MicroRNA-200c在结直肠癌中的表达及对侵袭和转移的影响

【目的】探讨microRNA-200c(miR-200c)在结直肠癌中的表达及其对SW620肠癌细胞株侵袭和转移能力的影响。【方法】采用实时荧光定量PCR检测45例结直肠癌组织和配对邻近正常肠粘膜组织中miR-200c的表达水平;利用脂质体将miR-200c模拟物瞬时转染SW620细胞株,通过Western blot检测上皮间质转化相关蛋白E-cadherin和Vimentin的表达;CCK-8试剂盒和Transwell小室装置检测上调miR-200c的表达对SW620细胞增殖、侵袭和迁移能力的影响。【结果】miR-200c在伴有淋巴结转移的结直肠癌组织中的表达明显下调。体外细胞实验显示,SW620细胞株在转染miR-200c模拟物后,ZEB1蛋白表达受抑制,上皮表型标志物E-cadherin表达升高,而间质表型标志物Vimentin表达下降;上调miR-200c表达可抑制SW620细胞增殖、侵袭和迁移。【结论】miR-200c低表达与结直肠癌侵袭和转移相关,其机制可能是通过调控上皮间质转化过程实现的。

宫颈癌上皮间质转化相关因子ZEB1与microRNA-200c的关系

目的：探讨宫颈癌上皮间质转化相关因子ZEB1与microRNA-200c水平及其意义。方法选取2013年7月～2015年1月于厦门大学附属第一医院普外科已确诊为宫颈癌的患者50例，取其肿瘤部位组织作为实验组，同期选取50例在本院行子宫肌瘤切除手术患者的子宫颈正常组织作为对照组，检测2组患者子宫组织的ZEB1与microRNA-200c水平。结果实验组ZEB1平均水平明显高于对照组（P＜0.05），在宫颈癌中是否淋巴转移及深肌层浸润组之间差异均有统计学意义（P＜0.05）；实验组microRNA-200c平均水平低于对照组（P＜0.05）；在宫颈癌中不同肿瘤病理分级组、是否淋巴转移及深肌层浸润组之间差异有统计学意义（P＜0.05）；实验组ZEB1与microRNA-200c呈负相关（r＝－0.270，P＝0.001）。结论 ZEB1在宫颈癌中表达水平较高，microRNA-200c在宫颈癌中表达水平降低，提示2者在宫颈癌的浸润和侵袭转移中可能起重要作用，2者之间的相关性提示microRNA-200c可能通过ZEB1参与宫颈癌上皮间质化过程。

microRNA-200c预测肺腺癌患者对吉非替尼的敏感性及其机制

目的:探讨microRNA-200c的表达对肺腺癌患者吉非替尼敏感性的影响及其机制。方法:收集38例EGFR基因敏感突变且选用吉非替尼初治的肺腺癌患者外周血,采用real-time PCR法检测microRNA-200c的表达量,MSP法检测microRNA-200c启动区的甲基化状态。结果:对吉非替尼敏感的29例患者均存在microRNA-200c的相对高表达,其启动子区为非甲基化状态;耐药的9例患者存在microRNA-200c相对低表达,启动子区为甲基化状态。结论:肺腺癌患者microRNA-200c的表达与吉非替尼敏感性相关,作用机制可能为其启动子区的甲基化状态。

血清microRNA-200c在原发性肾病综合征中的表达及临床意义分析

目的探索原发性肾病综合征患者血清microRNA-200c的表达水平,并分析其临床价值。方法选取在本院首诊并诊断为原发性肾病综合征的160例患者作为病例组研究对象,按照1∶1匹配的方法另选取160名同期健康体检人员为对照组。收集他们的临床信息和血液样本,检测他们的血生化指标,并采用定量PCR技术检测两组人群血清microRNA-200c的表达水平,并分析其临床意义。结果原发性肾病综合征患者中血清microRNA-200c表达水平为(6.869±0.768),显著高于对照组人群的表达水平(1.138±0.151)(P<0.01);患者血清microRNA-200c的表达水平与BMI、TC、TG、LDL、β2-MG、BUN及Scr呈正相关(相关系数r分别是0.485、0.524、0.714、0.617、0.741、0.687和0.518);多因素Logistics回归分析显示:BMI(OR=1.994)、TC(OR=3.061)、LDL(OR=3.551)、β2-MG(OR=2.231)、microRNA-200c(OR=8.147)是肾病综合征的主要危险因素,其中microRNA-200c与肾病综合征的关联强度最大。结论原发性肾病综合征患者血清中microRNA-200c的表达水平上调,其表达与肾功能损伤和血脂指标具有相关性;microRNA-200c可能是肾病综合征潜在的新分子标志物。

