MicroRNA-222对肺腺癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响

目的探讨microRNA-222(miR-222)对肺腺癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响。方法将miR-222和对照分别转染入肺腺癌细胞系A549进行活细胞计数法试剂盒(CCK-8)增殖实验、Transwell迁移及Matrigel侵袭实验,观察miR-222对肺腺癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响。运用荧光素酶报告实验、实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)及Western blot验证miR-222靶向下调ETS1的过程。结果 CCK-8增殖实验,Transwell迁移及Matrigel侵袭实验发现,与对照组相比miR-222能够促进肺腺癌细胞增殖、迁移和侵袭。荧光素酶报告实验、qRT-PCR及Western blot实验发现,miR-222可以靶向下调ETS1的表达,且ETS1参与调节上述过程。结论 miR-222通过靶向下调ETS1,促进肺腺癌细胞增殖、迁移和侵袭。

microRNA-222通过Akt信号通路调控人外周血内皮祖细胞迁移

目的 探讨microRNA-222（miR-222）通过调控Akt信号通路对内皮祖细胞（EPCs）迁移功能的影响及对靶向调控转录因子ETS-1（ETS proto-oncogene 1, transcription factor）的影响。方法 从正常成人外周静脉血分离、体外培养后鉴定EPCs。分别向人内皮祖细胞（hEPCs）转染人工合成的miR-222的模拟物（mimic）、抑制物（inhibitor）和相应的阴性对照（NC）。用荧光定量PCR法测miR-222及ETS-1 mRNA的表达。应用Western blot测量每组的ETS-1、p-Akt和Akt的蛋白表达。各组EPCs用Transwell检测其迁移。结果 miR-222可以靶向影响ETS-1的mRNA和蛋白表达。与对照组比较，上调miR-222表达可致ETS-1的mRNA和蛋白表达降低，同时抑制EPCs的迁移能力（均P＜0.05）。相反，下调miR-222表达可致ETS-1的mRNA和蛋白表达升高，同时增强EPCs的迁移能力（均P＜0.05）。Western blot检测显示，上调miR-222表达抑制p-Akt的蛋白水平；下调miR-222表达增强p-Akt的蛋白水平（均P＜0.05）。结论 miR-222可通过调控Akt信号通路和靶向转录因子ETS-1影响EPCs的迁移功能。

MicroRNA-222调控HUVEC c-kit基因表达及对内皮微粒的影响

目的:探讨微小RNA(miR)-222及特异性miR-222抑制剂对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)c-kit基因的mRNA和蛋白表达、内皮微粒的影响。方法:设计miR-222-3p mimic和miR-222-3p inhibitor及相应的阴性对照(mimic control和inhibitor control),分别转染HUVEC,通过实时荧光定量聚合酶链式反应技术(qRT-PCR)验证转染效率。利用qRT-PCR检测c-kit基因mRNA表达水平;免疫印迹技术分析c-kit蛋白表达水平;CD144标记内皮微粒,流式细胞仪检测miR-222转染对内皮微粒分泌的影响。结果:与mimic control转染组相比,转染miR-222-3pmimic均显著降低c-kit基因mRNA和蛋白表达水平。与inhibitor control转染组相比,转染miR-222-3p inhibitor均显著提高c-kit基因mRNA和蛋白表达水平。流式细胞仪检测显示miR-222-3p表达上调导致内皮微粒分泌增加,miR-222-3p表达下调导致内皮微粒分泌减少。结论:miR-222表达上调抑制c-kit基因mRNA的表达,进而抑制蛋白的表达,miR-222表达上调可能通过引起HUVEC株细胞活化而致内皮微粒分泌增加,进而介导了内皮细胞功能的紊乱。

MicroRNA-196b、IGFBP-3在非小细胞肺癌组织中的表达及与预后关系

目的 探究microRNA-196b(miR-196b)、胰岛素样生长因子结合蛋白-3(IGFBP-3)在非小细胞肺癌(NSCLC)组织中的表达及与预后的关系。方法 选取2020年4月—2022年4月在无锡市第二人民医院手术治疗的NSCLC患者78例。收集患者的病历资料,采用实时荧光定量聚合酶链反应检测癌组织、癌旁组织中miR-196b、IGFBP-3的表达。所有患者随访12个月,根据预后结局分为进展组、稳定组。筛查NSCLC患者预后的影响因素,评估组织中miR-196b、IGFBP-3表达对NSCLC患者预后的预测效能。分析癌组织中miR-196b、IGFBP-3不同表达患者生存曲线的差异。结果 进展组临床分期Ⅲ期占比、术前淋巴结转移率均高于稳定组(P <0.05)。进展组癌组织miR-196b相对表达量高于稳定组(P <0.05),IGFBP-3阳性表达率低于稳定组(P <0.05)。癌组织miR-196b相对表达量高于癌旁组织(P <0.05),IGFBP-3阳性表达率低于癌旁组织(P <0.05)。多因素逐步Logistic回归分析结果显示:临床分期[O^R=3.684(95%CI:1.259,10.778)]、术前淋巴结转移[O^R=3.557(95%CI:1.216,10.408)]、癌组织miR-196b表达[O^R=3.979(95%CI:1.359,11.641)]是NSCLC患者预后的危险因素(P <0.05),癌组织IGFBP-3表达阳性[O^R=0.220(95%CI:0.075,0.642)]是NSCLC患者预后的保护因素(P <0.05)。癌组织miR-196b、IGFBP-3及联合预测NSCLC患者预后的敏感性分别为66.25%(95%CI:0.512,0.797)、60.00%(95%CI:0.496,0.781)、87.50%(95%CI:0.725,0.963),特异性分别为69.74%(95%CI:0.534,0.825)、76.32%(95%CI:0.603,0.892)、72.37%(95%CI:0.576,0.861),曲线下面积分别为0.703、0.680、0.805。miR-196b低表达组生存情况优于高表达组(P <0.05)。IGFBP-3阳性表达组生存情况优于阴性表达组(P <0.05)。结论 NSCLC患者癌组织miR-196b、IGFBP-3表达与预后相关,且联合预测NSCLC患者预后效能良好。

