血清miR-375、miR-155与原发性肝癌临床分期及预后的关系

目的探讨原发性肝癌患者血清miR-375、miR-155与其临床分期及预后的关系。方法回顾性分析86例原发性肝癌患者资料,比较不同临床分期患者血清miR-375、miR-155表达水平,应用Spearman相关系数分析相关性;将患者以肝外转移分成转移组、非转移组,比较两组患者血清miR-375、miR-155差异,应用受试者曲线(ROC)分析两者诊断临床分期效能;随访1年内生存情况,应用Kaplan-Meier法、COX比例风险模型进行生存分析。结果不同临床分期患者血清miR-375、miR-155表达水平比较差异有统计学意义(P<0.05);血清miR-375表达水平与肿瘤临床分期呈负相关(P<0.05),miR-155表达水平与临床分期呈正相关(P<0.05);转移组血清miR-375表达水平低于非转移组,miR-155表达水平高于非转移组,差异有统计学意义(P<0.05);血清miR-375、miR-155及联合诊断肿瘤转移的AUC分为0.898、0.847、0.941;miR-375高表达患者平均生存时间均长于miR-375低表达患者,miR-155高表达患者平均生存时间均短于miR-155低表达患者,差异有统计学意义(P<0.05);血清miR-375、miR-155表达水平是患者预后独立影响因素(P<0.05)。结论血清miR-375、miR-155与患者临床分期密切相关,是预后独立影响因素指标,可作为原发性肝癌肿瘤转移的重要标志物,对临床诊疗提供参考与指导。

原发性肝癌血清miR-375、miR-25水平变化及其与患者预后关系的研究

目的 探究原发性肝癌(HCC)患者血清miR-375、miR-25水平变化情况及其i与预后的关系。方法 选取2020年3月至2021年3月本院收治的50例HCC患者为观察组,另选取同期30例健康体检者为对照组,采用RT-qPCR检测血清miR-375、miR-25水平,探究HCC患者治疗前后miR-375、miR-25水平变化及其在HC患者预后.诊断中的价值,并分析HCC患者1年生存期的独立影响因素。结果 治疗前,观察组HCC患者miR-375水平低于对照组,其miR-25水平高于对照组(P<0.05);治疗1个月后,观察组HCC患者miR-375水平高于治疗前,其miR-25水平低于治疗前(P<0.05),且其miR-375低于对照组,miR-25高于对照组(P<0.05)。50例HCC患者均接受TACE治疗,其1年生存率为82.00%(41/50)。miR-375诊断HCC患者1年生存期的AUC、灵敏度和特异度分别为0.736(0.626-0.828)、84.00%和63.33%(P<0.05);miR-25诊断HCC的AUC、灵敏度和特异度分别为0.782(0.676-0.867)、80.00%和66.67%(P<0.05)。病灶大小、miR-375、miR-25表达量是HCC患者预后的独立影响因素(P<0.05)。结论 miR-375、miR-25在HCC患者中表达异常,在治疗后miR-375升高,miR-25降低,病灶小、miR-375、miR-25表达量是HCC患者预后的影响因素。

慢性牙周炎患者龈沟液miR-143、miR-375表达及与疾病严重程度的关系

目的探讨慢性牙周炎患者龈沟液微小核糖核酸(miR)-143、miR-375表达及与疾病严重程度的关系。方法选取2022年1月至2023年7月在呼和浩特市第一医院确诊的135例慢性牙周炎患者作为研究组,根据疾病严重程度分为轻度组(n=58)、中度组(n=37)和重度组(n=40)。另选同期在该院体检的健康志愿者127例作为对照组。实时荧光定量PCR检测miR-143、miR-375相对表达水平,酶联免疫吸附试验试剂盒测定龈沟液炎症因子[白细胞介素6(IL-6)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、C-反应蛋白(CRP)]水平。Pearson相关性分析龈沟液miR-143、miR-375表达与临床指标及炎症因子水平的相关性。结果对照组与研究组年龄、性别、刷牙次数、吸烟占比比较,差异无统计学意义(P>0.05)。与对照组比较,研究组龈沟液miR-143相对表达水平显著升高,miR-375相对表达水平显著降低,差异有统计学意义(P<0.05)。与中度组比较,重度组出血指数(BI)、牙龈指数(GI)、牙周袋探针深度(PD)、附着丧失(AL)显著增加,差异有统计学意义(P<0.05)。与中度组比较,重度组IL-6、TNF-α、CRP水平显著升高,差异有统计学意义(P<0.05)。慢性牙周炎患者龈沟液miR-143相对表达水平与BI、GI、PD、AL及龈沟液CRP、TNF-α、IL-6水平均呈正相关(P<0.05);龈沟液miR-375相对表达水平与BI、GI、PD、AL及龈沟液CRP、TNF-α、IL-6水平均呈负相关(P<0.05)。结论慢性牙周炎患者龈沟液miR-143、miR-375表达可评估患者疾病严重程度,对慢性牙周炎病情判断具有参考价值。