microRNA-200c在胰腺癌干细胞中的表达及作用研究

目的分析microRNA-200c在胰腺癌干细胞中的表达及作用。方法在人胰腺癌的PANC-1细胞采取流式细胞术分选胰腺癌的干细胞,通过NOD/SCID鼠的瘤移植验证干细胞的特性;并采取RFQPCR检测胰腺癌干细胞、PANC-1细胞以及转染microRNA-200c的表达及侵袭的能力。结果 NOD/SCID鼠的瘤移植验证PANC-1细胞中分选胰腺癌干细胞具肿瘤干细胞的特性,瘤移植鼠的皮下胰腺癌干细胞瘤体积(1673.56±258.77)mm3大于移植同期的PANC-1细胞瘤体积(482.41±96.44)mm3;microRNA-200c表达量上,胰腺癌干细胞(0.14±0.01)%低于PANC-1细胞(0.98±0.11)%,平均穿膜的细胞数上,胰腺癌干细胞(311.00±6.93)个多于PANC-1细胞(73.00±17.11)个,转染microRNA-200c前体片段后,胰腺癌干细胞microRNA-200c表达量上升,平均穿膜的细胞数上明显降低(P<0.05)。结论 microRNA-200c在胰腺癌干细胞中的表达降低,microRNA-200c能够对胰腺癌的干细胞生长与减弱侵袭起到抑制的作用。

MicroRNA-200c通过TGF-β/Smad通路抑制人瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖和胶原合成

目的:探讨mi croRNA-200c(miR-200c)对人瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖及胶原合成的影响,并阐明其涉及的TGF-β/Smad通路机制。方法:将mi R-200c mi mics用oligofectami脂质体转染经TGF-β1诱导的人瘢痕疙瘩成纤维细胞,Cell Counting Kit-8(CCK-8)法测细胞增殖变化;3H-脯氨酸掺入法测胶原蛋白水平的变化。相关蛋白表达变化和TGF-β1分泌表达变化分别用Western blot和ELISA法检测。结果:mi R-200c明显抑制经TGF-β1诱导的人瘢痕疙瘩纤维细胞的增殖和胶原合成;mi R-200c能明显减低磷酸化Smad2和Smad3的蛋白表达水平及抑制博莱霉素诱导的TGF-β1分泌。结论:miR-200c能明显抑制人瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖及胶原合成,其机制可能与抑制TGF-β/Smad通路相关。

