MicroRNA-203抑制骨肉瘤细胞增殖和迁移的机制研究

目的探讨microR NA-203(miR-203)对骨肉瘤细胞增殖和迁移的影响及机制。方法通过逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)测定miR-203在正常成骨细胞hF OB及骨肉瘤细胞系中的表达,将MG-63细胞系分成miR-203组、Scramble组、RAB22A组、NC组,Lipofectamine 2000分别转染miR-203 mimics、Scrambles、pcD NA3.1-RAB22A、空白对照质粒;通过噻唑蓝(MTT)实验测定增殖能力,细胞划痕实验测定迁移能力;通过Target Scan和双荧光素酶实验预测及验证miR-203与RAB22A基因的靶向调节关系;RT-PCR测定RAB22A mR NA表达水平;Western blot测定E-cadherin、N-cadherin、Vimentin蛋白表达水平。结果 miR-203在骨肉瘤细胞系SAOS-2、SOSP-9607、U2OS及MG-63中较hF OB细胞系表达降低。MTT显示,在培养48和72 h后,miR-203组相对细胞数少于Scramble组(P<0.05);培养24 h后,Scramble组细胞相对划痕面积小于miR-203组(P<0.05);双荧光素酶实验示,miR-203与RAB22A基因存在靶向调节关系。RAB22A组相对划痕面积小于NC组(P<0.05);MTT显示,在培养24、48和72 h后,RAB22A组相对细胞数多于NC组(P<0.05);RAB22A组与NC组比较,E-cadherin下调表达,N-cadherin上调表达,Vimentin上调表达。结论 miR-203通过下调RAB22A基因表达,抑制上皮间质转化,进而抑制骨肉瘤细胞增殖与迁移。

MicroRNA-203对人下咽癌细胞转移能力的影响及其机制研究

目的研究Micro RNA-203对人下咽癌细胞迁移能力的影响及作用机理。方法利用生物信息学方法预测Micro RNA-203的下游调控靶分子,利用荧光素酶报告基因实验、q RT-PCR、与Westenr blot等方法对其中与调节细胞迁移有关的靶分子MEKK1进行验证,证实下咽癌细胞中MEKK1的表达是否受Micro RNA-203的影响。通过细胞迁移实验研究Micro RNA-203对下咽癌细胞迁移能力的影响,进一步阐明可能影响下咽癌转移能力的因素。结果在过表达Micro RNA-203的下咽癌细胞中,Westenr blot检测靶基因蛋白表达量分析、q RT-PCR检测靶基因m RNA表达量和双荧光素酶报告基因实验结果均提示Micro RNA-203下调靶基因MEKK1的表达。细胞迁移实验证明过表达Micro RNA-203可显著抑制下咽癌细胞的迁移能力。结论 MEKK1是Micro RNA-203的直接下游作用靶点,Micro RNA-203有可能通过负向调控MEKK1抑制下咽癌细胞的转移能力。

MicroRNA-203及其与胶质瘤的关系研究进展

神经胶质瘤是最常见的颅内原发性肿瘤,且其发病率随年龄增大有增高的趋势[1-2],也几乎是死亡率最高的脑内肿瘤。microRNA-203（miRNA-203）是新近发现的与胶质瘤密切相关的一类表达于真核生物的非编码蛋白质的短链RNA,近年来的研究发现miRNA-203在胶质瘤中的异常表达与胶质瘤发病的关系密切。