CircAGFG1通过miR-375/USP22轴调节食管鳞癌细胞的放射敏感性研究

目的研究环状带有FG重复序列1(CircAGFG1)通过miR-375/泛素特异性蛋白酶22(USP22)轴对食管鳞癌(ESCC)细胞放射敏感性的影响。方法采用实时荧光定量PCR和免疫印迹法检测人ESCC细胞株KYSE150及人ESCC放射性抵抗细胞KYSE150-R中CircAGFG1、miR-375、USP22表达。将体外培养的KYSE150-R细胞随机分为对照组、辐照组、辐照+阴性对照组、辐照+CircAGFG1敲低组、辐照+CircAGFG1敲低+miR-375 inhibitor组,分组转染后,4Gy 6MV-X线辐照后24 h采用实时荧光定量PCR和免疫印迹法检测各组KYSE150-R细胞中CircAGFG1、miR-375、USP22表达;采用CCK-8法和平板集落形成实验检测各组KYSE150-R细胞增殖;采用流式细胞术检测各组KYSE150-R细胞凋亡;采用免疫荧光染色检测各组KYSE150-R细胞凋亡相关蛋白Bax与Bcl-2比值(Bax/Bcl-2)。将各组细胞接种在裸鼠右后肢腋下来构建ESCC移植瘤模型,饲养3周后检测各组裸鼠肿瘤体积及重量。采用双荧光素酶报告基因实验检测KYSE150-R中CircAGFG1对miR-375的靶向调节与miR-375对USP22的靶向调节。结果与KYSE150细胞相比,KYSE150-R细胞中CircAGFG1 mRNA表达、USP22 mRNA与蛋白表达升高(P<0.05),miR-375 mRNA表达降低(P<0.05)。与对照组相比,辐照+CircAGFG1敲低组CircAGFG1 mRNA表达、USP22 mRNA及蛋白表达、细胞增殖率、集落生成率、裸鼠肿瘤体积与肿瘤重量降低(P<0.05),细胞凋亡率、Bax/Bcl-2、miR-375 mRNA表达升高(P<0.05);辐照组、辐照+阴性对照组细胞各指标比较无明显差异(P>0.05)。与辐照组相比,辐照+CircAGFG1敲低组CircAGFG1 mRNA、USP22 mRNA及蛋白表达、细胞增殖率、集落生成率、裸鼠肿瘤体积与肿瘤重量降低(P<0.05),细胞凋亡率、Bax/Bcl-2、miR-375 mRNA表达升高(P<0.05)。与辐照+CircAGFG1敲低组相比,辐照+CircAGFG1敲低+miR-375 inhibitor组USP22 mRNA及蛋白表达、细胞增殖率、集落生成率、裸鼠肿瘤体积与肿瘤重量升高(P<0.05),细胞凋亡率、Bax/Bcl-2、miR-375 mRNA表达降低(P<0.05);辐照+阴性对照组与对照组细胞各指标无明显变化(P>0.05)。CircAGFG1可靶向下调KYSE150-R细胞miR-375表达,而miR-375可靶向下调KYSE150-R细胞USP22表达。结论敲低CircAGFG1可通过上调miR-375来减弱USP22表达,从而增强ESCC细胞的放射敏感性,提升放射性对ESCC细胞的杀伤力,并促使其凋亡。

miR-375靶向PI3K/AKT通路在高糖诱导的人视网膜内皮细胞增殖和血管生成中的作用

目的探讨miR-375靶向磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)/蛋白激酶B(AKT)通路对高糖诱导的人视网膜内皮细胞(hRECs)增殖和血管生成的影响机制。方法体外培养hRECs,对hRECs进行转染及双荧光素酶检测。hRECs分为对照组、高糖组、高糖+miR-375组、高糖+miR-375+LM22B-10组。采用CCK-8实验检测细胞增殖能力,采用血管形成实验检测细胞血管形成能力,采用RT-qPCR检测hRECs内miR-375和PI3K mRNA的表达情况,采用Western blot检测hRECs内PI3K、p-AKT/AKT蛋白表达的情况。结果与对照组比较,高糖组、高糖+miR-375组、高糖+miR-375+LM22B-10组培养48 h和72 h时hRECs增殖活力、PI3K和p-AKT/AKT的蛋白表达水平、血管形成能力和PI3K mRNA表达均显著升高,而miR-375表达降低(均为P<0.05);与高糖组比较,高糖+miR-375组培养48 h和72 h时hRECs增殖活力、PI3K mRNA和蛋白以及p-AKT/AKT的蛋白表达水平、血管形成能力均降低,而miR-375表达升高(均为P<0.05);与高糖+miR-375组比较,高糖+miR-375+LM22B-10组培养48 h和72 h时hRECs增殖活力、血管形成能力和p-AKT/AKT蛋白表达水平均升高(均为P<0.05),而miR-375、PI3K mRNA差异均无统计学意义(均为P>0.05)。转染miR-375模拟物和PI3K野生型载体后,hRECs中相对荧光素酶活性分别较转染miR-375阴性对照、转染PI3K突变型载体后显著降低(均为P<0.05)。结论miR-375靶向抑制PI3K/AKT通路可抑制高糖诱导的hRECs增殖和血管生成,进而缓解DR。

