lncRNA HOXA11-AS和miR-98-5p在乳腺癌组织中的表达及临床意义

目的 探讨长链非编码RNA(lncRNA)同源异形盒基因A11反义RNA(HOXA11-AS)和微小RNA-98-5p(miR-98-5p)在乳腺癌中的表达,并分析其与临床病理特征的关系。方法 回顾性选取2014年1月至2016年10月青岛大学附属青岛市中心医院(青岛市肿瘤医院)接收的120例乳腺癌患者作为研究对象。收集乳腺癌患者的临床病理资料,如年龄、肿瘤大小、TNM分期、病理分级、病理类型、孕激素受体(PR)表达、人类表皮生长因子受体2(HER-2)表达、雌激素受体(ER)表达、Ki-67表达等。采用实时荧光定量PCR法检测所有组织HOXA11-AS、miR-98-5p表达水平。比较HOXA11-AS、miR-98-5p在乳腺癌组织及乳腺癌各分子分型上的表达水平。采用Spearman法分析癌组织中HOXA11-AS与miR-98-5p的相关性。分析HOXA11-AS、miR-98-5p表达水平与乳腺癌临床病理特征关系。结果 癌组织中HOXA11-AS的水平为2.21±0.53,较癌旁组织(1.02±0.21)显著升高,而miR-98-5p水平为0.58±0.12,较癌旁组织(1.03±0.19)显著降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。HER-2阳性、Luminal A型、Luminal B型、Basal-like型的癌组织中HOXA11-AS表达水平较癌旁组织显著升高,miR-98-5p表达水平显著降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。以表达水平将乳腺癌患者分别分为HOXA11-AS高表达组(n=67)和HOXA11-AS低表达组(n=53),miR-98-5p低表达组(n=63)和miR-98-5p高表达组(n=57)。HOXA11-AS、miR-98-5p均与乳腺癌TNM分期、HER-2表达、Ki-67表达、ER表达、PR表达相关(P<0.05)。乳腺癌组织中HOXA11-AS与miR-98-5p表达水平呈负相关(r=-0.571,P<0.05)。Kaplan-Meier分析表明,HOXA11-AS低表达组的平均生存时间为(53.61±1.58)个月,高于HOXA11-AS高表达组[(42.11±2.14)个月],差异有统计学意义(P<0.05);miR-98-5p高表达组的平均生存时间为(52.65±1.62)个月,高于miR-98-5p低表达组[(42.25±2.23)个月],差异有统计学意义(P<0.05)。TNM分期、病理分级、病理类型、PR表达、HER-2表达、ER表达、Ki-67、HOXA11-AS、miR-98-5p是乳腺癌患者预后的独立危险因素(P<0.05)。结论 乳腺癌组织HOXA11-AS呈高表达、miR-98-5p呈低表达,HOXA11-AS、miR-98-5p与患者生存期密切相关,是影响乳腺癌预后的独立因素,可能成为新的乳腺癌治疗靶点。

circPRMT5通过靶向miR-98-5p对膀胱癌细胞增殖、迁移侵袭的机制研究

目的探究circPRMT5通过靶向miR-98-5p对膀胱癌细胞增殖、迁移侵袭的机制研究。方法qRT-PCR检测永生化正常尿路上皮细胞SV-HUC-1和膀胱癌细胞(T24、J82、HT-1376)中circPRMT5、miR-98-5p和X染色体连锁的凋亡抑制蛋白(XIAP)mRNA相对表达水平。核糖核酸酶(RNase)R和放线菌素D的消化实验鉴定circPRMT5的环状结构。将T24细胞分为si-NC组、si-circPRMT5组、miR-NC组、miR-98-5p组、si-circPRMT5+anti-miR-NC组、si-circPRMT5+anti-miR-98-5p组。qRT-PCR检测circPRMT5和miR-98-5p表达水平;MTT、克隆实验检测细胞增殖水平;Transwell检测迁移、侵袭能力;Western Blot检测MMP2、MMP9、XIAP蛋白表达;双荧光素酶报告实验检测circPRMT5和miR-98-5p靶向关系。结果与永生化正常尿路上皮细胞SV-HUC-1相比,膀胱癌细胞T24、J82、HT-1376中circPRMT5、XIAP mRNA相对表达水平增加,miR-98-5p降低。circPRMT5比线性PRMT5稳定性更强。沉默circPRMT5或过表达miR-98-5p降低膀胱癌细胞存活率,减少克隆细胞数、迁移细胞数、侵袭细胞数,降低MMP2、MMP9、XIAP蛋白表达。circPRMT5靶向负调控miR-98-5p的表达,抑制miR-98-5p可部分回复沉默circPRMT5对膀胱癌细胞增殖、迁移、侵袭及XIAP mRNA和蛋白表达的作用。结论circPRMT5靶向负调控miR-98-5p抑制膀胱癌细胞增殖、迁移和侵袭能力。

