化瘀杀胚汤联合甲氨蝶呤治疗异位妊娠的疗效及对TGF-β/Smad2/3蛋白水平和microRNA-30d-5p表达量的影响

【目的】探讨化瘀杀胚汤(由丹参、赤芍、桃仁、蜈蚣、紫草、天花粉、三七等中药组成)联合甲氨蝶呤治疗异位妊娠疗效及对患者TGF-β/Smad2/3蛋白水平和microRNA-30d-5p表达量的影响。【方法】将104例异位妊娠患者随机分为观察组和对照组,每组各52例。对照组给予甲氨蝶呤联合米非司酮治疗,观察组在对照组的基础上加用化瘀杀胚汤治疗,连续用药3 d并随访观察1个月。比较2组患者保守治疗成功率、血β人绒毛膜促性腺激素(β-HCG)水平恢复正常时间以及异位妊娠包块吸收时间、治疗后输卵管完全通畅率与不通畅率,观察2组保守治疗成功患者治疗前后血清TGF-β/Smad2/3蛋白水平和microRNA-30d-5p相对表达量的变化情况。【结果】(1)观察组的保守治疗成功率为94.23%(49/52),明显高于对照组的71.15%(37/52),差异有统计学意义(P<0.05)。(2)与对照组比较,观察组的血β-HCG恢复正常时间及包块吸收时间均明显缩短,差异均有统计学意义(P<0.01)。(3)观察组治疗后的输卵管完全通畅率为55.77%(29/52),明显高于对照组的21.15%(11/52);不通畅率为19.23%(10/52),明显低于对照组的59.62%(31/52),差异均有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。(4)与治疗前比较,2组保守治疗成功患者治疗结束1个月后的TGF-β/Smad2/3蛋白水平和microRNA-30d-5p相对表达量均明显降低(P<0.05或P<0.01);与对照组比较,观察组治疗结束1个月后的TGF-β/Smad2/3蛋白水平和microRNA-30d-5p相对表达量均明显降低,差异均有统计学意义(P<0.01)。(5)2组患者的不良反应均以胃肠道不适为主,观察组的不良反应发生率为25.00%(13/52),明显低于对照组的46.15%(24/52),组间比较,差异有统计学意义(P<0.05)。【结论】化瘀杀胚汤联合甲氨蝶呤治疗异位妊娠,可有效提高药物保守治疗的成功率,有助于包块的吸收以及输卵管通畅,能有效降低患者的TGF-β/Smad2/3蛋白水平及microRNA-30d-5p的相对表达量,且药物安全性较高。

MicroRNA-181d-5p通过PTEN参与睾丸支持细胞间紧密连接损伤

目的:探讨miR-181d-5p通过与人第10号染色体缺失的磷酸酶和张力蛋白同源的基因(PTEN)mRNA 3'UTR区相互作用,参与小鼠睾丸支持细胞TM4细胞间紧密连接损伤及其可能机制。方法:通过网站预测miR-181d-5p的靶基因为PTEN mRNA,采用双荧光素酶报告基因分析实验在293T细胞上验证其与靶基因3'UTR区的结合;在TM4细胞上采用mimic过表达miR-181d-5p,引起PTEN蛋白表达降低,再进行p-FAK-Tyr397、p-Akt-Thr308等相关信号分子检测以及细胞间跨膜电阻(TER)值的测定。结果:MiR-181d-5p能与PTEN mRNA的3'UTR区结合,并降低其表达;在TM4细胞上过表达miR-181d-5p后,致使p-FAK-Tyr397和p-Akt-Thr308水平升高,以及TER值降低。结论:MiR-181d-5p通过与PTEN mRNA 3'UTR区结合降低其表达,引起p-FAK-Tyr397水平升高,以及PI3K/Akt信号通路激活,导致睾丸支持细胞间紧密连接损伤。

MicroRNA-21-5p和MicroRNA-18b-5p在大肠癌中的表达及意义

目的研究MicroRNA-21-5p和MicroRNA-18b-5p在大肠癌中的表达和临床意义。方法选取大肠癌组织和癌旁正常组织50例,应用qPCR法,检测MicroRNA-21-5p和MicroRNA-18b-5p表达水平;应用免疫组化法,检测PI3K表达水平。结果 MicroRNA-21-5p、MicroRNA-18b-5p和PI3K在大肠癌组织中的的表达量显著高于癌旁正常组织(P<0.05),且MicroRNA-21-5p、MicroRNA-18b-5p均和PI3K具有明显正相关性(P<0.05)。结论 MicroRNA-21-5p和MicroRNA-18b-5p通过PI3K/AKT信号通路在大肠癌的发生、发展过程中起重要作用。