miR-375靶向MMP13抑制骨肉瘤细胞的迁移和侵袭

目的为了探究miR-375是否通过影响基质金属蛋白酶13(MMP13)的表达来调控骨肉瘤(osteosarcoma,OS)恶性特征。方法用Lipofectamine 3000试剂盒将质粒、miRNA转染至骨肉瘤细胞和HEK293细胞中。实时定量聚合酶链反应(real-time quantitative PCR,RT-qPCR)检测OS患者和OS细胞中miR-375和MMP13的表达。蛋白质印迹法(Western blot)分析OS患者和OS细胞中MMP13蛋白的表达。双荧光素酶法分析miR-375与MMP13的靶向关系。伤口愈合和transwell实验分别分析OS细胞的迁移和侵袭。结果OS组织中miR-375的表达低于正常组织。MMP13在OS组织中表达上调。在OS患者中,MMP13的表达与miR-375呈负相关。与转染miRNA对照的OS细胞相比,转染miR-375模拟物OS细胞的迁移和侵袭明显被抑制。MMP13能部分逆转miR-375对OS细胞迁移和侵袭的抑制作用。结论在OS细胞中,过表达miR-375通过调控MMP13的表达抑制细胞的迁移和侵袭。

CCAT1靶向抑制miR-375-3p通过线粒体途径诱导的人口腔癌SAS细胞凋亡

目的:探究长链非编码RNA(lncRNA)结肠癌相关转录因子1(CCAT1)靶向miR-375-3p通过线粒体途径诱导人口腔癌SAS细胞凋亡的作用。方法:人口腔癌SAS细胞随机分为空白组、CCAT1下调组、CCAT1上调组、CCAT1下调对照组、CCAT1上调对照组、miR-375-3p下调组、miR-375-3p上调组、miR-375-3p下调对照组和miR-375-3p上调对照组。转染48 h后,流式细胞术检测细胞凋亡;RT-qPCR检测miR-375-3p表达、线粒体凋亡通路相关的基因半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶3(caspase-3)、半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶9(caspase-9)、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)和Bcl-2相关X蛋白(Bax)的mRNA表达;免疫印迹检测caspase-3、caspase-9、Bcl-2、Bax蛋白表达;双荧光素酶报告实验分析CCAT1与miR-375-3p的靶向关系。结果:与空白组和CCAT1下调对照组比较,CCAT1下调组细胞凋亡率、miR-375-3p表达、caspase-3、caspase-9、Bax mRNA及蛋白表达升高,Bcl-2 mRNA及蛋白表达降低;与空白组和CCAT1上调对照组比,CCAT1上调组细胞凋亡率、miR-375-3p表达、caspase-3、caspase-9、Bax mRNA及蛋白表达降低,Bcl-2 mRNA及蛋白表达升高;与空白组和miR-375-3p下调对照组比较,miR-375-3p下调组细胞凋亡率、miR-375-3p表达、caspase-3、caspase-9、Bax mRNA及蛋白表达降低,Bcl-2 mRNA及蛋白表达升高;与空白组和miR-375-3p上调对照组比较,miR-375-3p上调组细胞凋亡率、miR-375-3p表达、caspase-3、caspase-9、Bax mRNA及蛋白表达升高,Bcl-2 mRNA及蛋白表达降低。双荧光素酶实验结果提示CCAT1可靶向调控miR-375-3p。结论:CCAT1可抑制人口腔癌SAS细胞凋亡,推测是通过靶向抑制miR-375-3p的表达,调控线粒体凋亡通路相关基因及蛋白的表达来实现的。

LncRNA SBF2⁃AS1靶向miR⁃375对胃癌细胞免疫逃逸及mTOR1信号通路的影响

目的探究LncRNA SBF2⁃AS1靶向miR⁃375对胃癌细胞免疫逃逸及mTOR1信号通路的影响。方法Real⁃time PCR法检测正常胃上皮细胞及4种胃癌细胞系中LncRNA SBF2⁃AS1、miR⁃375表达水平,取胃癌细胞将其分为胃癌细胞(GC)组、胃癌细胞+LncRNA SBF2⁃AS1⁃NC(SN)组、胃癌细胞+LncRNA SBF2⁃AS1激动剂(SM)组、胃癌细胞+LncRNA SBF2⁃AS1抑制剂(SI)组、胃癌细胞+miR⁃375⁃NC(MN)组、胃癌细胞+miR⁃375抑制剂(MI)组、胃癌细胞+miR⁃375激动剂(MM)组、胃癌细胞+LncRNA SBF2⁃AS1抑制剂+miR⁃375激动剂(IM)组,免疫印迹法检测免疫逃逸相关因子及mTOR1信号通路蛋白表达,双荧光素酶报告实验证实LncRNA SBF2⁃AS1和miR⁃375的相互作用。结果胃癌细胞系中的LncRNA SBF2⁃AS1 mRNA表达量显著高于正常胃上皮细胞系NGEC(P<0.05),miR⁃375 mRNA表达量显著低于正常胃上皮细胞系NGEC(P<0.05)其中HGC⁃27细胞的LncRNA SBF2⁃AS1、miR⁃375 mRNA值变化最大(P<0.05),因此选取其作为此次实验细胞;GC组、SN组、MN组,PD⁃1、PD⁃L1、mTOR1、p70S6K、4EBP1蛋白表达基本无差异(P>0.05),与与SN组、MN组相比,SM组、MI组PD⁃1、PD⁃L1、mTOR1、p70S6K、4EBP1蛋白表达明显升高(P<0.05),与SM组、MI组相比,SI组、MM组PD⁃1、PD⁃L1、mTOR1、p70S6K、4EBP1蛋白表达明显降低(P<0.05),与SI组、MM组相比,IM组PD⁃1、PD⁃L1、mTOR1、p70S6K、4EBP1蛋白表达明显降低(P<0.05);双荧光素酶报告结果显示,转染LncRNA SBF2⁃AS1后可显著降低miR⁃375⁃3′⁃UTR⁃WT的荧光素酶活性(P<0.05),但对突变基因无显著影响(P>0.05)。结论抑制LncRNA SBF2⁃AS1可有效抑制胃癌细胞免疫逃逸,并抑制mTOR1信号通路表达,其作用机制可能与靶向激活miR⁃375有关。