血清miR-22 miR-98-5p表达与非小细胞肺癌三维适形放疗疗效的关系研究

目的:观察非小细胞肺癌(nonsmalcellungcancer,NSCLC)实施三维适形放疗后不同疗效情况患者机体微小RNA(microRNA,miR)-22、miR-98-5p表达水平差异,并分析其表达水平与疗效间的关联性。方法:纳入2020年1月至2024年1月本院收治的104例NSCLC患者,所有患者接受三维适形放疗,完成放疗后通过实时荧光定量PCR法测定患者机体miR-22、miR-98-5p表达水平,采用单因素方差分析不同疗效患者miR-22、miR-98-5p表达水平差异,采用Logistic多因素回归模型分析影响放疗疗效的相关因素,绘制受试者工作特征曲线(receiver operating characteristic,ROC)分析miR-22、miR-98-5p表达水平对放疗有效性的评估效能。结果:不同疗效患者miR-22、miR-98-5p表达水平比较差异有统计学意义(P<0.05),其中SD组与PD组miR-22表达水平比较差异有统计学意义(P<0.05),CR组、PR组与SD组、PD组miR-22、miR-98-5p表达水平比较差异有统计学意义(P<0.05),CR组与PR组miR-22、miR-98-5p表达水平比较差异有统计学意义(P<0.05)。单因素分析发现不同病理类型、TNM分期、分化程度及miR-98-5p、miR-22表达水平与放疗的疗效有关,差异有统计学意义(P<0.05)。Logistic回归模型分析发现,TNM分期(OR=3.360,95%CI:1.229~9.184)、分化程度(OR=2.779,95%CI:1.066~7.246)及miR-98-5p(OR=2.085,95%CI:1.147~3.792)、miR-22表达水平(OR=0.590,95%CI:0.368~0.946)是评估放疗疗效的影响因素(P<0.05)。ROC曲线表明:miR-98-5p、miR-22评估放疗有效性的曲线下面积(AUC)分别为0.798、0.800,敏感度分别为0.589、0.630,特异度分别为0.871、0.839,而miR-98-5p+miR-22评估放疗有效性的AUC为0.895,明显高于单项指标(P<0.05),敏感度为0.726,特异度为0.935。结论:在NSCLC实施三维适形放疗后不同疗效患者血清miR-98-5p、miR-22表达水平存在一定的差异,与放疗有效性明显相关,并对疗效有一定的评估价值。

miR-98-5p通过STAT3通路抑制骨关节炎的发展

目的探究miR-98-5p调节骨关节炎(OA)发生发展的可能分子机制。方法①将大鼠软骨细胞分为对照组、白介素-1β(IL-1β)组、NC-agomir组、miR-98-5p-agomir组、NC-antagomir组和miR-98-5p-antagomir组。对照组软骨细胞采用正常DMEM培养基培养,其他组细胞在转染成功后在添加10 ng/mL IL-1β的培养基中继续培养24 h。采用MTT法和TUNEL法检测软骨细胞增殖和凋亡水平。采用RT-qPCR检测miR-98-5p、STAT3、Bcl-2、Bax、IL-1β、IL-6和TNF-α的转录水平。采用ELISA法检测细胞培养上清液中的IL-1β、IL-6和TNF-α蛋白水平。采用Western blot检测Bcl-2、Bax、p-STAT3和STAT3蛋白水平。②采用前交叉韧带切断加内侧半月板部分切除法建立OA大鼠模型。OA模型大鼠分为OA组、NC-agomir+OA组和miR-98-5p-agomir+OA组,每组12只;另取12只健康大鼠为假手术组。假手术组和OA组大鼠关节腔内注射40μL生理盐水,NC-agomir+OA组和miR-98-5p-agomir+OA组大鼠关节腔内分别注射40μL的NC-agomir和miR-98-5p-agomir(1 nmol/μL),每周注射1次,共4周。采用番红O-固绿染色观察大鼠软骨退变。采用TUNEL染色观察软骨细胞凋亡。采用RT-qPCR检测软骨组织中miR-98-5p、STAT3、Bcl-2、Bax、IL-1β、IL-6和TNF-α的转录水平。采用ELISA法检测软骨组织中IL-1β、IL-6和TNF-α蛋白水平。采用Western blot检测软骨组织中Bcl-2、Bax、p-STAT3和STAT3蛋白水平。结果①与IL-1β组和NC-agomir组比较,miR-98-5p-agomir组相对细胞活力、Bcl-2 mRNA和蛋白水平和miR-98-5p水平均升高(P<0.05),TUNEL阳性率,Bax、IL-1β、IL-6、TNF-α、STAT3 mRNA和蛋白水平,p-STAT3蛋白水平和p-STAT3/STAT3比值均降低(P<0.05)。与IL-1β组和NC-antagomir组比较,miR-98-5p-antagomir组相对细胞活力、Bcl-2 mRNA和蛋白水平、以及miR-98-5p水平均降低(P<0.05),TUNEL阳性率,Bax、IL-1β、IL-6、TNF-α、STAT3的mRNA和蛋白水平,p-STAT3蛋白水平以及p-STAT3/STAT3比值均升高(P<0.05)。②与OA组和NC-agomir+OA组比较,miR-98-5p-agomir+OA组OARSI评分,TUNEL阳性率,Bax、IL-1β、IL-6、TNF-α、STAT3 mRNA和蛋白水平,p-STAT3蛋白水平和p-STAT3/STAT3比值均降低(P<0.05),Bcl-2 mRNA和蛋白水平、以及miR-98-5p水平均升高(P<0.05)。结论上调miR-98-5p可能通过降低STAT3的活性抑制OA中的炎症反应和细胞凋亡,从而抑制OA的发展。

circ_0031739通过下调miR-98-5p促进高糖诱导的心肌细胞损伤

目的 探讨circ_0031739对高糖诱导的心肌细胞损伤的影响及其分子机制。方法 培养人心肌细胞系AC16,分别转染siRNA NC、siRNA circ_0031739、miRNA mimics miR-98-5p mimics、miRNA inhibitor、miR-98-5p inhibitor,给予细胞高糖(30 mmol/L)处理,CCK8实验检测细胞增殖活性,流式细胞仪检测细胞凋亡情况,实时荧光定量PCR(qRT-PCR)实验检测细胞中circ_0031739和miR-98-5p表达,双荧光素酶实验验证circ_0031739和miR-98-5p的靶向关系。结果 高糖诱导心肌细胞中circ_0031739表达升高;抑制circ_0031739能够增强高糖诱导的心肌细胞增殖活性,减少心肌细胞凋亡;circ_0031739靶向负调控miR-98-5p的表达;高糖诱导心肌细胞中miR-98-5p表达降低,过表达miR-98-5p能够增强高糖诱导的心肌细胞增殖活性,减少心肌细胞凋亡;抑制miR-98-5p能够逆转circ_0031739的作用。结论 抑制circ_0031739可通过上调miR-98-5p,增强高糖诱导的心肌细胞增殖活性,减少心肌细胞凋亡,对心肌细胞起保护作用。