MicroRNA-203在人食管鳞癌组织和细胞中的表达及其基因的甲基化状态

目的:检测人食管鳞状细胞癌(esophageal squamous cell carcinoma,ESCC)组织及细胞中MicroRNA-203(miR-203)的表达及其基因的甲基化状态,探讨miR-203在ESCC发生及发展中的作用。方法:选取河北医科大学第四医院2008—2011年间手术切除的83例ESCC原发灶组织及癌旁组织标本,实时定量PCR与甲基化特异性PCR(methylation specific PCR,MSP)分别检测其miR-203的表达及其编码基因的甲基化状态。用DNA甲基化转移酶抑制剂5-氮杂-2’-脱氧胞苷(5-aza-2’-deoxycitydine,5-Aza-dC)处理食管癌细胞系(TE1、TE13、YES-2、EC109、T.TN),实时定量PCR与MSP分别检测5-Aza-dC处理对食管癌细胞中miR-203的表达及其基因甲基化状态的影响。结果:五种食管癌细胞中miR-203的表达均相对较低,且呈高甲基化状态。5-Aza-dC处理后,miR-203的表达均显著升高(P<0.05或P<0.01);YES-2细胞中miR-203编码基因的甲基化程度显著降低,其余4种细胞均转变为非甲基化状态。miR-203在ESCC组织中的表达显著低于癌旁组织(0.54±0.11 vs 1.00±0.01,P<0.01),启动子区甲基化率显著高于癌旁组织[62.65%(52/83)vs 7.23%(6/83),P<0.01],并且两者均与TNM分期和组织分化程度有关(P<0.05)。发生miR-203编码基因甲基化的ESCC组织中miR-203的表达显著低于未发生甲基化的ESCC组织(P<0.05)。结论:miR-203在ESCC组织与细胞中呈低表达,与食管鳞癌的发生、发展有关,且其启动子区甲基化可能是导致其表达沉默的机制之一。

七氟醚对结直肠癌细胞侵袭迁移的影响及对microRNA-203的调控作用机制研究

目的观察七氟醚对结直肠癌细胞侵袭迁移的影响及对microRNA-203(miR-203)的调控作用,探讨其可能作用机制。方法将HCT116细胞分为对照组(5%CO2培养+未转染)、七氟醚组(4%七氟醚+5%CO2培养+未转染),miR-203组(5%CO2培养+转染miR-203 mimics)、miR-203+七氟醚组(4%七氟醚+5%CO2培养+转染miR-203 mimics),miR-203-NC+七氟醚组(4%七氟醚+5%CO2培养+转染miR-203 mimicsNC)。CCK-8实验检测细胞增殖能力;qRT-PCR法检测细胞的miR-203表达;划痕实验检测细胞迁移能力;Transwell实验检测细胞侵袭能力;Western blotting法检测细胞外信号调节激酶(ERK)、p-ERK、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)蛋白水平。结果miR-203+七氟醚可抑制细胞增殖,降低细胞迁移能力,减少穿膜细胞数,降低细胞中p-ERK、MMP-9蛋白表达。结论七氟醚可抑制HCT116细胞侵袭、迁移,可能是通过上调miR-203表达、阻断ERK/MMP-9信号通路发挥作用。

食管癌根治术患者血清microRNA-27a、microRNA-203a-3p表达及与预后的关系

目的 探究食管癌根治术患者术前血清microRNA-27a(miR-27a)、microRNA-203a-3p(miR-203a-3p)表达及与预后的关系。方法 选取2016年3月—2017年3月在南阳医学高等专科学校第一附属医院行食管癌根治术的123例食管癌患者作为研究组。另取同期该院健康体检人群64例作为对照组。采用实时荧光定量聚合酶链反应检测研究组术前和对照组体检时血清miR-27a、miR-203a-3p的表达。分析食管癌患者血清miR-27a、miR-203a-3p相对表达量与临床病理特征的关系。Kaplan-Meier生存曲线分析血清miR-27a、miR-203a-3p表达与患者预后的关系。单因素及多因素Cox回归分析食管癌患者预后的影响因素。结果 研究组血清miR-27a、miR-203a-3p相对表达量高于对照组(P <0.05)。肿瘤分期Ⅲ期、分化程度低分化、有淋巴结转移食管癌患者根治术前血清miR-27a、miR-203a-3p相对表达量高于肿瘤分期Ⅰ、Ⅱ期、分化程度高中分化、无淋巴结转移患者(P <0.05)。不同年龄、性别及肿瘤位置食管癌患者根治术前血清miR-27a、miR-203a-3p相对表达量比较,差异无统计学意义(P>0.05)。miR-27a高表达组5年总生存率低于miR-27a低表达组(P <0.05)。miR-203a-3p高表达组5年总生存率低于miR-203a-3p低表达组(P <0.05)。单因素Cox回归分析结果显示:肿瘤分期[HR=1.730(95%CI:1.434,2.099)]、淋巴结转移[HR=1.602(95%CI:1.191,2.153)]、miR-27a[HR=2.041(95%CI:1.813,2.463)]、miR-203a-3p[HR=2.060(95%CI:1.921,2.279)]是食管癌患者预后的影响因素(P <0.05)。多因素Cox回归分析结果显示:肿瘤分期Ⅲ期[HR=1.973(95%CI:1.245,3.219)]、有淋巴结转移[HR=2.637(95%CI:1.158,6.008)]、miR-27a≥3.09[HR=2.484(95%CI:1.435,4.301)]、miR-203a-3p≥2.79[HR=1.660(95%CI:1.236,3.058)]是食管癌患者预后的独立影响因素(P <0.05)。结论 食管癌患者血清miR-27a、miR-203a-3p表达上调,两者表达与肿瘤TNM分期、分化程度及淋巴结转移有关,是食管癌根治术患者预后不良的独立危险因素。