侧脑室注射microRNA-200c经PI3K/Akt/mTOR通路保护脑缺血再灌注损伤大鼠的机制

目的:探讨侧脑室注射microRNA-200c(miR-200c)调控磷酯酰肌醇-3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)通路在大鼠脑缺血再灌注损伤过程中的保护作用及相关机制。方法:SD大鼠随机分为假手术组、模型组、miR-NC组和miR-200c组,模型组、miR-NC和miR-200c组采用线栓法构建脑缺血再灌注损伤模型;模型制作成功后,侧脑室分别注射生理盐水、miR-NC和miR-200c,假手术组不进行缺血再灌注处理及任何侧脑室注射。观察各组大鼠神经功能评分、脑含水量、脑梗死体积、神经细胞凋亡相关指标[B淋巴细胞瘤-2(Bcl2)、Bcl-2关联X蛋白(Bax)和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(caspase 3)]、氧化应激指标[超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)]、炎症因子[白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-1β(IL-1β)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)]及PI3K/Akt/mTOR通路表达的差异。结果:与假手术组相比,其他3组神经功能评分、脑含水量和脑梗死体积均显著升高,miR-200c组神经功能评分、脑含水量和脑梗死体积显著低于模型组和miR-NC组。与假手术组相比,其他3组Bax、caspase 3蛋白表达显著上调,Bcl2蛋白表达显著下调,miR-200c组Bax、caspase 3蛋白表达显著低于模型组和miR-NC组,Bcl2蛋白表达显著高于模型组和miR-NC组。与假手术组相比,其他3组SOD和GSH-PX含量显著降低,MDA含量显著升高,miR-200c组SOD和GSH-PX含量较模型组和miR-NC组显著升高,MDA含量显著降低。与假手术组相比,其他3组IL-6、IL-1β、TNF-α含量显著增多,miR-200c组IL-6、IL-1β、TNF-α含量显著低于模型组和miR-NC组。与假手术组相比,其他3组PI3K/Akt/mTOR通路被显著抑制,miR-200c组PI3K/Akt/mTOR的活化水平显著高于模型组和miR-NC组。结论:过表达miR-200c通过激活PI3K/Akt/mTOR通路,抑制脑缺血再灌注模型大鼠氧化应激反应和炎症反应,减轻神经细胞凋亡,改善脑损伤,发挥显著的脑保护作用。

microRNA-200c靶向抑制转录因子激活蛋白2α表达增强结肠癌细胞增殖能力的体外研究

目的 探讨hsa-microRNA-200c对结肠癌细胞增殖能力影响的作用及相关机制.方法 利用生物信息学数据库筛选可能与转录因子激活蛋白2α （AP-2α）特异性结合的microRNA并合成其真核表达质粒与特异干扰序列.利用脂质体介导将质粒PEZX-miR-200c、PEZX-NC、pmir-GLO-AP-2 α3＇UTR、pmir-GLO与干扰序列miR-67-inhibtor、miR-200c-inhibitor转染至结肠癌HCT-116、SW480、HEK-293T细胞中.用实时荧光定量PCR法、Westem blot法和免疫细胞化学染色法检测细胞中AP-2α表达情况,用CCK-8法检测细胞增殖情况,用PE标记流式细胞术检测细胞凋亡情况;用双荧光素酶活性检测法判断miR-200c与AP-2 α的相互作用.结果 转染miR-200c-inhibitor的SW480（anti-miR-200c/SW480组）细胞增殖能力低于转染miR-67-inhibitor组（anti-miR-67/SW480组）,同时凋亡水平高于anti-miR-67/SW480组[（78±0.7）％比（66±1.1）％,P＜ 0.05],anti-miR-200c/SW480组AP-2α蛋白表达量高于anti-miR-67/SW480组（0.49±0.01比0.09±0.08,P＜0.05）.转染PEZX-miR-200c表达质粒组HCT-116细胞（PEZX-miR-200c/HCT-116组）增殖能力高于转染PEZX-NC组（PEZX-NC/HCT-116组）,同时AP-2 α的mRNA和蛋白量均降低（0.67±0.07比0.51±0.09,P＜0.05）.共转染PEZX-miR-200c与pmirGLO-AP-2 α-3＇ UTR质粒组（共转实验组）HEK-293T细胞相对荧光素酶活性值明显低于共转染PEZX-miR-200c与pmir-GLO-AP-2α-3＇ UTR-deleted组（共转对照组）HEK-293T细胞（0.51±0.09比0.98±0.04,P＜ 0.01）.结论 结肠癌细胞中miR-200c通过抑制AP-2 α转录后水平的表达活性增强细胞体外增殖能力.