血清microRNA-155、microRNA-21、趋化素、瘦素与糖尿病肥胖患者胰岛素抵抗的相关性

目的 探讨糖尿病肥胖患者血清microRNA-155(miR-155)、microRNA-21(miR-21)、趋化素、瘦素水平与胰岛素抵抗(IR)的相关性。方法 选取2022年1月—2023年4月山东中医药大学第二附属医院收治的138例2型糖尿病(T2DM)患者为研究对象,其中肥胖患者73例(肥胖组),非肥胖患者65例(非肥胖组)。肥胖组中有IR 45例(IR组),无IR 28例(非IR组)。收集患者一般资料,包括性别、体质量指数(BMI)、年龄、颈围(NC)、腰围(WC)、空腹血糖(FPG)、甘油三酯(TG)、空腹胰岛素(FINS)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、miR-155、miR-21、趋化素、瘦素、胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)水平;通过多因素逐步Logistic回归模型分析T2DM肥胖患者发生IR的危险因素;绘制受试者工作特征(ROC)曲线,分析miR-155、miR-21、趋化素、瘦素诊断T2DM肥胖患者IR的效能;Pearson法分析miR-155、miR-21、趋化素、瘦素与HOMA-IR的相关性。结果 肥胖组miR-155相对表达量低于非肥胖组(P <0.05),miR-21、趋化素、瘦素、HOMA-IR高于非肥胖组(P <0.05)。IR组miR-155相对表达量低于非IR组(P <0.05),NC、WC、miR-21、趋化素、瘦素水平高于非IR组(P<0.05)。多因素逐步Logistic回归分析结果显示:NC [O^R=1.416(95%CI:1.038,1.932)]、WC [O^R=1.227(95%CI:1.049,1.435)]、miR-155 [O^R=1.763(95%CI:1.205,2.579)]、miR-21[O^R=1.932(95%CI:1.356,2.753)]、趋化素[O^R=2.074(95%CI:1.492,2.883)]、瘦素[O^R=1.628(95%CI:1.246,2.127)]是T2DM肥胖患者发生IR的危险因素(P <0.05)。ROC曲线分析结果显示,miR-155、miR-21、趋化素、瘦素诊断T2DM肥胖患者IR的曲线下面积分别为0.865、0.909、0.874和0.871;敏感性为77.8%(95%CI:0.614,0.825)、86.7%(95%CI:0.792,0.917)、95.6%(95%CI:0.713,0.965)和80.0%(95%CI:0.692,0.917);特异性为85.7%(95%CI:0.647,0.903)、82.1%(95%CI:0.732,0.914)、75.0%(95%CI:0.675,0.928)和89.3%(95%CI:0.656,0.944)。miR-155与HOMA-IR呈负相关(r=-0.573,P=0.000),miR-21、趋化素、瘦素与HOMA-IR均呈正相关(r=0.531、0.558和0.568,均P=0.000)。结论 T2DM肥胖患者中IR较多,且miR-155、miR-21、趋化素、瘦素是T2DM肥胖患者发生IR的危险因素。

