JAK2-STAT3途径介导凝血酶诱导的小胶质细胞iNOS的激活致多巴胺能神经元变性

目的探讨JAK2-STAT3途径与凝血酶诱导多巴胺能神经元变性作用的关系。方法20U/ml凝血酶或AG490(10μmol/L)预处理+凝血酶(20U/ml)处理原代培养的小胶质细胞或中脑腹侧混合培养体系,用Westernblot检测小胶质细胞P-JAK1、P-JAK2、JAK2、STAT3、P-STAT3的表达;免疫荧光观察多巴胺能神经元的变性;Westernblot、RT-PCR及激光共聚焦观察iNOS的表达。结果凝血酶处理小胶质细胞2h后诱导JAK2、STAT3的磷酸化,2h和4h分别增加小胶质细胞iNOS的转录和表达,并且24h诱导中脑培养体系多巴胺能神经元变性。而AG490预处理显著地减少对应凝血酶处理组小胶质细胞JAK2和STAT3的磷酸化,抑制iNOS的表达,并且缓解多巴胺能神经元的变性。结论JAK2-STAT3途径介导凝血酶诱导的小胶质细胞iNOS的激活,导致多巴胺能神经元变性。

衰老过程中小胶质细胞分泌白介素-6水平的改变

目的探讨阿尔茨海默病发病过程中与衰老相关的免疫炎性机制。方法体外培养不同年龄阶段SD大鼠的小胶质细胞,免疫细胞化学方法进行小胶质细胞鉴定;用脂多糖(LPS)活化小胶质细胞,观察其形态变化,ELISA法检测培养基中白介素-6(IL-6)的浓度。结果LPS活化后,3个年龄组小胶质细胞形态均无明显改变;青年组、中年组、老年组小胶质细胞培养基中IL-6浓度呈梯度升高,组与组之间差异均有统计学意义(P<0.05)。结论衰老过程中小胶质细胞分泌IL-6的水平逐渐增高,提示衰老介导的免疫炎性机制在阿尔茨海默病发病过程中起着重要作用。

多西环素对LPS诱导的BV-2细胞MHCII表达的抑制效应

目的研究多西环素对LPS诱导的BV-2细胞MHCII表达的影响及其分子机制。方法 BV-2细胞作为小胶质细胞的替代细胞。(1)按常规方法培养BV-2细胞;(2)分组及处理:①对照组:不加任何特殊处理;②脂多糖组:脂多糖(100ng/ml)与BV-2细胞共孵育24h;③多西环素预处理组(多西环素+LPS):BV-2细胞在6孔板分别与多西环素(3个浓度梯度:50μmol/L、100μmol/L、200μmol/L)预孵育30min,然后,细胞再用脂多糖(100ng/ml)处理24h;④多西环素对照组:用细胞免疫荧光共聚焦显微镜观察。(3)Westen Blot检测MHCII蛋白的表达。结果 (1)细胞免疫荧光显示,分别用3种浓度(50μmol/L、100μmol/L、200μmol/L)多西环素预处理后,BV-2细胞MHCII的表达减少,并有量-效关系;(2)Westen Blot显示,多西环素预处理后,BV-2细胞的MHCII蛋白表达减少,3种浓度梯度显示有量-效关系(P<0.01)。结论研究初步证实多西环素预处理能够抑制LPS诱导的BV-2小胶质细胞MHCII的表达。