133a、miR-133b相对表达量与LVEDD、LVRI无关(P均>0.05)。结论 CHF患者血清miR-133a、miR-133b表达量随心功能分级升高而升高。检测CHF患者血清miR-133a、miR-133b有助于判断患者心室重构情况。

抑制miR-133b通过靶向FOXP3对PD大鼠调节性T淋巴细胞、炎性反应和神经元凋亡的影响

目的探究抑制微小RNA(microRNA,miR)-133b通过靶向叉头盒蛋白3(forkhead box protein 3,FOXP3)对帕金森病(Parkinson's disease,PD)大鼠调节性T细胞(regulatory T cells,Treg)的影响。方法32只PD模型大鼠随机分为PD组和PD+miR-133b antagomir组(n=16),健康大鼠16只作为对照组。尾静脉注射miR-133b antagomir(300µg)来抑制miR-133b的水平。检测和比较各组大鼠神经功能、黑质损伤、细胞凋亡、炎性反应、Treg细胞水平、miR-133b、FOXP3 mRNA和蛋白表达水平;通过双荧光素酶报告验证miR-133b和FOXP3的靶向关系。结果PD组的逃避潜伏期、旋转速率、细胞凋亡情况、IL-6、miR133b水平显著高于对照组,穿越次数、IL-10、FOXP3 mRNA和蛋白表达量显著低于对照组(P<0.05)。PD+miR-133b antagomir组的逃避潜伏期、旋转速率、细胞凋亡情况、IL-6、miR-133b水平显著低于PD组,穿越次数、IL-10、FOXP3 mRNA和蛋白表达量显著高于PD组(P<0.05)。miR-133b可与FOXP3靶向结合,提高miR-133b的水平显著抑制FOXP3 mRNA和蛋白表达(P<0.05)。结论抑制miR-133b的水平会促进FOXP3蛋白的表达量,恢复PD大鼠模型中Treg水平,抑制黑质组织的炎性反应,缓解细胞凋亡,保护神经功能。

miR-133a/b和MRP1在耐药性癫痫患者外周血含量的观察

目的:探讨外周血中microRNA-133a/b(miR-133a/b)及多药耐药相关蛋白1(multidrug resistanceassociated protein 1,MRP1)的含量与癫痫患者耐药性的相关关系。方法:生物信息学预测靶向调控MRP1的miRNAs,构建MRP1野生型及突变型3’UTR报告基因载体,双萤光素酶报告基因技术验证预测的miRNAs对MRP1的靶向调控作用。此外,收集95例接受药物治疗的癫痫患者(其中耐药患者37例,非耐药患者58例)外周血,实时荧光定量PCR检测外周血中这些miRNAs的含量,ELISA检测外周血中MRP1蛋白的含量。最后分析这些miRNAs及MRP1含量与癫痫耐药的相关性。结果:Target Scan软件预测miR-133a/b可能靶向调控MRP1,双萤光素酶报告基因技术发现,实验组(共转入miR-133a/b mimics、p MIR-MRP1及pRLTK质粒)较对照组(共转入scramble mimic、p MIR-MRP1及pRLTK质粒)相比,萤光素酶活性分别下调76.9%和64.1%(P<0.01);突变组(共转入miR-133a/b mimics、p MIR-mut-MRP1及pRLTK质粒)较实验组的萤光素酶活性分别上调3.61倍和2.04倍(P<0.01)。实时荧光定量PCR和ELISA检测发现:用药前非耐药性癫痫患者中miR-133a/b的含量分别是耐药性癫痫患者含量的2.18倍和1.74倍(P<0.05),而MRP1在耐药性癫痫患者中的含量是非耐药性癫痫患者中的3.72倍(P<0.01);用药后非耐药性癫痫患者中miR-133a/b的含量分别是耐药性癫痫患者含量的2.76倍和2.95倍(P<0.05),而MRP1在耐药性癫痫患者中的含量是非耐药性癫痫患者中4.99倍(P<0.01)。结论:miR-133a/b可直接靶向调控MRP1,且在耐药性癫痫患者血清中,miR-133a/b呈现低水平,MRP1蛋白呈现高水平,miR-133a/b联合MRP1有望成为早期诊断癫痫药物敏感性的指标。