血清microRNA-21、microRNA-193a-3p表达与结直肠癌患者手术预后的关系

目的探究血清microRNA-21(miR-21)、microRNA-193a-3p(miR-193a-3p)水平与结直肠癌患者手术预后的关系。方法回顾性分析2020年1月—2022年1月苏州大学附属第一医院收治112例结直肠癌患者的病历资料。患者均接受结直肠癌根治术,术后随访16个月,记录患者的预后生存结局,多因素逐步Logistic回归分析结直肠癌患者手术预后的影响因素,评估血清miR-21、miR-193a-3p对结直肠癌患者预后的预测效能。结果112例结直肠癌患者死亡22例,病死率为19.64%;生存90例,生存率为80.36%。死亡组术前血清miR-21 mRNA相对表达量、临床分期Ⅲ期占比、淋巴结转移率均高于生存组(P<0.05),血清miR-193a-3p m RNA相对表达量低于生存组(P<0.05)。多因素逐步Logistic回归分析结果显示,临床分期Ⅲ期[OR=3.777(95%CI:1.399,10.194)]、淋巴结转移[OR=5.099(95%CI:1.715,15.156)]、miR-21表达升高[OR=4.889(95%CI:1.645,14.533)]、miR-193a-3p表达降低[OR=4.402(95%CI:1.481,13.084)]均是直肠癌患者预后的影响因素(P<0.05)。受试者工作特性曲线分析结果显示,血清miR-21、miR-193a-3p单一及联合预测结直肠癌预后的敏感性分别为69.04%(95%CI:0.487,0.813)、72.73%(95%CI:0.495,0.884)、86.36%(95%CI:0.640,0.964),特异性分别为62.22%(95%CI:0.513,0.720)、68.89%(95%CI:0.581,0.780)、90.00%(95%CI:0.814,0.950),曲线下面积分别为0.782、0.731和0.901。结论结直肠癌患者术前miR-21、miR-193a-3p表达与术后预后密切相关,且在结直肠癌患者的预后结局中表现出良好的预测效能。

miR-222-5p靶向WNK2基因促进肝细胞癌生长

目的 探讨miR-222-5p对肝细胞癌(HCC)生长的影响及其分子机制。方法 实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测miR-222-5p和WNK2 mRNA在HCC组织、癌旁组织及正常肝细胞系L02、不同HCC细胞系Hep3B、HepG2、HuH-7中表达;生物信息学预测和双荧光素酶验证miR-222-5p和WNK2靶向关系;取生长密度达50%~60%的HepG2癌细胞,分为miR-222-5p NC组、miR-222-5p mimics组、miR-222-5p inhibitor组、miR-222-5p NC+pSUPER-si NC组、miR-222-5p NC+pSUPER-si WNK2组、miR-222-5p inhibitor+pSUPER-si NC组、miR-222-5p inhibitor+pSUPER-si WNK2组、miR-222-5p NC+pcDNA组、miR-222-5p NC+pcDNA-WNK2组、miR-222-5p mimics+pcDNA组、miR-222-5p mimics+pcDNA-WNK2组,另取未转染L02正常肝细胞和HepG2癌细胞。24 h后,噻唑蓝(MTT)法检测细胞增殖率;平板克隆法检测克隆形成能力;裸鼠成瘤实验检测细胞在动物体内成瘤能力;Western印迹法检测WNK2蛋白表达水平。结果 与癌旁组织及正常肝细胞相比,HCC组织及各细胞系中miR-222-5p表达水平明显升高,WNK2 mRNA和蛋白水平明显降低(P<0.05)。与miR-222-5p NC组相比,miR-222-5p mimics组miR-222-5p表达水平、增殖活性、克隆形成数和成瘤能力明显升高(P<0.05),miR-222-5p inhibitor组miR-222-5p表达水平、增殖活性、克隆形成数和成瘤能力明显降低,WNK2蛋白表达水平升高(P<0.05)。miR-222-5p和WNK2存在靶向关系。与miR-222-5p NC+pcDNA组相比,miR-222-5p NC+pcDNA WNK2组细胞增殖活性、克隆形成数和成瘤能力明显降低(P<0.05);miR-222-5p mimics+pcDNA组增殖活性、克隆形成数和成瘤能力明显升高(P<0.05)。与miR-222-5p NC+pcDNA WNK2组相比,miR-222-5p mimics+pcDNA WNK2组细胞增殖活性、克隆形成数和成瘤能力明显升高(P<0.05)。与miR-222-5p mimics+pcDNA组相比,miR-222-5p mimics+pcDNA WNK2组细胞增殖活性、克隆形成数和成瘤能力明显降低(P<0.05)。结论 过表达miR-222-5p可能通过靶向抑制WNK2表达促进肝癌HepG2细胞的增殖、克隆形成和成瘤能力,促进HCC生长。