MicroRNA-203对胶质母细胞瘤干细胞生物学特性的作用研究

目的观察胶质母细胞瘤干细胞表达miR-203后对其生物学特性的影响。方法采用免疫磁珠分选出CD133+肿瘤干细胞,对其转染并表达miR-203,免疫荧光染色检测CD133等,实时定量RT-PCR检测巢蛋白(nestin)、神经胶质纤维酸性蛋白(GFAP)和微管相关蛋白2(MAP2)表达以鉴定其多向分化能力,成球实验评价其自我更新能力;最后采用CCK-8和流式凋亡分别检测miR-203对胶质母细胞瘤干细胞增殖和凋亡的影响。结果培养并分选出的CD133+胶质母细胞瘤干细胞表达CD133和nestin标记物,且分化后表达星形胶质细胞标记物GFAP和神经元标志物MAP2,且CD133+细胞miR-203表达明显低于CD133-细胞(P<0.05);miR-203转染两个7d后CD133+肿瘤干细胞的一、二次成球数目均显著低于对照组细胞的成球数(P<0.05);进一步实时定量RT-PCR检测示miR-203转染4d后细胞CD133和nestin的mRNA和蛋白表达均明显降低,而GFAP和MAP2的mRNA和蛋白表达均升高(P<0.05);miR-203转染24,48,72,96和120h后细胞存活率均明显低于对照组细胞(P<0.05);进一步流式检测示miR-203细胞的凋亡率明显高于对照组(P<0.05)。结论 miR-203可能成为胶质母细胞瘤干细胞的分子治疗靶点。

表达microRNA-203tough decoy的慢病毒载体构建及应用

目的建立表达microRNA(miRNA)tough decoy(TuD)的慢病毒载体构建方法,并检测其对细胞内miRNA表达水平及细胞表型的影响。方法在慢病毒表达质粒pSIH1-H1-copGFP中通过两步克隆,首先构建miRNA TuD通用骨架质粒,进一步构建特异性针对大鼠miR-203的TuD表达载体。在293T细胞中包装成慢病毒后,感染大鼠骨髓间充质干细胞(BM-MSCs),同时用pSIH1-H1-copGFP空质粒包装慢病毒,感染BM-MSCs作为对照。定量RT-PCR检测细胞中miR-203的水平变化,并用CCK-8法和Annexin V-PI双标记法分别检测BM-MSCs的活性和凋亡。结果成功构建了基于pSIH1-H1-copGFP质粒的miR-203 TuD表达载体,并对其序列进行了验证。用表达miR-203 TuD的重组慢病毒感染BM-MSCs后第3、6、9天检测细胞内源性miR-203表达水平降低,同时细胞活性增高,凋亡比例降低,与对照组相比差异有统计学意义。结论两步克隆法构建miRNA TuD表达载体是一种简便高效的方法,其表达产物能够有效抑制细胞内源性miRNA水平,同时影响细胞表型。

胃癌患者外周血microRNA-203的检测及意义

目的探讨胃癌患者外周血microRNA-203的表达及临床意义。方法采用RT—PCR方法检测20例胃癌患者、10例健康志愿者外周血中microRNA-203的表达。结果胃癌组和正常对照组外周血中microRNA-203的表达有显著差异（P〈0．01）。胃癌组外周血中microRNA-203的表达水平较正常对照组明显下调。结论外周血中microRNA-203的检测可作为胃癌早期诊断的标志物。