microRNA-200c对3T3-L1前体脂肪细胞向脂肪细胞分化的调控作用

目的 探讨microRNA（miRNA）-200c对3T3-L1前体脂肪细胞分化的影响.方法 利用实时PCR检测miRNA-200c在小鼠骨髓间充质干细胞（MSCs）向脂肪细胞分化过程及向骨细胞分化过程中的表达.通过将miRNA-200c类似物、miRNA-200c抑制剂转染至3T3-L1前体脂肪细胞,从而在细胞中增强或抑制miRNA-200c的表达,油红O染色检测转染后3T3-L1前体脂肪细胞诱导成熟后的脂滴形成情况.实时PCR检测转染后脂肪细胞特异性转录因子过氧化物酶体增殖物活化受体γ（PPARγ）和表征基因aP2在成脂过程中的表达变化.结果 实时PCR结果显示,在小鼠骨髓MSCs诱导成脂后miRNA-200c表达升高（t=24.709,P＜0.01）,而诱导成骨后,miRNA-200c表达下降（t=8.783,P＜0.01）.转染miRNA-200c类似物后,3T3-L1前体脂肪细胞中脂滴明显增多,PPARγ和aP2表达显著升高（t=7.674、9.657,P均＜0.01）;转染miRNA-200c抑制剂后,3T3-L1前体脂肪细胞中脂滴明显减少,PPARγ、aP2表达显著降低（t=9.483、6.419,P均＜0.01）.结论 miRNA-200c能够促进3T3-L1前体脂肪细胞向脂肪细胞分化.

miR-200c/ZEB1/E-cadherin轴在胆管癌转移侵袭中的作用及对胆管癌预后评估的价值

目的:探讨微小RNA-200c(miR-200c)/锌指转录因子(ZEB1)/E-钙黏蛋白(E-cadherin)在胆管癌(HCCA)转移、侵袭中的作用及对HCCA预后评估的临床价值。方法:选取2020年08月至2022年12月间我院收治的胆管癌患者36例为研究对象,同时选取胆管良性疾病患者(胆总管结石或胆管良性狭窄)20例作为对照。采用原位杂交、实时荧光定量PCR检测miR-200c在HCCA患者组织及血清中的表达;生存曲线分析miR-200c表达与总生存期的相关性;Transwell实验检测细胞的迁移及侵袭能力;免疫印迹检测ZEB1及E-cadherin蛋白的表达。体内研究构建裸鼠成瘤实验,采用免疫组化检测ZEB1及E-cadherin蛋白的表达;Tunel技术检测组织中的凋亡情况。受试者工作特征(ROC)曲线评估生物标志物对胆管癌预后的诊断效能。结果:miR-200c低表达于HCCA组织及血清中;生存曲线分析显示,miR-200c表达与患者的总生存期呈正相关性,TNM分期与患者的总生存期呈负相关性;miR-200c mimics抑制了胆管癌细胞的迁移和侵袭能力,并降低ZEB1表达而诱导E-cadherin表达;转染ZEB1逆转miR-200c的作用效应,促进胆管癌细胞的迁移和侵袭特性,抑制胆管癌细胞的凋亡。CA199、CEA和miR-200c联合检测诊断胆管癌预后的ROC曲线下面积为0.892,灵敏度0.8611,特异度0.8000。结论:miR-200c/ZEB1/Ecadherin轴参与胆管癌的转移侵袭;CA199、CEA和miR-200c联合检测对胆管癌预后的诊断效能良好,对临床胆管癌的治疗策略具有重要指导价值。

胶质瘤组织中microRNA-200a的表达及其与患者预后的关系

目的:探讨胶质瘤组织中microRNA-200a的表达及其在预测胶质瘤患者预后中的价值。方法:采用RTPCR方法检测63例胶质瘤及14例正常脑组织中microRNA-200a的表达水平。结果:胶质瘤组织中microRNA-200a的表达水平高于正常脑组织中的表达水平(P<0.001)。胶质瘤组织中microRNA-200a的表达水平与胶质瘤组织学分级有关(P<0.001),而与患者年龄、性别、KPS评分、肿瘤直径等均无关(P均>0.05)。microRNA-200a高表达的胶质瘤患者死亡风险较低表达的胶质瘤患者高(P<0.001)。结论:microRNA-200a在胶质瘤组织中表达增高,可作为评价胶质瘤预后的独立因素。