清肾颗粒对非透析慢性肾脏病湿热证患者血清microRNA-21、Wnt4及β-catenin的影响

目的观察清肾颗粒对非透析慢性肾脏病(chronic kidney disease,CKD)湿热证患者血microRNA-21、Wnt4及β-catenin的影响,探讨其保护肾功能、改善临床症状的作用机制。方法选取66例符合纳入标准的CKD湿热证患者,最终完成64例,对照组和观察组各32例。对照组采用CKD常规基础治疗,观察组在对照组治疗基础上加用清肾颗粒口服,疗程均为12周。观察和比较两组患者治疗前后中医症状积分及证候疗效,肾功能指标[血尿素氮(blood urea nitrogen,BUN)、肾小球滤过率(estimated glomerular filtration rate,eGFR)、血清肌酐(serum creatinine,SCr)],微炎症、营养指标[超敏C反应蛋白(hypersensitive C-reactive protein,hs-CRP)、白蛋白(albumin,Alb)、前白蛋白(prealbumin,PAB)],血清microRNA-21、Wnt4及β-catenin水平。结果两组患者治疗后中医症状积分较治疗前均显著降低(P<0.05),且观察组降低程度显著大于对照组(P<0.05);两组患者临床疗效比较,差异无统计学意义(P>0.05)。观察组BUN、SCr水平,eGFR较治疗前显著改善(P<0.05),且改善程度显著优于对照组(P<0.05);与治疗前比较,两组患者治疗后血清hs-CRP水平均显著降低(P<0.05),Alb、PAB水平均显著升高(P<0.05),且观察组血清hs-CRP、Alb、PAB水平改善程度优于对照组(P<0.05);治疗前两组患者血清microRNA-21、Wnt4、β-catenin水平均显著高于正常组(P<0.05),观察组患者治疗后血清microRNA-21、Wnt4、β-catenin水平均显著降低(P<0.05),且降低程度显著大于对照组(P<0.05)。结论清肾颗粒能够改善CKD湿热证患者肾功能及微炎症、营养不良状态,减轻临床症状,其机制可能与降低microRNA-21表达水平,靶向抑制Wnt/β-catenin信号通路有关。

血管内超声参数联合microRNA-206评估非ST段抬高型急性心肌梗死患者病变严重程度及预后的价值

目的探讨血管内超声(IVUS)参数联合microRNA-206(miR-206)评估非ST段抬高型急性心肌梗死(NSTEAMI)患者病变严重程度及预后的价值。方法选取2019年3月-2021年4月河北北方学院附属第一医院收治的105例NSTEAMI患者,所有患者行经皮冠状动脉介入术(PCI),根据病变严重程度将患者分为单支病变组(55例)、双支病变组(32例)、多支病变组(18例)。对比不同病变程度患者IVUS参数、血清miR-206,分析IVUS参数、血清miR-206与NSTEAMI患者病变严重程度的相关性。随访2年,根据是否发生MACE分为发生组与非发生组。对比发生组与非发生组的临床资料,采用多因素逐步Logistic回归模型分析NSTEAMI患者发生主要不良心脏事件(MACE)的影响因素。绘制受试者工作特征(ROC)曲线,评估IVUS参数、血清miR-206预测NSTEAMI患者发生MACE的效能。结果多支病变组斑块负荷、斑块面积、重构指数、偏心指数、血清miR-206相对表达量均高于单支、双支组(P<0.05),且双支病变组均高于单支病变组(P<0.05)。Pearson相关性分析结果显示,血管外弹力膜面积与NSTEAMI患者病变严重程度无相关性(r=0.271,P=0.325);斑块负荷、斑块面积、重构指数、偏心指数、血清miR-206与NSTEAMI患者病变严重程度呈正相关(r=0.416、0.382、0.423、0.507和0.394,均P=0.000)。随访2年,失访2例,剩余103例患者中32例(31.07%)发生MACE,71例(68.93%)未发生MACE。发生组多支病变、血运未重建占比、斑块负荷、斑块面积、重构指数、偏心指数、血清miR-206相对表达量均高于非发生组(P<0.05),淋巴细胞计数、血红蛋白水平均低于非发生组(P<0.05)。多因素逐步Logistic回归分析结果显示:多支病变[OR=3.466(95%CI:1.523,7.884)]、血运未重建[OR=2.776(95%CI:1.220,6.315)]、斑块负荷[OR=3.155(95%CI:1.387,7.177)]、重构指数[OR=3.842(95%CI:1.689,8.740)]、偏心指数[OR=4.166(95%CI:1.831,9.477)]、血清miR-206[OR=4.500(95%CI:1.978,10.236)]为NSTEAMI患者发生MACE的危险因素(P<0.05)。ROC曲线结果显示,斑块负荷、重构指数、偏心指数、血清miR-206四者联合预测NSTEAMI患者发生MACE的敏感性为88.52%(95%CI:0.674,0.957),特异性为92.86%(95%CI:0.713,0.968),曲线下面积为0.900(95%CI:0.812,0.953)。结论IVUS参数(斑块负荷、重构指数、偏心指数)、血清miR-206在评估NSTEAMI患者病变严重程度与预后中具有重要价值,且四者联合具有更高的预测价值。