定坤丹通过microRNA-30d-5p靶向调控卵巢组织Smad 2治疗多囊卵巢综合征模型大鼠的机制研究

目的通过观察定坤丹对多囊卵巢综合征(polycystic ovary syndrome,PCOS)模型大鼠卵巢组织形态学、血清性激素水平、转化生长因子β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)、Smad 2、Smad 3和microRNA-30d-5p表达的影响,进而探讨其通过microRNA-30d-5p靶向调控卵巢组织中Smad2治疗PCOS模型大鼠的作用机制。方法应用高、中、低剂量定坤丹[4.5、2.25、1.125 g/(kg·d)]干预脱氢表雄酮(dehydroepiandrosterone,DHEA)诱导的PCOS大鼠模型,采用酶联免疫吸附试验(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)、苏木精-伊红(hematoxylineosin,HE)染色、免疫组化、实时聚合酶链式反应(real time polymerase chain reaction,RT-PCR)及Western blot等方法检测各组大鼠卵巢组织形态学、血清性激素水平、microRNA-30d-5p的表达及TGF-β1、Smad 2、Smad 3 m RNA及蛋白的表达。结果与模型大鼠组相比较,定坤丹高、中、低剂量组卵巢分布有各级卵泡,可见较多黄体;雌二醇(estradiol,E_(2))、黄体生成素(luteinizing hormone,LH)及睾酮(testosterone,T)均下降,卵泡刺激素(follicle stimulating hormone,FSH)则升高,且差异均具有统计学意义;microRNA-30d-5p的表达升高,且差异均具有统计学意义;TGF-β1、Smad 2及Smad 3的mRNA及蛋白表达均下降,且差异均具有统计学意义。结论DHEA诱导的PCOS大鼠模型是研究PCOS排卵障碍较为理想的动物模型。定坤丹对PCOS大鼠有一定治疗作用,其机制可能是通过microRNA-30d-5p靶向调控卵巢组织中Smad 2的表达水平来实现。

参附注射液上调microRNA-181d-5p抑制大鼠心肌肥大及其机制

目的:研究参附注射液(SFI)改善大鼠心肌肥大的microRNA调控机制。方法:健康SD大鼠行腹主动脉缩窄(AAC)术建立心肌肥大模型,动物分成3组:SFI组(6.0m L·kg-1·d-1)、model组(6.0m L·kg-1·d-1)和Sham组(6.0m L·kg-1·d-1),腹腔注射,连续12周。造模成功大鼠心肌作micro RNA(mi R)基因芯片筛选有显著差异表达的mi Rs,Real-time RT-PCR方法检测确认候选mi R。利用生物信息学方法分析候选mi R的候选靶基因,并用RT-PCR与Western blot方法检测靶基因m RNA及其靶蛋白表达水平。在苯肾上腺素(PE)刺激建立的培养乳鼠心肌细胞肥大模型,分别给予SFI,候选mi R模拟物mi R-mimic和抑制剂mi R-inhibitor后,检测心肌细胞表面积,候选靶基因和靶蛋白表达的变化。结果:model组大鼠HW/BW及LVW/BW显著高于Sham组和SFI组(P<0.01);而SFI组HW/BW及LVW/BW与Sham组相比无显著差异;基因芯片筛选结果显示,model组与SFI组相比共有23种mi Rs差异表达显著,其中下调的有mi R-181d-5p等13种;MHC m RNA及MHC蛋白在model组大鼠心肌中过表达,而在SFI组中的表达与Sham组接近。SFI上调PE刺激的心肌细胞mi R-181d-5p水平,抑制PE刺激所致心肌细胞表面积增大;mi R-181d-5p-mimic能抑制心肌细胞MHC蛋白表达,抑制细胞表面积增大,而mi R-181d-5p-inhibitor的作用结果相反。结论:micro RNA-181d-5p具有抑制心肌肥大的作用,SFI可能通过上调或维持mi R-181d-5p的表达从而降低MHC m RNA与MHC蛋白的表达,抑制腹主动脉缩窄大鼠心肌肥大,从而改善大鼠心功能,对心肌肥大产生治疗作用。