长链非编码RNA IGF2BP2-AS1通过调控miR-375表达对喉癌细胞迁移及增殖的影响

目的探讨长链非编码RNA(lncRNA)胰岛素样生长因子2 mRNA结合蛋白2(IGF2BP2)-AS1通过调控微RNA-375(miR-375)表达对喉癌细胞迁移和增殖的影响。方法研究时间为2022年1月至2023年11月,研究地点为郑州大学附属洛阳中心医院中心实验室,研究类型为基础研究。实时荧光定量PCR(qPCR)检测喉癌细胞系AMC-NH-8、TU159、TU138、TU686和支气管上皮细胞系16HBE中IGF2BP2-AS1的表达。以TU686细胞为研究对象,将TU686细胞分为si-NC组和si-IGF2BP2-AS1组,采用IGF2BP2-AS1小干扰RNA下调IGF2BP2-AS1表达水平。划痕愈合实验和CCK-8法分析敲降IGF2BP2-AS1对TU686细胞迁移及增殖的影响。双荧光素酶报告基因实验验证IGF2BP2-AS1与miR-375的靶向关系。qPCR检测敲降IGF2BP2-AS1对miR-375表达的影响。Western blotting检测细胞中迁移蛋白N-钙黏着蛋白(N-Cadherin)、叉头框蛋白C2(FOXC2)和增殖蛋白CDK2、细胞周期蛋白A(Cyclin A)的表达。统计学方法采用单因素方差分析、t检验。结果与16HBE细胞相比,IGF2BP2-AS1在喉癌细胞系中均高表达(F=37.42,P<0.01)。si-IGF2BP2-AS1组TU686细胞划痕愈合率低于si-NC组[(28.16±6.13)%比(65.08±3.82)%],差异有统计学意义(t=5.11,P<0.01)。在铺板后第2、3、4、5天,si-IGF2BP2-AS1组TU686细胞增殖能力均低于si-NC组(t=3.83、3.17、3.02、6.31,均P<0.01)。IGF2BP2-AS1-Wt中,miR-375组相对荧光素酶活性低于miR-NC组(t=8.95,P<0.01)。si-IGF2BP2-AS1组TU686细胞中miR-375表达高于si-NC组[(4.95±0.49)比(1.02±0.40)],差异有统计学意义(t=6.23,P<0.01)。敲降IGF2BP2-AS1后TU686细胞中迁移蛋白N-Cadherin、FOXC2表达与增殖蛋白CDK2、Cyclin A表达均低于si-NC组。结论IGF2BP2-AS1在喉癌细胞系中呈高表达,敲降IGF2BP2-AS1通过调控miR-375表达抑制喉癌TU686细胞的迁移及增殖能力。

食管癌组织中miR-375、SHOX2表达变化及临床意义

目的探讨食管癌组织中微小核糖核酸-375(miR-375)、矮小同源盒基因2(SHOX2)的表达及临床意义。方法选取食管癌患者90例,均接受根治术治疗。术中收集部分癌组织及对应癌旁组织,用实时荧光定量PCR法检测miR-375、SHOX2 mRNA,通过Targetscan网站、miRTargetLink网站、miRanda网站、PicTar网站预测miR-375与SHOX2结合位点,用Pearson相关分析法分析食管癌组织中miR-375、SHOX2 mRNA表达的相关性,分析二者表达与临床病理参数的关系。对患者进行随访,统计3年生存率,分析miR-375、SHOX2 mRNA表达与3年生存率的关系。用多因素Cox回归模型分析miR-375、SHOX2 mRNA表达对食管癌患者根治术后预后的影响。结果食管癌组织miR-375表达低于癌旁组织,SHOX2 mRNA表达高于癌旁组织(P均<0.05)。经在线网站预测,miR-375与SHOX2的3'非翻译端1489~1496处存在结合位点;Pearson相关分析显示,食管癌组织中miR-375、SHOX2 mRNA表达呈负相关(r=-0.825,P<0.05)。不同分化程度、TNM分期、淋巴结转移的食管癌组织中miR-375、SHOX2 mRNA比较差异有统计性意义(P均<0.05)。随访3年,90例食管癌患者死亡29例,总生存率为67.78%(61/90)。高miR-375表达者总生存率高于低miR-375表达者,高SHOX2 mRNA表达者总生存率低于低SHOX2 mRNA表达者(P均<0.05)。多因素Cox回归模型分析结果显示,肿瘤低分化、TNM分期Ⅲ期、淋巴结转移、SHOX2 mRNA≥1.38为食管癌患者根治术后预后的独立危险因素(P均<0.05),miR-375≥0.66为独立保护因素(P<0.05)。结论食管癌组织中miR-375低表达、SHOX2 mRNA高表达,二者表达变化与肿瘤分化程度、TNM分期、淋巴结转移及预后有关。