Hsa-miR-98-5p/DKK3信号轴对乳腺癌细胞生物学行为的影响

背景与目的:乳腺癌威胁着全世界女性的健康。虽然已发现大量微小RNA(microRNA,miRNA)在乳腺癌中异常表达,但仍需要构建一个完整的miRNA-信使RNA(messenger RNA,mRNA)网络。方法:利用癌症基因组图谱(The Cancer Genome Atlas,TCGA)数据库下载乳腺癌相关数据集,分析肿瘤组织与正常组织之间差异表达的miRNA。利用miRDB、miRTarBase和StarBase数据库分析差异miRNA靶向的基因。使用R语言中的ClusterProfiler包对靶基因进行富集分析。使用String数据库联合Cytoscape 3.6.2软件进行蛋白质-蛋白质相互作用(protein-protein interaction,PPI)网络分析及Hub基因的筛选;构建miRNA-Hub mRNA调控网络确定研究信号轴,然后通过细胞实验进行验证。结果:采用TCGA数据集识别出两个差异miRNAs。3个数据库取交集预测得到278个靶基因。共鉴定出10个Hub基因,从构建的miRNA-Hub基因网络图中发现,hsa-miR-98-5p/DKK3轴可能在乳腺癌的进展中起关键作用。细胞功能学实验证实hsa-miR-98-5p可抑制细胞凋亡,促进细胞的增殖、迁移和侵袭。双荧光素酶报告基因实验进一步验证了hsa-miR-98-5p与DKK3的结合作用。结论:本研究首先通过生物信息学分析鉴定出一个与乳腺癌进展相关的hsa-miR-98-5p/DKK3轴,初步证实hsa-miR-98-5p可通过靶向DKK3抑制乳腺癌细胞凋亡,促进细胞的增殖、迁移和侵袭。

miR-98-5p靶向HMGA2通过PI3K/Akt/GSK-3β通路调控骨再生的机制研究

目的研究miR-98-5p靶向高迁移率族蛋白A2(HMGA2)通过PI3K/Akt/GSK-3β通路调控骨再生的机制。方法构建细胞培养模型,根据成骨细胞诱导分化中细胞类别不同分为mBMMSCs组、hBMMSCs组及MC3T3-E1组,并根据对成骨细胞质粒不同转染方法分为正常组、A组(MC3T3-E1细胞诱导分化)、B组(MC3T3-E1细胞诱导分化后转染mimic control)、C组(MC3T3-E1细胞诱导分化后转染miR-98-5p mimic)及D组(MC3T3-E1细胞诱导分化后转染miR-98-5p mimic和HMGA2 plasmid)。检测各组碱性磷酸酶(ALP)、miR-98-5p、Runt相关转录因子2(RUNX2)和Osterix mRNA、HMGA2 mRNA表达水平及HMGA2、Bax、Bcl-2、Caspase-3、PI3K/Akt/GSK-3β通路蛋白相对表达水平。比较各组MC3T3-E1细胞增殖和凋亡情况。结果与0 d时比较,mBMMSCs组、hBMMSCs组、MC3T3-E1组7、14 d时ALP、RUNX2及Osterix mRNA水平均明显上升,miR-98-5p mRNA水平下降(P<0.05)。miR-98-5p minic组wt-HMGA2荧光素酶活性低于mimic control转染组(P<0.01)。C组HMGA2 mRNA及HMGA2蛋白表达水平显著低于于A组、B组和D组(P<0.01)。与正常组比较,A、B、C、D组MC3T3-E1细胞内ALP、RUNX2、Osterix mRNA水平均显著增高(P<0.01)。与A组和B组比较,C组和D组MC3T3-E1细胞内ALP、RUNX2、Osterix mRNA水平降低,但D组上述指标显著高于C组(P<0.01)。与A、B组比较,C、D组MC3T3-E1细胞增殖活性显著降低,凋亡率及Bax、Bcl-2、Caspase-3蛋白相对表达水平显著升高,且D组上述指标较变化C组更显著(P<0.01)。与A组、B组比较,C、D组MC3T3-E1细胞p-PI3K、p-Akt蛋白相对表达水平升高,且C组高于D组(P<0.01)。与A组、B组比较,C、D组MC3T3-E1细胞PI3K、Akt、p-GSK-3β及GSK-3β蛋白相对表达水平降低,且C组低于D组(P<0.01)。结论miR-98-5p可促进成骨细胞增殖分化及抑制其凋亡,作用机制可能与靶向作用HMGA2进行结合激活PI3K/Akt/GSK-3β通路,上调ALP磷酸化等有关。

