人乳头瘤病毒6/11型L2片段的高效表达及免疫效果评价

目的：原核表达人乳头瘤病毒（HPV）6型和11型L2 N端融合蛋白,并初步评价其免疫效果。方法：用重叠PCR将HPV6和HPV11次要衣壳蛋白L2基因5＇端片段融合,并在大肠杆菌中表达融合蛋白,纯化后与Al（OH）3佐剂配伍肌肉注射免疫BALB/c小鼠,用ELISA检测血清抗体,以基于假病毒的体外中和试验评价中和抗体水平。结果：ELISA结果显示,3种融合蛋白均能产生针对同型别L2蛋白的高滴度特异性Ig G抗体,滴度为1∶10 000～1∶200 000;体外中和试验显示,3种融合蛋白均能诱发中和抗体和交叉中和抗体,针对同型别的滴度最高可达1∶3200,对于高危型能产生一定水平的交叉中和抗体,滴度为1∶50～1∶800。结论：HPV6/11 L2融合蛋白能够诱发较强的体液免疫反应,产生较高的中和抗体及交叉中和抗体,为HPV L2新型预防性疫苗的研究提供了初步的实验基础。

HPV 16型L2全长原核融合蛋白的交叉反应特性研究

目的 研究HPV 16型L2全长蛋白在HPV6、11、16和18型别间的交叉反应特性.方法 收集108例尖锐湿疣患者、156例宫颈癌患者和100名健康对照者的血清标本,采用PCR法从宫颈癌患者组织DNA中扩增HPV16 L2全长基因,将其克隆至原核表达载体PGEX-4T-1中,构建重组质粒PGEX-4T-1-HPV16 L2,将鉴定正确的重组质粒转化至E.coli BL21（DE3）中,经IPTG诱导表达,SDS-PAGE和WB鉴定;进一步通过WB检测HPV16 L2全长融合蛋白与HPV6、11、16和18型DNA检测阳性的患者血清的特异性结合能力.以镍螯合亲和层析柱（Nj-NTA Agarose）纯化HPV16 L2融合蛋白作为包被抗原,采用间接ELISA法检测3组标本中的HPV血清特异性IgG抗体.结果 成功构建了重组质粒PGEX-4T-1-HPV16 L2,含有HPV16 L2的融合蛋白在原核表达体系中呈较高效表达,表达量为27.2%;SDS-PAGE和WB检测结果显示在约相对分子质量82 000处可见特异性阳性信号条带;以HPV6、11、16和18 DNA阳性患者血清为一抗的WB结果显示,HPV16 L2全长融合蛋白在相对分子质量82 000处均出现特异性阳性信号条带.ELISA结果显示,尖锐湿疣组、宫颈癌组和健康对照组血清抗体A值分别为0.825±0.409、0.808±0.376、0.128±0.15,阳性率分别为92.6%、92.3%和6.0%.3组间血清抗体A值及阳性率差异均具有统计学意义（H=207.292,x2=251.846,P均＜0.01）,而尖锐湿疣组与宫颈癌组之间的血清抗体均值（0.825和0.808）差异无统计学意义（H=0,P＞0.05）.结论 HPV16 L2全长原核融合蛋白具有较强的抗原性,与HPV6、11、16和18型别间具有交叉反应,可进一步用于HPV感染及其相关肿瘤ELISA血清学检测试剂的通用型靶抗原研究.

基于人乳头瘤病毒次要衣壳蛋白L2的广谱疫苗研究进展

人乳头瘤病毒(Human papillomavirus,HPV)次要衣壳蛋白L2具有广谱中和表位,被认为具有成为新一代广谱预防性疫苗的潜力。目前上市的HPV疫苗均是基于主要衣壳蛋白L1,但都被证明只对疫苗保护型别有效,仍无法覆盖所有高危型别的HPV,且成本较高不利于在发展中国家推广,因此急需开发低成本高覆盖的预防性疫苗。本文综述了基于L2疫苗的相关研究策略,对HPV广谱预防性疫苗的研究具有参考意义。

人乳头瘤病毒16型次要结构蛋白家兔免疫血清的制备及其特性研究

目的制备高效价人乳头瘤病毒(HPV)16型次要结构蛋白(L2)特异性兔血清抗体,并对其效价及其与HPV16 L2蛋白结合的特异性进行鉴定。方法将重组质粒PGEX-4T-1-HPV16 L2转化至E.coliBL21(DE3)中,经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导蛋白表达,SDS-PAGE和Western blot鉴定融合蛋白的抗原性;经镍螯合亲和层析柱(Ni-NTA Agarose)纯化HPV16 L2全长融合蛋白,纯化蛋白用佐剂乳化后经日本大耳白家兔背部皮下多点免疫注射,间隔2周后加强免疫,共2次,并分别于免疫前和每次免疫后1周取血,采用Western blot检测血清抗体的特异性,采用ELISA法检测血清抗体水平及变化趋势。结果家兔用HPV16 L2融合蛋白全程免疫后均产生了抗HPV16 L2抗体,ELISA法检测最高滴度达1∶256 000;Western blot检测显示,该抗体能识别HPV16 L2蛋白。结论用原核HPV16 L2全长蛋白免疫家兔,可获得高效价的血清抗体,该抗体具有与HPV L2蛋白结合的特异性。

人乳头瘤病毒预防性疫苗的研究进展

宫颈癌是常见的妇科恶性肿瘤,严重威胁着女性健康及生命。在导致女性死亡的原因中,宫颈癌排第2位,世界范围内每年约有493 000例宫颈癌发生,其中273 000例死亡。流行病学数据显示,70%的宫颈癌与16、18两种人乳头瘤病毒(human papillomavirus,HPV)基因型有关。宫颈癌的发病率很高,且与HPV感染的相关性非常明确,因此大部分HPV疫苗集中在预防宫颈癌上。目前已上市的3种HPV疫苗可有效预防90%与宫颈癌有关的HPV感染。本文对全球市场上HPV疫苗的现状以及未来的发展方向作一综述。