胃癌患者血清中miR-375和miR-665的表达变化及临床价值

目的 观察胃癌患者血清中微小RNA-375(miR-375)和微小RNA-665(miR-665)的表达变化,并探讨二者表达变化与临床病理特征及预后的关系。方法 选取该院2018年1月至2020年1月确诊的85例胃癌患者作为胃癌组,85例慢性胃炎患者作为胃炎组,根据胃癌患者3年内死亡情况分为生存组(48例)和死亡组(37例)。采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测血清中miR-375和miR-665相对表达水平,并分析其表达与患者临床病理特征之间的关系;采用Kaplan-Meier法分析miR-375及miR-665表达与胃癌患者3年生存率的关系;采用受试者工作特征(ROC)曲线分析血清miR-375和miR-665相对表达水平对患者死亡的预测价值。结果 胃癌组血清中miR-375及miR-665相对表达水平均低于胃炎组(t=28.183、22.361,P<0.001)。存活组血清中miR-375及miR-665相对表达水平均高于死亡组(t=8.094、8.330,P<0.001)。肿瘤浸润深度为T3+T4、TNM分期Ⅲ~Ⅳ期、组织分级Ⅲ级及有淋巴结转移的胃癌患者血清中miR-375及miR-665相对表达水平均低于肿瘤浸润深度T1+T2、TNM分期Ⅰ~Ⅱ期、组织分级Ⅰ、Ⅱ级及无淋巴结转移的胃癌患者(P<0.05)。miR-375高表达患者3年累积生存率为84.44%,高于miR-375低表达患者的25.00%(χ^(2)=30.442,P<0.05)。miR-665高表达患者3年累积生存率为74.47%,高于miR-375低表达患者的34.21%(χ^(2)=13.853,P<0.05)。血清miR-375、miR-665及联合预测胃癌患者死亡的曲线下面积分别为0.913、0.902和0.971,灵敏度分别为86.49%、67.57%和94.59%,特异度分别为83.33%、97.92%和91.67%。结论 血清中miR-375和miR-665的低表达可能与胃癌的发生发展及患者的不良预后有重要关系。

miRNA-375在食管鳞状细胞癌中的研究进展

微小RNA(miRNA)是一类高度保守、非编码、单链小分子RNA,长度为21~23个核苷酸,广泛存在于真核生物中,参与转录后基因表达的调控。研究证实miRNA与肿瘤的发生发展密切相关,参与肿瘤细胞周期、分化、增殖、微环境、凋亡、迁移和侵袭等的调控。miRNA-375是miRNA家族的一员,可作为抑癌因子发挥保护作用。miRNA-375在食管鳞状细胞癌(ESCC)患者中表达下调,且其低表达与患者预后不良有关。miRNA-375可作为ESCC的新型潜在治疗靶点,并可能成为ESCC早期筛查、诊断、治疗及预后评估的重要生物标志物。

产前超声联合血清miR-148b、miR-375检测在胎儿先天性心脏病诊断中的应用价值

目的 探讨微小RNA(miR)-148b、miR-375在胎儿先天性心脏病孕妇血清中的水平,及其联合产前超声在胎儿先天性心脏病诊断中的价值。方法 收集2019年1月至2023年1月进行产前筛查的疑似胎儿先天性心脏病的106例孕妇作为研究对象,根据产后随访结果将其分为病例组(先天性心脏病,n=80)和对照组(均无先天性心脏病,n=26)。比较2组血清miR-148b、miR-375水平;ROC曲线分析血清miR-148b、miR-375对胎儿先天性心脏病的诊断效能;四表格法分析产前超声联合血清miR-148b、miR-375水平对胎儿先天性心脏病的诊断效能。结果 与对照组比较,病例组血清miR-148b水平显著降低,血清miR-375水平显著升高(P<0.05)。产前超声联合血清miR-148b、miR-375诊断胎儿先天性心脏病的准确率为93.40%,敏感性为92.50%,特异性为96.15%。其中,三项联合诊断的敏感性高于血清miR-148b、miR-375单独诊断(P<0.05),三项联合诊断的准确率和特异性高于产前超声、血清miR-148b、miR-375单独诊断(P<0.05)。结论 胎儿先天性心脏病的孕妇血清miR-148b水平显著降低,血清miR-375水平显著升高,产前超声联合血清miR-148b、miR-375对胎儿先天性心脏病具有较高的诊断价值。