早发型子痫前期患者血清microRNA-26b表达及其与胎盘早剥发生的关系

目的分析早发型子痫前期患者血清microRNA-26b(miR-26b)表达及其与胎盘早剥发生的关系。方法选取2019年8月至2022年8月荆州市中心医院收治的102例早发型子痫前期患者作为研究对象。检测所有患者miR-26b相对表达量,随访至患者分娩,根据胎盘早剥发生情况分成胎盘早剥组与非胎盘早剥组,分析早发型子痫前期患者血清miR-26b表达及其与胎盘早剥发生的关系。结果随访至产妇分娩,102例早发型子痫前期患者胎盘早剥发生率为17.65%(18/102)。胎盘早剥组血清miR-26b相对表达量高于非胎盘早剥组(P<0.05)。根据确诊疾病时血清miR-26b四分位数将患者分为Q1组(n=25)、Q2组(n=27)、Q3组(n=24)及Q4组(n=26),Q4组胎盘早剥发生率高于Q1组、Q2组及Q3组(P<0.05)。经点二列相关性分析检验,血清miR-26b与早发型子痫前期患者胎盘早剥发生率呈正相关(r=0.458,P<0.05)。绘制受试者工作特征(ROC)曲线,血清miR-26b对早发型子痫前期患者胎盘早剥具有中等预测价值,且当血清miR-26b相对表达量为2.465时,可获得最佳预测价值。结论早发型子痫前期患者血清miR-26b与胎盘早剥发生有关,检测血清miR-26b相对表达量能为预测胎盘早剥发生提供重要价值。

MS-222和丁香酚胁迫对四指马鲅幼鱼鳃及肝脏组织微观结构的影响

【目的】探究不同质量浓度的MS-222和丁香酚胁迫对四指马鲅(Eleutheronema tetradactylum)幼鱼鳃和肝脏组织损伤的影响。【方法】设置7个浓度的MS-222(20、30、35、40、45、50、60 mg/L)和7个浓度的丁香酚(5、10、20、25、30、40、50 mg/L),分析不同处理对平均全长4.5(±0.5)cm、平均体质量1.5(±0.5)g的四指马鲅幼鱼的静水麻醉效应。【结果】当MS-222浓度不小于35 mg/L时,麻醉467 s后幼鱼开始出现应激反应;浓度为50 mg/L时可将部分幼鱼诱导进入麻醉期,浓度为60 mg/L时可在293 s后将全部幼鱼诱导进入麻醉期。丁香酚浓度不小于25 mg/L时,麻醉291 s后幼鱼开始出现应激反应;浓度为30 mg/L时可将部分幼鱼诱导进入麻醉期;浓度为40、50 mg/L时,分别可以在194 s和102 s将全部幼鱼诱导进入麻醉期。随着MS-222和丁香酚浓度的升高,幼鱼进入同一麻醉时期的时间显著缩短(P<0.05),高浓度下四指马鲅幼鱼进入麻醉时期的时间过快,超过耐受值可能对鱼体产生一定毒害作用,导致鱼体死亡。观察幼鱼组织病理切片发现,随着MS-222和丁香酚浓度的升高,幼鱼肝细胞出现空泡,排列紊乱,核内可见核溶解,肝板结构不清;鳃小片弯曲,末端肿大,严重者可胀破、脱落。【结论】适度的麻醉剂量可以降低鱼体对外界环境的应激反应,减少耗氧,不同浓度的MS-222和丁香酚(5 mg/L除外)均可在3 min内对四指马鲅幼鱼产生镇静作用,当2种麻醉剂浓度过高、麻醉时间过长以及幼鱼长时间处于应激状态时,会出现死亡现象。

化瘀杀胚汤联合甲氨蝶呤治疗异位妊娠的疗效及对TGF-β/Smad2/3蛋白水平和microRNA-30d-5p表达量的影响

【目的】探讨化瘀杀胚汤(由丹参、赤芍、桃仁、蜈蚣、紫草、天花粉、三七等中药组成)联合甲氨蝶呤治疗异位妊娠疗效及对患者TGF-β/Smad2/3蛋白水平和microRNA-30d-5p表达量的影响。【方法】将104例异位妊娠患者随机分为观察组和对照组,每组各52例。对照组给予甲氨蝶呤联合米非司酮治疗,观察组在对照组的基础上加用化瘀杀胚汤治疗,连续用药3 d并随访观察1个月。比较2组患者保守治疗成功率、血β人绒毛膜促性腺激素(β-HCG)水平恢复正常时间以及异位妊娠包块吸收时间、治疗后输卵管完全通畅率与不通畅率,观察2组保守治疗成功患者治疗前后血清TGF-β/Smad2/3蛋白水平和microRNA-30d-5p相对表达量的变化情况。【结果】(1)观察组的保守治疗成功率为94.23%(49/52),明显高于对照组的71.15%(37/52),差异有统计学意义(P<0.05)。(2)与对照组比较,观察组的血β-HCG恢复正常时间及包块吸收时间均明显缩短,差异均有统计学意义(P<0.01)。(3)观察组治疗后的输卵管完全通畅率为55.77%(29/52),明显高于对照组的21.15%(11/52);不通畅率为19.23%(10/52),明显低于对照组的59.62%(31/52),差异均有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。(4)与治疗前比较,2组保守治疗成功患者治疗结束1个月后的TGF-β/Smad2/3蛋白水平和microRNA-30d-5p相对表达量均明显降低(P<0.05或P<0.01);与对照组比较,观察组治疗结束1个月后的TGF-β/Smad2/3蛋白水平和microRNA-30d-5p相对表达量均明显降低,差异均有统计学意义(P<0.01)。(5)2组患者的不良反应均以胃肠道不适为主,观察组的不良反应发生率为25.00%(13/52),明显低于对照组的46.15%(24/52),组间比较,差异有统计学意义(P<0.05)。【结论】化瘀杀胚汤联合甲氨蝶呤治疗异位妊娠,可有效提高药物保守治疗的成功率,有助于包块的吸收以及输卵管通畅,能有效降低患者的TGF-β/Smad2/3蛋白水平及microRNA-30d-5p的相对表达量,且药物安全性较高。