microRNA-203通过靶向SRC抑制人角膜上皮细胞增殖与迁移

角膜上皮损伤修复对于维持角膜的完整性和透明度至关重要,其分子调控机制尚未明了。本室前期研究发现,miR-203在小鼠角膜上皮损伤修复中显著下调,提示miR-203在该进程中发挥重要作用。本研究首先通过小鼠在体实验,证实miR-203在角膜上皮损伤修复中的急剧下调。体外实验将miR-203转染入人角膜上皮细胞(human corneal epithelial cells, HCECs),使miR-203过表达。应用MTS法、EdU检测、流式细胞术、划痕实验和小孔迁移实验检测转染后细胞增殖、细胞周期及细胞迁移的变化情况。结果发现,过表达miR-203能抑制HCECs增殖(P<0.01),其细胞周期各时相比例中G1期上调了10.63%,并能诱导人角膜上皮细胞发生凋亡(P<0.001),划痕实验及小孔迁移检测均证实,过表达miR-203能抑制HCECs迁移。通过生物信息学预测及Western印迹验证SRC原癌基因(SRC proto-oncogene)是miR-203作用的靶基因。进一步在HCECs中敲减SRC,发现人角膜上皮细胞增殖速率放缓(P<0.001)。与阴性对照组相比,SRC敲减组细胞G1期上调了17.19%,且凋亡率增加(P<0.01)。划痕实验及小孔迁移实验也证实,降低SRC表达能抑制HCECs迁移。该研究表明,miR-203可能通过下调靶基因SRC的表达,进而影响HCECs的增殖及迁移。本研究将为miR-203在角膜损伤修复过程中的作用机制提供理论依据,并为临床治疗角膜损伤提供新靶点。

携载microRNA-140外泌体/海藻酸钠/胶原水凝胶修复关节软骨损伤

背景:研究已证实,上调microRNA-140表达可部分抑制膝关节软骨组织与细胞的骨关节炎样改变,延缓骨关节炎进程,提示microRNA-140参与了骨关节炎的发病机制。目的:采用海藻酸钠/胶原水凝胶负载过表达microRNA-140的外泌体,进一步分析microRNA-140参与骨关节炎的相关机制。方法:利用慢病毒感染大鼠骨髓间充质干细胞使其过表达microRNA-140,随后分离提取外泌体,得到过表达microRNA-140的外泌体。制备负载外泌体的海藻酸钠/胶原水凝胶。采用随机数字表法将32只SD大鼠随机分为4组,每组8只:正常对照组不进行任何处理,骨关节炎组、未转染外泌体组、转染外泌体组均通过膝关节腔内注射碘乙酸钠的方式建立骨关节炎模型,造模2周后,骨关节炎组膝关节腔内注射PBS,未转染外泌体组、转染外泌体组膝关节腔内分别注射负载未过表达microRNA-140与过表达microRNA-140外泌体的海藻酸钠/胶原水凝胶。造模后第6周,检测大鼠机械刺激缩足反应阈值、滑膜液炎症因子浓度、软骨相关基因表达、膝关节软骨组织的组织学变化与焦亡相关蛋白表达。结果与结论:①与正常对照组比较,骨关节炎组机械刺激缩足反应阈值、Ⅱ型胶原及SOX9 mRNA表达、Ⅱ型胶原免疫荧光强度均减少(P<0.05),滑膜液中促炎症因子水平增加(P<0.05),基质金属蛋白酶13、血小板反应蛋白解整合素金属肽酶5(ADAMTS5)mRNA表达增加(P<0.05),NLRP3、ASC、GSDMD p30、caspase-1 p20、白细胞介素1β、白细胞介素18蛋白表达均增加(P<0.05),GSDMD、cleaved caspase-1免疫荧光强度增强(P<0.05),软骨组织损伤严重。②与骨关节炎组比较,两外泌体组机械刺激缩足反应阈值、Ⅱ型胶原及SOX9 mRNA表达、Ⅱ型胶原免疫荧光强度均增加(P<0.05),滑膜液中促炎症因子水平减少(P<0.05),基质金属蛋白酶13 mRNA表达减少(P<0.05),NLRP3、ASC、GSDMD p30、caspase-1 p20、白细胞介素1β、白细胞介素18的蛋白表达均减少(P<0.05),GSDMD、cleaved caspase-1的免疫荧光强度减弱(P<0.05),软骨组织损伤减轻(P<0.05),并且转染外泌体组的作用更强。③结果表明,microRNA-140可通过抑制炎症、维持软骨稳态、抑制软骨焦亡来减轻骨关节炎大鼠的疼痛反应,降低软骨损伤,发挥骨关节炎治疗作用。