微RNA-375-5p对心力衰竭大鼠的保护作用及机制

目的探讨微RNA(miR)-375-5p对心力衰竭(HF)大鼠的保护作用及相关机制。方法将50只雄性Sprague Dawley大鼠随机分为假手术组、HF组、miR-NC组、miR-375-5p组、miR-375-5p+Compound C(CC)组,每组10只。HF组、miR-NC组、miR-375-5p组、miR-375-5p+CC组大鼠腹腔注射阿霉素溶液制备HF模型,假手术组大鼠腹腔注射等量的NaCl溶液。造模结束后次日,miR-375-5p组大鼠经尾静脉注射miR-375-5p mimics 100μL,miR-NC组大鼠经尾静脉注射miR-NC mimics 100μL,假手术组和HF组大鼠经尾静脉注射等量生理盐水,miR-375-5p+CC组大鼠经尾静脉注射miR-375-5p mimics 100μL和腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)抑制剂CC(0.2 mg·kg^(-1));各组大鼠均每日给药1次,连续给药4周。使用彩色多普勒超声仪检测各组大鼠心功能指标,反转录聚合酶链反应检测各组大鼠心肌组织中miR-375-5p表达,酶联免疫吸附试验检测各组大鼠血清中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素(IL)-6、IL-1β、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽(GSH)水平,苏木精-伊红染色观察各组大鼠心肌组织病理学变化,末端脱氧核苷酸转移酶介导的末端标记法检测各组大鼠心肌细胞凋亡情况,蛋白质印迹检测各组大鼠心肌组织中磷酸化腺苷酸活化蛋白激酶(p-AMPK)、AMPK、沉默信息调节因子3(SIRT3)蛋白的相对表达量。结果与假手术组比较,HF组、miR-NC组和miR-375-5p组大鼠的左心室射血分数(LVEF)、左心室短轴缩短率(LVFS)、血清中SOD活性、GSH水平及心肌组织中p-AMPK/AMPK、miR-375-5p表达量和SIRT3蛋白相对表达量显著降低,左心室舒张末期内径(LVEDD)、左心室收缩末期内径(LVESD)、心肌细胞凋亡率及血清中TNF-α、IL-6、IL-1β、MDA水平显著升高(P<0.05)。miR-NC组与HF组大鼠LVEF、LVFS、LVEDD、LVESD、心肌细胞凋亡率、血清中TNF-α、IL-6、IL-1β、MDA、GSH水平、SOD活性、心肌组织中p-AMPK/AMPK、miR-375-5p表达量及SIRT3蛋白相对表达量比较差异无统计学意义(P>0.05)。与HF组相比,miR-375-5p组大鼠LVEF、LVFS、血清中SOD活性、GSH水平、心肌组织中p-AMPK/AMPK及miR-375-5p表达量和SIRT3蛋白相对表达量显著升高,LVEDD、LVESD、心肌细胞凋亡率及血清中TNF-α、IL-6、IL-1β、MDA水平显著降低(P<0.05)。与miR-375-5p组相比,miR-375-5p+CC组大鼠LVEF、LVFS、血清中SOD活性、GSH水平及心肌组织中p-AMPK/AMPK、miR-375-5p表达量和SIRT3蛋白相对表达量显著降低,LVEDD、LVESD、心肌细胞凋亡率及血清中TNF-α、IL-6、IL-1β、MDA水平显著升高(P<0.05)。假手术组大鼠心肌细胞规律排列,细胞核明显且无炎症细胞浸润;HF组大鼠心肌细胞形态发生明显改变,排列紊乱,细胞间隙变大,染色变浅,且出现心肌纤维化,有大量的炎症细胞浸润,HF组和miR-NC组大鼠心肌组织病理学变化无明显差异;与HF组相比,miR-375-5p组大鼠心肌细胞排列明显有序,细胞坏死程度和范围明显减少;miR-375-5p+CC组与HF组大鼠心肌组织病理学变化相似。结论miR-375-5p能抑制HF大鼠心肌细胞凋亡,进而对HF大鼠发挥保护作用,其机制可能与激活AMPK/SIRT3信号通路有关。