MicroRNA-200a/TFAM通路调控紫杉醇对乳腺癌细胞的化疗敏感性

目的探讨MicroRNA-200a/TFAM在MCF-7细胞对紫杉醇化疗敏感性中的作用。方法分别采用实时荧光定量PCR、蛋白印迹法检测不同浓度紫杉醇处理MCF-7细胞后mi R-200a、TFAM蛋白的表达差异;转染mi R-200a(或antimi R-200a)联合紫杉醇处理MCF-7细胞后,应用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法和5-溴脱氧尿嘧啶核苷(Brd U)观察细胞增殖活力的变化;转染pc DNA3.1-TFAM质粒联合紫杉醇处理MCF-7细胞后,MTT和Brd U法检测细胞增殖活力的变化。结果在MCF-7细胞中,mi R-200a的表达量随紫杉醇浓度增加逐渐升高,而TFAM的表达量随紫杉醇浓度升高逐渐下降。紫杉醇与mi R-200a共同作用于MCF-7细胞,可增强紫杉醇对细胞增殖的抑制作用;紫杉醇与anti-mi R-200a共同作用于MCF-7细胞时,可减弱紫杉醇对细胞增殖的抑制作用;而紫杉醇与TFAM共同孵育MCF-7细胞时,可减弱紫杉醇对细胞增殖的抑制作用。结论 mi R-200a及TFAM参与调控紫杉醇对MCF-7细胞的化疗敏感性。

microRNA-200a干扰肺癌患者外周血B细胞IL-18的表达

目的 探讨microRNA-200a干扰肺癌患者外周血B细胞白细胞介素(IL)-18的表达。方法 收集47例非小细胞肺癌患者(研究组)与同期进行体检的健康人(对照组)的外周血,分离两组CD19 B淋巴细胞并在体外培养,应用实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测两组细胞中microRNA-200a与IL-18 mRNA表达水平,构建microRNA-200a脂质体与肺癌小鼠模型,将脂质体转入小鼠模型体内,观察瘤体生长情况,用酶联免疫吸附试验(ELISA)试剂盒检测脂质体处理前后小鼠血清中IL-18表达水平并分析microRNA-200a与IL-18的相关性。结果 研究组外周血CD19B淋巴细胞中miRNA-200a、IL-18表达水平显著低于对照组(P<0.05);在对照组CD19B淋巴细胞中转染miRNA-200a脂质体与空白脂质体并LPS诱导后,miRNA-200a脂质体组miRNA-200a及IL-18 mRNA表达水平显著高于空白脂质体组(P<0.05);实验第12天对荷瘤小鼠的瘤体生长情况进行检测,miRNA-200a脂质体处理组瘤体显著小于空白脂质体组(P<0.05),miRNA-200a脂质体处理组小鼠血清中IL-18水平显著高于空白脂质体组(P<0.05);处理前,研究组细胞培养液中IL-18水平显著高于对照组(P<0.05);脂质体处理后,miRNA-200a脂质体组培养液的IL-8水平显著高于空白脂质体组(P<0.05)。结论 肺癌患者中低microRNA-200a、低IL-18表达的水平,为通过过表达miRNA-200a调控IL-18表达从而发挥抗肿瘤作用的药物研发提供可靠的理论与实验基础。

MicroRNA-200a-3p通过靶点蛋白ZEB2和e钙粘蛋白对膀胱癌细胞的生物学影响

目的分析miR-200a-3p在膀胱癌中的生物学作用。方法选取于2018年3月至2020年3月在本院行膀胱部分切除术或根治性膀胱切除术的9例膀胱癌患者,采用qPCR检测膀胱癌组织中miR-200a-3p水平、组织学分析肿瘤形态、WB法测定蛋白表达情况。结果miR-200a-3p在膀胱癌组织中显著下调。组织学分析结果显示膀胱癌黏膜坏死与肉芽组织增生、多核巨噬细胞聚集和浸润性尿路上皮癌有关。蛋白表达结果显示E-钙粘蛋白显著上调、ZEB2蛋白显著下调。推测miR-200a-3p可与E-cadherin和ZEB2相关调控膀胱癌的侵袭和迁移。结论miR-200a-3p可以作为靶向ZEB2的生物标志物,负调控ZEB2的表达,这些发现将有助于寻找新的膀胱癌治疗靶点。