miR-98-5p与靶基因HMGA2相关调控机制抑制喉鳞癌的作用及临床意义

目的研究miR-98-5p通过靶向调控HMGA2在喉鳞癌中的相关作用及临床意义。方法采用定量反转录聚合酶链反应(qRT-PCR)检测喉鳞癌组织和癌旁正常组织中miR-98-5p的表达水平;检测转移的肿瘤组织和无转移的肿瘤组织间miR-98-5p的表达水平;分析miR-98-5p的表达与患者临床特征的相关性。microRNA靶基因数据库进行筛选,预测HMGA2为miR-98-5p的潜在靶基因:荧光素酶报告基因法进行验证;qRT-PCR和Western印迹检测miR-98-5pmimics对HMGA2的mRNA及蛋白表达的影响;qRT-PCR检测喉鳞癌组织中HMGA2的mRNA表达水平;用CCK8实验检测miR-NC对照组,miR-98-5pmimics转染组和miR-98-5pmimics+HMGA2转染组的吸光度(OD)值;使用流式细胞法检测miR-98-5pmimics转染组和miR-98-5p mimics+HMGA2转染组S期细胞的比值。在裸鼠右肩胛近腋窝处皮下接种喉鳞癌Hep-2细胞培养液,检测裸鼠肿瘤体积及重量;检测miR-98-5p在miR-98-5pmimics转染组裸鼠肿瘤组织中的表达水平。结果对比癌旁正常组织,喉鳞癌组织中miR-98-5p的表达水平明显降低;转移的肿瘤组织中miR-98-5p的表达水平明显低于无转移的肿瘤组织;miR-98-5p的表达随着分化程度及临床分期的升高呈下降趋势;无淋巴结转移患者miR-98-5p的表达水平明显高于有淋巴结转移患者。miR-98-5p可以通过结合HMGA2的3'-UTR,进而抑制HMGA2的表达;miR-98-5pmimics转染组中HMGA2蛋白表达量相比对照组明显降低;miR-98-5p能够抑制HMGA2的mRNA翻译及其蛋白表达;qRT-PCR检测结果也显示喉鳞癌组织相比癌旁正常组织,HMGA2的mRNA表达量明显升高;miR-98-5pmimics转染组的OD值明显低于对照组,而miR-98-5pmimics+HMGA2转染组的OD值明显高于miR-98-5pmimics转染组;miR-98-5pmimics转染组S期细胞比值明显低于对照组,而miR-98-5pmimics+HMGA2转染组S期细胞比值明显高于miR-98-5pmimics转染组;miR-98-5p可抑制喉鳞癌细胞Hep-2的增殖和细胞周期在S期聚集,而这些抑制效果可被HMGA2补回;miR-98-5p过表达能够抑制Hep-2细胞的增殖,抑制肿瘤的生长。结论 miR-98-5p能抑制HMGA2而抑制喉鳞癌的进程,可能成为喉鳞癌诊断及治疗的一个新靶点。

脓毒症患者外周血miR-98-5p与全身炎症反应激活及预后的相关性研究

目的研究脓毒症患者外周血miR-98-5p与全身炎症反应激活及预后的相关性。方法选择2019年1月至2021年1月期间自贡市第四人民医院收治的102例脓毒症患者作为脓毒症组,同期体检的100例健康志愿者作为对照组,采用荧光定量PCR法检测外周血miR-98-5p的表达水平,采用Elisa法检测血清炎症细胞因子TNF-α、HMGB-1、IL-1β的含量,采用急性生理和慢性健康评分Ⅱ(APACHEII)、序贯性器官衰竭评分(SOFA)评分评估脓毒症病情,采用28d生存情况评估预后。结果脓毒症组患者外周血miR-98-5p的表达水平低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);脓毒症组中miR-98-5p表达≥中位数患者的APACHEII、SOFA评分低于miR-98-5p表达<中位数患者,差异有统计学意义(P<0.05);脓毒症组中miR-98-5p表达≥中位数患者的血清TNF-α、HMGB-1、IL-1β含量低于miR-98-5p表达<中位数患者,差异有统计学意义(P<0.05);经K-M曲线分析,脓毒症组中miR-98-5p表达≥中位数患者的28 d累积生存率高于miR-98-5p表达<中位数患者差异有统计学意义(P<0.05);外周血miR-98-5p表达水平对脓毒症患者28 d生存具有预测价值(P<0.05)。结论脓毒症患者外周血miR-98-5p表达降低与病情加重、全身炎症反应激活及预后不良有关。

支气管哮喘患儿肺泡灌洗液miR-98-5p及靶蛋白STAT3的表达与气道炎症的相关性分析

目的:探讨支气管哮喘患儿肺泡灌洗液(BALF)中miR-98-5p及靶蛋白STAT3表达水平与气道炎症的相关性。方法:选取2017年1月至2020年5月于重庆市涪陵区妇幼保健院就诊的120例支气管哮喘患儿作为哮喘组,包含72例急性发作期患儿(BA-E组)和48例缓解期患儿(BA-R组);纳入20例无支气管哮喘患儿为对照组。收集BALF,用实时荧光定量PCR法检测其中miR-98-5p相对表达量,采用酶联免疫吸附法检测STAT3和气道炎症因子(IL-6、IL-10、IL-13、TNF-α、总IgE),另外检测哮喘患儿肺功能和FeNO含量。结果:与对照组相比,哮喘患儿BALF中miR-98-5p相对表达量降低,STAT3水平升高,且BA-E组患儿miR-98-5p和STAT3水平变化更明显(P<0.05)。经TargetScan在线软件和双荧光素酶报告基因分析显示,miR-98-5p存在与STAT3 mRNA相结合的互补序列。与BA-R组相比,BA-E组FEV1、FEV1/FVC以及BALF中IL-10水平降低(P<0.001),同时FeNO和BALF中IL-6、IL-13、TNF-α、IgE水平均增高(均P<0.05)。经Pearson分析,哮喘患儿BALF中miR-98-5p与STAT3、IL-6、IL-13、TNF-α、IgE呈负相关(均r<0,P<0.001),与IL-10水平则呈正相关(r=0.288,P=0.001);而STAT3水平与IL-6、IL-13、TNF-α、IgE均呈正相关(均r>0,P<0.001),与IL-10水平则呈负相关(r=-0.285,P<0.001)。结论:支气管哮喘患儿BALF中miR-98-5p相对表达量降低,同时STAT3蛋白水平升高,且两者与气道炎症有关。