急性心肌梗死病人PCI术后血清miR-135b-3p、miR-375-3p相对表达水平及其与主要不良心血管事件发生的关系

目的:分析急性心肌梗死(AMI)病人行经皮冠状动脉介入(PCI)术后血清miR-135b-3p、miR-375-3p相对表达水平及其与主要不良心血管事件(MACE)发生的关系。方法:选取2018年1月—2021年1月我院收治的150例因患AMI进行PCI术的病人,同时选取同期100名健康体检者为对照组。采用荧光定量聚合酶链式反应(PCR)检测血清miR-135b-3p、miR-375-3p表达水平;采用Pearson法分析血清miR-135b-3p、miR-375-3p水平及其与临床资料的相关性;受试者工作特征(ROC)曲线评价血清miR-135b-3p、miR-375-3p对AMI病人PCI后发生MACE的预测价值。结果:相较于对照组,试验组血清miR-135b-3p、miR-375-3p水平显著升高(P<0.05)。与非MACE组相比,MACE组C反应蛋白(CRP)、白细胞介素(IL)-1β、IL-6、IL-8、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、miR-135b-3p、miR-375-3p水平显著上升(P<0.05)。AMI病人血清miR-135b-3p与miR-375-3p、CRP、IL-1β、IL-6、IL-8、TNF-α水平呈正相关(P<0.05);血清miR-375-3p与CRP、IL-1β、IL-6、IL-8、TNF-α水平呈正相关(P<0.05)。ROC结果显示,血清miR-135b-3p、miR-375-3p水平及二者联合预测AMI病人PCI术后发生MACE的ROC曲线下面积(AUC)分别为0.78,0.756,0.869,其中联合预测AUC显著高于二者单独预测(P<0.05)。结论:AMI病人血清miR-135b-3p、miR-375-3p水平升高,且PCI术后发生MACE病人miR-135b-3p、miR-375-3p水平高于非MACE病人,可能成为AMI病人PCI术后发生MACE的预测因子。

胰岛素、葡萄糖、胰高血糖素调节miRNA-375启动子活性的体外研究

探讨胰岛素、葡萄糖、胰高血糖素对miRNA-375启动子活性的影响及意义。方法 先构建重组质粒pGEM-T-miRNA-375 ,再构建miRNA-375启动子区荧光素酶报告质粒,以Lipofect脂质体进行转染分至胰岛β细胞株NIT-1,转染6小时之后,分别于各孔中加入不同浓度的胰岛素、葡萄糖、胰高血糖素,同时以普通培养基作为对照,分别于48h之后测定荧光素酶的活性,观察miRNAs-375启动子区活性的变化。结果 胰岛素可明显抑制miRNA-375启动子的活性,与胰岛素的浓度正相关;葡萄糖则上调miRNA-375启动子的活性,但与葡萄糖浓度无关,而胰高血糖素对其活性无影响。结论 miRNA-375启动子在胰岛细胞中受胰岛素的负调控、葡萄糖能够对miRNA-375启动子活性有上调效果,胰高血糖素对miRNA-375启动子活性无明显影响,本研究初步探讨了糖尿病发病中miRNA-375异常表达的机制。 。

紫铆花素对人黑色素瘤细胞A375与人永生化角质形成细胞HaCaT共培养细胞生物学活性的影响

目的探讨紫铆花素对人黑色素瘤细胞A375与人永生化角质形成细胞HaCaT共培养细胞生物学活性的影响。方法建立A375细胞与HaCaT细胞的共培养细胞体系,实验分为对照组(等体积培养液),紫铆花素低、中、高剂量组(以下简称低、中、高剂量组,0.5,1.0,5.0μg/L)。采用四甲基偶氮噻唑蓝(MTT)法检测细胞活性;采用流式细胞仪检测细胞的周期分布和线粒体膜电位;采用实时荧光定量聚合酶链反应(qPCR)法检测干细胞因子(SCF)和其受体c-Kit,以及小眼畸形相关转录因子(MITF)的mRNA表达水平;采用Western blot法检测细胞酪氨酸酶相关蛋白1,2(TRP-1,TRP-2)及SCF,c-Kit,MITF的蛋白表达水平。结果与对照组比较,中、高剂量组细胞的增殖率均显著升高(P<0.01);与对照组比较,各剂量组G0/G1期细胞比例均显著降低,S期和G_(2)/M期细胞比例均显著升高(P<0.01),高线粒体膜电位细胞比例均显著升高(P<0.05或P<0.01),SCF,c-Kit,MITF的mRNA表达水平及SCF,c-Kit,MITF,TRP-1,TRP-2的蛋白表达水平均显著升高(P<0.05或P<0.01)。结论紫铆花素可能通过调节SCF,cKit,MITF的表达而影响A375细胞与HaCaT细胞共培养细胞的增殖、细胞周期和线粒体膜电位等细胞生物学活性。

间充质干细胞来源的胞外囊泡通过装载miR-375对结直肠癌发生的影响机制

目的探究间充质干细胞来源的胞外囊泡通过装载miR-375对结直肠癌发生的影响机制。方法分离培养并鉴定结直肠癌组织中间充质干细胞,从间充质干细胞中分离并鉴定胞外囊泡。将胞外囊泡装载miR-375过表达模拟物,qRT-聚合酶链反应(PCR)检测细胞中miR-375的表达情况。培养结直肠癌细胞系SW480,将胞外囊泡和SW480细胞共培养。双荧光素酶报告分析miR-375和同源框蛋白(HOX)A3的靶向关系。qRT-PCR检测共培养后,细胞中miR-375和HOXA3 mRNA的表达情况。Western印迹检测HOXA3蛋白的表达情况。对细胞分别进行miR-375和HOXA3过表达处理,CCK-8法、Transwell实验分别检测各组细胞增殖和侵袭能力变化情况。流式细胞术检测细胞凋亡情况。结果成功分离间充质干细胞来源的胞外囊泡,并将miR-375过表达模拟物装载至胞外囊泡。miR-375可靶向负调控HOXA3的表达。过表达miR-375后抑制SW480细胞增殖、侵袭,促进细胞凋亡,而过表达HOXA3则会促进SW480细胞增殖、侵袭,抑制细胞凋亡,且过表达HOXA3后,会阻断miR-375对SW480细胞增殖和侵袭的抑制作用及对细胞凋亡的促进作用。结论间充质干细胞来源的胞外囊泡通过装载miR-375,进入结直肠癌细胞后,通过靶向抑制HOXA3的表达,进而抑制结直肠癌细胞增殖、侵袭,并促进细胞凋亡。