miR-200c PAPP-A水平与经阴道超声鉴别诊断先兆流产和异位妊娠的价值

目的:探究血清miR-200c、妊娠相关血浆蛋白A(PAPP-A)水平与经阴道超声鉴别诊断先兆流产和异位妊娠的价值。方法:本研究开展时间为2020年1月至2022年1月,研究对象为此时间段内在我院就诊的正常早孕孕妇、异位妊娠及先兆流产孕妇各43例,患者均接受阴道超声检查,记录各项超声参数,并比较各组孕妇就诊时血清miR-200c、PAPP-A水平差异,探究其对孕妇先兆流产及异位妊娠的诊断价值。结果:三组间孕妇的妊娠黄体平均径比较组间差异无统计学意义(P>0.05),异位妊娠孕妇的子宫内膜厚度低于先兆流产组和正常早孕组,且先兆流产组低于正常早孕组(P<0.05);先兆流产组孕妇的RI高于异位妊娠组和正常早孕组,且异位妊娠组高于正常早孕组(P<0.05);先兆流产组和异位妊娠组孕妇的PSV均低于正常早孕组(P<0.05),但先兆流产组和异位妊娠组组间差异无统计学意义(P>0.05)。先兆流产组和异位妊娠组孕妇的血清miR-200c水平高于正常早孕组(P<0.05),但先兆流产组和异位妊娠组组间差异无统计学意义(P>0.05),异位妊娠孕妇的PAPP-A低于先兆流产组和正常早孕组,且先兆流产组低于正常早孕组(P<0.05)。经分析,超声及miR-200c、PAPP-A水平联合诊断孕妇先兆流产特异度高于各指标单独诊断,对异位妊娠诊断的特异度及阳性预测值高于各指标单独诊断。结论:血清miR-200c和PAPP-A水平结合经阴道超声检查,能有效地用于鉴别诊断先兆流产和异位妊娠,提高诊断的准确率和特异度,具有较高的临床应用潜力。

miR-200c联合MORC2检测在卵巢癌病情及预后评估中的临床价值

目的研究微小核糖核酸-200c(miR-200c)联合MORC家族CW型锌指蛋白2(MORC2)检测在卵巢癌病情及预后评估中的临床价值。方法选择2017年1月—2019年12月武汉大学人民医院妇产科诊治的卵巢癌患者103例(卵巢癌组)及卵巢良性疾病患者60例(对照组)为研究对象,采用实时荧光定量PCR检测miR-200c及MORC2表达并分析其与临床病理因素的关系;受试者工作特征(ROC)曲线分析miR-200c联合MORC2预测卵巢癌2年预后不良的效能;多因素Logistic回归分析卵巢癌患者死亡的危险因素;Kaplan-Meier法分析miR-200c和MORC2表达与生存期的关系。结果卵巢癌组患者肿瘤组织miR-200c、MORC2表达高于癌旁组织和对照组(F=1926.617、1832.415,P均<0.001)。低分化、有恶性腹水、肿瘤最大径≥5 cm、有淋巴结转移、有远处转移及Ⅲ~Ⅳ期卵巢癌患者miR-200c、MORC2表达高于中-高分化、无恶性腹水、肿瘤最大径<5 cm、无淋巴结转移、无远处转移及Ⅰ~Ⅱ期患者(t=14.067、12.451、12.871、11.523、16.298、18.351,11.745、10.893、10.462、9.893、14.617、13.269,P均<0.001)。miR-200c、MORC2及二者联合预测卵巢癌患者2年预后不良的AUC分别为0.786、0.792、0.901,二者联合优于各自单独预测效能(Z=8.239、8.025,P均<0.001)。miR-200c≥0.78、MORC2≥0.65、低分化、有恶性腹水、肿瘤最大径≥5 cm、有淋巴结转移、有远处转移、FIGO分期Ⅲ~Ⅳ期为卵巢癌死亡的独立危险因素[OR(95%CI)=5.323(1.812~8.834)、4.802(1.141~8.463)、2.065(1.068~3.062)、2.252(1.145~3.359)、2.140(1.216~3.064)、2.012(1.005~3.019)、2.522(1.625~3.419)、2.186(1.134~3.238)];卵巢癌组中miR-200c≥0.78且MORC2≥0.65卵巢癌患者中位生存期显著低于其他患者(miR-200c<0.78或MORC2<0.65)(Log-Rankχ^(2)=16.371,P<0.05)。结论卵巢癌患者miR-200c及MORC2表达显著升高,在卵巢癌病情及预后评估中具有重要临床价值,两者联合检测时可显著提高预测卵巢癌预后不良的敏感度及特异度。