CD44和miR-98-5p在肺癌组织中的表达及其与患者临床病理特征及预后的关系

目的探讨CD44和microRNA-98-5p在肺癌组织中的表达及其与患者临床病理特征及预后的关系。方法选取肺癌患者69例,采用免疫组织化学法检测肿瘤组织及癌旁组织中CD44表达情况,采用RT-PCR技术,检测miR-98-5p表达水平,分析CD44和miR-98-5p水平与临床病理特征的关系,应用Kaplan-Meier生存曲线分析CD44和miR-98-5p水平与患者预后的关系。结果CD44在肺癌组织中表达水平明显高于癌旁组织,差异具有统计学意义(P<0.05),miR-98-5p在肺癌组织中相对表达量明显低于癌旁组织,差异具有统计学意义(P<0.05)。CD44表达水平与患者年龄、性别、TNM分期及肿瘤分化程度无关(P>0.05),而与患者有无淋巴结转移相关(P<0.05),miR-98-5p表达水平与患者年龄、性别无关(P>0.05),而与TNM分期、肿瘤分化程度及有无淋巴结转移相关(P<0.05)。CD44阳性表达的肺癌患者生存率明显低于阴性表达患者,差异具有统计学意义(P<0.05),miR-98-5p高表达的肺癌患者生存率明显高于低表达患者,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论CD44和miR-98-5p在肺癌组织中表达且与临床病理特征和预后相关,可能作为肺癌患者预后的相关评估指标。

miR-98-5p通过降低STAT3水平促进A549细胞凋亡并抑制其侵袭和迁移

目的研究微小RNA-98-5p (miR-98-5p)对肺癌A549细胞生长的影响及机制。方法实时定量PCR检测正常支气管上皮细胞HBE细胞和非小细胞肺癌来源的细胞(A549细胞、H1299细胞和H460细胞)中miR-98-5p的水平,后续选择miR-98-5p水平最低的A549细胞进行实验。CCK-8法检测miR-98-5p模拟物(miR-98-5p mimic)及miR-98-5p抑制物(anti-miR-98-5p)对A549细胞增殖的影响,流式细胞术检测miR-98-5p对A549细胞的凋亡的影响,商品化试剂盒检测胱天蛋白酶3(caspase-3)和caspase-9的活性,TranswellTM小室实验检测miR-98-5p对A549细胞侵袭和迁移的影响,实时定量PCR检测miR-98-5p对A549细胞信号转导子与转录激活子3(STAT3) mRNA水平的影响,Western blot法检测miR-98-5p对A549细胞STAT3蛋白水平的影响。结果与HBE细胞相比,A549细胞、H1299细胞和H460细胞中miR-98-5p的表达水平降低。上调A549细胞miR-98-5p水平后,能够显著抑制A549细胞的增殖、促进细胞凋亡,并抑制细胞侵袭和迁移,同时,miR-98-5p可以显著降低STAT3的表达。结论 miR-98-5p通过降低STAT3水平促进A549细胞凋亡,并抑制其增殖、侵袭和迁移。

miR-98-5p通过靶向调控TRAF6表达促进肺泡巨噬细胞M2表型分化以保护脓毒症引起的急性肺损伤

目的在脓毒症急性肺损伤中探讨miR-98-5p对肺泡巨噬细胞表型分化的影响并初步探究其相关分子机制。方法利用盲肠结扎穿孔(cecal ligation and puncture,CLP)术建立大鼠急性肺损伤(ALI)模型,并将40只SD大鼠分为4组(n=10):假手术(Sham)组,脓毒症组(以下简称CLP),CLP^+agomir NC组(CLP^+agomir NC),CLP^+miR-98-5p agomir组(CLP^+miR-98-5p agomir)。在CLP术后24 h处死各组大鼠并收集肺泡灌洗液(BALF)及双肺组织,利用HE染色、ELISA及检测肺组织干湿比重(W/T)来探究在大鼠体内过表达miR-98-5p对脓毒症介导的ALI的肺组织结构、肺泡灌洗液(BALF)中炎性因子的表达及肺部含水量的影响;分离大鼠原代肺泡巨噬细胞(AMs),细胞流式检测过表达miR-98-5p对ALI大鼠AMs的M1、M2表型分化影响;免疫磁珠分选F4/80^+AMs,利用RT-PCR检测M1、M2表型特征分子标记基因iNOS、CD206、Arg1的表达水平;生物信息学筛选TRAF6作为miR-98-5p的潜在靶基因,利用双荧光素酶基因报告实验进行检测;利用RT-PCR检测过表达miR-98-5p后的ALI大鼠AMs中miR-98-5p与TRAF6 mRNA的表达;应用细胞免疫化学法与Western blot实验在F4/80^+AMs中检测TRAF6与TLR4/MyD88/NF-κB信号通路中TLR4、MyD88、p65、p-p65蛋白的表达。结果HE染色、ELISA及肺组织干湿比重(W/T)的检测结果表明,在脓毒症大鼠ALI模型中,过表达miR-98-5p可明显缓解ALI大鼠肺部病理学改变,降低BALF中促炎因子IL-6、IL-1β、TNF-α的分泌水平,增加抗炎因子IL-10的分泌,并减少ALI肺部含水量;细胞流式结果显示过表达miR-98-5p可诱导ALI大鼠AMs向M2表型分化,抑制其向M1表型分化;在F4/80^+AMs中,RT-PCR实验结果显示,过表达miR-98-5p可抑制M1表型特征分子iNOS mRNA表达水平,而促进M2型特征分子CD206、Arg1表达水平;双荧光素酶基因报告实验结果显示,在大鼠AMs中miR-98-5p可靶向调控ARTF6 mRNA的表达。细胞免疫化学法与Western blot实验结果显示,过表达miR-98-5p明显抑制ALI大鼠的F4/80^+AMs中TRAF6及TLR4、MyD88、p-p65蛋白表达表达。结论miR-98-5p可通过TLR4/MyD88/NF-κB信号通路负向调控TRAF6的表达来诱导脓毒症急性肺损伤大鼠的肺泡巨噬细胞向M2型分化,从而减轻肺部的炎症反应并保护肺泡组织的正常结构及功能。