microRNA-203在膀胱癌中的表达及功能研究

目的:验证microRNA-203在膀胱癌组织中的表达水平,并观察microRNA-203对膀胱癌细胞T24增殖和转移能力的影响。方法:选取膀胱癌组织和正常组织各20例,通过实时定量PCR分析microRNA-203的表达。通过转染上调microRNA-203在T24细胞中的表达,并通过PCR验证转染效率。再进一步通过CCK-8法检测microRNA-203上调后细胞增殖能力的变化。采用Annexin V-PI双染法观察microRNA-203对膀胱癌细胞凋亡的影响,采用transwell法观察microRNA-203对膀胱癌细胞转移能力的影响。结果:与正常组织相比,膀胱癌组织的microRNA-203表达明显降低(P<0,.05)。上调T24细胞microRNA-203表达后,与对照组相比,细胞增殖能力明显减弱,并且可观察到有凋亡现象发生。进一步的transwell法可观察到microRNA-203可明显抑制T24细胞侵袭。结论:microRNA-203在膀胱癌的发生发展过程中发挥着明显的抑癌作用。

MicroRNA-214调控骨关节炎软骨和软骨下骨代谢的机制

背景:microRNA-214(miR-214)在骨质疏松中的作用国内外已有相关报道,而miR-214与骨关节炎关节软骨及软骨下骨退变之间的相互关系尚不清楚。目的:探讨miR-214与小鼠膝骨关节炎软骨及软骨下骨退变之间存在的关系。方法:取30只C57BL/6J小鼠随机分组:①实验一:分为假手术组和内侧半月板失稳组(n=3),分别进行苏木精-伊红染色和荧光定量PCR检测miR-214基因的表达变化;②实验二:分为假手术组、内侧半月板失稳组、内侧半月板失稳+空载腺病毒组(空载组)、内侧半月板失稳+miR-214拮抗剂过表达腺病毒组(拮抗剂组)(n=6),术后4周各组分别取软骨组织,进行苏木精-伊红、番红O固绿、甲苯胺蓝染色分析;荧光定量PCR、Western blot检测关节软骨中相关因子的表达情况。结果与结论:①实验一中,苏木精-伊红染色结果显示,与假手术组相比,内侧半月板失稳组可见软骨退变;荧光定量PCR检测结果显示,所有样本均有miR-214表达,而内侧半月板失稳组软骨样本中miR-214的表达水平明显高于假手术组(P<0.05);②实验二中,苏木精-伊红染色、番红O固绿染色、甲苯胺蓝染色结果显示,拮抗剂组软骨退变程度低于内侧半月板失稳组;腺病毒验证PCR检测结果显示,空载组软骨中miR-214表达水平高于拮抗剂组(P<0.05);③实验二中,X射线片显示,内侧半月板失稳组和空载组呈典型骨关节炎影像学变化,拮抗剂组关节退行性病变程度相对较轻;Mirco-CT检测结果显示,拮抗剂组在注入miR-214拮抗剂后,骨小梁结构模型指数变小,各项数据整体好于内侧半月板失稳组及空载组;④实验二Western blot检测结果显示,内侧半月板失稳组、空载组软骨标本中软骨相关因子Ⅱ型胶原α1、性别决定区Y框转录因子9、Runt相关转录因子2、骨桥蛋白的相对表达水平低于假手术组及拮抗剂组(P<0.05);而金属基质蛋白酶13的相对表达水平在内侧半月板失稳组、空载组高于假手术组及拮抗剂组(P<0.05);⑤实验二荧光定量PCR检测结果显示,与假手术组比较,肿瘤坏死因子α和白细胞介素6 mRNA的相对表达量在内侧半月板失稳组、空载组中表达相对较高,拮抗剂组中表达相对较低(P<0.05);内侧半月板失稳组、空载组高于拮抗剂组(P<0.05);⑥结果表明,骨关节炎小鼠模型的关节软骨中miR-214表达水平明显升高,提示miR-214表达水平的升高与骨关节炎有密切联系;而在骨关节炎小鼠模型膝关节腔内注入miR-214拮抗剂,可以延缓关节软骨退化、促进软骨下骨重塑,改善骨关节炎进展。