microRNA-124在阿尔兹海默症中的作用及针刺干预研究进展

阿尔兹海默症(AD)是老年人常见的神经退行性疾病。目前认为AD的病因大多与大脑中β-淀粉样蛋白(Aβ)的异常沉积、相关蛋白Tau的过度磷酸化以及各种细胞因子、补体的释放有关。microRNA-124在中枢神经系统中高度表达,与许多神经生理和病理过程相关。microRNA-124通过Aβ沉积、Tau蛋白过度磷酸化、神经炎症、氧化应激、神经元兴奋性和神经分化等多种方式在AD中发挥作用。它还可能通过调节细胞凋亡对突触可塑性和轴突生长产生不利影响,进而影响AD。因此,探讨microRNA-124在AD中的表达变化以及靶向治疗至关重要。针刺治疗AD疗效明确,可能与microRNA-124调控相关。文章就AD所具有的几个典型组织病理学特征与microRNA-124的相关性进行综述,包括老年斑中Aβ的积累、Tau过度磷酸化、神经炎症和突触丧失。综述了microRNA-124通过靶向不同的基因与调节下游信号在AD中发挥作用,以及针刺治疗AD的可能干预机制,为未来治疗提供新思路。

MS-222对许氏平鲉幼鱼麻醉效果的研究

本研究测试了不同浓度MS-222对许氏平鲉(Sebastes schlegelii)幼鱼的麻醉效果,确定了3种规格幼鱼在不同浓度MS-222作用下达到深度镇静期(A2)和麻醉期(A4)的效应时间及最佳镇静、麻醉浓度和适宜运输浓度。结果显示,在水温为(14.5±0.5)℃、pH为7.85、盐度为30、溶解氧浓度大于7.5 mg/L条件下,平均体质量为(10.11±2.13) g (W10)、(42.38±5.19) g (W40)和(80.79±6.65) g(W80)的3种规格幼鱼达到A2期和A4期的效应时间随麻醉剂浓度升高逐渐缩短,同一麻醉浓度下效应时间随体质量增加逐渐延长,通过二次曲线回归分析各规格幼鱼达A2期和A4期的效应时间与MS-222浓度的关系,效应时间为180s时,W10、W40和W80组达A2期对应的MS-222浓度分别为27.38、29.94和40.39 mg/L,达A4期对应的MS-222浓度分别为95.32、107.32和116.58 mg/L;A2期不同规格幼鱼的呼吸频率与对照组无显著差异,A4期幼鱼呼吸频率随麻醉剂浓度升高逐渐下降,且显著低于对照组(P<0.05);MS-222浓度为30~50mg/L时,8h模拟运输中W10、W40和W80幼鱼存活率均为100%,显著高于对照组,60mg/L时,幼鱼运输存活率分别为60%、80%和100%,W10、W40和W80适宜运输浓度范围建议为27.38~50.00、29.94~50.00、40.39~60.00 mg/L。相关结果可为许氏平鲉不同规格幼鱼的安全转运、生物学实验的抗应激操作提供指导。

UV_(222)/PDS体系降解对乙酰氨基酚的效能及机制研究

以UV_(222)/过硫酸盐(PDS)为研究体系,考察了对非甾体类抗炎药对乙酰氨基酚(ACT)的降解效能。研究了PDS浓度、pH、天然有机物(NOM)、阴离子(Cl^(-)、HCO_(3)^(-)/CO_(3)^(2-))对ACT降解效果的影响。试验结果表明单独UV_(222)或PDS体系中ACT稳定性较强,而在UV_(222)/PDS体系中,由于催化产生了活性物质(如HO·、SO_(4)^(·-)、^(1)O_(2)、O_(2)^(·-)),ACT降解效率明显升高。体系中提高氧化剂投加量或增加溶液pH,均能够提高ACT降解速率;NOM对UV_(222)遮光作用较强,导致其对UV_(222)/PDS降解ACT的抑制作用较明显;水体中存在的Cl^(-)对ACT的降解影响随着浓度增加呈现出先抑制后促进的效果;而HCO-3/CO_(3)^(2-)能够显著促进ACT的降解。此外,值得关注的是,急性毒性研究结果显示,ACT在UV_(222)/PDS体系降解过程中生成的有机产物具有一定的生物毒性。