LncRNA HEIH通过miR-98-5p调节肺癌细胞增殖和凋亡

目的探讨lncRNA HEIH对肺癌细胞增殖和凋亡的影响及其作用机制。方法培养人正常肺上皮细胞BEAS-2B和肺癌细胞系A549、A427、H1299和TKB-1,RT-qPCR检测细胞中HEIH表达水平;分别转染si-HEIH和miR-98-5p mimics至A549细胞,沉默A549细胞中HEIH表达或过表达miR-98-5p;MTT法检测细胞增殖;流式细胞仪检测细胞凋亡;Western blot检测CCND1、caspase-3、SHH、GLI-1、PTCH和SUFU蛋白表达。双荧光素酶报告基因实验验证HEIH与miR-98-5p之间的关系。结果与正常肺上皮细胞BEAS-2B相比,肺癌细胞系A549、A427、H1299和TKB-1中HEIH表达水平显著升高(P<0.05).其中A549细胞中的HEIH表达最高。因此,后续实验选择A549细胞为研究对象。沉默HEIH表达或过表达miR-98-5p均可降低A549细胞培养12、48和72 h后吸光度值(A值)(P<0.05)(MTT法);升高凋亡率(P<0.05);抑制CCND1蛋白表达(P<0.05),促进caspase-3蛋白表达(P<0.05)。并且过表达miR-98-5p还抑制了A549细胞中SHH和GLI-1的mRNA和蛋白表达(P<0.05),促进了PTCH和SUFU的mRNA和蛋白表达水平(P<0.05)。过表达HEIH逆转了过表达miR-98-5p对A549细胞增殖、凋亡以及SHH、GLI-1、PTCH和SUFU的mRNA和蛋白表达的影响。结论沉默HEIH表达可能通过靶向miR-98-5p经Hedgehog信号通路抑制肺癌细胞的增殖,并促进其凋亡。

支气管哮喘患儿血清mir-98-5p及IL-13的表达水平及临床意义

目的探讨支气管哮喘患儿血清中mir-98-5p及IL-13的表达水平及临床意义。方法选取在我院确诊的支气管哮喘患儿60例为研究对象,其中哮喘急性期患儿30例,哮喘缓解期患儿30例;另选进行健康体检的健康儿童30例作为健康对照组。采集患儿及健康儿童清晨空腹静脉血检测血清miR-98-5p与IL-13的表达水平。结果支气管哮喘患儿血清IL-13水平显著高于健康对照组儿童(P<0.01),哮喘急性期患儿血清IL-13水平显著高于哮喘缓解期患儿(P<0.01)。支气管哮喘患儿血清miR-98-5p水平显著低于健康对照组儿童(P<0.01),哮喘急性期组患儿血清miR-98-5p水平显著低于哮喘缓解期患儿(P<0.01)。在哮喘急性期患儿中,中度组与重度组患儿血清IL-13水平显著高于轻度组患儿(P<0.05),重度组显著高于中度组(P<0.05);中度组与重度组患儿血清miR-98-5p水平均显著低于轻度组患儿(P<0.05),重度组显著低于中度组(P<0.05)。支气管哮喘患儿血清miR-98-5p的表达与IL-13的表达水平呈负相关(r=-0.863,P<0.05)。结论支气管哮喘患儿血清miR-98-5p表达与IL-13的表达水平呈负相关,IL-13的过度分泌在哮喘的发病中起重要作用,miR-98-5p、IL-13的表达水平与患儿哮喘发病的严重程度有关,miR-98-5p可能会通过影响IL-13的表达水平而影响支气管哮喘的发生发展。

miR-98-5p靶向HIF1AN对LPS诱导的支气管上皮细胞凋亡及炎症因子的影响

目的:探讨miR-98-5p对LPS诱导的支气管上皮细胞凋亡、炎症因子的影响及对HIF1AN的调控作用。方法:体外培养人支气管上皮细胞16-HBE,LPS刺激细胞建立细胞损伤模型(LPS组),分别将miR-NC、miR-98-5p mimics、si-NC、si-HIF1AN、pcDNA-NC、pcDNA-HIF1AN、miR-98-5p mimics与pcDNA-NC、miR-98-5p mimics与pcDNA-HIF1AN转染至16-HBE细胞后进行LPS处理(miR-NC+LPS组、miR-98-5p+LPS组、si-NC+LPS组、si-HIF1AN+LPS组、pcDNA-NC+LPS组、pcDNAHIF1AN+LPS组、miR-98-5p+pcDNA-NC+LPS组、miR-98-5p+pcDNA-HIF1AN+LPS组);qRT-PCR与Western blot分别检测miR-98-5p、HIF1AN表达;流式细胞术检测细胞凋亡率;ELISA检测TNF-α、IL-6、IL-1α水平;双荧光素酶报告实验检测miR-98-5p、HIF1AN的靶向关系;Western blot检测Cleaved-caspase-3、HIF1AN、BNIP3蛋白表达。结果:转染miR-98-5p mimics或si-HIF1AN可明显降低LPS诱导的16-HBE细胞凋亡率、Cleaved-caspase-3蛋白表达及TNF-α、IL-6、IL-1α水平(P<0.05);双荧光素酶报告实验证实miR-98-5p可靶向结合HIF1AN;共转染miR-98-5p mimics与pcDNA-HIF1AN可明显提高细胞凋亡率、Cleaved-caspase-3、BNIP3蛋白表达及TNF-α、IL-6、IL-1α水平(P<0.05)。结论:miR-98-5p过表达可通过下调HIF1AN表达抑制LPS诱导的支气管上皮细胞凋亡及炎症因子释放进而减轻细胞损伤。