microRNA-203a-3p在原发性肝癌患者外周血中的临床研究

目的对不同分期原发性肝癌患者外周血中microRNA-203a-3p表达进行荧光定量PCR检测,研究microRNA-203a-3p在原发性肝癌患者中的临床意义。方法收集56例原发性肝癌患者外周血,另取56例同期健康者作为对照组并留取血样。荧光定量PCR实验测定血样microRNA-203a-3p表达水平。与健康者相比,统计microRNA-203a-3p在不同分期原发性肝癌患者的表达水平,并分析与AFP数值的相关性以及15例肝癌患者治疗前后microRNA-203a-3p的差异。结果与健康者相比,56例原发性肝癌患者外周血中microRNA-203a-3p显著降低,和原发性肝癌分期相关,与AFP水平显著负相关,且15例原发性肝癌手术患者治疗1个月后microRNA-203a-3p表达显著升高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论MicroRNA-203a-3p在原发性肝癌患者外周血中显著降低并和临床进程显著相关。

MicroRNA-155、microRNA-203在银屑病患者皮肤中的表达及定位

目的:研究microRNA-155(miR-155)、microRNA-203(miR-203)在银屑病患者皮损区及非皮损区皮肤中的表达及定位。方法:活检切取12名寻常型银屑病患者皮损及邻近非皮损区的皮肤组织,采用石蜡包埋,通过RT-PCR法检测和比较12对标本的皮损区、非皮损区中miR-155、miR-203表达水平,并以5’端、3’端地高辛标记的探针对组织切片中的目的 miRNA进行原位杂交,观察miR-155、miR-203在皮肤组织中的定位情况。结果:12对标本中,miR-155在皮损区的表达显著高于非皮损区,差异具有显著统计学意义(P<0.05);而皮损区和非皮损区miR-203的表达未见统计学差异(P>0.05)。miR-155在皮肤的表皮、真皮均有表达,定位在细胞核,基底层表达较高;miR-203在基底层和表皮突表达较高,细胞核、细胞质中均有表达。结论:银屑病患者皮损区miR-155的表达显著升高,定位在细胞核,在皮肤的表皮、真皮均表达,可能参与了银屑病的发生发展过程。

MicroRNA-203靶向调控Bmi-1对甲状腺乳头状癌增殖及侵袭的影响

目的探讨Bmi-1基因在甲状腺乳头状癌(papillary thyroid cancer,PTC)中的表达情况,并分析微小RNAs(MicroRNAs,miRNAs)靶向调控Bmi-1对PTC增殖及侵袭的影响及机制。方法收集2018年6月到2018年12月在浙江大学医学院附属杭州市第一人民医院肿瘤外科行甲状腺手术的组织标本,共计60例,通过实时定量聚合酶链反应(real-time quantitative polymerase chain reaction,RT-PCR)检测PTC组织中Bmi-1基因的表达水平并分析其与病理特征的关系。通过生物信息学网站targetscan和microRNA.org预测调节Bmi-l的miRNAs,并用荧光素酶报告基因实验进行确认。应用CCK-8(cell counting Kit-8)试剂盒、Transwell小室测定PTC增殖能力、侵袭能力的改变。结果本研究发现Bmi-1基因表达与PTC病灶大小、侵袭能力呈正相关。生物信息学预测结果提示Bmi-1是微小RNA-203(MicroRNA-203,miR-203)的靶基因,miR-203针对Bmi-l的3’-UTR靶序列为GUAAAGU。转染miR-203模拟物后,PTC细胞系TPC-1中Bmi-1 mRNA表达显着下调。双荧光素酶报告基因实验证明miR-203可作用于Bmi-1基因的3’UTR区预测靶位。此外,miR-203模拟物转染后有效抑制了PTC细胞的增殖及侵袭,而在转染miR-203模拟物的PTC细胞TPC-1中同时过表达Bmi-1后可恢复PTC细胞TPC-1的增殖、侵袭能力。结论Bmi-1与PTC增殖侵袭能力正相关,miR-203可通过直接靶向Bmi-1基因来抑制PTC细胞的增殖、侵袭能力。