串内频率对高频纳秒脉冲串诱导A375黑色素瘤细胞电穿孔的影响

高频纳秒脉冲串能有效杀伤肿瘤细胞,但是其杀伤机制,特别是串内频率对诱导电穿孔效应的影响机制仍不清楚。以A375黑色素瘤细胞为研究对象,开展了细胞活性检测、短时/长时荧光染料检测以及细胞微观形态学检测等离体细胞实验,研究高频纳秒脉冲串的串内频率对细胞膜电穿孔的影响机制。细胞活性实验结果表明,高频纳秒脉冲串能有效杀伤肿瘤细胞,串内频率存在使细胞活性显著降低的阈值100k Hz;荧光染料实验结果反映细胞活性降低是由不可逆电穿孔引起,并且存在串内频率对电穿孔的累积效应;扫描电镜实验结果直接验证了高频纳秒脉冲串诱导肿瘤细胞发生了不可逆电穿孔。该实验结果为高频纳秒脉冲串杀伤肿瘤细胞的机制提供了实验依据。

老年性痴呆患者血清miR-375、SP1水平与认知功能的相关性

目的:检测老年性痴呆患者血清微小RNA-375(miR-375)、特异性蛋白1(SP1)表达水平,探讨其与认知功能的相关性。方法:选取2021年4月至2022年4月在本院就诊的老年性痴呆患者120例纳入疾病组,根据临床痴呆评定量表(CDR)评定患者病情严重程度,选取同期在本院进行健康体检的志愿者120例纳入对照组。采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测所有受试者血清miR-375、SP1 mRNA表达水平。采用简易精神状态量表(MMSE)评估所有受试者的认知功能。比较不同病情严重程度患者血清miR-375、SP1 mRNA表达水平及MMSE评分。采用Pearson相关分析疾病组血清miR-375与SP1 mRNA表达水平的相关性,Spearman相关分析两者与MMSE评分的相关性。采用多因素Logistic回归分析影响老年性痴呆发生的危险因素。采用受试者工作特征(ROC)曲线分析血清miR-375、SP1 mRNA表达水平和MMSE评分对老年性痴呆患者病情进展为重度的预测价值。采用双荧光素酶报告基因实验检测miR-375与SP1的关系。体外培养人神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y,通过β-淀粉样蛋白肽25-35(Aβ25-35)诱导构建老年性痴呆体外细胞模型,观察过表达miR-375对Aβ25-35诱导的SH-SY5Y细胞中SP1 mRNA和蛋白表达以及细胞活力、凋亡率的影响。结果:疾病组血清miR-375表达水平、MMSE评分显著低于对照组,SP1 mRNA表达水平显著高于对照组(P<0.05)。重度组、中度组血清miR-375表达水平、MMSE评分显著低于轻度组,SP1 mRNA表达水平显著高于轻度组(P<0.05);重度组血清miR-375表达水平、MMSE评分显著低于中度组,SP1 mRNA表达水平显著高于中度组(P<0.05)。Pearson相关分析显示,疾病组血清miR-375与SP1 mRNA表达水平呈负相关(r=-0.627,P<0.05);Spearman相关分析显示,血清miR-375表达水平与MMSE评分呈正相关(r=0.664,P<0.05),血清SP1 mRNA表达水平与MMSE评分呈负相关(r=-0.472,P<0.05)。多因素Logistic回归分析显示,低MMSE评分、miR-375低表达、SP1 mRNA高表达是影响老年性痴呆发生的危险因素(P<0.05)。ROC曲线分析显示,血清miR-375、SP1 mRNA表达水平和MMSE评分以及三者联合预测老年性痴呆患者病情进展为重度的曲线下面积(AUC)分别为0.823、0.780、0.851、0.938,且三者联合预测的AUC显著高于单个指标预测的AUC(Z=2.734、3.150、2.113,P<0.05)。双荧光素酶报告基因实验显示miR-375能够靶向SP1。Aβ25-35诱导后,SH-SY5Y细胞中miR-375表达水平、细胞活力显著降低,SP1 mRNA和蛋白表达以及凋亡率显著升高(P<0.05);过表达miR-375可显著升高Aβ25-35诱导的SH-SY5Y细胞活力,降低SP1 mRNA和蛋白表达以及凋亡率(P<0.05)。结论:老年性痴呆患者血清miR-375表达水平下调,SP1 mRNA表达水平上调,且均与认知功能密切相关,可能两者通过相互作用参与调控患者病情进展。