miR-98-5p对STAT3诱导的人舌鳞癌细胞SCC-25凋亡、增殖和成瘤性的影响

目的:探讨miR-98-5p对人舌鳞癌细胞SCC-25凋亡和肿瘤干样特性及裸鼠成瘤的影响。方法:将SCC-25细胞转染mimic mock、miR-98-5p mimic、inhibitor-NC、miR-98-5p inhibitor后分为对照(control)组、模拟物对照(mimic-mock)组、模拟物(mimic)组、抑制剂阴性对照(inhibitor-NC)组和抑制剂(inhibitor)组。逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测miR-98-5p表达;克隆形成法检测细胞增殖;流式细胞仪检测细胞凋亡;RT-PCR检测Ki67、增殖细胞核抗原(PCNA)、Bax、Bcl-2 mRNA水平;细胞成球实验检测细胞成球体积、成球数目;免疫印迹检测信号转导和转录活化因子3(STAT3)磷酸化情况;建立移植瘤裸鼠模型,慢病毒转染mimic,将裸鼠随机分为control组和mimic组,检测肿瘤质量和体积,免疫印迹检测STAT3磷酸化情况,免疫组织化学检测Ki67阳性表达率。结果:与control组相比较,mimic组miR-98-5p水平显著升高,克隆形成率显著降低,凋亡率显著升高,Ki67、PCNA mRNA水平显著降低,Bax/Bcl-2比值升高,成球体积、成球数目显著降低,p-STAT3/STAT3水平显著降低;inhibitor组miR-98-5p水平显著降低,克隆形成率显著升高,Ki67、PCNA mRNA水平显著升高,Bax/Bcl-2比值降低,成球体积、成球数目显著升高,p-STAT3/STAT3水平显著升高;mimic组肿瘤质量显著降低,肿瘤体积显著降低,Ki67阳性表达率显著降低,p-STAT3/STAT3水平显著降低。结论:miR-98-5p mimic可通过抑制STAT3诱导人舌鳞癌细胞SCC-25凋亡,抑制增殖和移植瘤生长。

circBPTF靶向miR-98-5p对高糖诱导的肾小管上皮细胞损伤的影响及其机制

目的 探讨circ溴结构域PDH指转录因子(BPTF)对高糖诱导的肾小管上皮细胞损伤的影响及分子机制。方法 肾小管上皮细胞分为对照组(Con)、高糖组(HG)、HG+si-NC组、HG+si-circBPTF组、HG+miR-NC组、HG+miR-98-5p组、HG+si-circBPTF+anti-miR-NC组、HG+si-circBPTF+anti-miR-98-5p组。实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测circBPTF和miR-98-5p表达;流式细胞术检测细胞凋亡;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测肿瘤坏死因子(TNF)-α、白细胞介素(IL)-6水平;双荧光素酶报告实验证实circBPTF和miR-98-5p的靶向关系。结果 与Con组比较,HG组肾小管上皮细胞中circBPTF表达、IL-6、TNF-α水平和凋亡率升高,miR-98-5p表达水平降低(P<0.05)。与HG+si-NC组或HG+miR-NC组比较,HG+si-circBPTF组和HG+miR-98-5p组IL-6,TNF-α水平降低,细胞凋亡率降低(P<0.05)。circBPTF靶向调控miR-98-5p;下调miR-98-5p逆转了抑制circBPTF表达对高糖诱导的肾小管上皮细胞损伤的保护作用。结论 抑制circBPTF表达通过靶向上调miR-98-5p对高糖诱导的肾小管上皮细胞损伤起保护作用。

沉默CDKN2B-AS1调控miR-98-5p、STAT3对高糖诱导的人脐静脉内皮细胞损伤的影响

[目的]探讨细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂2B反义RNA 1(CDKN2B-AS1)是否通过靶向miR-98-5p影响高糖诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)损伤。[方法]将HUVEC分为对照组(含5 mmol/L葡萄糖的DMEM培养)、模型组(含33.5 mmol/L葡萄糖的DMEM培养)、模型+si-NC组、模型+si-CDKN2B-AS1组、模型+miR-NC组、模型+miR-98-5p模拟物组、模型+si-CDKN2B-AS1+anti-miR-NC组、模型+si-CDKN2B-AS1+anti-miR-98-5p组。运用实时定量聚合酶链反应检测HUVEC的CDKN2B-AS1、miR-98-5p表达;Western blot检测信号转导及转录激活因子3(STAT3)蛋白表达;流式细胞术检测细胞凋亡;超氧化物歧化酶(SOD)、乳酸脱氢酶(LDH)、丙二醛(MDA)试剂盒检测SOD、LDH、MDA水平。双荧光素酶报告实验分析miR-98-5p与CDKN2B-AS1、STAT3的靶向结合。[结果]高糖使HUVEC中CDKN2B-AS1、STAT3表达、凋亡率、LDH、MDA水平升高,miR-98-5p表达、SOD水平降低(P<0.05)。沉默CDKN2B-AS1或过表达miR-98-5p后,高糖诱导的HUVEC中CDKN2B-AS1、STAT3表达、凋亡率、LDH、MDA水平降低,miR-98-5p表达、SOD水平升高(P<0.05)。双荧光素酶报告实验显示,CDKN2B-AS1靶向miR-98-5p,miR-98-5p靶向STAT3。抑制miR-98-5p逆转了沉默CDKN2B-AS1对高糖诱导的HUVEC凋亡、氧化应激、STAT3蛋白表达的抑制作用。[结论]沉默CDKN2B-AS1通过调节miR-98-5p/STAT3轴抑制高糖诱导的HUVEC氧化应激和凋亡,CDKN2B-AS1可作为糖尿病相关血管并发症的候选治疗靶标。

