-
题名甜瓜AMS基因结构分析及基因编辑载体构建
- 1
-
-
作者
才羿
戴冬洋
谭海
王迪
杨芬
王岭
盛云燕
-
机构
黑龙江八一农垦大学
石河子大学
黑龙江省农业科学院大庆分院
-
出处
《新疆农业科学》
CAS
CSCD
北大核心
2023年第1期61-68,共8页
-
基金
国家自然科学基金“花药发育关键转录因子AMS调控甜瓜雄性不育机理研究”(31772330)。
-
文摘
【目的】研究鉴定甜瓜雄性不育候选基因ABORTED MICROSPORES(AMS)的基因家族,分析CRISPR基因编技术并构建其敲除载体,为甜瓜雄性不育基因AMS功能验证提供依据。【方法】采用生物信息学技术鉴定甜瓜雄性不育候选基因ABORTED MICROSPORES(AMS)家族基因,分析其进化关系、保守基序及理化性质。利用CRISPR/Cas9基因编辑技术以甜瓜AMS基因外显子区设计gRNA引物,以载体pHSN401为模板,扩增获得sgRNA克隆框,使用Bsa I酶切pHSN401载体,利用DNA重组酶构建重组载体并转化农杆菌,挑选单克隆进行培养,随后进行菌液PCR鉴定。【结果】甜瓜AMS基因编码的蛋白质长度从501~605 aa不等,平均分子量约为59351 Da,等电点为5.04~6.45,甜瓜大部分AMS基因定位在细胞核;利用CRISPR/Cas9基因编辑技术,在AMS基因的CDS区设计3个靶位点,分别是AMS-pHSN401-1、AMS-pHSN401-2和AMS-pHSN401-3。【结论】AMS基因主要被预测在细胞核中表达,利用CRISPR/Cas9基因编辑技术构建甜瓜敲除重组载体AMS-pHSN401并转化农杆菌,获得阳性克隆。
-
关键词
甜瓜
ABORTED
microsporeS(AMS)
生物信息学
载体构建
-
Keywords
melon
ABORTED microsporeS(AMS)
bioinformatics
vector construction
-
分类号
S652
[农业科学—果树学]
-