MicroRNA-3162-3p在儿童原发性免疫性血小板减少症不同临床分期中的表达及其意义

目的:探讨microRNA-3162-3p在儿童原发性免疫性血小板减少症(ITP)不同临床分期中的表达及其意义。方法:纳入96例ITP患儿,按照病程的不同将其分为新诊断组(病程<3个月,40例)、持续性组(病程3-12个月,30例)、慢性组(病程>12个月,26例),同期选择80例健康儿童作为对照组。分离并培养ITP患儿与健康儿童的外周血单个核细胞(PBMNC),采用实时荧光定量PCR法检测外周血PBMNC中microRNA-3162-3p的表达情况,ELISA法检测受试者外周血PBMNC中IL-17、IL-23、IL-10、TGF-β的含量。Spearman相关性分析microRNA-3162-3p与血小板计数、IL-17、IL-23、IL-10、TGF-β的相关性。结果:与对照组相比,ITP患儿的外周血PBMNC中microRNA-3162-3p、IL-10的表达及血小板计数显著下降(P<0.05),IL-17、IL-23、TGF-β显著升高(P<0.05);随着病程的延长,microRNA-3162-3p、IL-10在PBMNC中的表达及血小板计数均显著下降(P<0.05),IL-17、IL-23、TGF-β的表达显著升高(P<0.05)。MicroRNA-3162-3p在ITP患儿PBMNC中的表达与血小板数、IL-10呈正相关(r=0.716、0.667),与IL-17、IL-23、TGF-β呈负相关(r=-0.540、-0.641、-0.560)。结论:MicroRNA-3162-3p在ITP患儿PBMNC中的表达明显降低,参与调控Th17/Treg的失衡,可作为ITP潜在的治疗靶点。

反义microRNA-221与反义microRNA-222抑制人脑胶质瘤细胞的体外与体内生长

目的探讨敲低microRNA（miR）-221和miR-222表达以抑制人脑胶质瘤U251细胞生长的作用及其机制。方法脂质体介导转染反义寡聚核苷酸（AS—miR-221和AS．miR-222）于人脑胶质瘤细胞13251。采用Northern blot鉴定转染后U251细胞的miR-221和miR-222表达水平；四甲基偶氮唑蓝（Myr）法评价AS—miR-221和AS—miR-222抑制U251细胞生长的作用；Transwell实验检测细胞侵袭能力；流式细胞术检测细胞周期的分布和凋亡；Western blot检测转染后U251细胞相关蛋白表达的变化，并用AS—miR-221和AS—miR-222治疗裸鼠皮下移植瘤，观察其在活体内对肿瘤生长的抑制作用。结果Northern blot检测结果显示，AS-miR-221和AS—miR-222共转染后，肿瘤细胞miR-221和miR-222表达明显下降，细胞生长速度降低，细胞穿过率为14．5％，细胞周期出现G0／G1期阻滞，凋亡率（13．7％）增高，并可见connexin43、p27、PUMA、caspase-3、PTEN、TIMP3和Bax等相关蛋白表达增高，而bcl-2表达降低，p53无明显变化。经AS—miR-221和AS—miR-222治疗后，裸鼠皮下移植瘤生长明显受抑。结论AS-miR-221和AS—miR-222共转染可抑制U251细胞的增殖与侵袭，miR-221和miR-222可以作为人脑胶质瘤基因治疗的侯选靶点。

MS-222对墨瑞鳕麻醉效果及血清生化指标的影响

为探索MS-222麻醉剂对墨瑞鳕(734.94±51.36 g)的麻醉效果,在水温18±0.5℃条件下,采用不同浓度(0.10、0.15、0.20、0.30 mg·L^(-1))麻醉剂进行麻醉实验,并分析麻醉复苏后血清生化指标的变化。结果显示,在麻醉及复苏时间效果上,麻醉有效浓度范围为0.185~0.227 mg·L^(-1)。麻醉期间,血清中的葡萄糖、皮质醇含量与对照组相比均存在显著差异(P<0.05),随麻醉剂浓度增加,葡萄糖含量先升高后降低,皮质醇含量先降低再升高;碱性磷酸酶活性和谷丙转氨酶活性仅在0.30 mg·L^(-1)组显著升高(P<0.05);超氧歧化酶活性先降低后升高,过氧化氢酶活性逐渐下降。复苏12 h后,葡萄糖含量、谷丙转氨酶活性、超氧歧化酶活性均恢复到对照组水平,而皮质醇含量除0.10 mg·L^(-1)组、碱性磷酸酶活性及过氧化氢酶活性除0.30 mg·L^(-1)组外,其他组均恢复到对照组水平。综合考虑MS-222麻醉剂的麻醉效果及对墨瑞鳕机体的影响,麻醉剂浓度在0.20 mg·L^(-1)具有最佳效果。研究结果可为MS-222麻醉剂使用安全性及其麻醉机理的分析提供参考依据。