circ-HECTD1通过调控miR-98-5p/EPHA4表达参与OGD诱导的神经元损伤

目的探讨环状RNA HECTD1(circ-HECTD1)是否通过调控miR-98-5p/酪氨酸蛋白激酶A4(EPHA4)的表达参与氧糖剥夺(OGD)诱导的神经元损伤。方法体外分离培养小鼠原代皮层神经元,采用双荧光素酶报告基因实验、RNA结合蛋白免疫沉淀实验检测神经元中circ-HECTD1、miR-98-5p和EPHA4之间的靶向关系,并将神经元随机分为对照组(正常条件下培养24 h)与OGD 6 h、12 h、24 h组(予OGD处理6 h、12 h、24 h)以及OGD+Vector组与OGD+circ-HECTD1组、OGD+小干扰RNA(siRNA)阴性对照(si-NC)组与OGD+siRNA circ-HECTD1(si-circ-HECTD1)组、OGD+微小RNA(miRNA)模拟物阴性对照(miR-NC)组与OGD+miR-98-5p模拟物(miR-98-5p mimic)组、OGD+miRNA抑制物阴性对照(anti-miR-NC)组与OGD+miR-98-5p抑制物(anti-miR-98-5p)组、OGD+miR-98-5p mimic+pcDNA组与OGD+miR-98-5p mimic+EPHA4组、OGD+si-circ-HECTD1+anti-miR-NC组与OGD+si-circ-HECTD1+anti-miR-98-5p组,分别转染pCD5-ciR空载体、pCD5-ciR-circ-HECTD1过表达载体、si-NC、si-circ-HECTD1、miR-NC、miR-98-5p mimic、anti-miR-NC、anti-miR-98-5p至神经元,以及共转染miR-98-5p mimic和pcDNA3.1空载体、miR-98-5p mimic和pcDNA3.1-EPHA4过表达载体、si-circ-HECTD1和anti-miR-NC、si-circ-HECTD1和anti-miR-98-5p至神经元,OGD处理24 h后,采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测circ-HECTD1、miR-98-5p和EPHA4 mRNA表达,采用Western blotting实验检测EPHA4蛋白表达,采用MTT法检测细胞增殖活性,采用流式细胞仪检测细胞凋亡率,采用ELISA法检测细胞培养液中白细胞介素(IL)-1β、肿瘤坏死因子(TNF)-α含量,采用试剂盒法检测超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)活性。结果(1)circ-HECTD1能够与miR-98-5p靶向结合,miR-98-5p能够与EPHA43’’翻译区靶向结合。(2)与对照组比较,OGD 6 h、12 h、24 h组神经元中circ-HECTD1表达均明显升高,miR-98-5p表达均明显降低,EPHA4蛋白表达均明显升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。(3)与OGD+Vector组比较,OGD+circ-HECTD1组神经元中circ-HECTD1的表达明显升高,miR-98-5p的表达明显降低;与OGD+si-NC组比较,OGD+si-circ-HECTD1组神经元中miR-98-5p的表达明显升高,EPHA4 mRNA和蛋白的表达均明显降低;与OGD+miR-NC组比较,OGD+miR-98-5p mimic组神经元中miR-98-5p的表达明显升高,EPHA4蛋白的表达明显降低;与OGD+anti-miR-NC组比较,OGD+anti-miR-98-5p组神经元中miR-98-5p的表达明显降低,EPHA4蛋白的表达明显升高;与OGD+si-circ-HECTD1+anti-miR-NC组比较,OGD+si-circ-HECTD1+anti-miR-98-5p组神经元中EPHA4 mRNA和蛋白的表达均明显升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。(4)与对照组比较,OGD组神经元的细胞活力明显降低,细胞凋亡率明显升高,IL-1β、TNF-α含量明显升高,SOD活性明显降低,MDA活性明显升高;与OGD+si-NC组比较,OGD+si-circ-HECTD1组神经元的细胞活力明显升高,细胞凋亡率明显降低,IL-1β、TNF-α含量明显降低,SOD活性明显升高,MDA活性明显降低;与OGD+si-circ-HECTD1+anti-miR-NC组比较,OGD+si-circ-HECTD1+anti-miR-98-5p组神经元的细胞活力明显降低,细胞凋亡率明显升高,IL-1β、TNF-α含量明显升高,SOD活性明显降低,MDA活性明显升高;与OGD+miR-NC组比较,OGD+miR-98-5p mimic组神经元的细胞活力明显升高,细胞凋亡率明显降低,IL-1β、TNF-α含量明显降低,SOD活性明显升高,MDA活性明显降低;与OGD+miR-98-5p mimic+pcDNA组比较,OGD+miR-98-5p mimic+EPHA4组神经元的细胞活力明显降低,细胞凋亡率明显升高,IL-1β、TNF-α含量明显升高,SOD活性明显降低,MDA活性明显升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论敲低circ-HECTD1后可通过靶向调控miR-98-5p/EPHA4的表达,从而改善OGD诱导的神经元损伤。