MicroRNA-203在结直肠癌研究中的进展

结直肠癌是我国常见的消化道恶性肿瘤。目前认为结直肠癌的形成是一个多因素、多步骤的过程,其具体发病机制尚不清楚。microRNA是一类非编码小分子RNA,能在转录后水平调控靶基因的表达,参与肿瘤的增殖、侵袭和转移,甚至调节肿瘤化疗敏感性。学者普遍认为mircroRNA-203(mir-203)是抗癌小分子RNA,但与以往不同的是mir-203在结直肠癌肿的表达水平仍存在争议。本文将概述mir-203在结直肠癌的发生、发展、诊断、预后以及药物抗性中发挥的各类生物学作用。阐述mir-203在结直肠癌不同信号通路中的作用,探索其在结直肠癌研究中的全部潜能。

MicroRNA-196b、IGFBP-3在非小细胞肺癌组织中的表达及与预后关系

目的 探究microRNA-196b(miR-196b)、胰岛素样生长因子结合蛋白-3(IGFBP-3)在非小细胞肺癌(NSCLC)组织中的表达及与预后的关系。方法 选取2020年4月—2022年4月在无锡市第二人民医院手术治疗的NSCLC患者78例。收集患者的病历资料,采用实时荧光定量聚合酶链反应检测癌组织、癌旁组织中miR-196b、IGFBP-3的表达。所有患者随访12个月,根据预后结局分为进展组、稳定组。筛查NSCLC患者预后的影响因素,评估组织中miR-196b、IGFBP-3表达对NSCLC患者预后的预测效能。分析癌组织中miR-196b、IGFBP-3不同表达患者生存曲线的差异。结果 进展组临床分期Ⅲ期占比、术前淋巴结转移率均高于稳定组(P <0.05)。进展组癌组织miR-196b相对表达量高于稳定组(P <0.05),IGFBP-3阳性表达率低于稳定组(P <0.05)。癌组织miR-196b相对表达量高于癌旁组织(P <0.05),IGFBP-3阳性表达率低于癌旁组织(P <0.05)。多因素逐步Logistic回归分析结果显示:临床分期[O^R=3.684(95%CI:1.259,10.778)]、术前淋巴结转移[O^R=3.557(95%CI:1.216,10.408)]、癌组织miR-196b表达[O^R=3.979(95%CI:1.359,11.641)]是NSCLC患者预后的危险因素(P <0.05),癌组织IGFBP-3表达阳性[O^R=0.220(95%CI:0.075,0.642)]是NSCLC患者预后的保护因素(P <0.05)。癌组织miR-196b、IGFBP-3及联合预测NSCLC患者预后的敏感性分别为66.25%(95%CI:0.512,0.797)、60.00%(95%CI:0.496,0.781)、87.50%(95%CI:0.725,0.963),特异性分别为69.74%(95%CI:0.534,0.825)、76.32%(95%CI:0.603,0.892)、72.37%(95%CI:0.576,0.861),曲线下面积分别为0.703、0.680、0.805。miR-196b低表达组生存情况优于高表达组(P <0.05)。IGFBP-3阳性表达组生存情况优于阴性表达组(P <0.05)。结论 NSCLC患者癌组织miR-196b、IGFBP-3表达与预后相关,且联合预测NSCLC患者预后效能良好。