222nm远紫外线的杀菌作用及安全性评价

【目的】环境中的病原菌传播是当前疾病防控中亟待解决的难题,传统紫外线(254 nm)是目前环境消毒的主要方式,因其对机体免疫系统、皮肤和眼睛造成不可逆转的损伤而受到限制,故探索一种无间断、安全有效的消毒手段是一项有前景的研究。【方法】选取恶劣的场地考察222 nm远紫外线无间断照射8 h对环境中病原菌的消杀作用,其中阴性对照组不做处理,阳性对照组敞开放置,远紫外组敞开放置的同时用远紫外线距离30 cm进行照射;对临床常见致病菌(金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、铜绿假单胞菌和大肠埃希菌)涂布后连续照射30 min,并设置阴性和阳性对照组,对比远紫外线与传统紫外线灭菌的差异;通过对比照射距离(20、30 cm)和作用时间(15、30、45、60、75、90 s)考察远紫外线对常见致病菌的表面杀菌率并判断其杀菌能力;将常见致病菌接种至液体培养基中,考察远紫外线对液体中细菌的灭菌效果;以222 nm远紫外线无间断照射小鼠8 h后观察其临床状态、血常规和皮肤组织学变化,初步判断远紫外线长时间照射对机体的安全性。【结果】与阴性对照组相比,阳性对照组培养基上观察到多种细菌,而远紫外组培养基上无细菌定植。222 nm远紫外线无间断照射30 min可杀灭金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、铜绿假单胞菌和大肠埃希菌,照射15 s杀菌率即可高达99.9%。距离20 cm照射222 nm远紫外线的杀菌效果普遍优于距离30 cm照射的杀菌效果。液体杀菌效果评价中,远紫外线的灭菌效果欠佳。小鼠安全性试验结果表明,222 nm远紫外线无间断照射小鼠8 h对其临床症状、内脏器官、血常规及皮肤组织无明显影响,而传统紫外可能会对其造成损伤。【结论】222 nm远紫外线对常见致病菌的表面定植有极强的杀灭作用,杀菌率在15 s即可高达99.9%,且照射距离与杀菌效果成正比,但对液体杀菌效果仍有待改进和提升,且连续照射8 h不会对小鼠的临床状态、血常规和皮肤组织学造成明显影响,有良好的安全性,为环境中疾病防控提供了一个新的方案。

MicroRNA-195/497对香烟烟雾提取物诱导的人支气管上皮细胞中TGF-β表达的影响

目的探讨microRNA-195/497(miR-195/497)在香烟烟雾提取物(CSE)诱导的人支气管上皮细胞中影响转化生长因子-β(TGF-β)表达的作用机制。方法用3%CSE诱导BEAS-2B细胞模拟慢性阻塞性肺疾病(COPD)的发病机制,实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测miR-195、miR-497、SMAD7及TGF-β基因表达。双荧光素酶报告实验验证miR-195、miR-497与SMAD7的靶向关系,将miR-195mimic和miR-497 mimic转染至3%CSE处理的细胞中,qRT-PCR检测SMAD7的表达。将miR-195 mimic、miR-497 mimic和si-SMAD7转染至3%CSE处理的细胞中,qRT-PCR检测miR-195、miR-497、SMAD7、TGF-β的基因表达,Western blotting检测SMAD7、TGF-β的蛋白表达。结果3%CSE组miR-195、miR-497 mRNA相对表达量低于正常细胞组(P<0.05),SMAD7、TGF-βmRNA相对表达量高于正常细胞组(P<0.05)。miR-195 mimic组Wt-SMAD7 mRNA相对表达量低于mimic NC组(P<0.05)。miR-195 mimic组与mimic NC组Wt-SMAD7 mRNA相对表达量比较,差异无统计学意义(P>0.05)。miR-497 mimic组WtSMAD7 mRNA相对表达量低于mimic NC组(P<0.05)。miR-497 mimic组与mimic NC组Mut-SMAD7mRNA相对表达量比较,差异无统计学意义(P>0.05)。miR-195 mimic组SMAD7 mRNA相对表达量低于mimic NC组(P<0.05)。miR-497 mimic组SMAD7 mRNA相对表达量低于mimic NC组(P<0.05)。3%CSE组细胞miR-195和miR-497相对表达量较Control组下降(P<0.05),SMAD7及TGF-β蛋白相对表达量升高(P<0.05);miR-195 mimic+3%CSE组细胞miR-195相对表达量较3%CSE组升高(P<0.05),SMAD7、TGF-β下降(P<0.05),而miR-497相对表达量无明显差异(P>0.05);miR-497 mimic+3%CSE组细胞miR-497相对表达量较3%CSE组升高(P<0.05),SMAD7、TGF-β下降(P<0.05),而miR-195相对表达量无明显差异(P>0.05);si-SMAD7+3%CSE组SMAD7、TGF-β蛋白相对表达量较3%CSE组下降(P<0.05),而miR-195、miR-497无明显差异(P>0.05)。3%CSE组SMAD7、TGF-β蛋白相对表达量较Control组升高(P<0.05),miR-195 mimic+3%CSE组、miR-497 mimic+3%CSE组、si-SMAD7+3%CSE组较3%CSE组下降(P<0.05)。结论miR-195/497可通过调控SMAD7的表达影响CSE诱导的人支气管上皮细胞中TGF-β表达。