Ascl2和microRNA-200家族在结肠癌组织和癌旁组织中的定量表达及二者的相关性分析

目的探讨Ascl2与MicroRNA-200家族在结肠癌(colorectal cancer,CRC)组织及癌旁组织中的表达及二者的相关性。方法采用实时定量PCR检测50例结肠癌患者的结直肠癌组织及其癌旁组织中Ascl2与MicroRNA-200家族表达,用SPSS 18.0统计软件进行统计分析。结果 Ascl2在癌组织中的表达显著高于癌旁组织(P<0.01),除了MicroRNA-429在癌组织中的表达与癌旁组织相比无统计学差异(P=0.2139),MicroRNA-200家族成员在癌组织中的表达都显著低于癌旁组织(P<0.05);且Ascl2和MicroRNA-200家族成员在癌组织中表达都呈负相关(r<-0.5,P<0.05)。结论发现与正常结直肠黏膜组织相比,Ascl2在结直肠癌组织中表达增高,MicroRNA-200家族表达降低,它们在结直肠癌组织中的表达呈现负相关。

LncRNA FEZF1-AS1靶向调控miR-200c-3p对人肺成纤维细胞生物学行为的影响

目的探讨FEZ家族锌指1-反义RNA1(LncRNA FEZF1-AS1)靶向调控miR-200c-3p对人肺成纤维细胞HLF生物学行为的影响。方法采用转化生长因子β1(TGF-β1)诱导HLF向肌成纤维细胞转化,分为空白对照组(Blank组)和造模组(HLF+TGF-β1组),另根据转染质粒不同将细胞分为Blank组、TGF-β1+Si LncRNA FEZF1-AS1 NC组和TGF-β1+Si LncRNA FEZF1-AS1组。采用Western blot法检测α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、Ⅰ型胶原蛋白(CollagenⅠ)和波形蛋白(Vimentin)蛋白的表达。采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测LncRNA FEZF1-AS1和miR-200c-3p的表达。采用CCK-8法检测细胞增殖,细胞划痕实验检测迁移能力,Transwell实验检测侵袭能力;采用双萤光素酶实验检测FEZF1-AS1与miR-200c-3p的靶向作用关系。结果与Blank组比较,HLF+TGF-β1组α-SMA、CollagenⅠ、Vimentin蛋白表达及LncRNA FEZF1-AS1表达水平升高,miR-200c-3p表达水平降低(P<0.05);与TGF-β1+Si LncRNA FEZF1-AS1 NC组比较,TGF-β1+Si LncRNA FEZF1-AS1组细胞增殖、迁移、侵袭能力下降,LncRNA FEZF1-AS1表达及α-SMA、CollagenⅠ、Vimentin蛋白表达水平降低,miR-200c-3p表达水平升高(P<0.05);FEZF1-AS1与miR-200c-3p基因序列上存在结合位点。结论LncRNA FEZF1-AS1通过抑制miR-200c-3p促进特发性肺间质纤维化的发生、发展。