多发性骨髓瘤患者血清微小RNA-625和微小RNA-203的水平及临床意义

目的探讨多发性骨髓瘤(MM)患者血清微小RNA-625(miR-625)、血清微小RNA-203(miR-203)水平及临床意义。方法选取2021年6月—2023年8月本院治疗的103例确诊MM患者为观察组,根据多发性骨髓瘤国际分期体系(ISS)分为Ⅰ期(n=23)、Ⅱ期(n=31)和Ⅲ期(n=49)。按照诊疗情况将患者分为初诊组(n=75)和复发组(n=28);另选取103例同期本院体检健康者为对照组。采用逆转录-实时定量聚合酶链反应(RT-qPCR)法测定血清miR-625、miR-203水平;采用多因素Logistic回归模型分析MM的影响因素;采用受试者工作特征(ROC)曲线分析血清miR-625、miR-203对MM患者的诊断价值。结果观察组M蛋白、血红蛋白、白蛋白、miR-625和miR-203水平均低于对照组,血肌酐、24 h尿蛋白、尿素氮、血清β_(2)微球蛋白和血清钙水平高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。初诊组MM患者血清miR-625、miR-203水平均高于复发组,差异有统计学意义(P<0.05)。Ⅱ期、Ⅲ期患者血清miR-625、miR-203水平均低于Ⅰ期患者,Ⅲ期患者血清miR-625、miR-203水平均低于Ⅱ期患者,差异有统计学意义(P<0.05)。溶骨性病变<2个的MM患者血清miR-203水平低于溶骨性病变≥2个的患者,差异有统计学意义(P<0.05);骨病分级为1~2级的MM患者血清miR-625水平高于骨病分级为3~4级的患者,差异有统计学意义(P<0.05)。miR-625、miR-203是MM发生的保护因素(P<0.05)。血清miR-625、miR-203诊断MM的曲线下面积(AUC)分别为0.808、0.866,二者联合诊断的AUC为0.919,二者联合诊断优于血清miR-625、miR-203各自单独诊断(Z_(二者联合-miR-625)=3.816、Z_(二者联合-miR-203)=2.157,P=0.001、0.031)。结论MM患者血清miR-625、miR-203水平下降,二者联合对MM具有较高的诊断价值。

血清microRNA-155、microRNA-21、趋化素、瘦素与糖尿病肥胖患者胰岛素抵抗的相关性

目的 探讨糖尿病肥胖患者血清microRNA-155(miR-155)、microRNA-21(miR-21)、趋化素、瘦素水平与胰岛素抵抗(IR)的相关性。方法 选取2022年1月—2023年4月山东中医药大学第二附属医院收治的138例2型糖尿病(T2DM)患者为研究对象,其中肥胖患者73例(肥胖组),非肥胖患者65例(非肥胖组)。肥胖组中有IR 45例(IR组),无IR 28例(非IR组)。收集患者一般资料,包括性别、体质量指数(BMI)、年龄、颈围(NC)、腰围(WC)、空腹血糖(FPG)、甘油三酯(TG)、空腹胰岛素(FINS)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、miR-155、miR-21、趋化素、瘦素、胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)水平;通过多因素逐步Logistic回归模型分析T2DM肥胖患者发生IR的危险因素;绘制受试者工作特征(ROC)曲线,分析miR-155、miR-21、趋化素、瘦素诊断T2DM肥胖患者IR的效能;Pearson法分析miR-155、miR-21、趋化素、瘦素与HOMA-IR的相关性。结果 肥胖组miR-155相对表达量低于非肥胖组(P <0.05),miR-21、趋化素、瘦素、HOMA-IR高于非肥胖组(P <0.05)。IR组miR-155相对表达量低于非IR组(P <0.05),NC、WC、miR-21、趋化素、瘦素水平高于非IR组(P<0.05)。多因素逐步Logistic回归分析结果显示:NC [O^R=1.416(95%CI:1.038,1.932)]、WC [O^R=1.227(95%CI:1.049,1.435)]、miR-155 [O^R=1.763(95%CI:1.205,2.579)]、miR-21[O^R=1.932(95%CI:1.356,2.753)]、趋化素[O^R=2.074(95%CI:1.492,2.883)]、瘦素[O^R=1.628(95%CI:1.246,2.127)]是T2DM肥胖患者发生IR的危险因素(P <0.05)。ROC曲线分析结果显示,miR-155、miR-21、趋化素、瘦素诊断T2DM肥胖患者IR的曲线下面积分别为0.865、0.909、0.874和0.871;敏感性为77.8%(95%CI:0.614,0.825)、86.7%(95%CI:0.792,0.917)、95.6%(95%CI:0.713,0.965)和80.0%(95%CI:0.692,0.917);特异性为85.7%(95%CI:0.647,0.903)、82.1%(95%CI:0.732,0.914)、75.0%(95%CI:0.675,0.928)和89.3%(95%CI:0.656,0.944)。miR-155与HOMA-IR呈负相关(r=-0.573,P=0.000),miR-21、趋化素、瘦素与HOMA-IR均呈正相关(r=0.531、0.558和0.568,均P=0.000)。结论 T2DM肥胖患者中IR较多,且miR-155、miR-21、趋化素、瘦素是T2DM肥胖患者发生IR的危险因素。