人microRNA-200家族靶基因预测及生物信息学分析

目的对microRNA-200(miR-200)家族成员的靶基因进行预测和生物信息学分析,为进一步探讨miR-200家族的功能及其调节机制提供证据。方法运用靶基因预测软件TargetScan、PicTar2和miRanda分别预测miR-200家族9个成员的靶基因,再分别取各自在三个软件下预测所得靶基因的交集,然后利用miRTarbase数据库获取这9个miRNA经过至少3种实验验证并且靶向关系类型为具有功能的miRNA-靶基因互作的靶基因,将软件预测所得结果与靶向关系预测结果取并集,作为所纳入每个miRNA的靶基因集合,然后分别对靶基因集合进行生物学过程的功能富集,信号通路及蛋白质互作网络分析。结果 miR-200家族的预测靶基因富集于多个生物学过程,其生物学过程主要富集于:RNA聚合酶Ⅱ启动子的转录负调控、DNA模板转录负调控、RNA聚合酶Ⅱ启动子的转录调控等;信号通路主要富集于:肿瘤、胶质瘤、黑色素瘤、肺小细胞癌等多种肿瘤和EB病毒感染、乙型肝炎等感染相关通路,蛋白质互作网络显示9个成员的预测靶基因编码蛋白质间存在复杂的相互作用,靶基因编码蛋白质"RAC1"、"SRC"、"RHOA"、"CREBBP"、"CTNNB1"在互作网络中具有核心地位。结论 miR-200家族中的成员通过调控靶基因进而调节下游靶蛋白参与肿瘤、感染等病理生理进程。

肾病综合征患者尿液外泌体microRNA-146a、microRNA-200p表达与肾损伤的关系

目的探讨肾病综合征(NS)患者尿液外泌体microRNA-146a(miR-146a)、microRNA-200p(miR-200p)表达与肾损伤的关系。方法选取2019年8月—2022年8月成都大学附属医院收治的106例NS患者为观察组,另选取120例同期来医院体检的健康者为对照组。根据NS患者是否发生肾损伤分为非损伤组74例和损伤组32例。采用实时荧光定量聚合酶链反应检测研究对象的尿液外泌体miR-146a、miR-200p表达。采用受试者工作特征(ROC)曲线评估miR-146a、miR-200p对NS患者肾损伤的诊断效能;采用Pearson法分析尿液外泌体miR-146a、miR-200p与肾功能指标的相关性;采用多因素Logistic逐步回归模型分析影响NS患者肾损伤的相关因素。结果观察组尿液外泌体miR-146a表达高于对照组(P<0.05),miR-200p表达低于对照组(P<0.05)。非损伤组尿液外泌体miR-146a表达低于损伤组(P<0.05),miR-200p表达高于损伤组(P<0.05)。miR-146a、miR-200p诊断NS患者肾损伤的曲线下面积(AUC)分别为0.873(95%CI:0.822,0.924)、0.844(95%CI:0.793,0.895),最佳截断值分别为4.08和1.99,特异性分别为67.57%和60.81%,敏感性分别为93.75%和93.75%,两者联合诊断的AUC为0.927(95%CI:0.896,0.958),特异性为85.14%,敏感性为87.50%。非损伤组与损伤组的尿蛋白量、白蛋白、肾小球滤过率、尿素氮、血肌酐、血尿酸比较,差异有统计学意义(P<0.05)。Pearson相关性分析结果显示,尿液外泌体miR-146a表达与尿蛋白量、尿素氮、血肌酐呈正相关(r=0.402、0.447和0.613,均P=0.000),与白蛋白、肾小球滤过率呈负相关(r=-0.369和-0.415,均P=0.000);尿液外泌体miR-200p表达与尿蛋白量、尿素氮、血肌酐呈负相关(r=-0.357、-0.405和-0.534,均P=0.000),与白蛋白、肾小球滤过率呈正相关(r=0.428和0.513,P=0.000)。多因素Logistic逐步回归分析结果显示,肾小球滤过率降低[OR=2.591(95%CI:1.687,3.980)]、血肌酐升高[OR=2.342(95%CI:1.576,3.480)]、miR-146a≥4.08[OR=3.050(95%CI:1.913,4.862)]、miR-200p≤1.99[OR=3.347(95%CI:2.083,5.378)]是NS患者肾损伤的危险因素(P<0.05)。结论尿液外泌体miR-146a、miR-200p异常表达与NS患者肾损伤有关,可作为诊断NS患者肾损伤的生物学指标,且两者联合的诊断效能更好,具有临床推广价值。